检索结果-内蒙古大学图书馆

科学通报 2024年

作者：杨茜孟祥兵王春刘婷婷王克剑余泓饶玉春邹金鹏中国农业科学院中国水稻研究所水稻生物育种全国重点实验室浙江师范大学生命科学学院中国科学院遗传与发育生物学研究所植物基因组学国家重点实验室和国家植物基因中心中国科学院种子设计创新学院崖州湾国家实验室中国科学院大学

引导编辑(prime editing, pe)作为新一代精准基因组编辑技术,能够实现任意类型碱基替换、小片段DNA插入和缺失,已成功应用于作物性状改良及新种质创制.然而,目前在某些位点上, pe编辑效率较低,无法实现预期目标编辑.因此,为了提升工作... 详细信息

引导编辑(prime editing, pe)作为新一代精准基因组编辑技术,能够实现任意类型碱基替换、小片段DNA插入和缺失,已成功应用于作物性状改良及新种质创制.然而,目前在某些位点上, pe编辑效率较低,无法实现预期目标编辑.因此,为了提升工作效率并加快获取目标编辑植株的速度,需建立一套完整的pe效率评估体系,用以评估不同位点的精准编辑效率.本研究选择6个已知具有不同编辑效率的pe载体,通过农杆菌介导的遗传转化法将其转化到水稻愈伤组织,随后对转化后的愈伤组织进行不同时间点连续取样,并利用高通量二代测序技术进行检测,以研究pe技术介导的精准编辑在整个愈伤组织转化过程中发生的时间和效率.实验结果显示,最早在侵染后第13天的愈伤组织中就能检测到精准编辑的发生,从第13天开始,编辑效率逐渐上升,并在第30天的愈伤组织中达到最大值.特别地,在侵染后第15天的愈伤组织中,不同位点的编辑效率与植株中的编辑效率呈良好的对应关系,因此,该时间点可用于评估植株中pe精准编辑效率.该pe效率评估体系的建立,为评估植株精准编辑效率提供了参考,有助于精准编辑在作物改良中的应用.

关键词：水稻 pe技术愈伤组织二代测序精准编辑评估体系

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DNA聚合酶POLG（D260A）突变猪模型构建及线粒体DNA突变谱分析

DNA聚合酶POLG（D260A）突变猪模型构建及线粒体DNA突变谱分析

引用

作者：郑伟五邑大学

学位级别：硕士

线粒体DNA(Mitochondrial DNA,mtDNA)突变造成线粒体功能缺陷,与线粒体疾病和衰老等密切相关。借助携带mtDNA突变的动物模型来深入研究相关病理是常见的手段之一,但直接进行mtDNA突变还存在较大局限,可用模型很少。核基因编码的线粒体DN... 详细信息

线粒体DNA(Mitochondrial DNA,mtDNA)突变造成线粒体功能缺陷,与线粒体疾病和衰老等密切相关。借助携带mtDNA突变的动物模型来深入研究相关病理是常见的手段之一,但直接进行mtDNA突变还存在较大局限,可用模型很少。核基因编码的线粒体DNA聚合酶γ催化亚基(Catalytic Subunit of ploymerase gamma,POLG)的外切酶结构域在mtDNA复制过程中发挥校准作用,破坏该区域会在mtDNA中引入大量随机突变,为构建mtDNA突变模型提供了新思路。科学家们已成功构建POLG外切酶活性缺陷的小鼠模型,并证实其mtDNA突变显著增加。但小鼠模型在用于人类相关疾病研究中有时并不理想,而猪的生理结构和代谢途径与人类更为接近,是mtDNA突变相关疾病研究的理想动物模型。因此,本研究构建了POLG外切酶活性缺陷的猪模型,并对其mtDNA突变谱进行综合分析,探究该模型猪后续用于mtDNA突变猪模型筛选与构建的可行性。首先,本研究利用引导编辑器(Prime editor,pe)突变猪POLG基因,将外切酶结构域中第260位天冬氨酸(Aspartate,D)突变为丙氨酸(Alanine,A),获得外切酶活性缺陷的POLG(D260A)变体猪模型。针对猪POLG基因的靶位点,设计不同的peg RNA,在猪胎儿成纤维细胞(Porcine fetal fibroblasts,PFF)中测试pe的编辑效率。结果显示,当peg RNA的RT模板长为17个核苷酸(Nucleotide,nt)、PBS为10 nt时,编辑效率达到最高:pe2为22.7%,pe3为53.4%。本研究利用最优的peg RNA编辑PFF,筛选获得了携带POLG(D260A)变体的细胞克隆,其作为供体细胞,用于体细胞核移植(Somatic cell nuclear transfer,SCNT),成功构建了携带POLG(D260A)突变的纯合子和杂合子猪模型。纯合子模型猪在2-4月龄时陆续死亡,而杂合子模型猪可以正常生长到成年,没有明显表型异常。随后,本研究对不同月龄(2、4和6月)POLG(D260A)突变猪的多个组织(肝脏、小肠和心脏)的mtDNA进行测序,分析mtDNA突变谱特征。结果显示,纯合子猪与野生型相比,其mtDNA存在大量低频(<1%)突变,且随着时间累计增加。其中,肝脏中mtDNA突变数量最多,小肠次之,心脏中最少。mtDNA突变类型主要倾向于A→G(T→C),且CDS、r RNA和t RNA区域的突变数量略多于D-loop区。从氨基酸改变的结果来看,mtDNA突变主要导致氨基酸错义突变,而同义突变比例相对较低。进一步分析蛋白编码区域的突变发现,在已报道的致病性mtDNA突变中,37%(17/46)的突变可以在至少一个样品中被检测到,提示该猪模型用于筛选致病性mtDNA突变的巨大潜力。总之,本研究首次通过pe技术构建了POLG(D260A)突变猪模型,验证了pe应用于大动物模型基因修饰的可行性。POLG(D260A)突变猪随着年龄增长,mtDNA突变负荷逐渐增加,且能产生致病性mtDNA突变,可为大规模筛选各种mtDNA突变猪模型提供有效平台。

关键词：线粒体DNA pe技术 POLG基因突变猪模型突变谱

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几种SiC刻蚀方法的刻蚀速率

几种SiC刻蚀方法的刻蚀速率

引用

中国电子学会第十二届全国青年学术年会

作者：徐俊平杨银堂贾护军西安电子科技大学微电子学院陕西西安 710071

在简单介绍了刻蚀SiC的几种方法的基础上重点讨论pe技术,RIE技术,ECR技术,ICP技术中对于SiC刺蚀速率的影响因素。通过前人所做的实验得出,刻蚀速率的影响因素主要是产生等离子体的刻蚀气体,通入的气体组分比,气体流速,反应室内的压力,... 详细信息

在简单介绍了刻蚀SiC的几种方法的基础上重点讨论pe技术,RIE技术,ECR技术,ICP技术中对于SiC刺蚀速率的影响因素。通过前人所做的实验得出,刻蚀速率的影响因素主要是产生等离子体的刻蚀气体,通入的气体组分比,气体流速,反应室内的压力,衬底偏压,射频功率,刻蚀时间,温度等。不同的条件下刻蚀速率不一样。为得到最大刻蚀速率,目前使用ICP刻蚀方法最好。

关键词：碳化硅 pe技术 RIE技术 ECR技术 ICP技术刻蚀速率刻蚀方法

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