检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2025年第2期45卷 305-311页

作者：吴小霞刘晓雷刘明远孙树民赵永军丁静吉林大学动物医学学院/人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062 云南农业大学动物医学院云南昆明650000 内蒙古民族大学动物科技学院内蒙古通辽028000

构建细粒棘球绦虫3 d幼虫cdna表达文库,并进行初步鉴定。从新鲜带有包囊的患病羊源肝脏内分离采集原头蚴,人工经口感染实验犬,第3天剖检取幽门后小肠约1.5 m,沿纵轴将其剪开置38~40℃生理盐水中稍加摆动使虫体自行脱落,收集细粒棘球绦虫... 详细信息

构建细粒棘球绦虫3 d幼虫cdna表达文库,并进行初步鉴定。从新鲜带有包囊的患病羊源肝脏内分离采集原头蚴,人工经口感染实验犬,第3天剖检取幽门后小肠约1.5 m,沿纵轴将其剪开置38~40℃生理盐水中稍加摆动使虫体自行脱落,收集细粒棘球绦虫3 d幼虫。采用TRIzol试剂提取总RNA,PolyATtract^(®) mRNA Isolation Systems分离纯化mRNA,反转录合成cdna,加5′接头后与pBluescript sk-载体连接经电转导入大肠杆菌,构建细粒棘球绦虫3 d幼虫cdna表达文库。构建的文库初始库容量为1.15×10^(7)CFU/mL,扩增后文库的滴度为1×10^(10)CFU/mL,重组率为100%,插入片段长度平均为1.0~1.2 kb。构建的cdna表达文库库容量及插入片段大小合适,有望用于细粒棘球绦虫终末宿主犬疫苗候选基因及诊断抗原分子的筛选。

关键词：棘球蚴病/包虫病细粒棘球绦虫 3 d幼虫 cdna表达文库

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平颏海蛇毒腺cdna表达文库的构建

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中山大学学报（自然科学版） 2001年第3期40卷 66-69页

作者：钟肖芬卫剑文赵贵军吴文言徐安龙中山大学生命科学学院广东广州510275

以真核表达载体质粒pcdna3为载体 ,成功构建了一个高质量的平颏海蛇毒腺cdna表达文库 ,这是国内首个海蛇cdna文库 .通过对亚文库克隆的大规模序列测定和分析 ,发现了 38个海蛇新基因序列 ,其中包括神经毒素基因、磷酸脂酶A2 基因和半胱... 详细信息

以真核表达载体质粒pcdna3为载体 ,成功构建了一个高质量的平颏海蛇毒腺cdna表达文库 ,这是国内首个海蛇cdna文库 .通过对亚文库克隆的大规模序列测定和分析 ,发现了 38个海蛇新基因序列 ,其中包括神经毒素基因、磷酸脂酶A2 基因和半胱氨酸丰富毒蛋白基因共 10个编码海蛇毒素蛋白的新基因 .

关键词：平颏海蛇毒腺 cdna表达文库

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日本鬼鲉毒腺cdna表达文库的构建和初步分析

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生物化学与生物物理进展 2002年第3期29卷 424-428页

作者：姜孝玉涂洪斌陈慧萍卫剑文杨文利吴文言徐安龙中山大学生命科学学院

以海洋生物日本鬼鲉毒腺为材料 ,应用SMARTTM cdnaLibraryConstruction技术 ,构建以真核表达载体pcdna3 0为基础的日本鬼鲉毒腺cdna表达文库 .通过对文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析 ,获得 94个日本鬼鲉毒腺新表达序列标签 (EST... 详细信息

以海洋生物日本鬼鲉毒腺为材料 ,应用SMARTTM cdnaLibraryConstruction技术 ,构建以真核表达载体pcdna3 0为基础的日本鬼鲉毒腺cdna表达文库 .通过对文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析 ,获得 94个日本鬼鲉毒腺新表达序列标签 (ESTs) ,其中已确定全长cdna的克隆有 35个 ,包括溶细胞素基因、类短链神经毒素蛋白、C型凝集素、巨噬细胞迁移抑制因子、致病相关基因等 ,这些基因在日本鬼鲉中绝大多数为首次发现 .日本鬼鲉毒腺cdna表达文库的成功构建 ,为深入研究日本鬼鲉毒腺的组分及其分子作用机理奠定了基础 .

