检索结果-内蒙古大学图书馆

临床皮肤科杂志 2007年第2期36卷 71-73页

作者：蔡林陈雪赵亭丁北川张建中北京大学人民医院皮肤科北京100044 北京结核病控制研究所北京100044

目的:探讨用pcr-限制性片段长度多态性(RFLP)分析法快速检测游泳池肉芽肿组织中海分枝杆菌。方法:对疑诊为游泳池肉芽肿患者5份皮损组织DNA进行pcr扩增,扩增产物分别用BstEⅡ和HaeⅢ两种限制性内切酶进行酶切,再用琼脂糖凝胶电泳进行RFL... 详细信息

目的:探讨用pcr-限制性片段长度多态性(RFLP)分析法快速检测游泳池肉芽肿组织中海分枝杆菌。方法:对疑诊为游泳池肉芽肿患者5份皮损组织DNA进行pcr扩增,扩增产物分别用BstEⅡ和HaeⅢ两种限制性内切酶进行酶切,再用琼脂糖凝胶电泳进行RFLP分析,并与培养结果进行比较。结果:5份标本中均检测出海分枝杆菌,与培养结果一致。经过3～7个月治疗,4例患者治愈,1例患者好转。结论:用pcr-RFLP可以快速鉴定海分枝杆菌,有利于该类疾病的早期诊断和及时治疗。

关键词：海分枝杆菌感染皮肤 pcr-限制性片段长度多态性分析

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弓形虫的基因型及其主要效应分子的致病机制

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2015年第6期33卷 429-435页

作者：沈继龙王林安徽医科大学病原生物学教研室安徽病原生物学省级实验室安徽省人兽共患病重点实验室合肥230032 安徽中医药大学第一附属医院检验中心合肥230031

弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种广泛寄生于人和温血动物有核细胞内的顶复门原虫(Apicomplexan),具有复杂的生活史和致病机制。Toxoplasma属下仅此一个虫种,但对其种群遗传结构的研究表明,世界各地的弓形虫存在着丰富的遗传多样性。采... 详细信息

弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种广泛寄生于人和温血动物有核细胞内的顶复门原虫(Apicomplexan),具有复杂的生活史和致病机制。Toxoplasma属下仅此一个虫种,但对其种群遗传结构的研究表明,世界各地的弓形虫存在着丰富的遗传多样性。采用pcr-限制性片段长度多态性分析(RFLP)或微卫星标记分型,已从野生动物、家养禽畜和人体分离虫株中发现了232个基因型。其中,北美的弓形虫基因型以typeⅡ、typeⅢ和type12(主要见于野生动物)为主;欧洲以typeⅡ、typeⅢ和typeⅠ为主;非洲以typeⅡ和typeⅢ为主。以上称为原型克隆谱系。但南美的弓形虫表现出丰富的遗传多样性,包括BrⅠ、BrⅡ、BrⅢ和BrⅣ型等。近年研究发现,我国流行的弓形虫优势基因型为Chinese 1型(Toxo DB#9)。该型虫株兼具有原型谱系虫株关键效应分子的多态性。本文综述了世界各地包括我国在内的基因型、宿主免疫应答及其致病特点,为深入研究基因型/效应分子相关的致病机制,以及弓形虫的生物学和流行病学研究提供借鉴。

关键词：弓形虫基因型 pcr-限制性片段长度多态性分析致病机制免疫应答

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贵阳猫源弓形虫株基因分型及毒力研究

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中国人兽共患病学报 2014年第2期30卷 150-154页

作者：孟德娣王林楼研房功思沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032 安徽医学高等专科学校合肥230601 安徽中医药大学第一附属医院检验中心合肥230031

目的观察流行于贵阳猫源弓形虫株基因型分布及其毒力。方法采自贵阳的2株猫源性刚地弓形虫株(CT-1,CT-2),经pcr-限制性片段长度多态性分析(pcr-RFLP),在SAG1,SAG2,SAG3,BTUB,GRA6,c22-8,c29-2,L358,PK1和Apico十个位点进行基因分型;同... 详细信息

目的观察流行于贵阳猫源弓形虫株基因型分布及其毒力。方法采自贵阳的2株猫源性刚地弓形虫株(CT-1,CT-2),经pcr-限制性片段长度多态性分析(pcr-RFLP),在SAG1,SAG2,SAG3,BTUB,GRA6,c22-8,c29-2,L358,PK1和Apico十个位点进行基因分型;同时用弓形虫CT-1株1×103个速殖子分别腹腔注射SPF级KM、BALB/c、C57BL、ICR小鼠,观察其存活率及死亡时间,进行毒力分析。结果从贵阳分离出2株弓形虫株,在10个遗传位点经pcr-RFLP分析均为China 1型(ToxoDB#9)。通过进行不同品系小鼠毒力研究显示,CT-1虫株感染C57BL、BALB/c、KM和ICR小鼠死亡率分别为100%、100%、30%和20%,有显著差异;CT-1虫株对C57BL和BALB/c鼠的毒力显著高于KM和ICR小鼠(P<0.01)。结论流行我国的弓形虫分离株具有有限的遗传多态性;在生物多样性较为丰富的我国西南地区,弓形虫China 1仍为其优势基因型;该型CT-1虫株对不同品系小鼠的致死力具有显著性差异。

