检索结果-内蒙古大学图书馆

世界华人消化杂志 2004年第8期12卷 1800-1805页

作者：梁莉丁彦青李欣杨玉芳肖军张进华赵培冉中国人民解放军第一军医大学病理学教研室广东省广州市510515 中国人民解放军第一军医大学热卫系广东省广州市510515

目的:初步筛选和鉴定大肠癌转移相关基因,阐述大肠癌转移的分子机制. 方法:利用抑制消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),在一对来自同一亲本、转移能力不同的人大肠癌细胞株SW620和SW480间,已成功构建了人大肠癌... 详细信息

目的:初步筛选和鉴定大肠癌转移相关基因,阐述大肠癌转移的分子机制. 方法:利用抑制消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),在一对来自同一亲本、转移能力不同的人大肠癌细胞株SW620和SW480间,已成功构建了人大肠癌转移促进基因和转移抑制基因的两个cdna消减文库.从以上两个文库中随机挑取约200个菌液PCR片段,利用Differential screening(DS)方法筛选真正差异表达的cdna片段,之后通过Northern blot对部分差异cdna 片段的DS筛选结果进行验证.最后对筛选出的差异cdna 片段进行测序和同源检索,分析其性质并初步探讨其在大肠癌中转移中的可能机制. 结果:约200个菌液PCR片段经过DS筛选后,共获得29 个真正差异表达cdna片段,利用Northern blot对其中4 种cdna片段的表达情况进行验证,结果与DS筛选一致. 然后对29个差异cdna片段进行测序和同源性分析,得到25个差异表达基因,10个为已知基因,其中5个基因在高转移细胞株SW620中差异表达,可能有促进转移的作用, 包括热休克蛋白10(heat shock protein10,HSP10)、细胞色素氧化酶Ⅱ(cytochrome C oxidaseⅡ,COXⅡ)、有丝分裂调控蛋白dis3人同源物(mitotic control protein dis3 homolog, DIS3)、骨骼肌α1-肌动蛋白(skeletal muscle actin alphal, ACTA1)及血浆淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA);另外5个基因的表达仅见于在SW480低转移细胞株,具有潜在的转移抑制作用,包括egl nine homolog 2(EGLN2)、真核翻译起始因子4A(eukaryotic translation initiation factor 4A,EIF4A)、人细胞色素氧化酶Ⅲ的类似物(similar to cytochrome c oxidase Ⅲ,COXⅢ)、谷胱甘肽S转移酶3(glutathione S-transferase mu 3,GSTM3)及线粒体DNA (mitochondrion DNA,mtDNA).10个已知基因基本上是一些与细胞生长分化、代谢合成、转录、凋亡及信号转导等相关的基因.除DIS3和SAA外,其余基因与大肠癌转移的关系在本研究中首次被报道.此外,还筛选到15个未知基因片段,通过与人基因组序列进行比对,发现其中6个基因定位于5号染色体上,包括4个可能促进大肠癌转移的基因和2个抑制基因.目前这15个未知基因片段已经被GeneBank dbEST库收录,GeneBank登陆号为CD485499- CD485513. 结论:DS技术是一种筛查表达文库的有效途径;细胞的生长分化、转录、凋亡、信号转导等变化可能在大肠癌转移过程中发挥重要作用;5号染色体上可能存在多个与大肠癌转移相关的新基因位点.

关键词：癌转移人大肠癌相关基因 cdna片段筛选 5号染色体 SW480 转录差异表达测序

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新疆3种藜科盐生植物NHX基因的克隆与序列分析比较

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植物生理学通讯 2005年第3期41卷 383-387页

作者：蔡伦张富春马纪李金耀陈邦党恩特马克·布拉提拜新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室新疆生物资源基因工程重点实验室乌鲁木齐830046

从新疆野生植物盐角草(Salicorniaeuropaea)、盐爪爪(Kalidiumfoliatum)和盐穗木(Halostachyscaspica)中分别克隆了约1.7kb的NHX基因cdna片段,此片段均包含了NHX完整基因,三者之间有较高的同源性,盐角草NHX基因与盐爪爪NHX基因同源性达92.81%,盐角草与盐穗木同源性达92.19%,盐爪爪与盐穗木同源性达97.66%。它们与其它几种藜科盐生植物如滨藜、碱蓬、灰绿藜的NHX基因同源性也很高,达到80%以上,与拟南芥同源性也达到86%。此基因在植物尤其是藜科盐生植物中高度保守,其编码的功能性蛋白可能在影响植物耐盐中起作用。

