检索结果-内蒙古大学图书馆

中华急诊医学杂志 2016年第4期25卷 439-443页

作者：朱海娟何淑芳金世云胡军张野安徽省妇幼保健院麻醉科合肥230061 安徽医科大学第二附属医院麻醉科合肥230601

目的：观察大鼠心力衰竭细胞中microrna （ miRNA）表达变化，利用生物信息学分析技术探索差异miRNA靶基因的功能。方法18只成年雄性SD大鼠，体质量200-220g，随机数字表法随机分为两组：正常对照组（ CON组）和心力衰竭组（ HF组）。 H... 详细信息

目的：观察大鼠心力衰竭细胞中microrna （ miRNA）表达变化，利用生物信息学分析技术探索差异miRNA靶基因的功能。方法18只成年雄性SD大鼠，体质量200-220g，随机数字表法随机分为两组：正常对照组（ CON组）和心力衰竭组（ HF组）。 HF组制备阿霉素致心力衰竭模型， CON组注射等量生理盐水。提取大鼠心脏， Largendorff逆行灌注法分离心室肌细胞，提取总RNA行miRNA表达谱检测，筛选两组差异表达的miRNA，荧光定量RT-PCR 技术验证结果， Targetscan、 miRanda软件预测差异表达miRNA的靶基因，并对靶基因行生物信息学分析。结果芯片检测结果显示，与CON组相比， HF组共有37个miRNA表达发生显著改变，其中22个miRNA上调，15个miRNA下调（均P＜0.01， FDR＜0.05）。荧光定量RT-PCR检测miR-133b-5p （t ＝14.56， P＜0.1）、 miR-6216（t＝9.32， P＜0.1）、 let-7e-5p （ t＝13.92， P＜0.1）表达水平，变化趋势与芯片结果一致。生物信息学分析显示，差异表达miRNA调控的靶基因显著富集于31个基因组（均P＜0.01， FDR＜0.05）和12条信号通路（均P＜0.05， FDR＜0.05），其中泛素蛋白酶体系统、 MAPK信号通路、 Toll样受体信号通路富集程度较高。结论阿霉素诱导的心力衰竭模型大鼠心肌细胞中miRNA表达谱发生显著改变，这些差异表达miRNA可能通过调控靶基因功能参与心力衰竭的病理生理过程。

关键词：心力衰竭心肌细胞 microrna表达谱生物信息学分析荧光定量RT—PCR 靶基因基因组 KEGG通路

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狼疮性肾炎中医证型及血浆外泌体microrna表达谱的生物信息研究

狼疮性肾炎中医证型及血浆外泌体microRNA表达谱的生物信息研究

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作者：张绍杰广州中医药大学

学位级别：博士

目的：1.临床研究探讨狼疮性肾炎患者年龄及性别、临床分型、病理类型及活动性指数等的分布情况,比较其中医主证虚、实证之间的上述指标及临床理化相关指标、免疫相关指标、炎症相关指标、尿液相关指标等的差异,以此来分析二者与疾病活... 详细信息

