检索结果-内蒙古大学图书馆

第12届全国干扰素与细胞因子学术会议

作者：王梁华章亚南朱玉平军医大学基础部分子毒理学教研室(上海)

ＴＲＡＩＬ是肿瘤环死因子家族新成员。该文在得到ＴＲＡＩＬ可溶性分子编码序列的基础上进行了ＴＲＡＩＬ的重组表达研究。将可溶性ＴＲＡＩＬ基因片断插入ｐＩＣ３．５酵母表达载体，氯化锂转化酵母ＧＳ１１５，甲醇诱导表达５天。结... 详细信息

ＴＲＡＩＬ是肿瘤环死因子家族新成员。该文在得到ＴＲＡＩＬ可溶性分子编码序列的基础上进行了ＴＲＡＩＬ的重组表达研究。将可溶性ＴＲＡＩＬ基因片断插入ｐＩＣ３．５酵母表达载体，氯化锂转化酵母ＧＳ１１５，甲醇诱导表达５天。结果发现在酵母细胞中重组表达的ＴＲＡＩＬ在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上呈三聚体形式，杀伤肿瘤细胞的比活性较原核重组表达复性后的ＴＲＡＩＬ有明显提高，说明ＴＲＡＩＬ可能已正确折叠并形成活性必须的高级结构。用抗人ＴＲＡＩＬ多抗可以确认上述真核表达系统表达了ＴＲＡＩＬ重组分子。

关键词： TRAIL pichia表达系统抗肿瘤

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重组人可溶性凋亡素-2配体在pichia系统中的表达

引用

第二军医大学学报 2001年第3期22卷 248-251页

作者：王梁华朱玉平娄永华彭燕冯煜焦炳华第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433

目的 :在甲醇营养型酵母 (pichia)表达系统中表达重组人可溶性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 (TRAIL ,凋亡素 - 2配体 )分子。方法 :人可溶性 TRAIL编码基因片段插入 p IC 3.5酵母表达载体 ,氯化锂转化酵母 GS115株 ,甲醇诱导表达 5 ... 详细信息

目的 :在甲醇营养型酵母 (pichia)表达系统中表达重组人可溶性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 (TRAIL ,凋亡素 - 2配体 )分子。方法 :人可溶性 TRAIL编码基因片段插入 p IC 3.5酵母表达载体 ,氯化锂转化酵母 GS115株 ,甲醇诱导表达 5 d,SDS- PAGE和 Western- blotting确认表达 ,L 92 9细胞鉴定活性。结果 :发现在酵母细胞中重组表达的 TRAIL在 SDS-PAGE上占总蛋白的 5 0 %以上 ,用抗人 TRAIL多抗可以确认表达了 TRAIL重组分子 ,杀伤肿瘤细胞的比活性较原核表达后复性的 TRAIL有明显提高 ,并能诱导几株肿瘤细胞 DNA片段化 ,说明 TRAIL可能已正确折叠并形成活性必需的高级结构。结论 :在 pichia系统中正确表达了人可溶性 TRAIL分子。

关键词：重组人可溶性凋亡素-2 pichia表达系统细胞毒甲醇营养型酵母

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重组人OCIF结构域D1~D6基因在毕赤酵母中的表达

重组人OCIF结构域D1~D6基因在毕赤酵母中的表达

引用

第14次全国干扰素及细胞因子学术会议

作者：张兴群王梁华焦炳华袁勤生华东理工大学生物反应器国家重点实验室(上海) 第二军医大学基础部生物化学和分子生物学教研室(上海)

目的:在甲醇营养型酵母(pichia)表达系统中表达重组人破骨细胞形成抑制因子(Osteoclastogenesis Inhibitory factor,OCIF)结构域D1~D6基因.方法:利用PCR从本实验室构建的pProEX-OCIF上扩增得到N末端融合有6×His标签和rTEV蛋白酶识... 详细信息

目的:在甲醇营养型酵母(pichia)表达系统中表达重组人破骨细胞形成抑制因子(Osteoclastogenesis Inhibitory factor,OCIF)结构域D1~D6基因.方法:利用PCR从本实验室构建的pProEX-OCIF上扩增得到N末端融合有6×His标签和rTEV蛋白酶识别序列的OCIF D1~D6结构域编码基因片段(OCIFm),将其与pMD18-T连接,转化大肠杆菌TOP10,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18-OCIFm双酶切重组克隆质粒pMD18-OCIFm得到OCIFm基因片段,将其定向插入甲醇酵母分泌表达载体pPIC9中,电穿孔转化酵母宿主菌GS115.筛选得到阳性表达菌株后,甲醇诱导表达5d,SDS-PAGE和Western blot对表达情况进行分析和确认,利用Ni-NTA树脂对表达产物进行一步亲和层析纯化.利用纯化产物对体外诱导培养的破骨细胞样细胞形成的抑制鉴定其活性.结果:所获得的OCIFm基因片段在甲醇酵母中表达量占菌体总蛋白的30﹪以上.Western Blot证实了表达产物的正确.初步测定了表达产物的生物学活性.结论:已成功获得了人OCIFm基因片段在甲醇酵母中的表达,表达产物的生物学活性较利用原核表达系统明显提高.

关键词：破骨细胞形成抑制因子 pichia表达系统细胞凋亡蛋白酶识别序列原核表达骨质疏松

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