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骨髓间充质干细胞通过TIAM1介导wnt3a/β-catenin信号通路改善神经病理性疼痛大鼠突触可塑性

解剖科学进展 2025年第2期 217-220+224页

作者：薛晨凝李子龙王站东白璐郭欣欣锦州医科大学附属第三医院疼痛科辽宁健康产业集团沈煤总医院麻醉科锦州医科大学附属第三医院教务处

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)介导TIAM1影响突触可塑性对神经病理性疼痛的改善作用及其机制。方法 SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、神经病理性疼痛模型组(SNI)、骨髓间充质干细胞治疗组(BMSCs)、BMSCs+ov-NC组和BMSCs+ov-TIAM1组... 详细信息

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)介导TIAM1影响突触可塑性对神经病理性疼痛的改善作用及其机制。方法 SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、神经病理性疼痛模型组(SNI)、骨髓间充质干细胞治疗组(BMSCs)、BMSCs+ov-NC组和BMSCs+ov-TIAM1组，每组10只，采用结扎坐骨神经干的方法建立坐骨神经慢性压迫损伤模型，并采用经皮鞘内注射的方法进行给药。Von-Frey纤维法检测大鼠机械刺激缩足反射阈值PWT);热痛刺激仪检测大鼠热缩足反射潜伏期(PWL);Western blot检测大鼠脊髓组织中TIAM1以及NMDAR亚单位GluN1和GluN2B蛋白表达；高尔基染色检测大鼠脊髓组织中树突棘密度；Western blot和RT-qPCR用于检测大鼠脊髓组织中wnt3a和β-catenin表达。结果 SNI大鼠脊髓组织中TIAM1表达上调，大鼠PWL和PWT值降低，脊髓组织中GluN1和GluN2B蛋白表达升高，脊髓中树突棘密度增加，脊髓组织中β-catenin蛋白表达上调。鞘内注射BMSCs降低SNI大鼠脊髓组织中TIAM1表达，增加大鼠PWL和PWT值，下调脊髓组织中GluN1和GluN2B蛋白表达，减少脊髓中树突棘密度并降低脊髓组织中wnt3a和β-catenin表达。过表达TIAM1逆转了鞘内注射BMSCs对SNI大鼠PWL和PWT值、脊髓组织中GluN1、GluN2B、wnt3a和β-catenin表达以及树突棘密度的下调作用。结论鞘内注射BMSCs通过下调TIAM1缓解神经病理性疼痛，其机制可能与抑制wnt3a/β-catenin信号通路降低脊髓中的突触可塑性有关。

关键词：骨髓间充质干细胞神经病理性疼痛 TIAM1 wnt3a/β-catenin信号通路突触可塑性

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orchinol对胃癌SGC-7901细胞侵袭迁移和wnt3a/β-catenin信号通路的影响

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中国中药杂志 2018年第23期43卷 4718-4723页

作者：凌涛王委胡琛严鑫许雨婷唐淳寇玉刘量扬州大学医学院(转化医学研究院)江苏省中西医结合老年病防治重点实验室

研究中药绶草中分离得到的主要的9,10-二氢菲类单体化合物orchinol对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的抑制作用及初步的分子机制。体外培养人胃癌SGC-7901细胞,分别加入终浓度为5,10,20,40,80μmol3;L-1的orchinol处理细胞24,48,72 h... 详细信息

研究中药绶草中分离得到的主要的9,10-二氢菲类单体化合物orchinol对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的抑制作用及初步的分子机制。体外培养人胃癌SGC-7901细胞,分别加入终浓度为5,10,20,40,80μmol·L-1的orchinol处理细胞24,48,72 h,采用MTT法检测orchinol对SGC-7901细胞活力的影响;利用伤口愈合实验、Transwell实验分别分析5,10,20μmol·L^-1orchinol作用48 h后对SGC-7901细胞的迁移和侵袭能力的影响;Western blot法检测orchinol对SGC-7901细胞β-catenin,wnt-3a,DvL2,cyclinD1,GSK-3β蛋白表达水平的影响。结果显示,orchinol在5~80μmol·L^-1能以剂量和时间依赖性的方式抑制SGC-7901细胞的活力,orchinol分别处理细胞24,48,72 h后,其对SGC-7901细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为77.79,42.96,7.85μmol·L^-1;与对照组相比,5,10,20μmol·L^-1orchinol作用48 h,可明显抑制SGC-7901细胞侵袭和迁移的能力(P<0.05,P<0.01),且呈剂量依赖关系;Western blot结果显示,orchinol可显著下调β-catenin,wnt3a,DvL2,cyclinD1蛋白、显著上调GSK-3β蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。以上结果提示orchinol能显著抑制SGC-7901细胞侵袭和迁移能力,其机制可能是与orchinol抑制wnt3a/β-catenin信号通路及下游基因蛋白的表达有关。