目的：1.临床研究探讨狼疮性肾炎患者年龄及性别、临床分型、病理类型及活动性指数等的分布情况,比较其中医主证虚、实证之间的上述指标及临床理化相关指标、免疫相关指标、炎症相关指标、尿液相关指标等的差异,以此来分析二者与疾病活动的相关性,为临床虚、实证的判定及分期论治提供客观依据。2.实验研究研究脾肾阳虚型狼疮性肾炎血浆外泌体microrna表达谱与健康志愿者的差异,对差异表达的分子行靶基因预测及生物通路和基因功能富集分析,找出靶基因的富集功能及调控的信号通路,以探索狼疮性肾炎可能的发生发展机制；筛选出差异表达的microrna分子,以期能发现具有良好应用前景的可用于辅助诊断的生物标志物；探讨差异表达的microrna分子与狼疮性肾炎脾肾阳虚证型可能存在的相关性,为中医辨证提供分子生物学方面的客观依据。方法：1.临床研究回顾性调查2010年1月至2015年12月于广州中医药大学第一附属医院肾内科住院的符合诊断标准、纳入标准及排除标准的狼疮性肾炎患者,按照首次肾活检时记录的症状体征,将其分为热毒炽盛证、肝肾阴虚证、气阴两虚证、脾肾气虚证、脾肾阳虚证五型,其中热毒炽盛证纳入实证组,其余四种证型纳入虚证组。收集患者年龄及性别等一般情况、临床分型、病理分型、活动性指数、免疫相关指标及临床相关理化指标等资料,应用SPSS软件进行分析,并比较虚、实证两组患者上述指标的差异。2.实验研究选取脾肾阳虚型狼疮性肾炎患者及健康志愿者各3名,应用Exoquick试剂提取血浆外泌体,采用高通量测序方法测定两组外泌体的microrna表达谱,筛选出差异表达的microrna分子行靶基因预测,进一步对预测的靶基因行KEGG Pathway生物通路分析及GO基因功能富集分析,找出靶基因的富集功能及其调控的信号通路。结果：1.临床研究本研究共纳入患者134例,女性患者117例,男性患者仅17例,男女比例约1：6.9。中医主证以脾肾气虚证患者最多,共41例,所占比例约30.6%；其次为热毒炽盛证及脾肾阳虚证,二者均有33例患者,各占24.63%；之后依次为肝肾阴虚证患者14例(10.45%),气阴两虚证患者13例(9.70%)。实证组患者33例,虚证组患者101例。(1)性别、年龄等一般情况：实证组中男性2例,女性31例：年龄最小12岁,最大45岁,平均年龄(27.76±10.80)岁。虚证组中男性15例,女性86例；年龄最小10岁,最大60岁,平均年龄(30.68±12.07)岁。两组患者的年龄、性别比较,差异均无统计学意义。说明狼疮性肾炎患者虚、实证的发病与性别及年龄均无明显相关性。(2)临床分型：临床分型中以肾病综合征为最多见,共59例(44.03%),其次为慢性肾炎型48例(35.82%),之后依次为隐匿性肾炎型12例(8.96%),慢性肾衰竭型11例(8.21%),急进性肾炎型4例(2.98%)。虚、实证两组患者的临床分型分布比较,差异无统计学意义。但实证组患者以慢性肾炎型为最多,而虚证组患者以肾病综合征为最多。急进性肾炎均见于虚证组,且主要为脾肾阳虚证。(3)病理相关指标：病理类型中以Ⅳ型为最多见,共50例(37.31%),其次为V型23例(17.16%),之后依次为Ⅴ+Ⅳ型20例(14.93%),Ⅱ型17例(12.69%),Ⅰ型12例(8.96%),Ⅲ型7例(5.22%),Ⅴ+Ⅲ型3例(2.24%),Ⅵ型2例(1.49%)。虚、实证两组患者的病理类型分布及AI比较,差异无统计学意义；虚证组的CI明显高于实证组,差异有统计学意义。(4)临床理化指标：两组患者的血常规相关指标比较,WBC、LYM、RBC及HGB的差异均有统计学意义。虚证组患者WBC及LYM计数均显著高于实证组,RBC及HGB则显著低于实证组；两组患者的肾功能相关指标比较,BUN、UA及CysC差异均有统计学意义,而Cr水平比较无统计学差异。虚证组患者的BUN、UA及CysC水平均显著高于实证组患者；两组患者的肝功能相关指标比较,AST的差异有统计学意义,而ALT、ALB及G的差异均无统计学意义。虚证组患者的AST水平显著高于实证组。(5)免疫相关指标：所有患者ANA全部为阳性,而ds-DNA阳性患者113例(84.33%)。抗ENA抗体谱中,以抗SSA抗体阳性者为最多,共79例(58.96%)。其次是抗Sm抗体阳性者77例(57.46%),其后为抗核小体抗体(AnuA)阳性者73例(54.48%),之后依次为抗组蛋白抗体(AHA)阳性者58例(43.28%),抗nRNP抗体阳性者42例(31.34%),抗rRNP抗体阳性患者38例(28.36%),抗SSB抗体阳性者34例(25.37%),抗SCL-70抗体阳性者5例(3.73%),抗JO-1抗体阳性者仅1例(0.75%),未发现抗着丝点抗

