检索结果-内蒙古大学图书馆

中国肿瘤临床 2012年第14期29卷 945-948页

作者：刘勇韩涛潘源梁寒天津医科大学附属肿瘤医院胃部肿瘤科天津市肿瘤防治重点实验室天津市300060 天津医科大学附属肿瘤医院ICU科天津市300060

目的:研究pi3k信号通路对胃癌BGC-823细胞中P27与磷酸化P27(p-P27)蛋白表达分布的影响。方法:LY294002处理BGC-823细胞,流式细胞术测定处理前后两组细胞周期分布。Western blotting测定两组细胞总蛋白、胞浆蛋白、核蛋白中P27与p-P27(Th... 详细信息

目的:研究pi3k信号通路对胃癌BGC-823细胞中P27与磷酸化P27(p-P27)蛋白表达分布的影响。方法:LY294002处理BGC-823细胞,流式细胞术测定处理前后两组细胞周期分布。Western blotting测定两组细胞总蛋白、胞浆蛋白、核蛋白中P27与p-P27(Thr187、Thr157及Ser10)蛋白含量及分布特点。结果:处理后G_1期细胞数明显增加(83.9%vs.67.6%,P<0.01)P27在总蛋白、胞浆蛋白和核蛋白中表达均显著增加(P<0.01,P<0.01,P<0.01);p-P27(Ser10)在总蛋白、胞浆蛋白和核蛋白中表达均显著下降(P<0.01,P<0.01,P<0.01);p-P27(Thr157)在总蛋白、胞浆蛋白中表达均显著下降(P<0.01,P<0.01),在核蛋白中下降不明显(P=0.482);p-P27(Thr187)在总蛋白、胞浆蛋白中表达均下降,在核蛋白中表达增高,均无显著性差异(P=0.254,P=0.70,P=0.223)。结论:阻断pi3k通路可增加胃癌细胞P27蛋白表达,降低p-P27蛋白表达,改变P27和p-P27蛋白的核浆分布,可以使细胞周期停滞于G_1期,诱导细胞凋亡。

关键词： pi3k信号通路胃癌 P27蛋白磷酸化P27蛋白

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pi3k信号通路对哮喘小鼠调节性T细胞与Th17失衡的调控作用

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中国病理生理杂志 2012年第2期28卷 332-337页

作者：聂颖张维溪崇蕾王婷李昌崇温州医学院附属育英儿童医院呼吸科浙江温州325027

目的:探讨pi3k信号通路对哮喘小鼠T细胞中辅助性T细胞17(Th17)与CD4+CD 25+调节性T细胞(Treg)失衡的调控作用。方法:尼龙毛柱法分选对照组和哮喘组BALB/c小鼠脾脏T细胞,进而在细胞水平分组:对照组(A组)分为2个亚组:空白对照组(A1),pi3k... 详细信息

目的:探讨pi3k信号通路对哮喘小鼠T细胞中辅助性T细胞17(Th17)与CD4+CD 25+调节性T细胞(Treg)失衡的调控作用。方法:尼龙毛柱法分选对照组和哮喘组BALB/c小鼠脾脏T细胞,进而在细胞水平分组:对照组(A组)分为2个亚组:空白对照组(A1),pi3k抑制剂LY294002对照组(A2);哮喘组(B组)继续分为4个亚组:哮喘组(B1),5μmol/L pi3k抑制剂LY294002组(B2),10μmol/L pi3k抑制剂LY294002组(B3),20μmol/L pi3k抑制剂LY294002组(B4),共培养72 h,采用流式细胞仪检测CD4+CD 25+Treg的数量,酶联免疫吸附反应(ELISA)检测上清中白细胞介素(IL)-10和IL-17水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转录因子Foxp3和RORγt的mRNA水平。结果:(1)分选后获得的T细胞纯度为(74.12±3.08)%,细胞存活率为(92.82±3.21)%;(2)Treg的数量B1组较A1组显著降低(P<0.01);A2组显著高于A1组(P<0.05);B3和B4组较B1组显著增高(均P<0.01);(3)IL-17水平和RORγt mRNA表达B1组较A1组显著增高(P<0.01);A2组显著低于A1组(P<0.01,P<0.05);B2、B3、B4组均显著低于B1组(均P<0.01),呈剂量依赖性降低;而IL-10水平和Foxp3 mRNA表达B1组显著低于A1组(P<0.01);A2组显著高于A1组(P<0.01);B2、B3和B4组均显著高于B1组(P<0.01),且呈浓度依赖性增高;(4)RORγt/Foxp3 mRNA的比值B1组显著高于A1组(P<0.01);A2组显著低于A1组(P<0.01);B2、B3和B4组显著低于B1组(P<0.01),且呈浓度依赖性降低;RORγt/Foxp3 mRNA比值与IL-17水平呈正相关(r=0.89,P<0.01);RORγt/Foxp3 mRNA比值与IL-10呈负相关(r=-0.86,P<0.01)。结论:哮喘小鼠存在Th17/Treg失衡,pi3k信号通过调控Treg/Th17失衡而参与哮喘发病过程。