关键词：日本鬼Yuo 毒腺 cdna表达文库刺毒鱼类

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鸡胚成纤维细胞cdna表达文库的构建

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微生物学报 2007年第3期47卷 413-417页

作者：刘伟高玉龙高宏雷王笑梅许修宏中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 东北农业大学资源与环境学院微生物系哈尔滨150030

鸡胚成纤维细胞(CEF)是研究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的主要细胞材料,而构建CEF的cdna表达文库是筛选IBDV在CEF中的细胞受体,研究细胞嗜性的基础平台。采用Gateway技术构建CEF的表达文库,避免使用限制性内切酶切割cdna,能够解决常规... 详细信息

鸡胚成纤维细胞(CEF)是研究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的主要细胞材料,而构建CEF的cdna表达文库是筛选IBDV在CEF中的细胞受体,研究细胞嗜性的基础平台。采用Gateway技术构建CEF的表达文库,避免使用限制性内切酶切割cdna,能够解决常规方法构建cdna文库的技术缺陷。该技术将CEF的mRNA分离纯化后,以5′端生物素标记的Oligo(dT)primer为引物反转录后连接Adapter,层析柱纯化,通过BP重组反应构建cdna入门文库,其平均滴度为1.1×106cfu/mL,文库总容量为1.2×107cfu,平均插入片段为2243bp,重组率为100%。通过LR重组反应将入门文库转换为表达文库,经测定平均滴度为5×105cfu/mL,文库总容量为5.5×106cfu,平均插入片段为2411bp,重组率为100%。结果表明,所构建的文库具有较高的重组率和较大的库容量,可作为较高质量的文库来研究IBDV的相关基因,为研究病毒受体和病毒入侵途径,进一步了解IBDV的致病机理奠定了基础。

关键词：鸡胚成纤维细胞(CEF) Gateway技术 cdna表达文库传染性法氏囊病病毒(IBDV)

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长角血蜱饥饿雌蜱cdna表达文库的构建及免疫学筛选

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2009年第1期27卷 6-10页

作者：柴慧萍刘光远张林龚真莉谢俊仁田占成贾宁中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫原病原生物学国家重点实验室甘肃省兽医寄生虫学重点实验室兰州730046 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

目的构建长角血蜱饥饿雌蜱cdna表达文库,筛选长角血蜱功能性抗原基因。方法在无RNA酶污染的条件下提取长角血蜱总RNA,进而纯化mRNA,以寡脱氧胸腺核苷酸[oligo(dT)]为引物合成双链cdna,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将cdna分子定... 详细信息

目的构建长角血蜱饥饿雌蜱cdna表达文库,筛选长角血蜱功能性抗原基因。方法在无RNA酶污染的条件下提取长角血蜱总RNA,进而纯化mRNA,以寡脱氧胸腺核苷酸[oligo(dT)]为引物合成双链cdna,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将cdna分子定向克隆至具有EcoRⅠ/HindⅢ黏性末端的λSCREEN载体。用噬菌体包装蛋白对以上连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体,转化大肠埃希菌(Escherichia coli)ER1647,从而构建长角血蜱饥饿雌蜱cdna表达文库。使用兔抗长角血蜱全蜱血清对该文库进行免疫学筛选,经过2次筛选得到的阳性噬菌体转化*** BM25.8亚克隆为重组质粒,转化*** JM109,提取重组质粒进行PCR和测序分析。结果长角血蜱饥饿雌蜱cdna表达文库的基础库容量为1.8×106pfu,重组率为100%,扩增后的滴度为2.4×109pfu/ml。筛选获得42个阳性克隆,序列分析表明有12个新cdna序列,其编码蛋白与长角血蜱原肌凝蛋白、环状扇头蜱幼蜱未知蛋白、黑腹果蝇染色体2R、褐黄血蜱线粒体DNA、青海血蜱HqL09、Hq05和肌球蛋白轻链mRNA等具有同源性。结论构建了长角血蜱饥饿雌蜱cdna表达文库,获得的阳性克隆为长角血蜱功能性抗原的研究奠定基础。