关键词：绶草 orchinol 人胃癌SGC-7901细胞迁移侵袭 wnt3a/β-catenin信号通路

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那可丁通过下调钙黏素17及wnt3a/β-catenin信号通路抑制结肠癌SW480细胞迁移

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中国肿瘤生物治疗杂志 2019年第10期26卷 1089-1094页

作者：韩峥黄晓东刘蒙朱庆曦谭洁刘维洁陈巍邹艳丽蔡一珊黄莎莎田霞武汉市第三医院消化科

目的:探讨那可丁(Nos)对结肠癌SW480细胞钙黏素17(CDH17)表达的影响及其对细胞迁移的作用机制。方法:选用SW480细胞,分为对照组、空载组(si-EV)、CDH17干扰组(si-CDH17)、Nos处理组和CDH17干扰+Nos处理组(si-CDH17+Nos),其中CDH17干扰... 详细信息

目的:探讨那可丁(Nos)对结肠癌SW480细胞钙黏素17(CDH17)表达的影响及其对细胞迁移的作用机制。方法:选用SW480细胞,分为对照组、空载组(si-EV)、CDH17干扰组(si-CDH17)、Nos处理组和CDH17干扰+Nos处理组(si-CDH17+Nos),其中CDH17干扰采用小干扰RNA(siRNA)敲低CDH17水平,Nos处理使用半数抑制质量浓度(55.30±2.21)μg/ml。用qPCR检测SW480细胞CDH17 mRNA表达水平,用Hoechst33258染色法和Transwell实验检测细胞的凋亡和迁移能力,用ELISA检测细胞中VEGF、MMP2和MMP9含量,用WB检测细胞CDH17、wnt3a和β-catenin蛋白表达水平。结果:与对照组相比,Nos组、si-CDH17组和si-CDH17+Nos组的CDH17 mRNA及蛋白表达水平明显降低(均P<0.01),细胞凋亡增加、迁移能力减弱,细胞中VEGF、MPP2和MPP9含量及wnt3a和β-catenin蛋白表达水平显著降低(均P<0.01),且si-CDH17+Nos组比si-CDH17组效果更显著(P<0.01)。结论:Nos可诱导人结肠癌SW480细胞凋亡、抑制其迁移能力,其机制可能与下调CDH17表达抑制wnt3a/β-catenin信号通路有关。

关键词：那可丁结肠癌 SW480细胞钙黏素17 wnt3a/β-catenin信号通路凋亡迁移

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GCM1通过激活wnt3a/β-catenin信号通路改善绝经后骨质疏松症

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中国骨质疏松杂志 2022年第6期28卷 805-811页

作者：谢菲飞宋立稳王小英胡燕芳谢蕴云刘文华谢宝强广东省人民医院赣州医院(赣州市立医院)内分泌代谢科江西赣州341000 潍坊市人民医院内分泌代谢科山东潍坊261000

目的探究GCM1对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)成骨分化及矿化的影响。方法实验设置control组、BMP2诱导组、BMP2+ov-NC组、MP2+ov-GCM1组、BMP2+sh-NC组、BMP2+sh-GCM1组,BMP2用于诱导细胞成骨分化。通过碱性磷酸酶(ALP)染色及茜... 详细信息

