检索结果-内蒙古大学图书馆

黑龙江畜牧兽医 2023年第7期 66-70,77页

作者：赵成莹张娅娣袁静魏艳华周广驰刘承军朱伟聊城市东昌府区畜牧兽医事业发展中心山东聊城252000 聊城市畜牧兽医事业发展中心山东聊城252000 山东畜牧兽医职业学院山东潍坊261061

为了建立快速检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)通用型及1型(BVDV-1)、2型(BVDV-2)的检测方法,并了解聊城地区BVDV的流行规律,试验根据BVDV-1、BVDV-2 5′端非编码区(5′UTR)基因序列分别设计BVDV通用型检测引物... 详细信息

为了建立快速检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)通用型及1型(BVDV-1)、2型(BVDV-2)的检测方法,并了解聊城地区BVDV的流行规律,试验根据BVDV-1、BVDV-2 5′端非编码区(5′UTR)基因序列分别设计BVDV通用型检测引物及BVDV-1、BVDV-2特异性检测引物,通过优化rt-pcr扩增条件分别建立BVDV通用型rt-pcr、BVDV-1分型rt-pcr、BVDV-2分型rt-pcr检测方法,并分析3种检测方法的特异性、重复性、符合性,最后采用3种检测方法对聊城地区采集的4 685份临床样品进行病原学检测分析。结果表明:3种检测方法检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛轮状病毒均为阴性,检测灵敏度分别为6.84,1.08,3.03 ng;BVDV通用型rt-pcr检测方法与BVDV-1分型rt-pcr、BVDV-2分型rt-pcr检测方法的符合率均为100%;聊城地区BVDV阳性率为6.51%,其中BVDV-1和BVDV-2阳性率分别为4.50%和2.01%,BVDV-1和BVDV-2混合感染率为0.13%。说明试验建立的BVDV通用型rt-pcr、BVDV-1分型rt-pcr、BVDV-2分型rt-pcr检测方法均具有良好的特异性、敏感性、准确性和临床适用性,聊城地区普遍存在BVDV的流行,其流行优势基因型为BVDV-1。

关键词：牛病毒性腹泻病毒通用型分型 rt-pcr检测方法流行优势基因型

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边界病病毒rt-pcr检测方法的建立和应用

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中国兽医学报 2022年第9期42卷 1786-1789,1816页

作者：毛立张纹纹李文良杨蕾蕾孙敏程子龙李基棕郝飞刘茂军江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014

边界病(border disease)由边界病病毒(border disease virus, BDV)引起,导致绵羊和山羊持续感染和繁殖疾病,2012年在国内首次报道,但目前尚无特异的rt-pcr方法对该病原进行检测。本研究通过比对黄病毒科瘟病毒属病毒的全基因组序列,以3... 详细信息

边界病(border disease)由边界病病毒(border disease virus, BDV)引起,导致绵羊和山羊持续感染和繁殖疾病,2012年在国内首次报道,但目前尚无特异的rt-pcr方法对该病原进行检测。本研究通过比对黄病毒科瘟病毒属病毒的全基因组序列,以3′-UTR基因为靶基因,设计了特异扩增BDV的引物。通过构建重组质粒pMD18-T-BDV,以其作为标准品建立了BDV的rt-pcr检测方法。进一步优化该方法的反应条件,并进行特异性、敏感性及临床样品检测。结果显示,该方法在退火温度48~60℃时均可特异扩增BDV,通过检测牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)、牛病毒性腹泻病毒2型(BVDV-2)和猪瘟病毒(CSFV)提取的RNA,该方法可特异扩增BDV而对其他同属病毒检测均呈阴性,表明其特异性良好;同时,该方法具有良好的敏感性,最低检出限可达10~1拷贝/μL,敏感性极高。利用该方法检测BDV持续感染羊和人工感染羊,发现持续感染羊的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、淋巴结、卵巢、脑等器官均可检测到BDV,而人工感染羊只能在感染3~7 d的血液和淋巴结中检测到病毒RNA,其他器官中未检测到病毒。本研究建立了特异检测BDV的rt-pcr方法,并证明了BDV在持续感染羊和一过性感染羊中的病毒分布情况,为其可能的排毒途径提供了依据。