关键词：弓形虫基因分型 pcr-限制性片段长度多态性分析毒力

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苹果煤污和蝇粪病病原菌多样性分析

苹果煤污和蝇粪病病原菌多样性分析

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作者：章柱西北农林科技大学

学位级别：硕士

苹果煤污和蝇粪病是苹果生产过程的重要病害,严重影响果实外观。主要表现为果面呈现深色煤烟状脏污,或着生轮纹状排列的黑色小点。苹果煤污和蝇粪病具有症状多样,如煤烟状、颗粒状、分枝状、蜂巢状等,和病原复杂的特点。对分离自中国苹... 详细信息

苹果煤污和蝇粪病是苹果生产过程的重要病害,严重影响果实外观。主要表现为果面呈现深色煤烟状脏污,或着生轮纹状排列的黑色小点。苹果煤污和蝇粪病具有症状多样,如煤烟状、颗粒状、分枝状、蜂巢状等,和病原复杂的特点。对分离自中国苹果主产区的煤污和蝇粪病病原菌采用形态鉴定和核糖体DNA的ITS(内转录间隔区)序列分析相结合的方法对其多样性进行了分析,并利用BsuRⅠ和MspⅠ两种限制性内切酶进行了ITS片段的pcr-RFLP(限制性片段长度多态性分析),为该类病原菌的快速鉴定提供了依据。通过形态、酶切和序列分析三种方法的分析得到了一致的结果,说明利用这两种内切酶对该类病原菌进行分析鉴定具有很好的分辨率。通过本论文的研究描述了三个新种,即苹果锥梗孢Dissoconium mali、梗多隔锥梗孢Dissoconium Conidiophora-multiseptatae及苹果横断孢Strelitziana mali;建立了该类群病原菌的BsuRⅠ和MspⅠITS片段酶切图谱;并通过ITS区序列测定构建系统发育树进行分析将各菌株进行了归属和鉴定。经过对苹果煤污和蝇粪病病原菌多样性进行分析发现其主要分布在子囊菌门座囊菌纲Dothidiomycetes和刺盾炱纲Chaetothyriomycetes的3个目11个属和担子菌门的节担菌纲Wallemiomcycetes,节菌属Wallemia中,,显示了苹果煤污和蝇粪病病原菌具有相当的复杂性。

关键词： pcr-限制性片段长度多态性分析苹果锥梗孢梗多隔锥梗孢苹果横断孢疣丝孢

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流行我国的弓形虫分离株基因分型及其毒力研究

流行我国的弓形虫分离株基因分型及其毒力研究

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作者：王林安徽医科大学

学位级别：硕士

目的本实验主要目的是观察流行我国的人及动物源性弓形虫基因型及其毒力，并检测优势基因型Chinese1型成囊株在小鼠体内的动态分布，以期为弓形虫病的诊断，治疗和疫苗研发提供实验依据。方法分别从安徽，广东，江苏，湖北和山东五省收... 详细信息