关键词：哮喘 pi3k信号通路辅助性T细胞17 调节性T细胞白细胞介素17 白细胞介素10

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pi3k信号通路的MiRNA基因多态性与宫颈癌易感性的相关性及其机制研究

PI3K信号通路的MiRNA基因多态性与宫颈癌易感性的相关性及其机制...

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作者：陈柯蓉北京协和医学院

学位级别：硕士

背景:宫颈癌是世界女性因癌症死亡的第四大的原因。高危型HPV的持续感染是宫颈癌发生的最主要的风险因素,除此之外,遗传因素也在个体宫颈癌易感性差异中发挥作用。研究发现,pi3k信号通路在宫颈癌中异常调控,pi3k信号通路的miRNA基因中的... 详细信息

背景:宫颈癌是世界女性因癌症死亡的第四大的原因。高危型HPV的持续感染是宫颈癌发生的最主要的风险因素,除此之外,遗传因素也在个体宫颈癌易感性差异中发挥作用。研究发现,pi3k信号通路在宫颈癌中异常调控,pi3k信号通路的miRNA基因中的SNP可能会通过影响miRNA的表达及其与靶基因的相互作用而在信号通路异常调控中发挥作用,从而在疾病发生中发挥作用。因此,研究pi3k信号通路的miRNA基因中的SNP与宫颈癌发生风险的相关性及其机制,将有助于阐明宫颈癌的发病机制以及寻找到新的宫颈癌诊断和治疗分子靶标。方法:首先筛选出宫颈癌中异常表达的miRNA;通过TargetScan数据库预测这些miRNA的靶基因;通过DAVID数据库对miRNA靶基因进行富集,筛选出pi3k信号通路相关的miRNA基因;通过Ensemble等数据库筛选出miRNA基因相关的SNP(miR-219a的rs107822,let-7i 的 rs10877887,miR-149 的 rs2292832,miR-143 的rs353293,miR-499 的 rs3746444,miR-132 的 rs3803808,miR-10b 的 rs4078756,let-7a的rs629367,miR-26a的rs7372209);随机选择宫颈癌患者431人,宫颈癌癌前病变患者273人,健康对照698人,采用MassARRAY核酸质谱分析技术对人群SNP位点进行基因分型;分析miRNA基因中的SNP等位基因和基因型与宫颈癌癌前病变及宫颈癌发生风险的相关性。基于前期课题组研究成果,筛选出与pi3k信号通路相关的miRNA基因miR-196a-3p,研究miR-196a-3p中的多态性位点rs1 1614913与宫颈癌发生风险相关的机制。通过qPCR和Steam-loop RT-qPCR分析miR-196a-3p及其靶基因在宫颈癌组织与正常组织中的表达水平;通过双荧光素酶报告基因检测系统研究miR-196a-3p(模拟物或携带rs11614913不同等位基因的模拟物)与靶基因的相互作用;通过构建携带rs11614913不同等位基因的miR-196a-3p的过表达载体,研究rs11614913对miR-196a-3p和靶基因表达的影响;通过CCk8实验检测过表达或敲除miR-196a-3p或靶基因的宫颈癌细胞的增殖能力;采用流式细胞实验检测过表达或敲除miR-196a-3p靶基因的宫颈癌细胞的凋亡能力。结果:miR-219基因中的SNP位点rs107822和miR-149基因中的SNP位点rs2292832的等位基因频率在宫颈癌组和对照组之间的差异有统计学意义(P=0.004和P=0.004)。其中rs107822位点等位基因C是宫颈癌的风险因素(OR=1.292,95%CI:1.088-1.536);rs2292832位点的等位基因C是宫颈癌的保护性因素(OR=0.767,95%CI:0.639-0.921)。遗传模式分析的结果显示,rs107822 和 rs2292832位点的基因型在宫颈癌组和对照组间分布频率的差异具有统计学意义(P=4.5x10-3,P=0.004),两个位点的最优遗传模式均为Log-addictive,在该模式下,rs107822位点的2CC-CT基因型可能是宫颈癌发生的风险因素(OR=1.28,95%CI:1.08-1.51);rs2292832位点的2CC-CT基因型可能是宫颈癌发生的保护性因素(OR=0.76,95%CI:0.64-0.92)。miR-196a-3p在宫颈癌组织中的表达水平显著高于正常组织;miR-196a-3p可以显著促进宫颈癌细胞的增殖能力;miR-196a-3p在宫颈癌细胞通过靶向pi3k信号通路中的CASP9发挥作用;CASP9可以抑制宫颈癌细胞的增殖能力,增强宫颈癌细胞的凋亡能力;在宫颈癌细胞中,rs11614913位点的等位基因C与等位基因T相比与更高的miR-196a-3p表达水平相关,而与更低的CASP9表达水平相关;rs11614913位点的等位基因C与等位基因T相比更有利于miR-196a-3p对CASP9的负调控。结论:miR-219基因中的SNP位点rs107822和miR-149基因中的SNP位点rs2292832与宫颈癌易感性相关。miR-196a-3p通过靶向CASP9在宫颈癌中发挥癌基因的作用,该miRNA基因中的SNP位点rs1 1614913可以通过影响miR-196a-3p的表达及miR-196a-3p与靶基因CASP9的相互作用而在宫颈癌发生过程中发挥作用。

