检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：施苗苗安徽中医药大学

学位级别：硕士

目的:探究健脾祛湿化瘀方(JQHF)调控miR-339-5p靶向的syk/ras/c-fos信号通路在体内外cGN模型中的作用机制。方法:1、miR-339-5p通过syk/ras/c-fos通路促进cGN炎症的发展将miR-339-5p过表达或抑制后转染到HBZY-1细胞,细胞计数试剂盒(cc... 详细信息

目的:探究健脾祛湿化瘀方(JQHF)调控miR-339-5p靶向的syk/ras/c-fos信号通路在体内外cGN模型中的作用机制。方法:1、miR-339-5p通过syk/ras/c-fos通路促进cGN炎症的发展将miR-339-5p过表达或抑制后转染到HBZY-1细胞,细胞计数试剂盒(ccK8)和流式细胞术检测细胞活力和周期;qRT-PcR检测miR-339-5p和syk/ras/c-fos通路的mRNA表达的表达水平;WB检测syk/ras/c-fos通路的蛋白表达的表达水平;IF检测syk/ras/c-fos通路的蛋白定位和平均光密度的水平;双荧光素酶检测miR-339-5p与syk的靶向结合。回复实验通过抑制miR-339-5p和syk的表达,检测细胞的周期和活力及炎症因子的蛋白和mRNA的表达水平。2、JQHF调控miR-339-5p介导syk/ras/c-fos信号通路改善cGN 体外实验部分,27g/kg的JQHF以2m L/100g的剂量连续给大鼠灌胃7d,制备含药血清,ccK8筛选最佳含药血清浓度和作用时间,将miR-339-5p过表达后和JQHF转染到HBZY-1细胞,ccK8和流式细胞术检测各组细胞活力和周期;qRT-PcR检测syk/ras/c-fos通路的mRNA表达;WB检测syk/ras/c-fos通路的蛋白表达;IF检测syk/ras/c-fos通路的蛋白定位和平均光密度的水平。回复实验通过JQHF和抑制miR-339-5p的表达,检测细胞的周期和活力。体内实验部分,通过尾静脉注射阿霉素建立cGN大鼠模型,将大鼠分为6组:正常组、模型组、JQHF(高、中、低)(21.6 g/kg、10.8 g/kg、5.4 g/kg)剂量组和阳性药黄葵胶囊(1g/kg)组,连续给药30d,观察各组大鼠给药前后的尿蛋白变化;HE染色和电镜观察cGN大鼠肾脏组织中的病理变化情况;ELISA试剂盒检测各组大鼠血清中肾功能指标的变化;qRT-PcR检测炎症因子和syk/ras/c-fos通路的mRNA表达;WB检测炎症因子及syk/ras/c-fos通路的蛋白表达。结果:1、miR-339-5p通过syk/ras/c-fos通路促进cGN炎症的发展与control组相比,在model组中HBZY-1炎症因子指标和syk/ras/c-fos通路中的相关指标的表达显著升高,与model组相比,miR-339-5p inhibitor显著升高上述指标表达水平,miR-339-5p mimics显著降低上述指标表达水平,双荧结果显示syk是miR-339-5p的下游靶基因,回复实验中,syk抑制剂R406组和miR-339-5p inhibitor+R406组可显著降低HBZY-1细胞活力和增殖能力,且R406组降低效果更显著,可见,miR-339-5p可能通过激活syk/ras/c-fos通路,提高model组中的HBZY-1细胞中炎症因子水平,加重cGN的炎症反应。2、JQHF调控miR-339-5p介导syk/ras/c-fos信号通路改善cGN 在体外实验中,在model组中HBZY-1细胞增殖及活力和syk/ras/c-fos通路的表达水平显著升高,JQHF可显著降低上述指标的表达水平,用miR-339-5p inhibitor组和miR-339-5p inhibitor+JQHF组作为回复实验发现,两组都能显著提高细胞活力和细胞增殖能力,且miR-339-5p inhibitor组的提高效果更显著。在体内实验中,模型组大鼠出现基底膜增厚、肾小球萎缩变形、足突融合等病理特征,肾功能指标、炎症因子及syk/ras/c-fos通路相关指标表达显著上调,而JQHF组可显著降低肾脏组织上述指标的表达水平。因此JQHF可能通过miR-339-5p调控syk/ras/c-fos信号通路,降低炎症因子水平,改善cGN的炎症症状。结论:1、miR-339-5p靶向syk调控syk/ras/c-fos信号通路,促进炎症因子的表达水平和细胞活力及周期,从而促进cGN的发生发展。2、JQHF治疗cGN的机制可能与miR-339-5p调控syk/ras/c-fos信号通路,从而降低炎症水平有关。