目的本实验主要目的是观察流行我国的人及动物源性弓形虫基因型及其毒力，并检测优势基因型Chinese1型成囊株在小鼠体内的动态分布，以期为弓形虫病的诊断，治疗和疫苗研发提供实验依据。方法分别从安徽，广东，江苏，湖北和山东五省收集猫的标本和弓形虫感染病人以分离人及动物源性弓形虫株。抽提弓形虫DNA，采用pcr-限制性片段长度多态性分析（RFLP）方法在SAG1、SAG2、SAG3、BTUB、GRA6、c22-8、c29-2、L358、PK1和Apico位点分析流行我国弓形虫的基因型。pcr反应体系包含25μlpcr master mix、10μm的上下游引物、1.5μl的DNA模板和21.5μl的无菌水，共50μl。各位点pcr反应产物纯化后经相应的内切酶酶切，酶切产物电泳图谱与参考虫株图谱相比较进而确定我国弓形虫株的基因型。为了探究流行我国不同基因型弓形虫株的小鼠毒力，用各基因型的代表性虫株1103个速殖子腹腔注射SPF级KM小鼠，逐日观察并记录小鼠的发病及死亡情况；随后提取各虫株的mRNA，采用逆转录荧光定量pcr（qRT-pcr）检测毒力相关因子ROP2、ROP4、ROP5、ROP16、ROP18、GRA2、GRA3、GRA5、GRA7、GRA15和MIC6的表达量。取Chinese1型弓形虫成囊株TgCtwh6的包囊50个经口感染SPF级KM小鼠，于感染后第2、4、7、10、14、21、35、50和72天，大体观察小鼠健康状况并测定体重；颈椎脱臼法处死小鼠，脑组织压片观察弓形虫包囊形成时间，计算小鼠成囊率，测量包囊直径；同时采用荧光定量pcr和组织接种方法检测弓形虫在血液、心脏、肝脏、脑和淋巴结组织中的动态分布。结果本研究共分离动物源性弓形虫19株，人源性弓形虫4株，对本室分离的23株弓形虫进行基因分型，共揭示了5种基因型，其中3种基因型为非典型，余下2种为原型谱系。这些非典型谱系被分别命名为ToxoDB#9（Chinese1），ToxoDB#204和ToxoDB#205。在23株人源性及动物源性弓形虫中，有15株（65.22%）属于Chinese1型谱系，基因型Chinese1在SAG2，GRA6，L358，PK1，c22-8位点为II型图谱，在c29-2，SAG3和BTUB位点显示为III型图谱，而在Apico位点则为I型图谱。基因型ToxoDB#204在SAG1位点显示为异常的图谱，余下九个位点则和Type II型图谱一致，暗示他们可能有种群相关性。基因型ToxoDB#205为I型和II型的混合图案，在SAG3和L358位点为I型图谱，在SAG2，BTUB，GRA6，c22-8，c29-2，PK1和Apico位点为II型图谱，而在SAG1位点则为II型或者III型谱系。基因型ToxoDB#204和205在中国大陆此前未见报道，在本研究中没有发现Type III型谱系。流行我国不同基因型的弓形虫株1103个速殖子腹腔感染SPF级KM小鼠，优势基因型Chinese1型弓形虫感染小鼠后，能在1周内致死所有小鼠；然而弓形虫TgCtwh6（Chinese1）速殖子感染小鼠后只出现一过性的炎症反应且在存活小鼠脑内发现大量的包囊。腹腔接种弓形虫TgCtxz5和TgCtxz8（ToxoDB#205）1103个速殖子，感染小鼠在5-7天内死亡。毒力相关因子mRNA表达量检测，强毒株ROP16的表达量明显增加（P<0.001）；弱毒株GRA3呈过度表达（P<0.001）。 KM小鼠经口感染弓形虫TgCtwh6包囊50个，第4天即在血液、心、肝和淋巴结组织中检测到弓形虫。感染后第7天，实验鼠脑组织中首次检测到弓形虫DNA（5.52×10～4copies/ml），第14天脑组织中虫体显著增多（P <0.05），21天达到最多（9.1010～6copies/ml），此后脑组织中虫体稳定存在并一直持续到实验结束。弓形虫TgCtwh6感染后第21天，脑组织压片首次查获包囊。血液中虫体随时间推移逐渐增多，4天时显著增多（P <0.05）；7天达到最高（7.4410～4copies/ml），以后逐渐下降；第35天，血液中虫体检测不到。结论1.本实验探究了流行我国的人及动物源性弓形虫基因型，证实Chinese1型基因型为优势基因型（78.33%）。2.发现了两个新的基因型（ToxoDB#204和205）在弓形虫基因型数据库（***）中未见报道。3.通过毒力相关因子表达量检测，发现强毒株高表达ROP16而弱毒株高表达GRA3。4.观察了优势基因型Chinese1型成囊株TgCtwh6在小鼠体内的动态分布，揭示了口服摄入包囊后，虫血症可持续至少35天，为我国弓形虫病的诊断提供实验依据。

关键词：刚地弓形虫基因型毒力 pcr-限制性片段长度多态性分析

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中国西南地区猫源弓形虫株基因分型及毒力研究

中国西南地区猫源弓形虫株基因分型及毒力研究

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作者：孟德娣安徽医科大学

学位级别：硕士

目的研究流行于我国西南地区（贵阳）猫源弓形虫株基因型分布及其毒力。探讨其与中国其他地区有无遗传差异，以及分离株对不同品系小鼠的毒力。方法从中国西南地区（贵阳）收集猫的标本进行动物接种，分离虫株，收集小鼠腹水中的速殖子... 详细信息

