检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：邓海静河北医科大学

学位级别：博士

目的：矽肺是一种职业性疾病。在我国，由于经济的较快发展，促进了工业化进程的加快。而尘肺病的发病率也在逐年升高。近年来尘肺病的发病人数以每年超过2万例的速度增长。截至2012年底，全国累计报告职业病人数为807269例，其中，尘... 详细信息

目的：矽肺是一种职业性疾病。在我国，由于经济的较快发展，促进了工业化进程的加快。而尘肺病的发病率也在逐年升高。近年来尘肺病的发病人数以每年超过2万例的速度增长。截至2012年底，全国累计报告职业病人数为807269例，其中，尘肺病为727148例，占到职业病总人数的90%。在这些患者中一半以上为矽肺病。因此，在我国矽肺是最多见、最严重的尘肺病。矽尘作为潜在的致纤维化因子，能促进支气管/肺泡上皮细胞凋亡，并可介导支气/肺泡上皮细胞向肌成纤维细胞的转化，即上皮-间质转变。目前认为上皮-间质转变是矽肺病发生发展的一个重要环节。我们前期应用蛋白质组学技术在矽肺大鼠肺组织中筛选出33个有意义的差异性蛋白，其中热休克蛋白27是比较典型的差异蛋白之一。HSP27作为一个小分子量热休克蛋白，在上皮间质转变过程中，可通过调节核转录因子SnAI1的表达而参与上皮-间质转变的过程。 n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸（n-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline, Ac-SDKP）是一种具有抗器官纤维化功能的短肽，我们和其他课题组发现Ac-SDKP具有抑制器官纤维化（包括心、肾、肺）的功能。近期我们报道了Ac-SDKP能够通过抑制TGF-β及其受体诱导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化，进而抑制矽肺纤维化的发生、发展，而发挥其拮抗矽肺纤维化的作用。然而，Ac-SDKP能够能够通过调节上皮-间质的转变调控矽肺纤维化的发生与发展？尚无文献报道。本研究拟采用体内矽肺动物模型结合体外细胞培养及其体外细胞转染等方法，研究与探讨Ac-SDKP能否通过对HSP27表达的调节，调控支气管/肺泡上皮细胞向肌成纤维细胞的转化，进而阻抑矽肺纤维化的形成与进展。进一步揭示Ac-SDKP抗矽肺纤维化作用的分子机制，为将其开发为一种抗矽肺纤维化的新药提供一些重要的理论与实验依据，并对其它器官（肝、肾、心血管）纤维化疾病的防治研究提供一些重要的信息。方法：采用支气管一次性灌注二氧化硅（SiO2）粉尘制作大鼠矽肺模型，动物被分为：1）对照4周组；2）矽肺4周组；3）Ac-SDKP单独给药4周组；4）对照8周组；5）矽肺8周组；6）Ac-SDKP单独给药8周组；7）Ac-SDKP后处理组（抗纤维化治疗组）；6）Ac-SDKP前处理组（预防治疗组）。体外培养人肺泡Ⅱ型上皮细胞，并分为：1）对照组；2）TGF-β1诱导组；3）Ac-SDKP干预组（TGF-β1+Ac-SDKP）；4）Ac-SDKP单独给药组。采用免疫组织化学染色、免疫细胞化学染色、Western blot或Realtime PCR等方法检测HSP27、磷酸化HSP27、SnAI1、SnAI2、上皮组织标记物CK、SP-A、间质组织标记物α-SMA、vimentin、I型和III型胶原蛋白的表达。采用激光共聚焦显微镜检测矽肺模型大鼠SP-A与α-SMA、pHSP27与α-SMA的共定位表达；检测人肺泡Ⅱ型上皮细胞各组别HSP27与SnAI1、HSP27与SnAI2的共定位表达。采用体外细胞转染的方法将特异性HSP27基因片段转染人肺泡Ⅱ型上皮细胞，实验分为7组，1)空质粒对照组；2）空质粒+TGF-β1组；3）HSP27干扰质粒+TGF-β1组；4）空质粒+TGF-β1+Ac-SDKP组；采用Western blot方法检测E-cad、α-SMA、HSP27、磷酸化HSP27、SnAI1、SnAI2、I型III型胶原蛋白的表达。结果： 1Ac-SDKP对矽肺大鼠肺组织中间质组织标志蛋白（α-SMA、Vimentin）和上皮组织标志蛋白（E-cad、SP-A）表达的调节作用免疫组织化学染色结果显示，在正常对照组α-SMA、Vimentin仅在大鼠血管和气管平滑肌细胞中阳性表达，而在矽肺大鼠间质纤维化区域和矽结节中可见较多的α-SMA和Vimentin阳性表达的细胞。而Ac-SDKP治疗给药组（包括前处理与后处理组）α-SMA和Vimentin阳性表达的细胞数量和范围均明显减少。激光共聚焦扫描显微镜结果显示，正常对照组可见红色荧光标记的SP-A表达阳性细胞，体积较大，呈扁平或立方状，多贴覆在肺泡壁的腔面。肺泡壁内可见少量绿色荧光标记的α-SMA表达阳性的细胞。在矽肺模型组，可见矽结节内有大量绿色荧光标记的α-SMA表达阳性的细胞，其间夹杂有一定数量的红色荧光标记的SP-A表达阳性细胞。采用两种蛋白荧光组合定位技术，可见一些紫粉色标记的细胞存在于矽结节内，多分布在结节的边缘区域，少量分布于结节内部。表明，在矽结节中有肺泡II型上皮细胞的存在与增生，而部分肺泡II型上皮胞浆中有α-SMA阳性蛋白的表达。而