关键词：狼疮性肾炎脾肾阳虚证高通量测序信号通路 microrna表达谱

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基于microrna表达谱的纳米材料与细胞作用研究

基于microRNA表达谱的纳米材料与细胞作用研究

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作者：李树春东南大学

学位级别：博士

纳米材料在生命科学领域有着巨大的应用价值,同时也使人们注意到可能产生的潜在危害,迫切需要全面、深入地研究纳米材料与细胞的作用。基因表达谱在研究纳米材料与细胞作用中已经受到广泛研究,但由于其检测对象mRNAs低稳定性及存在转录... 详细信息

纳米材料在生命科学领域有着巨大的应用价值,同时也使人们注意到可能产生的潜在危害,迫切需要全面、深入地研究纳米材料与细胞的作用。基因表达谱在研究纳米材料与细胞作用中已经受到广泛研究,但由于其检测对象mRNAs低稳定性及存在转录后翻译调控的作用机制,现有的基因表达谱分析在准确反映蛋白表达差异方面存在缺陷。micrornas(miRNAs)是一类内源性小RNA分子,参与调控多种生物学过程,能反映转录后基因表达水平。因此,microrna表达谱用于研究纳米材料与细胞作用更具优势。本论文发展了基于microrna表达谱的纳米材料与细胞作用的研究方法,并应用于三种典型纳米材料,即Fe2O3纳米颗粒(Fe2O3Nanoparticles,Fe2O3 NPs)、多壁碳纳米管(Mutiwall Carbon Nanotubes,MW-CNTs)和CdTe量子点(CdTe Quantum Dots,CdTe QDs),对细胞作用效应的研究,取得如下创新性研究成果:　　 1、通过三种典型纳米材料Fe2O3 NPs、MW-CNTs、CdTe QDs与NIH/3T3细胞作用后micrornas表达差异的研究,揭示了micrornas为纳米材料与细胞作用过程调控的参与者。研究结果表明:纳米材料作用于细胞后,凋亡相关micrornas的表达水平会发生显著变化,并且具有对纳米材料浓度的依赖性,与传统检测手段的检测结果具有较好的相关性。Fe2O3NPs和CdTe QDs与细胞作用中,明显抑制miR-21表达而促进miR-34a、miR-34c表达,表明这两种纳米材料可显著诱发细胞凋亡,与显微镜观察结果较为一致。而miR-29a、miR-29b和miR-29c在三种纳米材料处理细胞中不同的变化趋势,亦反映了纳米材料的作用特性。　　 2、发展了通过microrna表达谱研究纳米材料与细胞作用的新方法。应用SOLiD高通量测序技术检测出Fe2O3 NPs、MW-CNTs、CdTe QDs与NIH/3T3细胞作用后所有microrna的表达量,并据之研究纳米材料与细胞复杂的作用效应。创新性地将Z-test应用于microrna表达谱的分析,使纳米材料与细胞作用中micrornas的表达差异分析既包含了microrna的倍数变化又体现microrna的数量作用,从而使microrna表达差异的研究更为合理,为选择特异性microrna研究提供更可靠的依据。　　 3、提出了系统分析microrna表达谱的新的数学模型,并成功地用于研究纳米材料与细胞的作用,从microrna转录后调控角度全面理解纳米材料的生物学效应。在该数学模型中,我们充分考虑了microrna对不同靶基因的作用特点,将测序得到的所有micrornas都作为对靶mRNAs的调控网络单元。分析结果表明,纳米材料与细胞作用中micrornas全面调控其靶mRNAs翻译;通过对表达水平显著变化的基因进行DAVID分析,得到了KEGG信号传导途径、GO调控过程和GO代谢过程受到纳米材料的影响规律,也印证了microrna表达差异是细胞对纳米材料刺激的主动调节过程。　　 4、深入研究了CdTe QDs对NIH/3T3细胞作用的microrna差异表达的调控机制。研究结果表明:p53蛋白表达及其磷酸化在CdTe QDs作用后明显增多,而其mRNA的转录却未发生明显变化,活化的p53蛋白促进了其靶microrna基因(miR-34a、miR-34b和miR-34c)的转录而提高相应的pri-microrna表达水平,同时p53蛋白增多也加快了pri-microrna的剪切,促进了micrornas的成熟。P53蛋白通过调控其靶microrna的转录及pri-microrna剪切而参与调控CdTe QDs与细胞作用中microrna的差异表达。

