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基于pcrarray技术探讨脾虚痰浊AS对心肌线粒体能量代谢通路相关基因mRNA表达的影响

辽宁中医杂志 2016年第5期43卷 1069-1071,I0008页

作者：程岩岩贾连群宋囡马艺馨张妮吴瑾关乐杨关林辽宁中医药大学辽宁沈阳110847 辽宁中医药大学附属医院辽宁沈阳110847

目的:利用pcrarray的技术检测脾虚痰浊动脉粥样硬化(AS)巴马小型猪心肌线粒体能量代谢信号通路相关基因mRNA的表达。方法:普通级雄性巴马小型猪10只,随机分为正常组,脾虚痰浊AS组。脾虚痰浊AS组予饮食不节、劳倦过度结合高脂饲料饮食。... 详细信息

目的:利用pcrarray的技术检测脾虚痰浊动脉粥样硬化(AS)巴马小型猪心肌线粒体能量代谢信号通路相关基因mRNA的表达。方法:普通级雄性巴马小型猪10只,随机分为正常组,脾虚痰浊AS组。脾虚痰浊AS组予饮食不节、劳倦过度结合高脂饲料饮食。使用全自动生化分析仪测定TC、TG、LDL-C水平,提取各组巴马小型猪心肌总RNA,应用线粒体能量代谢信号通路PCR芯片测定脾虚痰浊AS巴马小型猪线粒体能量代谢通路相关mRNA表达。结果:各组巴马小型猪血脂的比较:模型组较正常组TC、TG、LDL-C水平明显升高;pcrarray结果显示:模型组与正常组相比,下调的≥4倍基因有17个,占总基因数的20%,如:ATP5A1、ATP5L、ATP5F1、ATP4A、ATP6V1E2等;上调≥4倍的基因转录占基因总数的10%,为OXA1L、NDUFB8、NDUFB9、NDUFS2、NDUFS8,涉及氢离子转运,琥珀酸脱氢酶亚基,NDUF脱氢酶亚基相关基因。结论:脾虚痰浊AS对心肌线粒体能量代谢的影响可能与涉及氢离子转运,琥珀酸脱氢酶亚基,NDUF脱氢酶亚基相关基因表达改变有关。

关键词： pcrarray 脾虚痰浊线粒体

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受体骨髓间充质干细胞抑制大鼠异位小肠移植急性排斥反应机制的实验研究

受体骨髓间充质干细胞抑制大鼠异位小肠移植急性排斥反应机制的实...

引用

作者：李姗霓天津医科大学

学位级别：博士

第一部分大鼠异位节段性小肠移植急性排斥反应模型的建立目的建立近交系BN-Lew大鼠异位节段性小肠移植的动物模型,通过移植物病理组织学观察,确定急性排斥反应的合适研究时间点。方法利用显微外科技术分别构建BN-Lew异系和Lew-Lew同系... 详细信息