关键词：慢性肾小球肾炎健脾祛湿化瘀方 miR-339-5p syk/ras/c-fos信号通路

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芪藤消浊颗粒对慢性肾小球肾炎大鼠syk/ras/c-fos信号通路的调控作用

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中药药理与临床 2017年第5期33卷 143-149页

作者：高家荣吴溪宋俊梅魏良兵姜辉徐双枝郭明飞安徽中医药大学第一附属医院合肥230038

目的:研究芪藤消浊颗粒对慢性肾小球肾炎大鼠syk/ras/c-fos信号通路关键基因表达的调控作用,探讨其可能的机制。方法:采用尾静脉注射阿霉素复制慢性肾小球肾炎大鼠模型,芪藤消浊颗粒(21.6,10.8,5.4g/kg)组和黄葵胶囊1.0 g/kg给药30天后... 详细信息

目的:研究芪藤消浊颗粒对慢性肾小球肾炎大鼠syk/ras/c-fos信号通路关键基因表达的调控作用,探讨其可能的机制。方法:采用尾静脉注射阿霉素复制慢性肾小球肾炎大鼠模型,芪藤消浊颗粒(21.6,10.8,5.4g/kg)组和黄葵胶囊1.0 g/kg给药30天后,HE染色观察慢性肾小球肾炎大鼠肾小球病变情况,测定24h尿蛋白含量,血清中尿素氮和肌酐含量,RT-q PcR检测syk、ras、MEK1/2、ERK1/2和c-fos mRNA表达情况,免疫组化法和Western blot法检测p-syk、ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2和c-fos蛋白表达。结果:芪藤消浊颗粒(10.8,21.6g/kg)组可明显降低慢性肾小球肾炎大鼠24h尿蛋白,血清尿素氮和肌酐,肾脏组织中syk、ras、MEK1/2、ERK1/2、c-fos mRNA和p-syk、ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白表达量。各治疗组肾脏病变程度较模型组有明显减轻。结论:芪藤消浊颗粒对慢性肾小球肾炎具有治疗作用,其机制可能通过抑制syk/ras/c-fos通路活化,进而减轻肾小球组织炎性反应有关。

关键词：芪藤消浊颗粒慢性肾小球肾炎 syk/ras/c-fos信号通路

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基于syk/ras/c-fos信号通路探讨芪藤消浊颗粒治疗慢性肾炎的机制

基于Syk/Ras/c-Fos信号通路探讨芪藤消浊颗粒治疗慢性肾炎的机制

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作者：宋俊梅安徽中医药大学

学位级别：硕士

目的芪藤消浊颗粒是国家级名老中医曹恩泽根据慢性肾小球肾炎(cGN)“脾虚、湿停、血瘀”的基本病机,提出“健脾、行水、化瘀”的治法,创制的特色中药制剂,临床主治cGN疗效确切,但其具体的分子学机制尚不清楚。本研究旨在研究芪藤消浊颗... 详细信息