关键词： n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸热休克蛋白27 核转录因子上皮-间质转化矽肺

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Ac-SDKP抗矽肺纤维化作用的新靶向—肌成纤维细胞分化和差异蛋白的筛选

Ac-SDKP抗矽肺纤维化作用的新靶向—肌成纤维细胞分化和差异蛋白...

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作者：徐洪河北医科大学

学位级别：博士

目的：矽肺是一种常见的职业性呼吸系统疾病。在我国,由于工业的快速发展而防护性措施相对不甚完善,尘肺病的发病率仍然很高。到2010年底,我国累计报告了676,541例尘肺病例,每年新增10,000例左右,其中一半以上是矽肺病。矽尘做为潜在的... 详细信息

目的：矽肺是一种常见的职业性呼吸系统疾病。在我国,由于工业的快速发展而防护性措施相对不甚完善,尘肺病的发病率仍然很高。到2010年底,我国累计报告了676,541例尘肺病例,每年新增10,000例左右,其中一半以上是矽肺病。矽尘做为潜在的致纤维化因子,可诱导肺泡巨噬细胞的凋亡,并激活巨噬细胞介导的慢性炎症,释放大量酶和细胞因子,如转化生长因子(transforming growth factor-β, TGF-β)。 TGF-β能通过促进胶原合成和其他致纤维化因子表达的上调,以及抑制基质降解来促进细胞外基质的沉积。作为致纤维化的重要细胞因子,TGF-β能够促进成纤维细胞向特异性表达平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin, α-SMA)的肌成纤维细胞分化,而这一过程受到血清应答因子(serum response factor, SRF)的调控。 n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(n-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-proline,Ac-SDKP)是一种具有抗组织炎症和抗器官纤维化功能的短肽,可被血管紧张素转换酶特异性水解,使用血管紧张素转换酶抑制剂能够上调血浆中Ac-SDKP的表达。我们和其他课题组发现Ac-SDKP具有抑制器官纤维化(包括心、肾、肺)的功能。前期我们报道了Ac-SDKP能够抑制慢性炎症,下调TGF-β表达及其诱导的成纤维细胞增殖和胶原合成,减轻矽肺大鼠纤维化的程度,具有拮抗矽肺纤维化的作用。本研究拟探讨Ac-SDKP能否通过调控TGF-β及其受体诱导的肌成纤维细胞分化,进而抑制矽肺纤维化的发生、发展。并采用比较蛋白组学技术,筛选出矽肺大鼠肺组织中的特异性差异蛋白以及Ac-SDKP对这些差异蛋白的调节规律。进一步阐明矽肺发生的相关机制,寻找Ac-SDKP抗矽肺纤维化的作用靶点,以期为开发Ac-SDKP作为一种新型的抗器官纤维化的新药提供进一步的理论基础和实验依据。方法：原代培养乳鼠肺成纤维细胞,并分为：1)对照组；2) TGF-β1诱导组；3) TGF-β受体阻断剂组(TGF-β1+LY364947);4) Ac-SDKP干预组(TGF-β1+Ac-SDKP)。采用支气管一次性灌注二氧化硅(SiO2)粉尘制作大鼠矽肺模型,动物被分为：1)对照4周组；2)矽肺4周组；3)对照8周组；4)矽肺8周组；5)Ac-SDKP抗纤维化治疗组；6) Ac-SDKP预防治疗组。采用免疫组织化学染色、免疫细胞化学染色、Western blot或Realtime PCR等方法检测TGF-β1及其受体、SRF. α-SMA、I型和III型胶原蛋白或mRnA的表达。提取肺组织蛋白样品经双向电泳分离,胶体考马斯亮蓝染色显示蛋白点。扫描输入计算机,用ImageMaster6.0图像分析软件对凝胶进行分析,差异蛋白判定标准为：该蛋白点在两组间(对照组4周、8周分别与矽尘4周、8周组比较；Ac-SDKP抗纤维化治疗组与矽尘8周组比较; Ac-SDKP预防治疗组与矽尘组8周比较)有统计学差异(P<0.05),且volume%值上下变化超过30%。将凝胶中的差异蛋白点切出,经胶内胰蛋白酶解,并行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry, MALDI-TOF-MS)获得肽质量指纹谱并对蛋白质进行分析。结果： 1Ac-SDKP对TGF-β1诱导的肺成纤维细胞TGF-β1型受体、II型受体的调节作用 TGF-β1能够显著上调肺成纤维细胞TGF-β1型受体、II型受体的表达,与对照组相比分别上调1.84和1.94倍。给予TGF-β1受体阻断剂LY364947,能够显著减弱TGF-β1的诱导效应。分别为TGF-β1诱导组的63.59%和70.10%。给予Ac-SDKP干预处理,能够显著减少TGF-βⅠ型受体、II型受体的表达,分别为TGF-β1诱导组的76.83%和84.92%。 2Ac-SDKP对TGF-β1诱导的肺成纤维细胞SRF和a-SMA表达的调节作用给予TGF-β1诱导48h后,镜下可见成纤维细胞胞体伸展,呈纺锤形,免疫细胞化学染色可见胞体内大量平行或交叉排列的a-SMA标记的肌丝。给予LY364947和Ac-SDKP干预后,a-SMA阳性表达的肌丝结构显著减少。Western blot结果显示,TGF-β1诱导SRF、α-SMA蛋白的表达上调,分别是对照组的2.65倍和2.00倍。而给予LY364947和Ac-SDKP干预处理后,能够明显下调SRF和a-SMA蛋白的表

