检索结果-内蒙古大学图书馆

植物保护学报 2007年第2期34卷 219-220页

作者：张丹丹杨之帆彭宇焦彦成王荫长湖北大学生命科学学院武汉430062 南京农业大学植物保护学院南京210095

昆虫对拟除虫菊酯类杀虫剂的敏感性下降主要与神经细胞膜上钠离子通道的敏感性降低有关。至今已在14种昆虫的para直向同源钠离子通道基因序列中发现了与击倒抗性有关的20个突变。作者利用反转录-多聚酶链式反应（RT-PCR）对食虫沟瘤蛛... 详细信息

昆虫对拟除虫菊酯类杀虫剂的敏感性下降主要与神经细胞膜上钠离子通道的敏感性降低有关。至今已在14种昆虫的para直向同源钠离子通道基因序列中发现了与击倒抗性有关的20个突变。作者利用反转录-多聚酶链式反应（RT-PCR）对食虫沟瘤蛛的钠离子通道基因ⅢS5-ⅣS6区域进行了克隆、序列分析及同源性比较分析。

关键词：钠离子通道基因序列序列分析 cdna片段反转录-多聚酶链式反应克隆拟除虫菊酯类杀虫剂同源性比较

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用RACE技术延伸cdna片段5'端未知序列

用RACE技术延伸cDNA片段5'端未知序列

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作者：朱敏北京协和医学院(清华大学医学部)&中国医学科学院

学位级别：博士

随着分子生物学的迅速进展，分离表达序列的方法被不断更新和完善。目前为止，EST数据库(Expressed Sequence Tag Library)已收入80多万条表达序列。这些表达序列可作为标志用于致病基因的分离和克隆。研究致病基因的功能及其致病的分... 详细信息

随着分子生物学的迅速进展，分离表达序列的方法被不断更新和完善。目前为止，EST数据库(Expressed Sequence Tag Library)已收入80多万条表达序列。这些表达序列可作为标志用于致病基因的分离和克隆。研究致病基因的功能及其致病的分子机制，仅凭表达序列是远远不够的。如何能够快速而准确地通过cdna片段获得cdna全长，就成为对表达序列进行更深入研究的重要前提。本实验室在研究脆性X综合征分子机制的过程中，以脆性X综合征的致病基因FMR1(Fragile X Mental Retardation gene 1)的表达产物FMRP为“诱饵”，应用酵母双杂交体系从小鼠胚胎cdna文库中寻找能与FMRP相互作用的新蛋白。由此得到的2#克隆插入片段长1．2 kb，Northern杂交证实该基因全长约为5 kb，己知的1．2 kb靠近3’末端。DNA序列同源检索分析表明，除了一些EST片段，该基因与其它已知功能基因无同源性。Northern杂交还发现该基因在人睾丸组织中有高表达。脆性X综合征的典型临床表现之一为大睾丸，由此推测该新蛋白可能与脆性X综合征有某些内在联系。因而有必要得到该基因的全长并对其进行更深入的研究。本实验旨在尝试用5’RACE(Rapid Ampiification of cdna End)技术建立向cdna片段5’端未知序列延伸的方法，为获得2#克隆的cdna全长打下基础。在应用RT-PCR进一步验证该基因在人绒毛组织中确有表达后，提取小鼠胚胎RNA进行5’RACE，尽可能向该基因的5’末端未知序列延伸。我们运用引物设计的技巧，在已知序列的5’末端保留了100 bp，并在这段序列上设计出一对引物，用于检测阳性克隆，可提高筛选的特异性。此外，还采用纯化的mRNA为逆转录模板，并减少引物用量、提高退火温度、减少退火时间等措施来提高PCR产物的特异性；在进行巢式PCR和克隆之前，又通过纯化柱分别将第一轮PCR产物和巢式PCR产物纯化，去除残余的引物和DNA短片段，以提高巢式PCR反应的特异性和减少小片段竞争。最后通过测序确证阳性克隆。将阳性克隆按插入片段长短进行排序，分别挑取不同长短的阳性克隆插入片段自5’端测序，然后拼接成完整的序列。目前测序结果表明，筛选克隆的阳性率达到90％，已测出向cdna片段5’端未知序列延伸了237 bp的克隆。由于时间关系仅筛选了部分克隆，得到的插入片段长度很有限，下一步的工作可以继续筛选有长插入片段的阳性克隆，或者分段回收片段较长的PCR产物重新进行克隆和测序。一次RACE不一定能达到cdna全长的5’末端。可在获得的新DNA序列上设计引物，进行连续5’RACE，直至达到5’cap结构。