目的芪藤消浊颗粒是国家级名老中医曹恩泽根据慢性肾小球肾炎(cGN)“脾虚、湿停、血瘀”的基本病机,提出“健脾、行水、化瘀”的治法,创制的特色中药制剂,临床主治cGN疗效确切,但其具体的分子学机制尚不清楚。本研究旨在研究芪藤消浊颗粒对syk/ras/c-fos信号通路的调控作用,探讨芪藤消浊颗粒防治cGN的潜在分子学机制。方法1芪藤消浊颗粒对ADR诱导的cGN大鼠syk/ras/c-fos信号通路的调控作用采用尾静脉注射阿霉素(ADR)复制cGN大鼠模型,取造模成功大鼠分为模型组、芪藤消浊颗粒不同剂量组(21.6、10.8、5.4 g/kg)组和黄葵胶囊(1.0 g/kg)组,每组10只,另取10只正常大鼠作为对照组。除模型组外,其余各组给药30天后,HE染色观察c GN大鼠肾小球病变情况,测定24h尿蛋白、N-乙酰氨基糖苷酶(NAG)含量和血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、胱抑素(cys-c)和视黄醇结合蛋白(RBP)的含量,RT-q PcR检测syk、ras、MEK1/2、ERK1/2和c-fos m RNA表达情况,免疫组化法和Western blot(WB)法检测p-syk、ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2和c-fos蛋白表达。2芪藤消浊颗粒含药血清对LPS诱导的HBZY-1细胞中syk/ras/c-fos信号通路的调控作用在37℃培养箱中,采用DMEM培养基培养HBZY-1细胞,采用脂多糖(LPS)诱导HBZY-1细胞复制细胞模型,MTT法筛选芪藤消浊颗粒含药血清最佳剂量及最佳作用时间。将HBZY-1细胞分为空白组、LPS刺激组、LPS刺激+正常血清组、LPS刺激+含药血清组、LPS刺激+抑制剂R406组、LPS刺激+含药血清+R406组,各组分别给予相应干预后,收集HBZY-1细胞,RT-q PcR检测syk、ras、MEK1/2、ERK1/2和c-fos m RNA表达情况,WB法检测p-syk、ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2和c-fos蛋白表达。结果1芪藤消浊颗粒对阿霉素诱导的慢性肾小球肾炎大鼠syk/ras/c-fos信号通路的调控作用各治疗组肾脏病变程度较模型组有明显改善。芪藤消浊颗粒中、高剂量组可明显降低cGN大鼠24h尿蛋白,血清BUN、Scr、cys-c、NAG和RBP,肾脏组织中syk、ras、MEK1/2、ERK1/2、c-fos m RNA和p-syk、ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白表达量;2芪藤消浊颗粒含药血清对LPS诱导的HBZY-1细胞中syk/ras/c-fos信号通路的调控作用MTT法筛选出的芪藤消浊颗粒含药血清最佳剂量为40%,最佳作用时间为48h,在此条件下,细胞生长抑制率(IR)较高。芪藤消浊颗粒含药血清可明显降低HBZY-1细胞中syk、ras、MEK1/2、ERK1/2、c-fos m RNA和p-syk、ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白表达量。结论1 syk/ras/c-fos信号通路在cGN的发生发展中存在显著变化;2芪藤消浊颗粒调控syk/ras/c-fos信号通路可能是其治疗cGN的作用机制之一。

关键词：芪藤消浊颗粒慢性肾小球肾炎 syk/ras/c-fos信号通路肾小球系膜细胞

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芪藤消浊颗粒对慢性肾小球肾炎大鼠syk/ras/c-fos信号通路的调控作用

芪藤消浊颗粒对慢性肾小球肾炎大鼠Syk/Ras/c-Fos信号通路的调控...

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中南地区第十三届医院药学学术会议

作者：吴溪高家荣宋俊梅魏良兵姜辉徐双枝郭明飞安徽中医药大学第一附属医院安徽合肥 230038

目的：研究芪藤消浊颗粒对慢性肾小球肾炎大鼠syk/ras/c-fos信号通路关键基因表达的调控作用,探讨其可能的机制.方法：采用尾静脉注射阿霉素复制慢性肾小球肾炎大鼠模型,芪藤消浊颗粒(21.6,10.8,5.4 g/kg)组和黄葵胶囊1.0g/kg给药30天后... 详细信息

目的：研究芪藤消浊颗粒对慢性肾小球肾炎大鼠syk/ras/c-fos信号通路关键基因表达的调控作用,探讨其可能的机制.方法：采用尾静脉注射阿霉素复制慢性肾小球肾炎大鼠模型,芪藤消浊颗粒(21.6,10.8,5.4 g/kg)组和黄葵胶囊1.0g/kg给药30天后,HE染色观察慢性肾小球肾炎大鼠肾小球病变情况,测定24h尿蛋白含量,血清中尿素氮和肌酐含量,RT-qPcR检测syk、ras、MEK1/2、ERK1/2和c-fos mRNA表达情况,免疫组化法和Western blot 法检测 p-syk、ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2 和 c-fos 蛋白表达.