关键词：盐生植物分析比较藜科克隆新疆基因同源性序列 cdna片段功能性蛋白盐角草野生植物灰绿藜拟南芥中高度滨藜碱蓬耐盐

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用改进的DDRT-PCR技术进行小麦穗和花药特异表达基因的分析

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山东农业大学学报（自然科学版） 2005年第1期36卷 113-118页

作者：刘秀珍孙兰珍刘保申宋伟刘青山东农业大学农学院

本研究采用改进的DDRT-PCR技术对小麦穗和花药发育的不同阶段进行了差别表达分析,以找出穗和花药的特异表达基因。用30个随机单引物进行RAPD扩增,从展示的近1000条带中找出14条差别cdna片段,然后以cdna为探针进行反向Northern-Blot,结... 详细信息

本研究采用改进的DDRT-PCR技术对小麦穗和花药发育的不同阶段进行了差别表达分析,以找出穗和花药的特异表达基因。用30个随机单引物进行RAPD扩增,从展示的近1000条带中找出14条差别cdna片段,然后以cdna为探针进行反向Northern-Blot,结果得到一条在花药内特异表达增强的阳性片段,命名为S1176450。

关键词： DDRT-PCR技术特异表达基因小麦穗 RAPD扩增 cdna片段表达分析花药发育单引物 450 差别

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极低频磁场影响细胞基因转录的研究

极低频磁场影响细胞基因转录的研究

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作者：吴瑞英浙江医科大学

学位级别：博士

电磁场对生物体的非热效应及其机理研究是当前生物电磁学的前沿课题，也是环境保护中新出现的重要课题。八十年代自美国学者报道居住在输配电线周围儿童白血病发病率增高以来，较多的流行病学调查及细胞分子实验研究支持极低频磁场(Extr... 详细信息

电磁场对生物体的非热效应及其机理研究是当前生物电磁学的前沿课题，也是环境保护中新出现的重要课题。八十年代自美国学者报道居住在输配电线周围儿童白血病发病率增高以来，较多的流行病学调查及细胞分子实验研究支持极低频磁场(Extremely Low Frequency Magnetic Field，ELF MF)可能增加肿瘤发生的危险性，并有可能引起其他的潜在危害。然而，对产生这些效应的潜在机理都不清楚，并还有不少阴性结果的报道，因而，对电磁场的非热效应仍有很大争议。近几年来电磁场非热效应的研究已发生了重要转移，逐步地在基因水平上进行机制的探索。1988～1992 Goodman及Phillips这两个独立实验室分别报道60Hz磁场辐照可影响原癌基因c-myc及c-fos的转录水平。由于这个实验结果在某种程度上支持极低频磁场与肿瘤发生率增高有关的假说，因而引起了该领域很大的反响。但是，还有相当多的类似实验得到的却是阴性结果。电磁场是否能影响原癌基因表达尤其是在HL-60及Daudi这二个细胞模型上已成了该领域的一个很大疑团，在1996年国际生物电磁学年会上成为争论的焦点：有许多这方面的实验报道，以重复及验证Goodman和Phillips的实验为主。从结果看，以阴性为多，也有阳性，其结果很不一致。值得重视的是美国学者Binninger利用差异显示反转录PCR(differential display reverse transcription PCR，DDRT-PCR)进行ELF MF对原始真核细胞的基因表达研究，初步发现20μT 60Hz MF辐照酿酒酵母菌24小时后有五个特异反应基因，其中三个为已知基因，两个为未