关键词： n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸血清应答因子 α-平滑肌肌动蛋白肌成纤维细胞矽肺蛋白组学

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胸腺素β_4-脯氨酸寡肽酶-AcSDKP轴在肝内生物学功能的研究

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胃肠病学和肝病学杂志 2011年第4期20卷 299-301页

作者：张蕾陈源文徐雷鸣上海交通大学医学院附属新华医院消化内镜诊治部上海200092

n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(n-acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro AcSDKP)由脯氨酸寡肽酶水解其前体胸腺素β4生成,三者均存在于肝内并发挥重要生物学功能。本文就胸腺素β4-脯氨酸寡肽酶-AcSDKP轴在肝内病理生理功能,特别是其与肝... 详细信息

n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(n-acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro AcSDKP)由脯氨酸寡肽酶水解其前体胸腺素β4生成,三者均存在于肝内并发挥重要生物学功能。本文就胸腺素β4-脯氨酸寡肽酶-AcSDKP轴在肝内病理生理功能,特别是其与肝损伤修复和肝脏细胞外基质沉积关系的研究做一概述。

关键词： n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸脯氨酸寡肽酶胸腺素β4 肝脏

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AcSDKP对正常人真皮成纤维细胞表达TGF-β1的影响

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组织工程与重建外科杂志 2009年第4期5卷 195-198页

作者：邓智明赵喜彬郑江红邓辰亮丁志茅广宇王惠东杨松林上海交通大学医学院附属第六人民医院整形外科 200233

目的探讨n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对真皮成纤维细胞表达TGF-β1的影响。方法对人皮肤成纤维细胞原代培养及鉴定后,给予不同浓度AcSDKP(10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L、10-10mol/L、10-11mol/L)干预,设立空白... 详细信息

目的探讨n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对真皮成纤维细胞表达TGF-β1的影响。方法对人皮肤成纤维细胞原代培养及鉴定后,给予不同浓度AcSDKP(10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L、10-10mol/L、10-11mol/L)干预,设立空白对照组。WST-8法检测人皮肤成纤维细胞增殖;RT-PCR技术检测人皮肤成纤维细胞TGF-β1mRnA表达;酶联免疫法检测培养细胞上清液TGF-β1含量。结果与空白对照组相比,各浓度组对成纤维细胞的增殖都有抑制作用,其中10-10mol/LAcSDKP抑制成纤维细胞增殖作用最强;10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L、10-10mol/LAcSDKP对TGF-β1mRnA表达有显著的抑制作用,且各浓度组间的抑制作用无差异;10-8mol/L、10-9mol/L、10-10mol/LAcSDKP可使培养上清液中的TGF-β1显著减少,各浓度组间差异无显著性。结论AcSDKP能够抑制人皮肤成纤维细胞增殖及TGF-β1的生成,有望成为病理性瘢痕防治的新方法。