关键词： RACE技术延伸 cdna片段

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Aspergillus niger FS6中β-1,3-1,4-葡聚糖酶cdna片段的克隆及序列测定

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科技通报 2001年第6期17卷 7-12页

作者：李卫芬孙建义许梓荣廖玉华浙江大学动物科学学院饲料科学研究所浙江杭州310029

通过 RT- PCR方法首次从真菌 Aspergillus niger FS6中扩增和克隆到 β- 1,3- 1,4 -葡聚糖酶 c DNA片段 .序列测定表明 :该片段全长 2 80 bp.经 Clustal W软件进行同源性分析后表明 ,该序列与枯草芽孢杆菌、水解淀粉芽孢杆菌、厌氧真菌... 详细信息

通过 RT- PCR方法首次从真菌 Aspergillus niger FS6中扩增和克隆到 β- 1,3- 1,4 -葡聚糖酶 c DNA片段 .序列测定表明 :该片段全长 2 80 bp.经 Clustal W软件进行同源性分析后表明 ,该序列与枯草芽孢杆菌、水解淀粉芽孢杆菌、厌氧真菌、牛链球菌和热纤维梭菌中 β- 1,3- 1,4 -葡聚糖酶基因同源性很高 ,分别为 91% ,90 % ,70 % ,6 7% ,6 5 %

关键词： Aspergillus niger β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因克隆 cdna片段序列测定真菌

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环境胁迫诱导的农作物早期反应基因的研究—1.稻瘟病菌(***)侵染诱导的水稻早期反应基因的研究;2.水分胁迫诱导的小麦早期反应基因的cdna片段克隆和序列分析

环境胁迫诱导的农作物早期反应基因的研究—1.稻瘟病菌(***)侵染...

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作者：周建明中国科学院上海植物生理生态研究所

学位级别：博士

在该研究中研究人员试图以稻瘟病菌感染水稻,利用mRNA差异显示技术分离稻瘟病菌侵染诱导的水稻早期反应基因的cdna片段,通过Northern blot分析确定早期反应基因诱导表达的格局,然后用5\'RACE技术分离水稻早期反应基因的5\'端cDN... 详细信息

在该研究中研究人员试图以稻瘟病菌感染水稻,利用mRNA差异显示技术分离稻瘟病菌侵染诱导的水稻早期反应基因的cdna片段,通过Northern blot分析确定早期反应基因诱导表达的格局,然后用5\'RACE技术分离水稻早期反应基因的5\'端cdna片段并对其进行克隆和序列分析,最后分离早期反应基因的全基因并对其进行初步鉴定,为进一步研究其表达调控机制打下基础.

关键词：环境胁迫农作用早期反应基因稻瘟病菌侵染诱导水稻小麦 cdna片段克隆序列分析

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食管癌组织中cystatin B基因、D10-86 cdna片段的表达

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郑州大学学报（医学版） 2004年第2期39卷 235-238页

作者：郭长青王明荣李继昌徐峰陈宝生徐昕蔡岩韩亚玲吴旻郑州大学第一附属医院消化内科郑州450052 中国医学科学院.协和医科大学肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室北京100021

目的:研究食管癌组织中cystatin B基因、D10-86 cdna片段的表达及相关性。方法:采用RT-PCR方法检测了41对食管癌组织及配对食管癌旁正常黏膜cystatin B基因、D10-86 cdna片段的表达。结果:cystatin B基因、D10-86 cdna片段各在82.9％(34... 详细信息

目的:研究食管癌组织中cystatin B基因、D10-86 cdna片段的表达及相关性。方法:采用RT-PCR方法检测了41对食管癌组织及配对食管癌旁正常黏膜cystatin B基因、D10-86 cdna片段的表达。结果:cystatin B基因、D10-86 cdna片段各在82.9％(34/41)、41.5％(17/41)食管癌组织中的表达水平低于配对的食管癌旁正常黏膜,cystatin B基因的表达下调情况显著高于D10-86 cdna片段(P<0.05),但2者的表达无相关性(JD>0.05)。结论:cystatin B基因、D10-86 cdna片段在食管癌中表达下调,可能源于不同的机制。2者可能分别是由不同的机制而导致在食管癌组织中表达下调。

关键词： cystatin B基因 D10—86 cdna片段食管肿瘤基因表达逆转录聚合酶链反应

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胃多癌多药耐相关分子MGr1抗原及其编码cDNA片段的消化系统的表达...