目的探究GCM1对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)成骨分化及矿化的影响。方法实验设置control组、BMP2诱导组、BMP2+ov-NC组、MP2+ov-GCM1组、BMP2+sh-NC组、BMP2+sh-GCM1组,BMP2用于诱导细胞成骨分化。通过碱性磷酸酶(ALP)染色及茜素红染色检测GCM1对MC3T3-E1成骨分化及矿化的影响;通过Western blot检测成骨分化相关蛋白及wnt3a/β-catenin蛋白的表达变化。结果GCM1在绝经后骨质疏松症患者血清中低表达。过表达GCM1能够促进BMP2诱导MC3T3-E1的成骨分化和矿化,而抑制GCM1表达则抑制了BMP2诱导MC3T3-E1的成骨分化和矿化。此外,过表达GCM1增加了wnt3a/β-catenin蛋白表达,激活wnt3a/β-catenin信号通路,抑制GCM1表达则与上述结果相反。结论GCM1在绝经后骨质疏松症患者血清中低表达,过表达GCM1则可能通过激活wnt3a/β-catenin信号通路、促进MC3T3-E1成骨分化及矿化,进而改善绝经后骨质疏松症。

关键词：绝经后骨质疏松症 GCM1 wnt3a/β-catenin信号通路成骨分化矿化

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基于wnt3a/β-catenin信号通路探讨针刀对膝骨关节炎兔股直肌纤维化的影响

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中华中医药杂志 2022年第1期37卷 136-140页

作者：刘晶林巧璇卢莉铭郭泽兴刘洪张良志赵红佳修忠标福建中医药大学附属人民医院福州350004 福建中医药大学中医学院福州350122 中医骨伤及运动康复教育部重点实验室福州350122 福建省骨伤研究所福州350004

目的:观察针刀干预对膝骨关节炎(KOA)兔股直肌wnt3a/β-catenin信号通路调控作用及纤维化的影响,探讨针刀治疗KOA的可能作用机制。方法:24只健康雄性新西兰兔随机分为空白组、模型组、针刀组,每组8只。改良Videman法左后肢伸直位石膏固... 详细信息

目的:观察针刀干预对膝骨关节炎(KOA)兔股直肌wnt3a/β-catenin信号通路调控作用及纤维化的影响,探讨针刀治疗KOA的可能作用机制。方法:24只健康雄性新西兰兔随机分为空白组、模型组、针刀组,每组8只。改良Videman法左后肢伸直位石膏固定制动6周复制KOA模型,Lequesne MG膝关节级别评分、X线和MRI确认造模成功后,采用经筋理论指导下在股四头肌鹤顶次、髌外上、髌内上经筋病灶点上行针刀松解治疗,每周1次,共治疗4次。采用Masson染色观察股直肌纤维化改变,Real-time PCR和Western Blot检测股直肌wnt3a、β-catenin、TGF-β、CTGF、ColⅠmRNA和蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组股直肌纤维化明显,胶原容积分数显著增加(P<0.05),wnt3a、β-catenin、TGF-β、CTGF、ColⅠmRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,针刀组股直肌纤维化减轻,胶原容积分数显著减小(P<0.05),wnt3a、β-catenin、TGF-β、CTGF、ColⅠmRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:基于经筋理论针刀松解股四头肌经筋病灶点能通过调节wnt3a/β-catenin信号通路,减轻KOA兔股直肌纤维化程度,这可能是针刀治疗KOA的作用机制之一。

关键词：膝骨关节炎针刀经筋理论骨骼肌纤维化 wnt3a/β-catenin信号通路机制

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蒺藜皂苷通过调控wnt3a/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞增殖、迁移侵袭的机制研究

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世界华人消化杂志 2022年第4期30卷 191-197页

作者：曹斌姚林华冯昕湖州市第一人民医院药剂科浙江省湖州市313000 湖州市第一人民医院消化内科浙江省湖州市313000 湖州市第三人民医院院感科浙江省湖州市313000

背景蒺藜皂苷是从中药蒺藜内提取的活性成分,具有抗癌、抗炎、调节免疫、等多种药理活性,已有研究表明蒺藜皂苷能抑制胃癌细胞生长和诱导凋亡,本研究主要探究蒺藜皂苷可能抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭.目的探讨蒺藜皂苷通过调控wnt3a/... 详细信息