目的研究流行于我国西南地区（贵阳）猫源弓形虫株基因型分布及其毒力。探讨其与中国其他地区有无遗传差异，以及分离株对不同品系小鼠的毒力。方法从中国西南地区（贵阳）收集猫的标本进行动物接种，分离虫株，收集小鼠腹水中的速殖子进行提取DNA，经pcr-限制性片段长度多态性分析（pcr-RFLP），在SAG1, SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1和Apico十个位点进行基因分型；反应总体积为50μl，其中pcr master mix25μl、上下游引物各1μl、DNA模板1.5μl。扩增条件为94℃预变性5min，然后94℃变性30s，60℃退火60s，72℃延伸90s，循环35次，最后72℃延伸10min。反应结束后，每管取5μl pcr产物在含溴化乙锭（Ethidium Bromide，EB）的1%琼脂糖凝胶中100V电泳30min，并在凝胶成像仪中观察结果。然后各管余下pcr产物经1%的琼脂糖凝胶电泳pcr产物用相应的内切酶酶切。酶切后产物经2.5%琼脂糖凝胶电泳，0.5μg/ml溴化乙锭染色后，在凝胶成像系统中观察电泳图谱，并与参考虫株图谱进行对比。经PBS稀释的纯化速殖子按1103个/只腹腔感染SPF级KM，BALB/c，C57BL，ICR小鼠，每组10只。逐日观察小鼠状态并计算死亡率和存活时间，进行毒力分析。结果采用10个遗传位点，从贵阳分离出2株弓形虫株，经pcr-RFLP分析揭示了1个基因型（ToxoDB#9, China1）。基因型China1型在SAG2、GRA6、L358、PKl、c22-8位点为基因II型；在SAG3、BTUB、c29-2位点为基因III型；在Apico位点为基因I型。BALB/c、C57BL、KM、ICR四个品系雌鼠各10只，经腹腔接种1×103个CT-1虫株速殖子。C57BL小鼠感染后第5天开始出现竖毛、腹水、抽搐等明显症状甚至死亡，第6天完全死亡。BALB/c小鼠在第5、6、7这三天之内全部死亡。KM小鼠感染后6-7天，活动减少，出现弓背、竖毛等症状，第10天死亡2只小鼠，感染后第15天至观察45天结束，小鼠恢复正常活动，一直存活。ICR小鼠相对于BALB/c、C57BL小鼠症状轻微，在第10、14天分别死亡了2只和1只小鼠，其余的在45天内存活。存活的感染小鼠45天后颈椎脱臼处死，脑组织压片发现有大量包囊形成。通过进行不同品系小鼠毒力研究显示：CT-1虫株感染C57BL、BALB/c、KM、ICR小鼠死亡率有显著差异（P＜0.01），C57BL、BALB/c小鼠两者之间及KM、ICR小鼠两者之间对虫株无显著差异（P＞0.01）。结论虽然从世界各地人体和动物体内分离得到的虫株的基因分型结果显示，各地刚地弓形虫具有丰富的遗传多态性。然而中国大陆虫株的基因分型结果与欧洲、非洲和北美的3个优势克隆株系截然不同：流行中国的动物源性弓形虫分离株具有有限的遗传多样性，弓形虫China1为其优势基因型；在生物多样性较为丰富的我国西南地区（贵阳），China1型（ToxoDB#9）为其优势基因型，流行我国的弓形虫分离株具有有限的遗传多态性；该型CT-1虫株对不同品系小鼠的致死力具有显著性差异。

关键词：弓形虫基因分型 pcr-限制性片段长度多态性分析毒力

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PRA法检测hsp65和groES在非结核分枝杆菌肺病诊断中的价值

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国际检验医学杂志 2019年第17期40卷 2112-2115,2119页

作者：章洁郭秋萍广元市第三人民医院检验科

目的探讨pcr-限制性片段长度多态性分析(PRA)法检测hsp65和groES在非结核分枝杆菌肺病诊断中的价值。方法选取非结核分枝杆菌肺病患者30例为肺病组,结核病患者30例为结核组,非结核分枝杆菌病感染患者30例为感染组,同时选取体检健康者3... 详细信息

目的探讨pcr-限制性片段长度多态性分析(PRA)法检测hsp65和groES在非结核分枝杆菌肺病诊断中的价值。方法选取非结核分枝杆菌肺病患者30例为肺病组,结核病患者30例为结核组,非结核分枝杆菌病感染患者30例为感染组,同时选取体检健康者30例为健康对照组。使用PRA法检测4组受试者痰液中hsp65和groES的相对分子质量。采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)下面积分析hsp65和groES联合检测在非结核分枝杆菌肺病中的诊断意义。结果肺病组患者痰液中hsp65相对分子质量和groES相对分子质量明显高于结核组、感染组及健康对照组(P<0.05)。肺病组与结核组的hsp65和groES灵敏度分别为93%和77%,特异度分别为80%和90%;肺病组与感染组的hsp65和groES的灵敏度分别为77%和63%,特异度分别为63%和96%;肺病组与健康对照组的hsp65和groES的灵敏度分别为93%和76%,特异度分别为83%和87%。hsp65和groES的临界值分别为2.27和1.96。结论 PRA法检测hsp65和groES在非结核分枝杆菌肺病诊断中具有较好的效果。

关键词： pcr-限制性片段长度多态性分析 hsp65 groES 非结核分枝杆菌病

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