第一部分大鼠异位节段性小肠移植急性排斥反应模型的建立目的建立近交系BN-Lew大鼠异位节段性小肠移植的动物模型,通过移植物病理组织学观察,确定急性排斥反应的合适研究时间点。方法利用显微外科技术分别构建BN-Lew异系和Lew-Lew同系两组大鼠异位节段性小肠移植模型,术后1、3、5、7天分别留取移植肠组织进行HE染色,观察排斥反应的发生及程度。结果BN-Lew异系移植肠术后第3天开始出现轻度急性排斥反应,第5-7天出现严重的急性排斥反应。Lew-Lew同系移植肠无明显急性排斥反应发生。结论BN-Lew大鼠异位节段性小肠移植模型可以发生急性排斥反应,术后第7天为合适的研究时间点。第二部分大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养和鉴定以及体外免疫抑制功能的实验研究目的体外分离、培养和鉴定大鼠骨髓间充质干细胞,对大鼠骨髓间充质干细胞体外免疫抑制功能进行研究。方法采用全骨髓贴壁培养法进行MSCs的分离、培养,传代扩增,利用流式细胞技术进行表型鉴定。以供鼠脾细胞作为反应T细胞,受鼠MSCs为刺激细胞,ConA作为T细胞增殖刺激因子,建立混合淋巴细胞培养体系。分4组进行对比研究：①脾细胞；②脾细胞+MSCs;③脾细胞+ConA;④脾细胞+ConA+MSCs。共孵育72小时后应用流式细胞仪检测T细胞亚群CD4+和CD8+的表达,分析MSCs对T细胞增殖的抑制作用。结果①体外分离的原代MSCs在48-72小时大部分贴壁,3周左右达到90%汇合,细胞形态由圆形过度到梭形。②流式细胞技术检测第3代MSCs表面标记物CD29、CD90阳性率大于95%,CD45阳性率低于5%。③CD4+细胞比例：脾细胞+MSCs组与脾细胞+ConA组间无差别,其它组间差异显著；脾细胞+ConA+MSCs组与脾细胞+ConA组差异最显著；CD8+细胞比例：脾细胞组与脾细胞+MSCs组、脾细胞+ConA组和脾细胞+ConA+MSCs组间无差异,脾细胞+MSCs组、脾细胞+ConA组和脾细胞+ConA+MSCs (?)(?)间差异显著；CD4/CD8：除脾细胞+ConA组和脾细胞+ConA+MSCs组间无差异外其余组间差异均有显著性。结论全骨髓帖壁培养法可取得较高纯度的MSCs,大鼠骨髓MSCs增殖能力强,可多次传代。MSCs在体外具有机制T淋巴细胞增殖的作用,以对CD4+的抑制为主,对CD8+的抑制作用不明显。第三部分受体骨髓间充质干细胞抑制大鼠小肠移植急性排斥反应机制的研究目的研究受体骨髓间充质干细胞抑制大鼠小肠移植急性排斥反应的机制。方法将实验动物随机分为4组：①Lew-Lew同系对照组；②BN-Lew急性排斥组；③急性排斥+FK506治疗对照组；④急性排斥+MSCs治疗组。术后第7天留取移植肠标本,病理切片观察排斥反应程度。pcrarray的方法对大鼠免疫相关的所有细胞因子的基因转录水平进行检测分析比较。结果急性排斥组较同系对照组IDO和HGF表达显著降低,Tnfsf15表达显著升高；急性排斥+FK506治疗对照组较急性排斥组IDO和HGF表达显著升高,Tnfsf15和Igf2显著降低：急性排斥+MSCs治疗组较急性排斥组Tnfsf15显著降低,伴、Illa, VEGF-A, Igfbp6显著升高,Igf2, iNOs, Igfbpl Tgfbl的显著降低；急性排斥+MSCs治疗组较急性排斥+FK506治疗对照组IDO和Tgfb1显著降低,VEGF-A、I115和Ccr3显著升高；急性排斥+MSCs治疗组较同系对照组VEGF-A和I115显著升高,IDO、Igf2、Ifng、Lta、Tgfb1、Ccl4和I118显著降低；急性排斥+FK506治疗对照组较同系对照组Ccl4、CCR3、Igf2和Tgfb1显著降低。结论①IDO、HGF和Tnfsf15这三种细胞因子相关的途径在大鼠小肠移植急性排斥反应过程中发挥重要作用。②FK506能抑制IDO和HGF表达,上调Tnfsf15表达,有效抑制大鼠小肠移植急性排斥反应的发生。③MSCs主要是通过上调Tnfsf15的表达发挥抑制急性排斥的作用,不能完全抑制大鼠小肠移植急性排斥反应。MSCs的抑制效果弱于FK506,但免疫耐受相关因子的表达,提示MSCs不仅可以抑制小肠移植急性排斥反应,还可能诱导免疫耐受。

关键词：大鼠小肠移植急性排斥间充质干细胞细胞因子 pcrarray

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健脾祛痰化瘀方药对脾虚痰浊动脉粥样硬化巴马猪肝脏线粒体能量代谢基因表达的影响

引用

辽宁中医杂志 2017年第11期44卷 2427-2429页

作者：王英贾连群宋囡马艺鑫杨关林辽宁中医药大学中医脏象理论及应用教育部重点实验室辽宁沈阳110847

目的:基于pcrarray技术探讨健脾祛痰化瘀方药对脾虚痰浊动脉粥样硬化巴马猪肝脏线粒体能量代谢基因表达的影响。方法:将9只健康广西巴马小型猪随机分为正常组、模型组和治疗组。模型组和治疗组给予饮食不节、劳倦过度结合高脂饲料饮食,... 详细信息