关键词： n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸真皮成纤维细胞转化生长因子-β1 表达

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抗纤维化短肽对大鼠矽肺纤维化MCP-1、ED-1表达的影响

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卫生研究 2008年第6期37卷 666-670页

作者：李倩闫静波张丽娟陈萍李丹丹武鹍飞杨方华北煤炭医学院实验中心唐山063000 邢台市人民医院病理科天津塘沽区泰达心血管病医院超声科

目的探讨抗纤维化短肽n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠肺内单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、ED-1表达的影响在拮抗矽肺纤维化形成过程中的作用。方法气管内灌尘法制作大鼠矽肺纤维化动物模型,实验大鼠随机分为6组,包... 详细信息

目的探讨抗纤维化短肽n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠肺内单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、ED-1表达的影响在拮抗矽肺纤维化形成过程中的作用。方法气管内灌尘法制作大鼠矽肺纤维化动物模型,实验大鼠随机分为6组,包括:对照1组,对照2组和矽肺模型1组,矽肺模型2组,矽肺抗纤维化治疗组,矽肺预防治疗组。采用HE染色对矽肺纤维化病变及其变化特点进行形态学观察;采用羟脯氨酸法对矽肺大鼠肺内胶原含量进行检测;采用免疫组织化学方法检测各组大鼠肺组织中MCP-1的表达与巨噬细胞(ED-1阳性)的数量。结果抗纤维化治疗组与矽肺模型1组与2组相比,矽结节面积下降到84.28%和67.93%,羟脯氨酸含量下降到70.89%和58.18%,MCP-1蛋白表达下降到82.3%和84.1%,MCP-1阳性细胞数下降到67.4%和72.5%,ED-1蛋白表达下降到78.7%和79.3%,ED-1阳性细胞数下降到54.4%和66.8%;预防治疗组与矽肺模型2组相比,矽结节面积下降到61.13%,羟脯氨酸含量下降到60.27%,MCP-1蛋白表达和阳性细胞数分别下降到85.2%和86.3%,ED-1蛋白表达和阳性细胞数分别下降到87.2%和74.9%。结论AcSDKP具有拮抗矽肺纤维化的作用,这可能与其抑制巨噬细胞在肺内的浸润、聚集,减轻了尘性肺泡炎的程度相关。

关键词：矽肺纤维化 n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸单核细胞趋化蛋白-1 巨噬细胞

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抗纤维化短肽对矽肺大鼠肺内胶原合成与降解的调节作用

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中国职业医学 2008年第4期35卷 274-277页

作者：陈萍杨方闫静波李倩张丽娟王瑞敏李丹丹武鹍飞华北煤炭医学院实验中心

目的探讨n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠肺内Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达以及基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9酶活力表达的调节在拮抗矽肺纤维化形成过程中的作用。方法气管内灌注染尘法制作大鼠矽肺模型,实验动物被分为6... 详细信息

目的探讨n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠肺内Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达以及基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9酶活力表达的调节在拮抗矽肺纤维化形成过程中的作用。方法气管内灌注染尘法制作大鼠矽肺模型,实验动物被分为6组:矽肺模型对照1组、矽肺模型对照2组、矽肺模型1组、矽肺模型2组、抗纤维化治疗组及预防治疗组。采用HE染色对矽肺纤维化病变进行形态学观察;采用Westernblot法对肺内Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达进行检测;采用明胶酶谱法对肺内MMP-2和MMP-9酶活力表达进行检测。结果抗纤维化治疗组Ⅰ型胶原表达量分别是矽肺模型1组与2组的71.08%和58.13%,Ⅲ型胶原表达量分别是矽肺模型1组与2组的80.13%和70.70%;预防治疗组Ⅰ型与Ⅲ型胶原表达量分别是矽肺模型2组的40.13%和65.77%。而抗纤维化治疗组MMP-2的表达分别是矽肺模型1组与2组的1.02倍;MMP-9表达分别是矽肺模型1组与2组的1.02倍和1.03倍。预防治疗组MMP-2与MMP-9表达都是矽肺模型2组的1.01倍。结论AcSDKP可以从抑制胶原合成与促进胶原降解的两个方面发挥拮抗矽肺纤维化的作用。

关键词：矽肺 n-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸胶原基质金属蛋白酶

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