关键词：边界病病毒 rt-pcr检测方法条件优化应用

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VBNC状态大肠杆菌rt-pcr检测方法的建立

VBNC状态大肠杆菌RT-PCR检测方法的建立

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作者：金凯吉林农业大学

学位级别：硕士

细菌活的非可培养状态(viable but nonculturable state，VBNC)指细菌遭受不良环境条件下所表现出的一种适合他存活的策略，其表现为在传统的实验培养基上不能生长但仍然是活的并具有代谢活性，仍能够保持它的致病性或毒力基因，并且这... 详细信息

细菌活的非可培养状态(viable but nonculturable state，VBNC)指细菌遭受不良环境条件下所表现出的一种适合他存活的策略，其表现为在传统的实验培养基上不能生长但仍然是活的并具有代谢活性，仍能够保持它的致病性或毒力基因，并且这种状态的细菌在适当的条件下可以恢复为可培养状态。在环境微生物质量评估中对于VBNC菌的检测是非常重要的，这不仅是因为细菌的致病性更重要的在于污染标准指示菌，如大肠杆菌.因此建立一种能够检测VBNC状态下的细菌并且能够确定它们的存活力是非常必要的。\n 本试验选取一株鹅源的大肠杆菌，一株貂体内的分离的大肠杆菌进行了活的非可培养状态诱导，将两株大肠杆菌悬浮于液体LB(PH2-3)中，置于4℃的低温静止培养，两株大肠杆菌均可进入活的非可培养状态。但因菌株不同进入VBNC状态的时间也不同，A142天，A255天。并连同早期已经诱导进入VBNC状态的两株大肠杆菌D1 D3进行核酸的提取，反转录，pcr阔增及其电泳分析，并且结合一些常规的检测。\n 菌经过寡营养的微生态环境下而诱导进入VBNC状态，在这过程中VBNC菌体的差异基因开始表达，并利用rt-pcr方法对其进行检测与代谢活性相关的mRNA的存在表明了VBNC状态下细菌的存活力。

关键词：大肠杆菌环境微生物 rt-pcr检测方法

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禽网状内皮增生病病毒rt-pcr检测方法的建立及其应用

禽网状内皮增生病病毒RT-PCR检测方法的建立及其应用

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作者：赵靓东北农业大学

学位级别：硕士

本研究应用现代分子生物技术,以1日龄SPF雏鸡为研究对象,利用被网状内皮组织增生病病毒感染雏鸡的cDNA为模板,选取相对保守的LTR序列,设计并合成出特异性引物,建立了rt-pcr检测方法,并对该检测方法进行优化。在此基础上,又结合生物学检... 详细信息

本研究应用现代分子生物技术,以1日龄SPF雏鸡为研究对象,利用被网状内皮组织增生病病毒感染雏鸡的cDNA为模板,选取相对保守的LTR序列,设计并合成出特异性引物,建立了rt-pcr检测方法,并对该检测方法进行优化。在此基础上,又结合生物学检测技术,对试验中感染REV的SPF雏鸡心脏、脾脏、肝脏、肺脏、肾脏、胸腺和法氏囊进行检测,同时又对来自东北某省养殖场选取的50份现地临诊血液样品进行检测。本实验旨在建立REV的快速、高效检测方法,为日后疾病的防治提供重要的科学基础和依据。主要研究结果如下:(1)成功建立了检测网状内皮组织增生病病毒的rt-pcr方法,该检测方法能够有效地扩增出目的片段,可在4个小时内完成对样品的检测;(2)该检测方法的最佳优化条件为:退火温度53℃、引物浓度为0.3μmol/L、Mg2浓度为2.5μmol/L;(3)该方法敏感性高,能特异性检测REV样品。对样品的反复多次检测,检测结果高度一致,该方法具有较高的重复性和稳定性;(4)应用上述建立的rt-pcr检测方法,对试验中感染REV的SPF雏鸡的各个主要器官进行检测,结果表明SPF雏鸡各个主要器官均受到感染。对东北某省50份现地临诊血液样品进行检测,结果显示,阳性率高达92%。

