检索结果-内蒙古大学图书馆

中国动物传染病学报 2023年第3期31卷 120-126页

作者：王娟王帅勇虞凌雪张毅峰严杰聪王曼茱周艳君单同领童武郑浩童光志于海中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009

猪盖塔病毒感染是由盖塔病毒(GETV)引起母猪妊娠初期胎儿死亡、初生仔猪发病的一种繁殖障碍性疾病。猪是自然界中GETV的主要扩增宿主,可以产生足够高的病毒血症滴度来感染叮咬的蚊子并维持GETV的传播周期,所以定期对猪群进行GETV监测对... 详细信息

猪盖塔病毒感染是由盖塔病毒(GETV)引起母猪妊娠初期胎儿死亡、初生仔猪发病的一种繁殖障碍性疾病。猪是自然界中GETV的主要扩增宿主,可以产生足够高的病毒血症滴度来感染叮咬的蚊子并维持GETV的传播周期,所以定期对猪群进行GETV监测对于预防潜在的GETV暴发具有重要意义。本研究通过分析GETV E2蛋白基因特征,设计特异性引物和探针,条件优化后建立检测GETV感染的taqman实时荧光定量pcr方法。结果表明:以阳性质粒为标准品建立的标准曲线在1×10^(2)~1×10^(7)copies/μL内呈现良好的线性关系,扩增效率为1.61;该检测方法的最低检出限低至3.16 TCID50/mL,远远低于普通pcr的检测限3.16×10^(3)TCID50/mL;组内、组间重复性试验的变异系数均小于2%,具有良好的重复性和稳定性。本研究建立的方法能够快速有效的检测和定量GETV,为猪群中GETV监测提供可靠的检测方法。

关键词：猪源盖塔病毒 taqman实时荧光定量pcr方法检测

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

BVDV 1型和2型taqman双重实时荧光定量pcr检测方法的建立

引用

中国畜牧兽医 2022年第6期49卷 2326-2335页

作者：麻宝艺盛陈艳刘宏莹马青霞汪婷婷李健明时坤杜锐冷雪吉林农业大学中药材学院长春130118 吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 动物生产及产品质量安全教育部重点实验室长春130118 吉林省梅花鹿高效养殖和产品开发技术工程研究中心长春130118

【目的】建立一种快速检测牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV1)和2型(BVDV2)的taqman双重实时荧光定量pcr方法。【方法】根据GenBank上收录的95株BVDV1和BVDV25′-非编码区设计特异性引物,构建含有BVDV1和BVDV2目的片段的阳性质粒,优化反应条件... 详细信息

【目的】建立一种快速检测牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV1)和2型(BVDV2)的taqman双重实时荧光定量pcr方法。【方法】根据GenBank上收录的95株BVDV1和BVDV25′-非编码区设计特异性引物,构建含有BVDV1和BVDV2目的片段的阳性质粒,优化反应条件,构建标准曲线,进行双重实时荧光定量pcr方法的特异性、敏感性和重复性检测,并利用建立的实时荧光定量pcr检测方法对采自吉林省的临床样品进行检测。【结果】建立的双重实时荧光定量pcr方法最适退火温度为57.0℃,最适引物浓度为0.5μmol/L,最适探针浓度为0.3μmol/L,BVDV1和BVDV2型的标准曲线分别为:Y=-3.54X+37.36(R^(2)=0.990)和Y=-3.18X+35.95(R^(2)=0.997)。对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)和牛副流感病毒3型(BPIV3)均无特异性扩增,批内和批间变异系数均<3%,检测下限为10拷贝/μL。临床样品检测结果显示,总体阳性率为23.1%(36/156),其中BVDV1阳性率为17.9%(28/156),BVDV2阳性率为5.1%(8/156)。【结论】本研究建立了可同时快速、准确鉴别BVDV1和BVDV2的taqman双重实时荧光定量pcr方法,为BVDV的防控与净化提供技术支撑。

关键词：牛病毒性腹泻病毒(BVDV) taqman实时荧光定量pcr方法探针

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪圆环病毒3型taqman实时荧光定量pcr检测方法的建立

引用

福建农业学报 2020年第7期35卷 739-745页

作者：陈如敬吴学敏陈秋勇车勇良王隆柏严山周伦江福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程中心福建福州350013

【目的】建立检测猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3)感染的taqman实时荧光定量pcr方法。【方法】通过分析明确PCV3复制相关蛋白Rep基因特征,设计针对Rep基因的特异性引物和探针,经条件优化后建立检测PCV3感染的taqman实时荧光定... 详细信息