关键词：宫颈癌 pi3k信号通路 miRNA rs11614913 CASP9

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pi3k信号通路对GES-1、BGC-823细胞系中磷酸化P27蛋白表达和分布的影响

PI3K信号通路对GES-1、BGC-823细胞系中磷酸化P27蛋白表达和分布...

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作者：韩涛天津医科大学

学位级别：硕士

目的：1、研究P27蛋白及三种磷酸化P27蛋白(p-P27(Thr187)、p-P27(Thr157)、p-P27 (Serl0))在GES-1、BGC-823两细胞系的表达及分布差异。2、研究P13k信号通路在GES-1、BGC-823细胞系中对P27蛋白、p-P27 (Thr187)、p-P27 (Thr157)、p-P27 (Ser10)的表达及分布的影响。方法：培养人胃黏膜上皮永生化细胞系GES-1及人胃癌细胞系BGC-823,以流式细胞术测定各自的细胞周期分布。以Western blotting测定两种细胞总蛋白、浆蛋白、核蛋白中P27及p-P27 (Thr187)、p-P27 (Thr157)、p-P27 (Ser10)的含量及分布特点。以pi3k信号通路特异性阻滞剂LY294002处理两种细胞系,再以流式细胞术测定细胞周期,Western blotting测定目的蛋白在细胞总蛋白及核、浆中的表达及分布。所得结果输入SPSS13.0统计软件进行分析。结果： 1、对比GES-1、BGC-823两细胞系,在细胞总蛋白中,P27蛋白、p-P27(Thr187)、p-P27 (Thr157)、p-P27 (Ser10)的表达均有统计学差异(P=0.000；P=0.000；P=0.000；P=0.000)。在细胞浆蛋白中,P27蛋白、p-P27 (Thr157)、p-P27 (Ser10)表达的差异有统计学意义(P=0.001; P=0.000; P=0.000),而p-P27(Thr187)表达无统计学意义(P=0.052)。在细胞核蛋白中,P27蛋白、p-P27(Thr187)、p-P27 (Ser10)表达的差异有统计学意义(P=0.001；P=0.000；P=0.000),而p-P27 (Thr157)表达无统计学意义(P=0.288)。两细胞系周期分布差异明显(P=0.003)。 2、GES-1细胞系经LY294002作用后,在细胞总蛋白中,P27蛋白及p-P27(Thr187)、p-P27 (Thr157)、p-P27 (Ser10)的表达量变化均无统计学意义(P=0.651; P=0.482; P=0.357; P=0.070)。在细胞浆蛋白中,p-P27(Thr187)、p-P27 (Ser10)表达量变化无统计学意义(P=0.053；P=0.056),而P27蛋白和p-P27 (Thr157)表达量则变化显著(P=0.013；P=0.002)。在细胞核蛋白中,P27蛋白及p-P27 (Thr187)、p-P27 (Thr157)、p-P27 (Ser10)表达量均无统计学差异(P=0.558; P=0.140; P=0.223; P=0.052)。给予处理前后细胞周期变化无统计学意义(P=0.392)。 3、BGC-823细胞系经LY294002作用后,在细胞总蛋白中,P27蛋白、p-P27(Thr157)、p-P27(Ser10)表达量均变化显著,差别有统计学意义(P=0.000；P=0.001；P=0.000),而p-P27 (Thr187)表达量无统计学变化(P=0.254)。在细胞浆蛋白中,P27蛋白、p-P27 (Thr157)、p-P27 (Ser10)表达量变化显著(P=0.000; P=0.000; P=0.001),而p-P27 (Thr187)表达量无明显变化(P=0.070)。在细胞核蛋白中,P27蛋白、p-P27 (Ser10)表达量变化显著(P=0.001; P=0.001),而p-P27 (Thr187), p-P27 (Thr157)表达量无明显变化(P=0.223；P=0.482)。给予处理前后细胞周期变化显著(P=0.001)。 4、两细胞系同时经LY294002作用后,在细胞总蛋白中P27蛋白、p-P27(Thr157)、p-P27(Ser10)的表达无统计学差异(P=0.391;P=0.158;P=0.106),仅p-P27 (Thr187)表达差别显著(P=0.000)。在细胞浆蛋白中,P27蛋白、p-P27 (Thr157). p-P27 (Ser10)的表达无统计学差异(P=0.279；P=0.062；P=0.196),仅p-P27 (Thr187)表达差别显著(P=0.002)。在细胞核蛋白中,P27蛋白、p-P27 (Thr157)、p-P27 (Ser10)的表达无统计学差异(P=0.092；p=0.081; P=0.055),仅p-P27 (Thr187)表达差别显著(P=0.000)。两组细胞的周期分布无统计学差异(P=0.564)。结论： 1、P27蛋白及磷酸化P27