关键词：禽网状内皮组织增生病病毒 rt-pcr检测方法

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兔病毒血症rt-pcr检测方法的建立及初步应用

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上海畜牧兽医通讯 2016年第6期 11-13页

作者：朱裕华胡安康陈全刚韩旭峰陈仁金徐州医科大学实验动物中心江苏徐州221004

根据GenBank上公布的RHDVvp60基因保守序列，设计引物，以RHDV发病兔的肝脏为材料，提取总RNA，rt—pcr扩增出大小为368bp的目的基因片段。该方法检测RHDV具有特异性，敏感性为血凝试验（HA）的3．2×10^3倍。通过对健康免疫兔的82... 详细信息

根据GenBank上公布的RHDVvp60基因保守序列，设计引物，以RHDV发病兔的肝脏为材料，提取总RNA，rt—pcr扩增出大小为368bp的目的基因片段。该方法检测RHDV具有特异性，敏感性为血凝试验（HA）的3．2×10^3倍。通过对健康免疫兔的82份鼻拭子样品进行检测，阳性样品为14份，阳性率为17．07％。试验结果表明，rt-pcr方法能快速、敏感地从健康免疫兔鼻拭子样品中检出RHDV。

关键词：兔病毒血症 rt-pcr检测方法应用

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水貂犬瘟热病毒rt-pcr检测方法建立及应用

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中国畜禽种业 2016年第10期12卷 72-73页

作者：于红鸽山东省即墨市畜牧兽医局 266100

水貂犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）属于副黏病毒科（Paramyxoviridae）麻疹病毒属（Morbillivirus）。形状多种,病毒直径大小多在150-300nm。本实验通过rtpcr技术检测了水貂病料中犬瘟热病毒的感染情况,建立具有快速、灵敏... 详细信息

水貂犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）属于副黏病毒科（Paramyxoviridae）麻疹病毒属（Morbillivirus）。形状多种,病毒直径大小多在150-300nm。本实验通过rtpcr技术检测了水貂病料中犬瘟热病毒的感染情况,建立具有快速、灵敏的rt-pcr检测方法。

关键词：犬瘟热病毒 rt-pcr检测方法 distemper 副黏病毒科参考毒株麻疹病毒属 Agarose 瘟热琼脂糖凝胶电泳下游引物

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鸡新城疫病毒B_(95)株的rt-pcr检测方法研究

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中国动物检疫 2003年第4期20卷 23-25页

作者：申之义苗儒王俊平焦静波信洪一李平安内蒙古农业大学呼和浩特市010018 内蒙古动物防疫监督检验所 010051 包头市动物防疫监督检验所 014040

本试验设计了一对B95 株的特异引物NDV -P1/P2,探讨了对其进行rt-pcr检测的可行性。结果证明 ,用该引物可以扩增出一条310bp的特异核酸带 ,敏感性为0.0043ng/ul。

关键词：鸡新城疫病毒 B95株 rt-pcr检测方法

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猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株rt-pcr检测方法的建立与应用

猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株RT-PCR检测方法的建立与应用

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第十届全国规模化猪场主要疫病监控与净化专题研讨会

作者：李彬刘苏燕高建峰赵付伟方六荣江云波肖少波华中农业大学农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院武汉 430070

2006年，我国暴发的“猪高热综合征”给我国养猪业带来了巨大的经济损失，经研究表明，其致病因子为高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2缺失变异株。本研究根据PRRSV变异株的序列特征，以发生缺失的Nsp2为靶基因，设计一对... 详细信息

2006年，我国暴发的“猪高热综合征”给我国养猪业带来了巨大的经济损失，经研究表明，其致病因子为高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2缺失变异株。本研究根据PRRSV变异株的序列特征，以发生缺失的Nsp2为靶基因，设计一对特异性引物，建立了能够同时检测PRRSVNsp2缺失变异株和经典PRRSV的rt-pcr鉴别诊断方法。研究表明，该方法特异性好，敏感性较高。通过对华中地区大量临床病料的检测，揭示华中地区目前流行的主要是PRRSV变异株，同时表明该方法简便、可靠，可以鉴别高致病性PRRSV，为PRRSV的鉴别诊断、流行病学研究及其预防和控制提供了很好的工具。