关键词：纳米材料 microrna表达谱细胞凋亡生物学效应调控机制

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大肠癌microrna表达谱及其通道Argonaute2蛋白表达的研究

大肠癌microRNA表达谱及其通道Argonaute2蛋白表达的研究

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作者：王迎昕同济大学医学院同济大学

学位级别：博士

大肠癌(colorectal carcinoma)包括结肠癌与直肠癌，是常见的恶性肿瘤。近20多年来，世界上多数国家大肠癌发病率呈上升趋势，我国大肠癌发病率上升趋势亦十分明显，在上海，大肠癌的发病率以每年4.2％左右的速度上升，因此，预计我国... 详细信息

大肠癌(colorectal carcinoma)包括结肠癌与直肠癌，是常见的恶性肿瘤。近20多年来，世界上多数国家大肠癌发病率呈上升趋势，我国大肠癌发病率上升趋势亦十分明显，在上海，大肠癌的发病率以每年4.2％左右的速度上升，因此，预计我国大肠癌的发病率和死亡率还将继续上升，成为最重要的恶性肿瘤之一。目前了解到大肠癌的发生是一个多步骤、多因素进行性发展的过程，可能有癌基因被激活，抑癌基因被抑制等，但是具体的机理尚不清楚。miRNA.在细胞产生、增殖及凋亡过程中发挥特有的负性调控能力，与人类许多疾病(包括肿瘤)的发生发展密切相关。近来的研究证实miRNA确在人类肿瘤中扮演着极为重要的角色，可能是潜在的癌基因或抑癌基因。我们研究大肠癌的miRNA表达谱，并在蛋白水平研究miRNA通道Argonaute2蛋白与大肠癌的关联性，深入探讨其作用机理，为进一步通过miRNA途径预测、诊断及治疗大肠癌提供实验依据。 　　目的： 　　 1.全面探讨无淋巴结转移结肠癌与癌旁黏膜组织的miRNA表达谱，筛选与结肠癌早期发生、发展相关的特异性miRNA。 　　 2.挑选特异性miRNA中上调的2个miRNA即miR-18a和miR-135b进行RT-PCR验证。 　　 3.严格按照组织芯片的制作流程构建包含有大肠癌组织和癌旁黏膜组织的组织芯片。 　　 4.运用高通量的组织芯片技术结合免疫组化染色的方法研究大肠癌组织和癌旁黏膜组织中Argonaute2(EIF2C2)的表达及其临床意义。 　　方法： 　　 1.选取手术、病理证实未发生淋巴结转移的结肠癌及对应远端相对正常组织标本，利用mirVana RNA抽提分离miRNA，与Agilent miRNA基因芯片杂交，采用Feacture Extraction软件进行图像和数据分析，应用miRNA靶基因预测数据库miGEN，我们利用miGEN输出在3个预测软件中均出现的基因为靶基因。 　　 2.挑选差异表达的miRNA中的两个miRNA进行荧光定量RT-PCR的验证，miRNA的PT-PCR方法参照QIGEN-miScriptsystem中的操作步骤进行。采用U6RNA作为内标，进行归一化。结果运用QIGEN软件数据库分析。 　　 3.组织芯片由生物芯片上海国家工程研究中心、上海芯超生物科技有限公司制备。所有供体组织蜡块行常规病理切片后做HE染色，病理专家做二次诊断，并在HE切片上根据典型病理部位作标记。显微镜下对所需穿取的目标组织进行定位，选取癌组织、癌旁组织共计360个位点。阵列制作利用组织阵列仪(ManualTissue Arrayer)在受体蜡块(空白蜡块)上打孔(直径1.0mm)，然后根据HE片上精确范围在供体组织蜡块相应位置获取所要组织芯放入受体蜡块阵列孔中，并记录组织编号，重复上述步骤制成阵列块，以5μm的厚度连续切片。所得的组织芯片的每个点都经过病理诊断。 　　 4.采用Ensembl数据库及抗体设计筛查软件(Dragonfly，USA)选择Argonaute2(EIF2C2)蛋白特异的片段，并由C-Strong公司合成特异性Argonaute2(EIF2C2)多肽，以马来酰胺活化匙孔血蓝蛋白(KLH)作为载体构建多肽免疫原，通过致敏大白兔，制备兔抗人Argonaute2(EIF2C2)多克隆抗体，然后用亲和层析法纯化抗体。用ELISA和western blot方法进行纯化抗体验证。采用免疫组织化学法检测大肠组织芯片中Argonaute2(EIF2C2)的表达，采用二步法进行免疫组化染色，严格按照试剂盒操作说明进行，DAB显色。用柠檬酸高温高压法进行抗原修复。免疫组织化学染色阳性信号为黄色到棕黄色，参照Rahman等的标准予以记分。 　　结果： 　　 1.筛选出在结肠癌中差异表达的microrna有14个，其中12个microrna表达水平增高，分别为miR-106b、miR-135b、miR-18a、miR-18b、miR-196b、miR-19a、miR-224、miR-335、miR-424、miR-20a*、miR-301b和miR-374a；2个microrna表达水平降低，分别为miR-378和miR-378*。根据miGEN整合数据库预测差异表达microrna的靶基因，输出在3个软件中均出现的基因为可能的靶基因，结果发现miR-106b和miR-19a这两个microrna下游存在符合要求的靶基因且数目众多，我们从中筛选出可能与