关键词：胃癌 P27蛋白磷酸化P27蛋白 pi3k信号通路 Akt分布

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二仙汤对过氧化氢诱导的成骨细胞蛋白组学及pi3k信号通路的影响

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中国中药杂志 2021年第15期46卷 3934-3942页

作者：吴雨蒙王莹吴琪孙煜昕施旻张丽任明诗刘波江西中医药大学江西南昌330004 上饶卫生学校江西上饶334600 九江市妇幼保健院江西九江332000

采用过氧化氢(H_(2)O_(2))复制细胞氧化应激模型,探讨二仙汤对过氧化氢(H_(2)O_(2))刺激的成骨细胞蛋白组学的影响及其保护机制。取新出生(24 h以内)乳鼠的头盖骨培养原代成骨细胞,实验分为正常组、模型组、福善美组、二仙汤组4组,空白... 详细信息

采用过氧化氢(H_(2)O_(2))复制细胞氧化应激模型,探讨二仙汤对过氧化氢(H_(2)O_(2))刺激的成骨细胞蛋白组学的影响及其保护机制。取新出生(24 h以内)乳鼠的头盖骨培养原代成骨细胞,实验分为正常组、模型组、福善美组、二仙汤组4组,空白组和模型组加入空白血清,福善美组和二仙汤组则分别加入福善美含药血清和二仙汤含药血清干预45 h后,除正常组外,各组均加入H_(2)O_(2)刺激3 h后,提取细胞蛋白,采用Nano-LC-LTQ-Orbitrap系统检测,Protein Discovery软件进行蛋白鉴定,SIEVE软件进行相对定量定性分析;另外用LY294002(10μmol·L^(-1))阻断pi3k信号通路,实验分为空白对照组、模型组、LY294002组、二仙汤组、二仙汤+LY294002组,观察LY294002干预下二仙汤含药血清对H_(2)O_(2)刺激成骨细胞后细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性及BMP-2、OPG、p-Akt、p-FoxO1蛋白表达的影响。结果显示,二仙汤组与模型组比较共发现78个差异蛋白,这些蛋白参与pi3k/Akt、胰高血糖素、雌激素、胰岛素等信号通路的调节;使用LY294002后,二仙汤对成骨细胞增殖的促进作用被削弱,OPG、p-FoxO1表达显著下调,BMP-2、p-Akt表达有下调趋势但无显著性,然而LY294002和二仙汤均提高了成骨细胞ALP活力,这可能与细胞状态、细胞分化进程有关。以上结果表明,二仙汤含药血清对H_(2)O_(2)刺激的成骨细胞有保护作用,pi3k/Akt信号通路是内在机制之一。

关键词：二仙汤成骨细胞氧化应激蛋白组学 pi3k信号通路

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天然产物通过抑制pi3k信号通路抗肝纤维化的研究进展

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中国药理学通报 2024年第4期40卷 619-624页