目的:基于pcrarray技术探讨健脾祛痰化瘀方药对脾虚痰浊动脉粥样硬化巴马猪肝脏线粒体能量代谢基因表达的影响。方法:将9只健康广西巴马小型猪随机分为正常组、模型组和治疗组。模型组和治疗组给予饮食不节、劳倦过度结合高脂饲料饮食,建立脾虚痰浊动脉粥样硬化模型,造模成功后治疗组给予健脾祛痰化瘀方药干预。提取各组巴马小型猪肝脏总RNA,应用线粒体能量代谢信号通路PCR芯片测定各组巴马猪线粒体能量代谢相关基因表达。结果:治疗组与模型组相比上调或下调2倍以上的基因有17个。发生改变的17个基因中11个基因为线粒体呼吸链复合物I亚基,1个基因为呼吸链复合物II亚基,2个基因为呼吸链复合物IV的亚基,2个基因为呼吸链复合物V的亚基,1个基因涉及应激反应。结论:健脾祛痰化瘀方药通过调节线粒体呼吸链复合物I、II、IV、V亚基基因表达,改善脾虚痰浊动脉粥样硬化巴马猪肝脏线粒体能量代谢功能。

关键词：线粒体能量代谢脾虚生痰 pcrarray

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骨髓中Ly6C+单核细胞祖细胞对造血调控机制的研究

骨髓中Ly6C+单核细胞祖细胞对造血调控机制的研究

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作者：高俊敏上海师范大学

学位级别：硕士

造血干细胞（Hematopoietic stem cells,HSCs）是各种血细胞的始祖细胞,具有持续和重建造血的重要生理功能。骨髓微环境（Niche）作为适宜HSCs生存的特定微环境,通过黏附分子和膜表面信号分子与HSCs直接接触或通过分泌细胞因子等刺激HSC... 详细信息

造血干细胞（Hematopoietic stem cells,HSCs）是各种血细胞的始祖细胞,具有持续和重建造血的重要生理功能。骨髓微环境（Niche）作为适宜HSCs生存的特定微环境,通过黏附分子和膜表面信号分子与HSCs直接接触或通过分泌细胞因子等刺激HSCs中信号的活化,从而调节HSCs的自我更新、增殖、分化和生存等细胞生物学行为。小鼠骨髓中的粒细胞的表型为CD11b+Gr1+,分为两个亚型:粒细胞样（CD11b+Ly6C-Ly6G+）和单核细胞样（CD11b+Ly6C+Ly6G+）。骨髓中的单核细胞祖细胞对HSCs的调控作用目前尚未见报道。本文首次探究了骨髓中Ly6C+单核细胞祖细胞调节HSCs增殖分化的具体机制。文章分为三个部分:（1）研究骨髓中Ly6C+单核细胞祖细胞对造血重建的影响;（2）研究骨髓中Ly6C+单核细胞祖细胞对造血调控的作用机制;（3）研究骨髓中Ly6C+单核细胞祖细胞中特异性表达因子对HSCs扩增的影响。期间我们运用了体内抗体清除、流式分选、免疫荧光染色、pcrarray等技术手段完成研究任务。研究发现,骨髓中Ly6C+单核细胞祖细胞被抗体清除后,小鼠造血重建能力显著增强,说明Ly6C+单核细胞祖细胞对小鼠HSCs具有抑制作用;接下来我们用免疫荧光染色的方法找寻Ly6C+单核细胞祖细胞和HSCs这两种细胞的位置关系,用不同颜色的抗体标记这两种细胞,实验表明骨髓中Ly6C+单核细胞祖细胞和HSCs细胞紧密相邻,提示Ly6C+单核细胞祖细胞本身或其分泌因子可能对造血干细胞有一定的调控作用;为了进一步探究Ly6C+单核细胞祖细胞中哪些因子对HSCs起关键的调控作用,我们用pcrarray筛选出Ly6C+单核细胞祖细胞中特异性表达的细胞因子,在众多因子中,我们根据前人对B细胞体外培养的研究,找到我们期望进一步研究的两种表达上调的因子Tnfsf12、Tnfsf13,并在体外培养造血干细胞体系中添加Tnfsf12、Tnfsf13这两种细胞因子,经过培养六天后流式分析造血干细胞总数比例和绝对数统计值,结果显示,加入这些因子的细胞组较对照组而言,造血干细胞发生了一定程度的分化,说明这些因子可能具有促进造血干细胞分化的作用。本文的研究为揭示Niche细胞对HSCs的调控机制提供了新的思路,首次发现骨髓中Ly6C+单核细胞祖细胞通过分泌Tnfsf12、Tnfsf13抑制HSCs的自我更新能力。后期我们还将继续研究Ly6C+单核细胞祖细胞对HSCs的调控作用,为进一步揭示骨髓微环境中的细胞成分提供资料。

关键词：造血干细胞骨髓中单核细胞祖细胞 Ly6C+ 流式细胞术 pcrarray 免疫荧光染色体外培养

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