关键词：芪藤消浊颗粒慢性肾小球肾炎 syk/ras/c-fos信号通路大鼠

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miR-324-5p/syk/ras/c-fos通路对HBZY-1细胞增殖的调控作用及芪藤消浊颗粒的干预研究

miR-324-5p/Syk/Ras/c-fos通路对HBZY-1细胞增殖的调控作用及芪藤...

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作者：王晶安徽中医药大学

学位级别：硕士

目的:研究HBZY-1细胞大鼠肾小球系膜细胞增殖模型中miR-324-5p/syk/ras/c-fos相关的RNA和蛋白水平的表达变化,同时研究芪藤消浊颗粒对上述指标的影响,并验证芪藤消浊颗粒对cGN大鼠肾小球系膜细胞增殖能力的调控作用是否是通过介导miR-32... 详细信息

目的:研究HBZY-1细胞大鼠肾小球系膜细胞增殖模型中miR-324-5p/syk/ras/c-fos相关的RNA和蛋白水平的表达变化,同时研究芪藤消浊颗粒对上述指标的影响,并验证芪藤消浊颗粒对cGN大鼠肾小球系膜细胞增殖能力的调控作用是否是通过介导miR-324-5p/syk/ras/c-fos信号通路来实现的。方法:1、miR-324-5p通过调控syk/ras/c-fos通路抑制脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖通过体外培养HBZY-1细胞并加以LPS处理,构建大鼠肾小球系膜细胞体外增殖模型。应用RT-qPcR技术检测HBZY-1细胞中miR-324-5p表达水平。利用Invitrogen原装脂质体3000（Lipo3000）构建miR-324-5p过表达与干扰的HBZY-1细胞,miR-324-5p mimics及inhibitor的转染效率采用RT-qPcR技术进行检测,MTT比色法验证各组HBZY-1细胞增殖能力,RT-qPcR技术检测HBZY-1细胞中syk/ras/c-fos信号通路相关mRNA的表达水平,Western Blotting和免疫荧光染色法检测HBZY-1细胞中syk/ras/c-fos信号通路相关蛋白表达水平。miR-324-5p与syk之间的靶向结合关系由双荧光素酶报告基因实验进行确认。2、芪藤消浊颗粒对脂多糖诱导的HBZY-1细胞增殖的影响及其作用机制的研究MTT比色法用于确认最佳含药血清干预时间和浓度。HBZY-1细胞被分为三组:（1）对照组,（2）LPS组,（3）LPS+最佳含药血清组。RT-qPcR用于测定各组HBZY-1细胞中miR-324-5p的表达水平以及syk/ras/c-fos信号通路相关mRNA的表达水平;syk/ras/c-fos信号通路相关蛋白表达水平由蛋白质印迹法和免疫荧光染色法共同检测。用miR-324-5p+inhibitor,miR-324-5p+inhibitor-Nc片段转染HBZY-1细胞,并用芪藤消浊颗粒含药血清进行处理,重复RT-qPcR实验和MTT实验,进行回复实验。结果:1、miR-324-5p通过抑制syk/ras/c-fos表达从而降低LPS诱导的HBZY-1细胞增殖活性通过比较各组细胞OD值,发现LPS干预后HBZY-1细胞增殖水平较对照组显著升高,而在LPS+miR-324-5p mimics片段转染后,HBZY-1细胞增殖能力显著降低;同时转染LPS+miR-324-5p inhibitor组HBZY-1细胞较LPS组相比增殖能力显著升高。RT-qPcR结果显示,LPS+miR-324-5p mimics组中miR-324-5p表达明显高于LPS组,而LPS+miR-324-5p inhibitor组中miR-324-5p表达明显低于LPS组。此外,LPS+miR-324-5p mimics组中syk、ras、MEK1/2、ERK1/2、c-fos mRNA的表达显著低于LPS组,LPS+miR-324-5p inhibitor组中syk、ras、MEK1/2、ERK1/2、c-fos mRNA的表达显著高于LPS组。Western Blotting结果显示,与LPS组相比,LPS+miR-324-5p mimics组中p-syk、ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白表达显著降低,而与LPS组相比,LPS+miR-324-5p inhibitor组通路相关的蛋白水平明显升高。免疫荧光结果显示,与LPS组相比,LPS+miR-324-5p mimics组p-syk、ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白阳性细胞数目明显减少,而与LPS组相比,LPS+miR-324-5p inhibitor组通路相关蛋白的阳性细胞数目明显增多。2、双荧光素酶报告基因结果验证syk是miR-324-5p的靶基因双荧光素报告基因实验结果表明,在syk野生型组中,miR-324-5p mimics转染组的荧光强度显著低于miR-324-5p mimics-Nc组。当syk的3'UTR区域中的miR-324-5p的结合位点发生突变时,miR-324-5p-mimics转染组和miR-324-5p mimics-Nc组的荧光强度无明显差异。以上结果表明syk是miR-324-5p的靶基因。3、芪藤消浊颗粒对脂多糖诱导的HBZY-1细胞增殖的影响及其作用机制的研究通过MTT的结果以及Ic50的计算,筛选出10%含药血清处理HBZY-1细胞作用48小时是含药血清最佳干预条件,并应用于后续实验。RT-qPcR的结果显示,LPS干预后HBZY-1细胞中的miR-324-5p表达明显低于对照组,而syk、ras、MEK1/2、ERK1/