作者：朱武嫦莫孝成苏宏梅韦锦斌广西医科大学药学院药理学教研室广西南宁530021

肝纤维化是慢性肝损伤的一种内在反应,其特征是细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的合成、降解和沉积失衡,会导致肝细胞受损和肝脏正常结构被破坏。而肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)的异常激活被认为是驱动肝纤维化的关... 详细信息

肝纤维化是慢性肝损伤的一种内在反应,其特征是细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的合成、降解和沉积失衡,会导致肝细胞受损和肝脏正常结构被破坏。而肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)的异常激活被认为是驱动肝纤维化的关键因素。在肝损伤的过程中,HSCs能够活化并向肌成纤维细胞转化进而产生过量的ECM。炎症和氧化应激在HSCs的激活中发挥重要作用,而HSCs凋亡则有利于肝纤维化的消退。抑制磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,pi3k)信号通路可降低炎症反应、氧化应激,诱导HSCs凋亡,从而改善肝纤维化。来源于植物的天然产物,包括黄酮类和萜类可以抑制pi3k信号通路,对肝纤维化的发生发展起到抑制作用。该文旨在综述pi3k信号通路在肝纤维化中的作用,总结近年来黄酮类化合物和萜类化合物通过抑制pi3k信号通路抗肝纤维化作用的证据,为进一步开发能有效防治肝纤维化的药物提供参考。

关键词：肝纤维化肝星状细胞 pi3k信号通路天然产物黄酮类化合物萜类化合物

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投喂频率对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)pi3k信号通路及糖代谢相关酶基因表达的影响

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海洋与湖沼 2022年第5期53卷 1189-1196页

作者：赵楠楠崔彦婷王忠凯王聪张志豪邓之通赵瑞阳孙金凤王仁杰李玉全青岛农业大学海洋科学与工程学院山东青岛266109

适宜的投喂频率能提高对虾的代谢和免疫能力,加快生长,实现提质增效的目标。为探讨不同投喂频率对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)糖代谢及相关信号通路的影响,以(7.6±1.0)g的凡纳滨对虾为实验材料,设置2、3、4、6次/d,共4个投... 详细信息

适宜的投喂频率能提高对虾的代谢和免疫能力,加快生长,实现提质增效的目标。为探讨不同投喂频率对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)糖代谢及相关信号通路的影响,以(7.6±1.0)g的凡纳滨对虾为实验材料,设置2、3、4、6次/d,共4个投喂频率处理组,每组设3个平行,实验持续14 d,实验结束时取样,测定pi3k信号通路相关因子pi3k、Akt、HIF-1α、mTOR,代谢酶基因中Hk、PFk、GAPDH、Pk、FBP、PEPCk,葡萄糖转运蛋白GLUT1、GLUT2 mRNA表达水平的变化。结果发现:随着投喂频率的增加,pi3k信号通路关键基因表达的水平显著上升(P<0.05),其中6次/d投喂组pi3k、Akt、HIF-1α和mTOR表达水平显著高于2次/d投喂组(P<0.05),4次/d投喂组mTOR表达水平显著高于2次/d投喂组(P<0.05);代谢关键酶基因Hk、PFk、GAPDH、Pk、FBP、PEPCk的表达水平随投喂频率的增加而增加,其中6次/d投喂组糖酵解Hk、PFk、GAPDH、Pk酶基因表达水平显著高于2次/d投喂组(P<0.05),3、4和6次/d投喂组糖异生酶FBP表达水平显著高于2次/d投喂组(P<0.05),葡萄糖转运蛋白GLUT2在2、3、6次/d投喂频率处理组显著高于4次/d频率投喂组(P<0.05)。得出结论认为较高的投喂频率可以通过激活凡纳滨对虾糖代谢酶基因、糖转运蛋白及pi3k信号通路的表达来提高糖代谢水平。

关键词：凡纳滨对虾投喂频率糖代谢酶糖转运蛋白 pi3k信号通路

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白藜芦醇通过ESR1-pi3k信号通路抑制3T3-L1细胞脂滴形成

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南方农业学报 2024年第7期55卷 1916-1924页

作者：王倩杨豹李银蒋钦杨黄艳娜广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室广西南宁530004

【目的】探究白藜芦醇(RES)与雌激素受体1(ESR1)对3T3-L1细胞脂滴形成的影响及调控机制,为RES抑制脂肪沉积潜在机制的研究提供理论依据。【方法】以3T3-L1细胞为试验材料,设计并合成针对ESR1基因的小干扰RNA(siRNA),在3T3-L1细胞培养基... 详细信息