背景蒺藜皂苷是从中药蒺藜内提取的活性成分,具有抗癌、抗炎、调节免疫、等多种药理活性,已有研究表明蒺藜皂苷能抑制胃癌细胞生长和诱导凋亡,本研究主要探究蒺藜皂苷可能抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭.目的探讨蒺藜皂苷通过调控wnt3a/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞增殖、迁移侵袭的机制研究.方法以胃癌细胞HGC-27为体外研究对象,用浓度0、20 mg/L、40 mg/L蒺藜皂苷进行处理,记为对照组(Control)、蒺藜皂苷20 mg/L组、蒺藜皂苷40 mg/L组;将siRNA NC、siRNA wnt3a转染胃癌细胞中,用40 mg/L蒺藜皂苷处理,记为蒺藜皂苷+siRNA NC组、蒺藜皂苷+siRNA wnt3a组.用噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)检测细胞增殖活性;伤口愈合实验检测细胞迁移;Transwell小室检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p21、细胞增殖核抗原-67(proliferating nuclear antigen-67,Ki67)、上皮性钙黏附素(epithelical cadherin,E-cadherin)、神经性钙黏附素(neural cadherin,N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、wnt3a、β-catenin蛋白表达.结果与Control组比较,蒺藜皂苷20 mg/L组、蒺藜皂苷40 mg/L组胃癌细胞活性、迁移率、侵袭细胞数显著降低,p21、E-cadherin蛋白表达增加,Ki67、N-cadherin、Vimentin、wnt3a、β-catenin蛋白表达降低.与蒺藜皂苷+siRNA NC组组相比,蒺藜皂苷+siRNA wnt3a组胃癌细胞活性、迁移率、侵袭细胞数显著降低,wnt3a、β-catenin、Ki67、N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低,p21、E-cadherin蛋白表达增加.结论蒺藜皂苷可能通过抑制wnt3a/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化.

关键词：蒺藜皂苷 wnt3a/β-catenin信号通路胃癌细胞增殖迁移侵袭

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miR-199a通过wnt3a/β-catenin信号通路调控非小细胞肺癌细胞的生物学活动

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实用医学杂志 2020年第18期36卷 2515-2521页

作者：庄焕伟白树堂符洪犊曹贤君梁丽明陈知群羊家慧欧阳华程弦张亮中南大学湘雅医学院附属海口医院心胸外科海口570208 中山大学附属第七医院胸外科广东深圳518107

目的探讨miR-199a调控非小细胞肺癌A549细胞的增殖、凋亡、转移和侵袭等生物学功能及作用机制。方法RT-PCR检测正常肺上皮细胞BEAS-2B和非小细胞肺癌细胞A549内miR-199a的表达;分别用miR-199a-mimics、miR-199a-NC和miR-199a-inhibitor... 详细信息

目的探讨miR-199a调控非小细胞肺癌A549细胞的增殖、凋亡、转移和侵袭等生物学功能及作用机制。方法RT-PCR检测正常肺上皮细胞BEAS-2B和非小细胞肺癌细胞A549内miR-199a的表达;分别用miR-199a-mimics、miR-199a-NC和miR-199a-inhibitor转染至A549细胞内,转染48 h后CCK-8法检测细胞各组细胞增殖率,Annexin V-FITC/PI联合流式细胞仪检测细胞凋亡率,划痕实验和Transwell小室实验分别检测细胞迁移、侵袭能力,采用双荧光素酶报告实验验证wnt3a与miR-199a的靶向关系,Western blot检测wnt3a、β-catenin、C-myc、Survivin、E-cadherin、Vimentin蛋白表达。结果miR-199a在肺癌细胞中的表达低于正常肺上皮细胞(P<0.05);miR-199a-mimics组细胞增殖、迁移、侵袭活性显著低于其他两组(P<0.05),而凋亡率显著高于其他两组(P<0.05),miR-199a-inhibitor组细胞增殖、迁移、侵袭活性显著高于其他两组(P<0.05),而凋亡率显著低于其他两组(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-199a靶向抑制A549细胞中wnt3a的表达;miR-199a-mimics组细胞wnt3a、β-catenin、C-myc、Survivin、Vimentin蛋白表达显著低于其他两组(P<0.05),而E-cadherin表达在3组中最强(P<0.05),miR-199a-inhibitor组细胞wnt3a、β-catenin、C-myc、Survivin、Vimentin蛋白表达显著高于其他两组(P<0.05),而E-cadherin表达在3组中最弱(P<0.05)。结论miR-199a能抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭,同时刺激其凋亡,这种作用是通过靶向抑制wnt3a/β-catenin信号通路的活性而实现的。