关键词：长角血蜱雌蜱 cdna表达文库免疫学筛选

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霜天蛾cdna表达文库的构建和初步鉴定

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西安交通大学学报（医学版） 2005年第3期26卷 244-246,279页

作者：孙秀珍刘昀西安交通大学第二医院呼吸内科陕西西安710061

目的构建霜天蛾cdna表达文库,为进一步筛选霜天蛾主要变应原、制备重组变应原奠定基础。方法利用Trizol法抽提霜天蛾RNA,经过Oligo(dT)纤维素柱纯化后得到mRNA,反转录合成dscdna,连接EcoRⅠ接头,末端磷酸化,XhoⅠ消化,将双末端黏性化的... 详细信息

目的构建霜天蛾cdna表达文库,为进一步筛选霜天蛾主要变应原、制备重组变应原奠定基础。方法利用Trizol法抽提霜天蛾RNA,经过Oligo(dT)纤维素柱纯化后得到mRNA,反转录合成dscdna,连接EcoRⅠ接头,末端磷酸化,XhoⅠ消化,将双末端黏性化的双链dscdna经过凝胶柱层析,收集大于400bp的cdna片段,加工后与UniZAPXRVector连接,经过体外包装,感染宿主菌,构建cdna文库,检测文库容量和重组效率,并采用PCR方法对插入的cdna片段大小进行分析。结果成功构建了一个含有5×105重组子的霜天蛾表达文库,重组率为67%,平均插入片段长度约为1.49kb。结论所建文库容量及插入片段大小合适,适用于筛选目的cdna克隆。

关键词：霜天蛾 cdna表达文库鉴定

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吕氏泰勒虫cdna表达文库的构建及其抗原基因的免疫筛选

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中国农业科学 2009年第1期42卷 331-339页

作者：李有全罗建勋高金亮关贵全马米玲刘志杰刘军龙刘爱红任巧云党志胜鲁炳义刘光远白启殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室

【目的】构建吕氏泰勒虫裂殖子cdna表达文库,并从中筛选抗原候选基因。【方法】从吕氏泰勒虫裂殖子直接提取和纯化mRNA,采用oligo(dT)引物合成双链cdna,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将所产生的cdna分子定向克隆到具有EcoRⅠ/Hin... 详细信息

【目的】构建吕氏泰勒虫裂殖子cdna表达文库,并从中筛选抗原候选基因。【方法】从吕氏泰勒虫裂殖子直接提取和纯化mRNA,采用oligo(dT)引物合成双链cdna,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将所产生的cdna分子定向克隆到具有EcoRⅠ/HindⅢ粘性末端的λSCREEN载体的两臂之间。用PhageMaker extract对连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体,并用之转染大肠杆菌ER1647,从而构建成吕氏泰勒虫的cdna表达文库。用吕氏泰勒虫阳性血清和兔抗绵羊IgG-AP筛选得到阳性克隆,经测序和Blast软件分析并获得新基因。【结果】成功构建吕氏泰勒虫裂殖子cdna表达文库,其初级库容量约为1.0×106PFU,扩增文库的滴度为8.2×108PFU·ml-1,文库重组率为100%;通过免疫学筛选、测序和Blast软件分析,共获得30个新基因,其中15个基因已登录GenBank/NCBI。【结论】为研究泰勒虫疫苗、新型医药和诊断抗原,以及发展可持续性防制羊泰勒虫病提供基本材料。

关键词：吕氏泰勒虫 cdna表达文库构建免疫筛选

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利用gateway技术构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cdna表达文库

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南京农业大学学报 2015年第4期38卷 630-635页

作者：李梦辉刘连瑞涂浩黄经纬张振超徐立新严若峰李祥瑞宋小凯南京农业大学动物医学院江苏南京210095

[目的]为了寻找可用于研制高效重组疫苗的抗原基因,利用gateway技术构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cdna表达文库。[方法]首先从新鲜分离的巨型艾美耳球虫孢子化卵囊中提取总RNA并分离纯化mRNA,用Clone MinerTMⅡcdna文库构建试剂盒构建... 详细信息