【目的】探究白藜芦醇(RES)与雌激素受体1(ESR1)对3T3-L1细胞脂滴形成的影响及调控机制,为RES抑制脂肪沉积潜在机制的研究提供理论依据。【方法】以3T3-L1细胞为试验材料,设计并合成针对ESR1基因的小干扰RNA(siRNA),在3T3-L1细胞培养基中添加RES,以添加等量二甲基亚砜(DMSO)为对照,利用油红O染色、实时荧光定量PCR检测、Western blotting检测等分析RES与ESR1对3T3-L1细胞分化的影响。【结果】与对照组相比,RES能显著(P<0.05)减少3T3-L1细胞脂滴的生成,极显著(P<0.001)上调脂肪分解关键基因ATGL相对表达量,极显著下调(P<0.001)脂肪合成关键基因CEBPα、PPARγ及FAS相对表达量。RES能极显著(P<0.001)增加ESR1基因相对表达量,极显著(P<0.01)增加ESR1蛋白相对表达水平;同时,RES能极显著(P<0.001)下调pi3k信号通路中pi3k和AkT基因相对表达量,极显著(P<0.001)上调FOXO1基因相对表达量。干扰ESR1基因可极显著(P<0.01)增加3T3-L1细胞脂滴的生成,极显著(P<0.001)下调ATGL基因相对表达量,极显著(P<0.001)上调CEBPα、PPARγ及FAS基因相对表达量;加入RES后,干扰ESR1基因的3T3-L1细胞脂滴与未加入RES相比无显著差异(P>0.05,下同),ATGL、CEBPα、PPARγ及FAS基因相对表达量也均无显著差异。干扰ESR1基因能极显著(P<0.001)上调pi3k信号通路中pi3k和AkT基因相对表达量,极显著(P<0.001)下调FOXO1基因相对表达量;加入RES后,pi3k、AkT及FOXO1基因相对表达量与未加入RES相比均无显著差异。【结论】RES能通过ESR1-pi3k信号通路,上调脂肪分解关键基因ATGL相对表达量,下调脂肪合成关键基因CEBPα、PPARγ及FAS相对表达量,从而抑制3T3-L1细胞脂滴形成。

关键词：白藜芦醇雌激素受体1(ESR1) pi3k信号通路脂滴形成

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β肾上腺素受体与pi3k信号通路的交互作用对心肌生长及增殖的调控

β肾上腺素受体与PI3K信号通路的交互作用对心肌生长及增殖的调控

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作者：张伟志中南大学

学位级别：博士

第一部分β肾上腺素受体与P13k信号通路在成年小鼠心脏中的交互作用及其早期信号级联反应目的：β肾上腺素受体(β-adrenergic receptors, PAR)对心率、心肌收缩力等心脏功能有重要的调控作用。在成人以及成年的动物,持续激活βAR可引... 详细信息