关键词： miR-199a 非小细胞肺癌A549 增殖迁移侵袭凋亡 wnt3a/β-catenin信号通路

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狼疮性肾炎小鼠肾脏组织中wnt3a/β-catenin信号通路表达的研究

狼疮性肾炎小鼠肾脏组织中Wnt3a/β-catenin信号通路表达的研究

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作者：王铭浩甘肃中医药大学

学位级别：硕士

目的检测wnt3a/β-catenin信号通路中膜蛋白wnt3a和核心信号蛋白分子β-catenin在狼疮性肾炎模型小鼠(MRL/lpr小鼠)肾脏组织中的表达水平,探讨wnt3a/β-catenin信号通路是否参与狼疮性肾炎的发生发展,并为狼疮肾炎的分子生物学机制研究... 详细信息

目的检测wnt3a/β-catenin信号通路中膜蛋白wnt3a和核心信号蛋白分子β-catenin在狼疮性肾炎模型小鼠(MRL/lpr小鼠)肾脏组织中的表达水平,探讨wnt3a/β-catenin信号通路是否参与狼疮性肾炎的发生发展,并为狼疮肾炎的分子生物学机制研究提供理论依据。方法1.动物的饲养及分组购买6周龄雌性MRL/lpr小鼠和C57BL/6小鼠各15只,前者作为模型组,后者作为正常对照组,两组小鼠饲养至16周龄后,先用代谢笼法收集小鼠24小时尿,并在麻醉下,摘眼取血和留取肾脏组织。2.狼疮肾炎的一般生化学检测留取小鼠血清,用酶联免疫吸附法分别测定两组小鼠血清中抗核抗体(ANA)和抗双链DNA抗体(ds DNA)水平。应用全自动生化分析仪测定两组小鼠24尿蛋白。3.狼疮肾炎模型的病理学检测取肾脏组织行HE染色、PASM染色、Masson染色,观察两组小鼠肾脏组织病理改变,免疫荧光法观察两组小鼠肾脏组织中免疫复合物Ig G和补体C3的沉积。4.狼疮小鼠肾脏组织中wnt3a和β-catenin基因的检测运用实时定量PCR技术测定模型鼠组和正常对照组小鼠肾脏组织中wnt3a和β-catenin基因的表达情况。5.狼疮小鼠肾脏组织中wnt3a和β-catenin蛋白的检测运用免疫蛋白印迹技术(WB)测定模型鼠组和正常对照组小鼠肾脏组织中wnt3a和β-catenin蛋白的表达情况。结果1.狼疮肾炎模型小鼠的一般状态模型鼠组在饲养至16周龄时颈部出现红色皮疹、脱毛、结痂等表现,取材时发现模型鼠组较正常对照组脾脏肿大。2.狼疮肾炎的一般生化学检测与正常对照组相比,模型鼠组尿蛋白含量明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型鼠组血清中ANA及ds DNA水平明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。3.狼疮肾炎的病理学改变病理检测及免疫荧光结果提示模型鼠组肾脏组织中肾小球系膜细胞增生、炎症细胞浸润,肾小球中可见免疫复合物Ig G和补体C3沉积。4.实时定量PCR检测狼疮小鼠肾脏组织中wnt3a和β-catenin基因的表达模型鼠组肾脏组织中wnt3a(2.49±0.939)和β-catenin(1.53±0.110)基因表达较正常对照组wnt3a(0.90±0.156)和β-catenin(0.82±0.109)基因表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。5.免疫蛋白印迹法(WB)检测狼疮小鼠肾脏组织中wnt3a和β-catenin蛋白的表达模型鼠组肾脏组织中wnt3a蛋白(0.46±0.193)的表达较正常对照组wnt3a蛋白(0.16±0.057)表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。模型鼠组肾脏组织中β-catenin蛋白(1.59±0.471)的表达较正常对照组β-catenin蛋白(0.55±0.209)表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论wnt3a/β-catenin信号通路处于异常活化状态,异常活化的wnt3a/β-catenin信号通路参与了狼疮肾炎的发生发展,wnt3a/β-catenin信号通路的异常高表达可能是狼疮肾炎发病的分子生物学机制之一。