[目的]为了寻找可用于研制高效重组疫苗的抗原基因,利用gateway技术构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cdna表达文库。[方法]首先从新鲜分离的巨型艾美耳球虫孢子化卵囊中提取总RNA并分离纯化mRNA,用Clone MinerTMⅡcdna文库构建试剂盒构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cdna初级文库,然后将cdna从初级文库重组到p VAX1.0上,构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cdna表达文库,最后用7个已知巨型艾美耳球虫基因的引物鉴定文库。[结果]构建的巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cdna初级文库总容量为0.92×107CFU,插入片段平均大小为1.63 kb;表达文库总容量为2.32×107CFU,插入片段平均大小为1.64 kb。两种文库的阳性重组率均为100%。能用特异性引物从该表达文库扩增出7个已知的巨型艾美耳球虫基因。[结论]该文库质量高,代表性强,为进一步筛选免疫保护性抗原基因奠定了坚实基础。

关键词：巨型艾美耳球虫孢子化卵囊 gateway技术 cdna表达文库

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莫氏巴贝斯虫裂殖子cdna表达文库的构建及免疫学筛选

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畜牧兽医学报 2012年第12期43卷 1931-1937页

作者：王锦明刘军龙刘爱红马米玲牛庆丽任巧云杨吉飞刘志杰李有全罗建勋殷宏关贵全中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室兰州730046

为了构建莫氏巴贝斯虫(Babesia motasi)裂殖子cdna表达文库,从中筛选和鉴定功能基因,利用差速离心法从莫氏巴贝斯虫感染的红细胞中纯化裂殖子,提取总RNA并纯化mRNA。在合成的双链cdna两端加上含EcoRⅠ和HindⅢ定向接头后连接到λSCREEN... 详细信息

为了构建莫氏巴贝斯虫(Babesia motasi)裂殖子cdna表达文库,从中筛选和鉴定功能基因,利用差速离心法从莫氏巴贝斯虫感染的红细胞中纯化裂殖子,提取总RNA并纯化mRNA。在合成的双链cdna两端加上含EcoRⅠ和HindⅢ定向接头后连接到λSCREEN载体上。通过体外包装形成完整的噬菌体颗粒,并用之转染ER1647,构建莫氏巴贝斯虫裂殖子的cdna表达文库。用莫氏巴贝斯虫阳性血清筛选cdna文库,获得的阳性克隆,经过测序和Blast软件分析鉴定,然后利用末端快速扩增技术(RACE)对筛选到的功能基因片段进行全长扩增。结果表明构建的cdna表达文库其初级库容量约为1.0×106 PFU,扩增文库为3.5×109 PFU;通过免疫学筛选,获得50个阳性克隆。测序和Blast分析后,鉴定出10个莫氏巴贝斯虫基因片段,RACE扩增获得了其中8个基因的全长。本试验构建的莫氏巴贝斯虫裂殖子的cdna表达文库和筛选到的10个结构和功能基因,为研究巴贝斯虫生物学特性、筛选疫苗与诊断用抗原及药物靶位奠定了基础。

关键词：莫斯巴贝斯虫 cdna表达文库免疫筛选 RACE

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斑节对虾肝胰腺全长cdna表达文库的构建

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海洋学报 2003年第S2期25卷 116-121页

作者：罗田徐洵厦门大学生命科学学院福建厦门361005 国家海洋局第三海洋研究所海洋生物工程重点实验室福建厦门361005

采用PolyATtract1000系统提取完整的斑节对虾肝胰腺mRNA,ZAPExpresscdna合成试剂盒合成具有EcoRⅠ和XhoⅠ末端的双链***与经EcoRⅠ和XhoⅠ预消化的λZAPExpress载体连接,再经GigapackⅢGold蛋白体外包装和感染***菌株XL1-BlueMRF′,成功构建了库容量为7 7×105,重组率高达99 1%的cdna表达文库.将初级文库进行扩增,并在滴定扩增文库时随机挑取9个噬菌斑,在辅助噬菌体ExAssist的作用下通过体内切除形成phagemid,再用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切获得插入cdna片段,其长度最长达1 6kb.我们还用PCR法从库中扩增出完整的肌动蛋白编码区cdna(约1 2kb).以上结果说明此表达文库含有斑节对虾肝胰腺全长cdna片段,因此本文库为对虾基因的克隆、表达及其结构和功能的研究奠定了基础.

关键词：斑节对虾 cdna表达文库肝胰腺

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