【目的】建立检测猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3)感染的taqman实时荧光定量pcr方法。【方法】通过分析明确PCV3复制相关蛋白Rep基因特征,设计针对Rep基因的特异性引物和探针,经条件优化后建立检测PCV3感染的taqman实时荧光定量pcr方法。【结果】建立的taqman实时荧光定量pcr方法敏感性好,最低检测限为42.2拷贝·μL-1;特异性强,对常见猪群传染病均无交叉反应;重复性好,组内变异系数和组间变异系数均在1.48%以内。对福建省2014年至2018年保存的193份组织样品进行检测发现,PCV3在福建省猪群中存在较高的阳性感染率(65.80%),且和PCV2混合感染率较高(52.85%)。【结论】本方法的建立为开展Rep基因在PCV3复制和感染过程中的作用机制提供检测方法。

关键词：猪圆环病毒3型 Rep基因 taqman实时荧光定量pcr方法检测

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

基于Hsp70基因的绵羊肺炎支原体taqman检测方法的建立及其遗传演化分析

引用

畜牧兽医学报 2024年第4期55卷 1684-1695页

作者：江锦秀张靖鹏林裕胜刘维巍胡奇林万春和福建省农业科学院畜牧兽医研究所福州350013 福建农林大学动物科学学院(蜂学学院) 福州350002

热休克蛋白70 (heat shock protein 70,Hsp70)是绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae, Movi)的重要膜蛋白,是机体内高度保守的生物分子,但在种间差异大,可作为分子生物学检测的候选靶区。为建立基于Hsp70基因的Movi通用型taqman实... 详细信息

热休克蛋白70 (heat shock protein 70,Hsp70)是绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae, Movi)的重要膜蛋白,是机体内高度保守的生物分子,但在种间差异大,可作为分子生物学检测的候选靶区。为建立基于Hsp70基因的Movi通用型taqman实时荧光定量pcr(qpcr)检测方法,并进一步了解其遗传变异情况,本研究基于GenBank中Movi的Hsp70基因特征,设计特异性的引物及探针,建立了基于Hsp70基因的绵羊肺炎支原体qpcr检测方法。应用建立的检测方法对88份山羊鼻拭子样品及43份疑似羊支原体性肺炎(Mycoplasmal pneumonia of sheep and goats, MPSG)病料进行检测。将检测结果为Movi阳性的肺组织样品进行分离鉴定,并对分离株Hsp70基因进行序列分析。结果显示,建立的qpcr检测方法其相关系数为1.00,扩增效率为96.0%,斜率为-3.411,Y轴截距为37.29。特异性强,与丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides ***, Mmc)、山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum ***, Mccp)、莱氏无胆甾原体(Acholeplasmalaidlawii, AL)、无乳支原体(Mycoplasma agalactiae, Maga)、伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis, CP)、羊口疮病毒(orf virus, ORFV)、牛支原体(Mycoplasma bovis, Mb)等牛羊常见病原均无交叉反应;敏感性高,最低检测限为5.72 copies·μL^(-1);重复性优,组内变异系数和组间变异系数均小于1.00%。6株Movi分离株Hsp70基因全长均为1 818 bp,与其它Movi参考株核苷酸和氨基酸同源性分别为96.0%~99.4%和98.0%~100.0%;进一步分析发现,山羊源Movi均比绵羊源多1个N-糖基化位点。遗传演化分析表明,其均处于ClusterⅠA亚分支(均为山羊源)。综上,本研究建立了特异性强、敏感性高、重复性优的基于Hsp70基因的Movi的qpcr检测方法。序列分析发现,不同来源Movi的Hsp70基因核苷酸同源性高;遗传演化分析证实,Movi福建株与山羊源分离株遗传关系较近。本研究不仅为Movi临床诊断提供了技术支持,更为进一步了解Movi遗传演化规律提供参考。

关键词：绵羊肺炎支原体 Hsp70基因 taqman实时荧光定量pcr方法序列分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪TTV实时荧光定量pcr检测方法的建立以及猪群中TTV感染情况的调查