关键词：狼疮性肾炎 MRL/lpr小鼠 β-catenin wnt3a/β-catenin信号通路分子生物学机制

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MiR-211-5p通过wnt3a/β-catenin信号通路影响血管平滑肌细胞钙化

MiR-211-5p通过Wnt3a/β-catenin信号通路影响血管平滑肌细胞钙化

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作者：赵唯羽承德医学院

学位级别：硕士

目的:研究并探讨miR-211-5p对大鼠胸大动脉平滑肌细胞A7r5钙化的影响及其作用机制。方法:1.A7r5细胞钙化模型的构建传代培养A7r5细胞系,使用高磷（Na H2PO4,2m M）作用12小时+纳米羟基磷灰石颗粒（Nano-HAP,200μg/m L）诱导A7r5体外钙... 详细信息

目的:研究并探讨miR-211-5p对大鼠胸大动脉平滑肌细胞A7r5钙化的影响及其作用机制。方法:1.A7r5细胞钙化模型的构建传代培养A7r5细胞系,使用高磷（Na H2PO4,2m M）作用12小时+纳米羟基磷灰石颗粒（Nano-HAP,200μg/m L）诱导A7r5体外钙化14天。2.实验分组细胞实验共分为三阶段:第一阶段将细胞分为2组,分别为不加任何干预的对照组和钙化诱导的钙化组,构建A7r5细胞钙化模型,并比较两组细胞miR-211-5P的表达是否有差异;第二阶段将细胞转染、加药处理后分为6组,即对照组、钙化组、钙化+miR-211-5P mimic组、钙化+mimic NC组、钙化+miR-211-5P inhibitor组、钙化+inhibitor NC组,探索在上调及下调miR-211-5P后,细胞钙化水平的差异和相关蛋白（包括钙化相关调节蛋白OPN、Runx2和wnt/β-catenin信号通路相关蛋白wnt3a、β-catenin、GSK3β）表达水平的差异,分析上调及下调miR-211-5P对细胞钙化及wnt/β-catenin信号通路的影响;第三阶段将细胞转染、加药处理后分为4组,即对照组、钙化组、钙化+miR-211-5P inhibitor组、钙化+inhibitor+XAV939组,探索在下调miR-211-5P后,再加入wnt/β-catenin信号通路抑制剂对细胞钙化水平的影响,进一步明确miR-211-5P是否通过wnt/β-catenin信号通路来调控A7r5细胞的钙化。3.茜素红染色及定量分析测定并分析细胞实验三个阶段各个组细胞的钙沉积情况;4.碱性磷酸酶（ALP）活性测定检测细胞实验三个阶段各个组细胞的ALP活性;5.钙含量检测（邻甲酚酞络合酮微板法）测定检测细胞实验三个阶段各个组细胞的钙含量;6.蛋白质免疫印迹（Western blot,WB）检测细胞wnt/β-catenin信号通路相关因子wnt3a、β-catenin、GSK3β以及平滑肌细胞细胞钙化相关蛋白OPN、Runx2等蛋白的表达水平;7.实时定量PCR（RT-q PCR）法检测细胞实验第一阶段中的两组细胞和转染miR-211-5P mimic组细胞及mimic NC组的miR-211-5P的表达水平。8.统计分析:数据采用SPSS 25.0软件进行统计分析,用Graph Pad Prism8.0软件进行绘图。数据用x±s来表示,两组数据之间的比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析（ANOVA）,然后进行多重比较（LSD检验）。如果P<0.05,则表明差异有统计学意义。结果:1.第一阶段实验结果:高磷+纳米羟基磷灰石颗粒诱导钙化后的A7r5细胞中miR-211-5p的表达水平降低。1.1茜素红染色及定量分析结果:钙化组细胞的钙沉积明显多于对照组（P<0.001）。1.2碱性磷酸酶活性测定结果:钙化组细胞的碱性磷酸酶活性明显高于对照组（P<0.001）。1.3钙含量检测（邻甲酚酞络合酮微板法）结果:钙化组细胞的钙含量明显高于对照组（P<0.001）。1.4蛋白质免疫印迹（Western blot,WB）检测结果:钙化组细胞钙化相关蛋白OPN、Runx2的表达量均高于对照组（P<0.001）;1.5实时定量PCR（RT-q PCR）检测结果:钙化组细胞中的miR-211-5p表达水平明显低于对照组（P<0.001）。与对照组细胞相比,高磷和纳米羟基磷灰石颗粒诱导钙化的A7r5细胞的钙沉积明显增多,碱性磷酸酶活性增高,钙含量明显增高,表明钙化模型造模成功。诱导钙化组细胞的miR-211-5p表达水平明显低于对照组。2.第二阶段实验结果:上调、下调miR-211-5P影响细胞钙化相关调节蛋白和wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平。2.1实时定量PCR（RT-q PCR）检测结果:与转染miR-211-5P mimic NC组细胞相比,转染miR-211-5P mimic组细胞的miR-211-5p表达水平明显更高（P<0.001）,表明转染成功。2.2茜素红染色及定量分析结果:与对照组相比,钙化组、钙化+miR-211-5P mimic组、钙化+mimic NC组、钙化+miR-211-5P inhibitor组、钙化+inhibitor NC组细胞的钙沉积量均增高（P均<0.001）;与钙化组相比,钙化+miR-211-5P mimic组细胞,上调miR-211-5P表达后,钙沉积量降低,而钙化+miR-211-5P inhibitor组细胞,下调miR-211-5P表达后钙沉积量增高（P均<0.001）。2.3碱性磷酸酶活性测定结果:与对照组相比,钙化组、钙化+miR-211-5P mimic组、钙化