关键词：极低频磁场辐照原癌基因 c-myc c-fos Daudi细胞基因转录 Northern印迹 mRNA差异性显示 cdna片段磁场相关基因

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猪瘟病毒套式PCR检测方法的建立

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黑龙江畜牧兽医 2010年第10期 129-130页

作者：鲁建民熊忙利咸阳职业技术学院陕西咸阳712000

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利用PCR技术快速构建cdna文库

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黑龙江畜牧兽医 2010年第11期 120-121页

作者：张瑞强繁萍蔡建平谢明权青海大学农牧学院青海西宁810016 广东省农业科学院兽医研究所广东省公共卫生重点开放实验室广东广州510640

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昆虫学

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中国学术期刊文摘 2008年第17期14卷 140-143页

家蚕CyPA基因的克隆、表达谱及进化分析;青杨脊虎天牛CYP4G2基因片段的克隆、序列分析与表达;谢氏宽漠王HSP70基因cdna片段的克隆及热激条件下的表达;红褐斑腿蝗卵黄蛋白的分离纯化及性质分析;苦皮藤素Ⅳ和Ⅴ混合物对棉铃虫幼虫神经细... 详细信息

家蚕CyPA基因的克隆、表达谱及进化分析;青杨脊虎天牛CYP4G2基因片段的克隆、序列分析与表达;谢氏宽漠王HSP70基因cdna片段的克隆及热激条件下的表达;红褐斑腿蝗卵黄蛋白的分离纯化及性质分析;苦皮藤素Ⅳ和Ⅴ混合物对棉铃虫幼虫神经细胞钠通道的影响

关键词：昆虫学 HSP70基因青杨脊虎天牛 cdna片段基因片段谢氏宽漠王棉铃虫幼虫苦皮藤素Ⅳ

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小鼠T-bet基因真核表达载体的构建

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广东医学 2005年第10期26卷 1332-1334页

作者：檀卫平麦友刚黄嘉凌刘然义麦贤弟黄绍良黄文林中山大学附属第二医院儿科广州510120 中山大学肿瘤防治中心广州5100160

目的构建小鼠T—bet基因重组真核表达载体pcdna3一T—bet,为T—bet基因治疗研究提供有效的生物表达系统。方法采用内切酶切从质粒T—bet/GFP—RV中获得约1.7 kb的小鼠T—betcdna片段,以单酶切非定向克隆方式与真核表达质粒pcdna3连接,... 详细信息

目的构建小鼠T—bet基因重组真核表达载体pcdna3一T—bet,为T—bet基因治疗研究提供有效的生物表达系统。方法采用内切酶切从质粒T—bet/GFP—RV中获得约1.7 kb的小鼠T—betcdna片段,以单酶切非定向克隆方式与真核表达质粒pcdna3连接,构建真核表达载体pcdna3-T-bet。结果经PCR筛选阳性重组子,双酶切鉴定T—bet基因重组方向,并测序鉴定无错配及插入移位等DNA顺序改变。结论本实验成功构建了小鼠T—bet基因真核表达载体pcdna3-T-bet。

关键词： T-bet基因真核表达载体peDNA3-T-bet 小鼠基因真核表达载体重组真核表达载体 cdna片段真核表达质粒酶切鉴定 pcdna3 阳性重组子

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三种CDI在人胃癌不同周期细胞中转录差异性及相关cdna片断的分离

三种CDI在人胃癌不同周期细胞中转录差异性及相关cDNA片断的分离

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作者：王俊北京医科大学北京大学

学位级别：硕士

该研究利用胃癌细胞系MGC803和BGC823,采用高压笑气同步法把细胞同步到不同的周期时相,研究p16、p53、p21等抑癌基因在细胞周期表达中的调节.对MGC803细胞的研究发现在细胞周期中p53、p16、p21等抑癌基因都没有改变,因而可能有其它未知... 详细信息

该研究利用胃癌细胞系MGC803和BGC823,采用高压笑气同步法把细胞同步到不同的周期时相,研究p16、p53、p21等抑癌基因在细胞周期表达中的调节.对MGC803细胞的研究发现在细胞周期中p53、p16、p21等抑癌基因都没有改变,因而可能有其它未知基因调节G1/S转换点.作者用mRNA差异显示的方法从MGC803 G1和S期RNA中分离未知基因,得到大量的差异cdna片段, 作者选择了三条转录独特的cdna片段,经PCR扩增后进行序列测定.基因文库检索发现,其中一片段与小鼠地塞米松诱导产生的mRNA产物具有高度同源性,这表明作者建立的差异显示体系是可信的,另外两片段与其它序列的同源性很低,这为作者的进一步工作奠定了基础.