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作者：尹芳第四军医大学

学位级别：硕士

肿瘤多药耐药现象(multidrug resistance,MDR)是肿瘤治疗研究的热点和难点.用MGr1筛选的肿瘤全长cdna文库获得了另一个稳定的阳性克隆MGr1-Ag2,其中约1400bp的cdna片段可能是编码细胞紧密连接蛋白occludin的cdna的部分序列.这两个cdna... 详细信息

肿瘤多药耐药现象(multidrug resistance,MDR)是肿瘤治疗研究的热点和难点.用MGr1筛选的肿瘤全长cdna文库获得了另一个稳定的阳性克隆MGr1-Ag2,其中约1400bp的cdna片段可能是编码细胞紧密连接蛋白occludin的cdna的部分序列.这两个cdna片段在SGC7901/VCR中的表达均高于SGC7901,为未知功能的基因片段.目的和方法:为进一步分析上述两个片段可能的意义及功能,该研究利用免疫组织化学和mRNA分子原位杂交等技术,对MGr1抗原及其编码的cdna片段MGr1-Ag1与MGr1-Ag2的mRNA组织中的分布进行了检测,以探索它们在消化系统的表达情况和意义.结论:应用免疫组织化学和mRNA分子原位杂交等技术,对组织标本中MGr1抗原及其编码cdna片段MGr1-Ag1与MGr1-Ag2的mRNA表这情况进行了检测.MGr1抗原主要分布于上皮细胞,其蛋白的表达水平随着肿瘤恶性程度的增加而降低.MGr1-Ag2 mRNA的表达水平也与胃癌组织的分化水平正相关,在这一点一两者相符,两者在各组的阳性率较一致,除低分化组外,MGr1-Ag1 mRNA各组的阳性率均高于MGr1抗原.但在某些情况下,同分子mRNA与蛋白的水平并不一定完全一致转录后调节机制也影响蛋白表达水平,所以mRNA表达水平及阳性率也有与蛋白表达水平不相符的情况.

关键词：多药耐药胃癌单克隆抗体原位杂交 cdna片段

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白纹伊蚊CYP6cdna片段克隆、鉴定

白纹伊蚊CYP6cDNA片段克隆、鉴定

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作者：葛春喜中山医科大学中山大学

学位级别：硕士

该研究根据家蝇CYP6A1、CYP6D1以及致倦库蚊CYP6E1的保守区氨基酸序列设计一组简并引物,采用RT-PCR的方法,旨在从白纹伊景中获得CYP6家庭中新的成员,为进一步研究细胞色素P450的多样性及其与抗药性形成成的分子机制打下基础.结论:该实... 详细信息

该研究根据家蝇CYP6A1、CYP6D1以及致倦库蚊CYP6E1的保守区氨基酸序列设计一组简并引物,采用RT-PCR的方法,旨在从白纹伊景中获得CYP6家庭中新的成员,为进一步研究细胞色素P450的多样性及其与抗药性形成成的分子机制打下基础.结论:该实验应用简并引物RT-PCR技术成功扩增、克隆和鉴定出9个细胞色素P450成员及其等位基因的cdna片段,同源性分析表明9个片段均属于CYP6家庭,为坟虫P450的多样性的研究积累了宝贵的资料;种系发生树的构建反映昆虫450各家庭的亲缘关系与同源性分析的结论相符;根据CYP6家庭是从CYP3家庭分化形成的结果,为证明CYP6家庭的某些成员具有代谢杀虫剂的作用提供了种系发生上的依据;种系发生树同时反映出P450进行速度非常快,形成了庞大的超基因家庭;该实验证实了蚊虫基因内P450具的复杂的多样性.

关键词： cdna片段克隆白纹伊蚊 CYP6 同源性分析种系发生树

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胃癌多药耐药相关分子MGr1-Ag编码cdna片段的克隆及鉴定

胃癌多药耐药相关分子MGr1-Ag编码cDNA片段的克隆及鉴定

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作者：时永全第四军医大学

学位级别：硕士

肿瘤的多药耐药现象是肿瘤化疗研究的热点.目前已经发现的多药耐药机制主要涉及Pgp、MRP、LRP、GSH/GST、TopoⅡ和多种凋亡相关基因的变化.但这些还不能圆满解释肿瘤多药耐药性的发生.1994年,人者所以人耐长春新碱胃癌细胞SGC7901/VCR... 详细信息