关键词： miR-211-5p A7r5大鼠胸大动脉平滑肌细胞高磷纳米羟基磷灰石颗粒 wnt3a/β-catenin信号通路

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蛇床子素对髓核致神经根炎性痛大鼠脊髓背角wnt3a/β-catenin信号通路的影响

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广州中医药大学学报 2023年第1期40卷 170-176页

作者：杨琳张嘉明何仲贤刘苑婷鲁杨孙来保江伟航广州市番禺区中心医院广东广州511400 中山大学附属第六医院广东广州1510655 中山大学附属第一医院广东广州510080

【目的】探讨蛇床子素对髓核致神经根炎性痛大鼠的治疗作用及机制。【方法】将54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组,每组18只。模型组和治疗组大鼠构建神经根炎性痛模型,假手术组进行假手术处理。术后2 d,治疗组大鼠经硬膜外注... 详细信息

【目的】探讨蛇床子素对髓核致神经根炎性痛大鼠的治疗作用及机制。【方法】将54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组,每组18只。模型组和治疗组大鼠构建神经根炎性痛模型,假手术组进行假手术处理。术后2 d,治疗组大鼠经硬膜外注射50μL蛇床子素20 g·L-1,假手术组和模型组大鼠经硬膜外注射相同体积二甲基亚砜(DMSO)。术前3、1 d及术后1、3、7、10、14 d测量大鼠50%机械性撤足阈值(MWT)及热伤害性撤足潜伏期(TWL)。于术后7 d,采用定量聚合酶链反应(Q-PCR)检测术侧脊髓背角wnt3a、β-catenin mRNA表达水平,采用Western Blot法和免疫荧光染色法分别检测术侧脊髓背角wnt3a、β-catenin蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测术侧脊髓背角白细胞介素18(IL-18)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。【结果】模型组术后各时间点50%MWT及TWL较假手术组降低(P<0.05或P<0.01),术后7 d术侧脊髓背角wnt3a、β-catenin mRNA和蛋白表达水平及IL-18、TNF-α水平均较假手术组升高(均P<0.01);与模型组比较,治疗组术后3 d出现50%MWT及TWL明显升高(P<0.05或P<0.01),术后7 d术侧脊髓背角wnt3a、β-catenin mRNA和蛋白表达水平及IL-18、TNF-α水平均降低(P<0.05)。【结论】蛇床子素可有效减轻髓核致炎大鼠神经根痛,其抗炎镇痛机制可能与抑制脊髓背角wnt3a/β-catenin信号通路,下调IL-18和TNF-α的表达有关。

关键词：蛇床子素神经根炎性痛 wnt3a/β-catenin信号通路白细胞介素18 肿瘤坏死因子α 髓核大鼠

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