关键词：芪藤消浊颗粒慢性肾小球肾炎 miR-324-5p syk/ras/c-fos信号通路细胞增殖

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miR-324-5p通过抑制syk/ras/c-fos通路降低脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖

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南方医科大学学报 2020年第11期40卷 1571-1578页

作者：王晶祝晓丽秦秀娟姜辉高雅晨高家荣安徽中医药大学第一附属医院安徽合肥230012 安徽中医药大学药学院安徽合肥230012 安徽中医药大学中药复方安徽省重点实验室安徽合肥230012

目的探讨miR-324-5p调控syk/ras/c-fos信号通路对大鼠肾小球系膜(HBZY-1)细胞增殖能力的影响。方法体外培养HBZY-1细胞;设计并合成miR-324-5p mimics,miR-324-5p mimics-Nc片段;采用Lipo3000试剂盒瞬时转染miR-324-5p mimics,miR-324-5p mimics-Nc片段至脂多糖(LPS)诱导的HBZY-1细胞内,RT-qPcR验证转染效率;将HBZY-1细胞分为对照组(生理盐水),LPS组(LPS 0.5μg/mL),LPS+mimics组(LPS 0.5μg/mL+miR-324-mimics),LPS+mimics-Nc组(LPS 0.5μg/mL+miR-324-mimics-Nc);MTT法检测各组HBZY-1细胞增殖活性;RT-qPcR法检测各组细胞miR-324-5p及syk、ras、MEK1/2、ERK1/2、c-fos mRNA的表达;Western blot和免疫荧光法检测各组细胞p-syk、ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白的表达。结果MTT结果显示,LPS组细胞增殖水平较正常组显著升高,与LPS组及LPS+mimics-Nc组相比,LPS+mimics组细胞增殖能力降低;RT-qPcR结果显示,LPS+mimics组中miR-324-5p表达明显高于LPS组及LPS+mimics-Nc组,且LPS+mimics组中syk、ras、MEK1/2、ERK1/2、c-fos mRNA的表达显著低于LPS组及LPS+mimics-Nc组,差异具有统计学意义(P<0.05);Western Blot结果显示,与LPS组及LPS+mimics-Nc组相比LPS+mimics组中p-syk、ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白表达显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);免疫荧光结果显示,与LPS组及LPS+mimics-Nc组相比,LPS+mimics组p-syk、ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白标记细胞数目明显减少。结论miR-324-5p可通过抑制syk/ras/c-fos信号通路降低LPS诱导的慢性肾小球肾炎细胞的增殖活性,miR-324-5p有望成为慢性肾小球肾炎诊断和治疗的潜在靶标。

关键词：慢性肾小球肾炎 miR-324-5p syk/ras/c-fos信号通路细胞增殖

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