关键词：生猪养殖猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株 rt-pcr检测方法

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新型鹅星状病毒对鹅的致病性及Cap蛋白的免疫保护作用

新型鹅星状病毒对鹅的致病性及Cap蛋白的免疫保护作用

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作者：肖亦辰南京农业大学

学位级别：硕士

2016年以来,中国多个省份的鹅场暴发了一种急性传染病,该病以内脏痛风为主要特点,死亡率为20%-50%,对我国养鹅产业造成了巨大的经济损失。该病主要影响21日龄以内雏鹅,患病雏鹅表现为精神沉郁、食欲减退、腹泻、四肢瘫痪,剖检可见心脏... 详细信息

2016年以来,中国多个省份的鹅场暴发了一种急性传染病,该病以内脏痛风为主要特点,死亡率为20%-50%,对我国养鹅产业造成了巨大的经济损失。该病主要影响21日龄以内雏鹅,患病雏鹅表现为精神沉郁、食欲减退、腹泻、四肢瘫痪,剖检可见心脏、肝脏、肾脏等内脏器官表面、胸腹膜以及关节腔内存在大量白色尿酸盐沉积。通过病原分离和动物回归试验,确定该病是由一种新型鹅星状病毒（Goose astrovirus,GoAstV）感染引起的。目前还没有针对该病毒的商品化疫苗,早期诊断和监控对于防治该病具有重要意义。本研究针对病原检测建立了新型GoAstV一步法rt-pcr方法和间接免疫荧光法,可用于临床样品的鉴别诊断以及病毒滴度的测定。用鹅胚传代的新型GoAstV感染雏鹅进行了致病性研究,并对新型GoAstV衣壳蛋白（Capsid,Cap）的免疫原性及免疫保护效果进行了评估。 1新型鹅星状病毒一步法rt-pcr检测方法的建立与应用为建立新型GoAstV的快速准确检测方法,本研究根据新型GoAstV ORF2基因序列,设计特异性引物,建立了新型GoAstV一步法rt-pcr检测方法,并对引物用量、退火温度等反应体系和条件进行优化。该检测方法可成功地特异性扩增新型GoAstV 512 bp的基因片段,但对其它鹅常见病原体扩增结果均为阴性,具有良好的特异性。该方法最小检测限量为4.54×10～2copies/μL,敏感性较高。另外,此法重复性也较好。应用所建立的方法对新型GoAstV临床样品进行检测,结果显示102份鹅泄殖腔拭子的阳性率为46.08%,24份痛风症状患病鹅内脏样本阳性率为91.7%。本研究建立的新型GoAstV一步法rt-pcr检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,且操作简便,经济、快速,可用于新型GoAstV的临床检测和流行病学调查。 2新型鹅星状病毒间接免疫荧光检测方法的建立用新型GoAstV感染LMH细胞,以小鼠抗重组衣壳蛋白（r Cap）多克隆抗体为一抗,Alexa Fluor 488标记山羊抗小鼠Ig G抗体为二抗,建立了检测新型GoAstV的间接免疫荧光方法。对反应条件进行优化,甲醇和丙酮按体积1:1混合为固定液,最佳固定时间30 min,最适病毒感染量为10～4稀释倍数,一抗和二抗的最适稀释度均为1:500,病毒最佳培养时间为48 h。该方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,可以用来检测LMH细胞增殖细胞毒、感染新型GoAstV的鹅胚尿囊液和攻毒雏鹅泄殖腔拭子样本中的新型GoAstV,并且可以用于测定样本中的病毒滴度。 3新型鹅星状病毒对雏鹅的致病性试验将新型GoAstV经绒毛尿囊膜接种14日龄鹅胚,连续传至第三代,收取尿囊液、尿囊膜及胚体组织脏器混合匀浆制成鹅胚组织毒。用rt-pcr方法对新型GoAstV鹅胚组织毒进行检测,仅扩增出新型GoAstV特异性条带,其他鹅常见病毒性病原体检测结果均为阴性。用间接免疫荧光方法检测新型GoAstV鹅胚组织毒,用Reed-Muench法计算得出病毒滴度为105.3TCID50/0.15m L。用新型GoAstV鹅胚组织毒感染2日龄雏鹅进行致病性试验,每只颈部皮下注射0.3 m L鹅胚组织毒,感染剂量为105.6TCID50/只,同时设置PBS空白对照组。感染组雏鹅出现精神沉郁、喜卧、食欲减退、聚堆角落等症状,第9 d死亡1只,死亡率为20.0%。每隔3 d对试验雏鹅逐只称量体重,监测体重增长变化,感染组雏鹅与PBS对照组相比体重增长缓慢。在感染后1、2、3、5、7、9、11 d采集泄殖腔拭子,用SYBR Green I荧光定量pcr方法检测泄殖腔拭子中新型GoAstV含量,结果显示从感染后第1 d泄殖腔拭子就可检测出病毒,之后排毒量逐渐增高,在感染后7 d达到排毒高峰。感染后雏鹅血清中尿酸水平升高,在感染后14 d,感染组血清尿酸水平比PBS组高5倍左右。剖检死亡雏鹅,可见脏器表面和膝关节内有白色尿酸盐沉积,胆囊膨大,内部有尿酸盐沉积,肾脏出血肿大。分别于感染后3 d、5 d和7 d剖杀3只感染雏鹅,剖检发现感染组雏鹅肾脏在第5 d发生肿胀,第7 d肿胀出血,输尿管内有白色尿酸盐沉积;脾脏明显肿胀。取感染组雏鹅的肝脏、脾脏和肾脏组织制作病理切片,可见肝血窦淤血,淋巴细胞浸润,肝细胞坏死;脾淋巴细胞坏死;肾小管上皮细胞变性坏死,肾间质有炎性细胞浸润。感染后3 d、5 d和7 d,雏鹅的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肠、胰脏和脑中均能检测到病毒,其中肝脏、脾脏和肾脏中病毒含量较高。 4新型鹅星状病毒Cap重组蛋白免疫保护试验衣壳蛋白（Capsid,Cap）是星状病毒的蛋白质外壳,具有良好的免疫原,具有作为研发星状病毒重组亚单位疫苗候选抗原的潜力。本研究用原核表达的Cap重组蛋白