关键词：胃癌抑癌基因细胞周期 cdna片段转录差异显示

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广东省PRRSV流行病学调查及XH株Nsp2部分缺失全长cdna的构建

广东省PRRSV流行病学调查及XH株Nsp2部分缺失全长cDNA的构建

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作者：于俊勇华南农业大学

学位级别：硕士

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病。迄今为止，该病己给世界养猪业造成了巨大的经济损失。\n 在PRRSV的全基因组中，Nsp2基因变异最大，对该基因变异的分析在一定程度上能够反映PRRSV整个基因组变异的情况。本研究采用RT-PCR方法，从临床发病猪的病料中扩增出PRRSV的Nsp2基因，得到17株PRRSV Nsp2基因的部分序列片段。序列测定和分析发现，扩增的17株Nsp2部分基因序列均有两个区域存在明显缺失。\n 应用DNA Star分析软件与GenBank中已发表的其他毒株序列进行核苷酸相似性比较，结果表明：17株Nsp2序列之间的核苷酸同源性为93.7～100%，与CH-1a、CH1R和VR-2332的核苷酸序列同源性分别为74.8～77.5%、75.1～77.8%和65.6～66.3%，与疫苗株MLV的同源性在65.9～66.1%之间，与HB-1(sh)2002、HEB1的同源性分别为78.4～81.8%、94.3～97.2%，而与HUN4、JX143、XH-GD等高致病性蓝耳病代表株的同源性分别为95.2～98.4%、95.5～98.4%、94.9～100.0%之间。参考国内外已经发表的Nsp2基因序列，采用分子生物学软件MEGA4绘制了PRRSV的系统进化树，结果表明：17株Nsp2与PRRSV经典株VR-2332、疫苗株MLV的遗传关系较远；与国内分离的高致病性PRRSV毒株JXA143、HUN4、XH-GD的遗传进化关系较近，属同一分支。\n 本研究，对2009至2011年，来自广东省地区部分猪场的411份血清样品及107份组织病料进行检测发现，所有被检测猪场均存在不同程度的PRRSV感染，全部猪的PRRSV的平均抗体阳性率为53.53%(220/411)。仔猪的抗体阳性率为49.45%(45/91)，种公猪的抗体阳性率为42.00%(21/50)，后备母猪的抗体阳性率为53.90%(76/141)，经产母猪的抗体阳性率为60.47%(78/129)。PRRSV病原阳性率为62.62%(67/107)，PRV病原阳性率为3.74%(4/107)，PCV2病原阳性率为42.98%(46/107)。变异株占PRRS阳性感染的91.04%(61/67)。从本调查结果可以看出，同一猪群，猪的年龄越大，PRRSV抗体阳性率越高。本研究发现PRRSV抗体的阳性率与PCV2抗体阳性率有较强的相关性，并且，PRRSV病原阳性率(62.62%)与PCV2病原阳性率(42.98%)有很大相关性，这种相关性有待于进一步研究。\n 本研究针对猪繁殖与呼吸综合征病毒XH株Nsp2基因序列的高变区域，设计了8对引物，覆盖PRRSV-XH株Nsp2基因组的cdna重叠片段△A1、△A2、△B1、△B2、△C1、△C2大小应分别为2115bp、720bp、2109bp、1008bp、2451bp、720bp。通过融合PCR的方法，最终扩增出三类关于PRRSV-XH株Nsp2部分基因序列缺失的cdna片段，并将它们分别克隆入pJET1.2Blunt载体，对这些亚克隆进行大量测序后，与亲本毒株PRRSV-XH株进行比对，筛选出与亲本相同的亚克隆，然后将获得的正确克隆依次连接并克隆到低拷贝质粒载体pokq中，最终获得了三株关于PRRSV-XH株Nsp2部分缺失的全长cdna重组质粒pokq-△ABCD。为进一步研究Nsp2的基因序列的缺失与PRRSV毒力之间的关系奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒流行病学调查 Nsp2基因 XH株部分基因缺失 cdna片段

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