猪TTV实时荧光定量PCR检测方法的建立以及猪群中TTV感染情况的调查

引用

作者：周延南昌大学

学位级别：硕士

TTV是一种无包膜的单股负链环状的DNA病毒,最初是1997年由日本科学家从一个输血后肝炎患者的血清中分离出,经与基因库中已知的DNA序列进行对比,证明该片段是一种全新的基因,该基因代表的病毒被认为是一种有可能引起输血后非甲-非庚型肝... 详细信息

TTV是一种无包膜的单股负链环状的DNA病毒,最初是1997年由日本科学家从一个输血后肝炎患者的血清中分离出,经与基因库中已知的DNA序列进行对比,证明该片段是一种全新的基因,该基因代表的病毒被认为是一种有可能引起输血后非甲-非庚型肝炎的新的DNA病毒,并把该病毒以患者名字命名为Torque teno virus (TTV)-因为是环状病毒,最初被归为圆环病毒科,其中包括圆环病毒属和圆圈病毒属。2008年又重新被归为细环病毒科。TTV广泛地分布于全世界,在很多家养动物如猪,牛、羊、猫和狗等中都呈现很高的感染率。其中关于猪的研究报道最多,且感染率最高,在猪群中检测到的TTV分为两种基因型-TTV1和TTV2。分别针对TTV1和TTV2的最保守的非编码区(UTR)设计特异性引物和taqman探针,建立了用于检测TTV1和TTV2的taqman实时荧光定量pcr方法。用巢式pcr方法分别扩增TTV1和TTV2中包含荧光定量pcr扩增区域的序列、回收纯化pcr产物并与pMD18-T载体连接,克隆阳性标准品,用阳性标准品为模板来优化taqman实时荧光定量pcr反应条件,并绘制标准曲线。建立的TTV1taqman实时荧光定量pcr方法检测下限为9.6copies/μL,当TTV1标准品含量在9.2x107copies/μL-9.2x102copies/μL范围内,荧光定量pcr的标准曲线图显示Ct值与TTV1标准品拷贝数的对数值之间具有良好的线性关系,相关系数(R2)为1.000,slope=-3.398,扩增效率为96.5%；与猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)以及TTV2等常见的猪DNA病毒没有交叉反应,具有高度的特异性。批内变异系数小于1%、批间变异系数小于3%,有较好的重复性。建立好的TTV2taqman实时荧光定量pcr方法检测下限为56copies/μL,当TTV2标准品含量在在5.6×106copies/μL-5.6×101copies/μL范围内,荧光定量pcr的标准曲线图显示Ct值与TTV2标准品拷贝数的对数值之间具有良好的线性关系,相关系数(R2)为0.998,slope=-3.440,扩增效率为95.3%；与猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)以及TTV1等常见的猪DNA病毒没有交叉反应,具有高度的特异性。批内变异系数小于1%、批间变异系数小于3%,有较好的重复性。运用建立的TTV1和TTV2taqman实时荧光定量pcr方法对220个临床的猪血清样本进行TTV1和TTV2的检测。结果显示两种基因型的感染率相差不大,分别是83.6%(184/220)和84.5%(187/220),共感染率为71.8%(158/220)。本课题还建立了能够高通量的同时能检测TTV1和TTV2的双重taqman实时荧光定量pcr方法。该方法对TTV1和TTV2的检测下限分别为9.6copies/μL和56copies/μL,TTVl的标准曲线的扩增效率为97.8%,斜率为-3.377,相关系数(R2)为1.000。TTV2的标准曲线的扩增效率为96.2%,斜率为-3.416,相关系数(R2)为0.998。与猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)等常见的猪DNA病毒没有交叉反应,具有高度的特异性。TTV1和TTV2批内变异系数小于1%、批间变异系数小于3%,有较好的重复性。运用建立的TTV双重taqman实时荧光定量pcr方法对220个临床的猪血清样本进行TTV1和TTV2的检测,结果显示两种基因型的感染率相差不大,分别是82.72%(182/220)和83.18%(183/220),总的感染率为68%(150/220)。此外,为了与比较本课题建立的方法进行比较,选取了目前常用于猪TTV检测的另外两种分子生物学的方法对同样的220个猪血清样本进行检测。结果显示本课题建立的两种taqman实时荧光定量pcr方法要明显优于用于TTV检测的另外两种分子生物学的方法。本课题建立taqman实时荧光定量pcr方法具有灵敏、特异、高效等优点,能大规模地检测猪群中的TTV病毒并能评估病毒含量。

关键词： TTV1 TTV2 猪群感染率 taqman实时荧光定量pcr方法双重taqman实时荧光定量pcr方法

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：