关键词：新型鹅星状病毒 rt-pcr检测方法间接免疫荧光法致病性试验 Cap蛋白免疫保护效果

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石斑鱼神经坏死病病原生物学及其rt-pcr检测操作规程的研究

石斑鱼神经坏死病病原生物学及其RT-PCR检测操作规程的研究

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作者：陈信忠龚艳清苏亚玲苏永全孔繁德黄丽莎俞秀霞黄印尧厦门出入境检验检疫局

该研究应用流行病学调查方法和逆转录聚合酶链式反应(rt-pcr)技术,对福建南部地区海水养殖石斑鱼近年来不断爆发的严重传染病进行调查和研究,首次阐明了该地区养殖石斑鱼爆发性传染病的流行病学特征,并证明神经坏死病是最常见危害也最... 详细信息

标准号: 0700490002

该研究应用流行病学调查方法和逆转录聚合酶链式反应(rt-pcr)技术,对福建南部地区海水养殖石斑鱼近年来不断爆发的严重传染病进行调查和研究,首次阐明了该地区养殖石斑鱼爆发性传染病的流行病学特征,并证明神经坏死病是最常见危害也最大的传染病。本研究通过实验首次在国内建立了《鱼类神经坏死病毒(NNV)逆转录聚合酶链式反应(rt-pcr)检测方法》,应用到厦门口岸的检测实践中,并用组织切片法观察石斑鱼脑部和视网膜的病变进行验证,证明建立的rt-pcr方法是一种快速、准确、灵敏的检测方法。该规程填补了我国口岸动物检疫所面临的急待解决的进出境海水鱼类种苗检测神经坏死病毒无“法”可依的空白,十分适合口岸动物检疫和基层实验室应用。本研究还首次在国内外测定了紫石斑鱼神经坏死病毒RNA1和RNA2基因组的全序列,并对该序列进行同源性和系统进化的比较。

关键词：石斑鱼神经坏死病毒 rt-pcr检测方法

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