肿瘤的多药耐药现象是肿瘤化疗研究的热点.目前已经发现的多药耐药机制主要涉及Pgp、MRP、LRP、GSH/GST、TopoⅡ和多种凋亡相关基因的变化.但这些还不能圆满解释肿瘤多药耐药性的发生.1994年,人者所以人耐长春新碱胃癌细胞SGC7901/VCR为免疫原成功地制备了一株胃癌耐药相关性单克隆抗体MGr1,它所识别的抗原MGr1-Ag在SGC7901/VCR的表达显著高于亲本细胞***1-Ag分子量约为110KDa,主要分布在细胞膜和细胞浆中.进一步研究表明,MGr1能部分逆转SGC7901/VCR对ADM、VCR、5-Fu的耐药性,明显增加SGC7901/VCR细胞内对ADM的蓄积和潴留.提示MGr1-Ag可能是一种新的胃癌耐药相关分子.目的:利用MGr1筛选文库,以获得MGr1-Ag编码cdna的全长或部分片段.结论:以胃癌耐药相关性单克隆抗体MGr1为探针筛选肿瘤耐药细胞表位文库和肿瘤全长cdna文库,获得两个cdna片段,它们在胃癌耐药细胞中的表达高于药物敏感细胞.其中一个可能为细胞紧密连接蛋白occludin的编码序列,另一个为未知功能的基因片段.进一步克隆其全长cdna并进行功能分析,将为克隆MGr1-Ag的编码基因作出有意义的贡献,甚至有望发现一个新的基因.

关键词：多药耐药性胃癌单克隆抗体文库筛选 cdna片段

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抗禾谷孢囊线虫基因SCAR标记的研究及抗虫基因cdna片段的克隆

抗禾谷孢囊线虫基因SCAR标记的研究及抗虫基因cDNA片段的克隆

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作者：闫乃红中国科学院成都生物研究所

学位级别：硕士

禾谷孢囊线虫是严重危害禾谷类作物的病原线虫,它广泛分布于澳大利亚、欧洲、北美、印度和中国等世界主要小麦产区、使作物严重减产,造成巨大的经济损失.目前最有效的防治措施是将外源抗性基因导入栽培小麦,选育,种植并推广小麦抗禾谷... 详细信息

禾谷孢囊线虫是严重危害禾谷类作物的病原线虫,它广泛分布于澳大利亚、欧洲、北美、印度和中国等世界主要小麦产区、使作物严重减产,造成巨大的经济损失.目前最有效的防治措施是将外源抗性基因导入栽培小麦,选育,种植并推广小麦抗禾谷孢囊线虫新品种.本文对与小麦禾谷孢囊线虫抗性基因紧密连锁的RAPD标记进行了SCAR转化,为分子标记辅助选择育种奠定基础,以提高抗虫育种率效;而小麦禾谷孢囊线虫抗性基因的分离克隆对获得自主产权基因、实现高效、定向转移抗病基因具有重要意义.

关键词：抗禾谷孢囊线虫基因 RAPD SCAR RACE cdna片段分子标记分离克隆基因工程抗虫育种

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缺铁胁迫下小麦根基表达的差异及差异的cdna片段的克隆

缺铁胁迫下小麦根基表达的差异及差异的cDNA片段的克隆

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作者：刘维仲首都师范大学

学位级别：硕士

利用mRNA差异显示(Differential Display Reverse Transcript PCR,简称DDRT-PCR)技术比较了正常供铁和缺铁胁迫下铁高效型小麦(京-411) 和铁低效型小麦(三属麦-3)的基因表达并异.结果表明,缺铁胁迫既能诱导某些基因的表达,也能抑制一些... 详细信息

利用mRNA差异显示(Differential Display Reverse Transcript PCR,简称DDRT-PCR)技术比较了正常供铁和缺铁胁迫下铁高效型小麦(京-411) 和铁低效型小麦(三属麦-3)的基因表达并异.结果表明,缺铁胁迫既能诱导某些基因的表达,也能抑制一些基因的表达;缺铁胁迫下铁高效型品种(京-411)的基因表达差异比铁低效型小麦(三属麦-3)明显,说明它们的抗缺铁胁迫能力确有差异.利用挑选出的差异显示cdna片段为探针同从铁高效型小麦(京-411)在正常供铁和缺铁胁上理的根尖中提取的总RNA进行Northern杂交, 证明划片段cdna2(经克隆后又分为cdna2-1和cdna2-2)和cdna3的表达受缺铁胁迫的的抑制.测序和序列分析结果表明,cdna3片段同普通小麦编码线粒体蛋白的、与Cytc形成有关的线粒体基因rpslA有99﹪同源性,和拟南芥菜等几种植物的与Cytc形成有关的线粒体基因也有92﹪以上的同源性;经分析后初步确定小麦的rpslA基因在缺铁胁上减弱表达,Cytc的形成减少,影响呼吸和ATP的生成.cdna2-1片段同ATP-binding-transporters家族有强相似性,cdna2-2片段同dDTP-4,6-葡萄糖脱水酶有一定同源性,推测这两个基因在缺铁胁迫下有可能减弱表达.

关键词：缺铁胁迫小麦根基因差异表达 Northern杂交 cdna片段

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