第一部分β肾上腺素受体与P13k信号通路在成年小鼠心脏中的交互作用及其早期信号级联反应目的：β肾上腺素受体(β-adrenergic receptors, PAR)对心率、心肌收缩力等心脏功能有重要的调控作用。在成人以及成年的动物,持续激活βAR可引起心肌肥厚。另外,在左心室去负荷(left ventricular unloading)治疗过程中,βAR激动剂可防止左心室萎缩。目前,对活化的βAR促进心肌生长相关机制的理解基本是通过长期使用βAR激动剂的动物模型来获得的。然而,心脏βAR活化后早期的信号级联反应却仍然不清楚。本研究旨在阐明心脏βAR活化后早期的信号调控机制,并探讨早期信号活动与心肌肥厚及萎缩之间的联系。方法：以成年雄性野生型C57BL/6小鼠和β1/β2AR双重基因敲除(β1/β2 DkO)小鼠为研究对象。小鼠经腹腔注射生理盐水、异丙肾上腺素(isoproterenol, ISO)、福莫特罗(formoterol)或多巴酚丁胺(dobutamine),30分钟或4小时后取左心室、肺、肝脏、肾脏等组织,分析组织裂解物中P13k的活性、相关蛋白的磷酸化水平以及有关mRNA的表达水平。结果：在成年雄性C57BL/6小鼠,急性激活pAR可显著提高心心脏P13k的活性,并明显增加心脏中Akt和ERk1/2的磷酸化水平,但对肺和肝脏中的Akt和ERk1/2的磷酸化水平则没有明显的影响。在β1/β2 DkO小鼠,同样的处理却不能引起相应的改变。β2AR选择性激动剂福莫特罗(formoterol)可以活化野生型小鼠心脏的Akt(也称蛋白激酶B)和ERk1/2(细胞外信号调节激酶1和2),β1AR优势激动剂多巴酚丁胺(dobutamine)则不能,说明心脏PAR-pi3k信号通路交互作用具有β2AR特异性。β2AR的急性活化还能显著提高多个Akt下游信号分子的磷酸化水平,包括mTOR(哺乳动物雷帕霉素靶蛋白),p70S6k(核糖体蛋白S6激酶1),核糖体蛋白S6, GSk-3a/β(糖原合酶激酶-3α和β),和FoxO1/3a(叉头状转录因子家族蛋白1和3a)。βAR的活化也可时间依赖性地降低肌肉特异性泛素蛋白连接酶E3的组分蛋白atrogin-1和MuRF1(肌肉无名指蛋白1)的mRNA水平。结论：(1)小鼠心脏βAR和P13k信号通路之间有交互作用,这种交互作用是β2AR特异性的;(2)小鼠心脏β2AR活化早期可激活多个信号级联反应,包括ERk1/2, pi3k/Akt及其下游的mTOR/p70S6k/S6信号轴,GSk-3α/β和FoxO1/3a;(3)这些信号活动引起atrogin-1和MuRF1的mRNA水平的降低,可能与心肌肥厚及左心室去负荷条件下的抗心肌萎缩有关;(4)深入了解β2AR活化与这些信号活动之间错综复杂的相互作用有助于理解心肌生长的病理生理,可为探寻心肌肥厚及萎缩的早期治疗靶点提供重要线索。第二部分β肾上腺受体通过pi3k/Akt信号通路调控新生小鼠心肌细胞的增殖目的：在发育早期的心脏中,虽然可检测到β肾上腺素受体(βAR)及其配体,甚至配体合成所需的酶,但却没有兴奋-收缩偶联。在成年小鼠中,慢性βAR活化会引起心肌的肥大。我们之前的数据表明P13k的活性在心肌发育过程中受到高度调控,在胚胎和新生阶段该激酶活性较高,而在成年阶段活性则较低。我们还发现,改变β2AR可引起心肌特异性P13k信号通路的相应变化,说明在心脏中存在βAR和P13k间的交互作用。本研究的主要目的是澄清该作用的生理效应,尤其是对心肌增殖的调控,并探讨可能参与这种调控的信号途径。方法：新生C57BL/6小鼠先经腹腔注射非选择性βAR阻滞剂普萘洛尔(10mg/kg),一小时后再注射EdU(5乙炔-2’-脱氧尿苷,50mg/kg),4小时后取心脏组织制备石蜡切片,通过免疫荧光染色检测EdU和α-辅肌动蛋白-2以观察心肌细胞的增殖情况。为检测相关信号激酶,新生小鼠用普萘洛尔处理30分钟,随后裂解心脏组织,检测裂解液中的P13k活性及Akt、GSk-3α/β、FoxOs、mTOR、p70S6k、S6和ERk1/2等蛋白的磷酸化水平。结果：阻断βAR显著降低新生小鼠心脏中处于增殖状态的心肌细胞数(处理组19.0±3.1/视野vs对照组30.4±2.2/视野,p<0.05)和增殖指数(增殖心肌细胞数/总细胞核数,处理组6.2±1.0%vs对照组11.7±0.9%,p<0.05)。用普萘诺尔阻断新生小鼠的pAR引起心脏中P13k的活性显著下降,并导致P13k下游多个效应因子的磷酸化水平降低,包括Akt、GSk-3α/β、FoxO1/3a。但急性阻断βAR对于mTOR/p70S6k/S6信号通路的活性不引起功能性改变,对于ERk1/2

关键词： β肾上腺素受体 pi3k信号通路心室重构心肌肥大 GSk-3α/β FoxOs atrogin-1/MuRF1 pi3k/Akt信号通路围生期心脏发育心肌细胞增殖

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FOG2在胰腺癌中的表达及其调控MAPk、pi3k信号通路串话的机制研究

FOG2在胰腺癌中的表达及其调控MAPK、PI3K信号通路串话的机制研究

引用

作者：刘尧华中科技大学

学位级别：博士

第一部分：胰腺癌MAPk与pi3k信号通路存在串话目的：研究胰腺癌MAPk与P13k信号通路间是否存在串话及其作用方式。方法：分别向胰腺癌BxPC3、 PANC1细胞株中加入MAPk通路抑制剂PD98059或P13k通路抑制剂LY294002干预1 h,免疫印迹方法检测p... 详细信息

第一部分：胰腺癌MAPk与pi3k信号通路存在串话目的：研究胰腺癌MAPk与P13k信号通路间是否存在串话及其作用方式。方法：分别向胰腺癌BxPC3、 PANC1细胞株中加入MAPk通路抑制剂PD98059或P13k通路抑制剂LY294002干预1 h,免疫印迹方法检测p-ERk、 ERk、 p-Akt、 Akt的蛋白表达水平。应用siRNA方法降低ERk表达水平,免疫印迹方法检测p-Akt、Akt的蛋白表达水平。结果：应用MAPk抑制剂抑制BxPC3、 PANC1细胞ERk活性后,p-Akt表达水平反而升高。使用siRNA转染BxPC3、 PANC1细胞沉默ERk的表达同样可以使p-Akt的蛋白表达水平升高。结论：胰腺癌MAPk, pi3k信号通路间存在串话,ERk的活化可以抑制pi3k/Akt信号通路的激活。第二部分：FoG2在胰腺癌中的表达及其在MAPk、 pi3k信号通路串话中的作用目的：研究FOG2在胰腺癌组织中的表达,及其调控MAPk、 pi3k信号通路串话的机制。方法：采用免疫组织化学方法检测108例临床胰腺癌样本中FOG2的蛋白含量。使用免疫印迹方法检测多种胰腺癌细胞株FOG2的蛋白表达水平,选择FOG2高表达细胞株a应用慢病毒颗粒转染胰腺癌细胞降低FOG2表达,对照组应用空白慢病毒载体。分别应用MAPk和P13k抑制剂抑制通路活性,免疫印迹方法检测***、p-Akt,Akt的蛋白表达水平。通过免疫共沉淀(Co-IP)方法,检测ERk与FOG2有无结合。结果：61.1%(66/108)患者的胰腺癌组织FOG2表达水平要强于对应的癌旁组织。FOG2在BxPC3、PANC1细胞中呈高表达。在对照组,抑制ERk的磷酸化可以显著增加Akt的磷酸化,活化的ERk可以抑制Akt的活化；应用慢病毒转染方法降低FOG2表达水平后,应用MAPk抑制剂抑制ERk活性,p-Akt的蛋白表达水平并没有明显变化。免疫共沉淀结果显示,ERk可以与FOG2特异性结合。结论：大多数胰腺癌肿组织中FOG2蛋白的表达水平要强于癌旁组织。ERk通过与FOG2特异性结合来调控Akt的活化。沉默FOG2可以干扰ERk对Akt信号通路的抑制作用。FOG2是调控胰腺癌MSPk、 pi3k信号通路串话的重要分子。第三部分：沉默FoG2对MAPk抑制剂作用效果的影响目的：研究沉默FOG2对MAPk抑制剂抑制胰腺癌细胞生物学行为的能力有无影响。方法：向慢病毒稳定转染的BxPC3、PANC1细胞中加入MAPk抑制剂,采用Transwell小室测定BxPC3、PANC1细胞的定向迁移能力,Flow Cytometry检测BxPC3、 PANC1的凋亡比例,采用平板克隆形成实验测定BxPC3、 PANC1细胞的成瘤能力,MTT检测BxPC3、 PANC1增殖能力。结果：Transwell assay结果显示,虽然沉默FOG2对BxPC3、 PANC1细胞的定向迁移能力没有明显影响,但沉默FOG2表达后,无论是单用MAPk通路抑制剂还是与P13k通路抑制剂联合应用,其抑制BxPC3、 PANC1细胞迁移的能力均得到增强。流式细胞术和平板克隆形成实验结果分别提示沉默FOG2可以增强PD98059对BxPC3、 PANC1细胞的促凋亡作用和抑制BxPC3、 PANC1细胞成瘤的能力。MTT结果显示,沉默FOG2后,PD98059抑制BxPC3、 PANC1细胞增殖的作用强度和持续时间均得到增强。结论：沉默FOG2可以增加胰腺癌细胞对ERk抑制剂的敏感性,可以增强MAPk抑制剂抑制BxPC3、 PANC1细胞增殖、存活、定向迁移和集落形成的能力。

关键词： MAPk信号通路 pi3k信号通路串话免疫印迹转染 MAPk信号通路 pi3k信号通路 FOG2 串话调控 MAPk信号通路 pi3k信号通路 FOG2 生物学行为

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