关键词：大肠癌 microrna表达谱组织芯片 Argonaute2 蛋白表达

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犬血红扇头蜱核糖体、线粒体DNA多态性及microrna表达谱研究

犬血红扇头蜱核糖体、线粒体DNA多态性及microRNA表达谱研究

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作者：陈义洲华南农业大学

学位级别：博士

血红扇头蜱(Rhipicephalus sanguineus)是一种呈世界性分布的人兽共患寄生虫，在分类上属于蛛形纲(Arachnida)、蜱螨亚纲(Acari)、蜱螨目(Acarina)、蜱总科(Ixodoidea)硬蜱科(Ixodidae)、扇头蜱属(Rhipicephalus)，主要寄生在犬身上，但也可寄生在其它动物如猫、兔子、骆驼、水牛、山羊、马、绵羊、蝙蝠甚至人类的身上。血红扇头蜱大量寄生会引起犬或其它动物出现贫血消瘦、生长发育受阻、生产性能下降、毛发质量差等症状，严重的甚至会引起死亡。更重要的是，血红扇头蜱可作为多种人兽共患病如莱姆病、蜱传回归热、巴贝斯虫病、落基山斑点热、纽扣热、人单核细胞埃立克体病等的传播媒介，通过叮咬而使人或动物受到感染，严重影响人类的健康，近年来国内曾有因蜱叮咬致人死亡的事件，并因此造成很大的恐慌。不同的蜱可以携带的病原体种类并不完全一样，因此，对其进行准确的分类是研究蜱传疾病的基础。但目前对血红扇头蜱属中各种蜱的分类地位仍存在争议，因此研究血红扇头蜱的分类和遗传变异，对血红扇头蜱的防控有重要意义。\n 本论文由5个部分组成：包括广州市宠物犬蜱螨流行病学进行调查；血红扇头蜱核糖体DNA序列的多态性研究；血红扇头蜱线粒体cox1、cytb基因多态性研究；血红扇头蜱线粒体全基因组研究；血红扇头蜱雌、雄成虫micrornas Solexa深度测序与分析。\n 第一部分调查了广州市宠物犬蜱螨的流行情况，一年时间内对3977只宠物犬进行调查，调查的内容主要包括宠物犬的年龄、性别、品种、体表是否有蜱虫、是否有皮肤方面的病变(如瘙痒、破损、脱毛、丘疹、脓包等)，并对有皮肤病变的宠物犬进行搔刮取样，检查是否有螨类感染。调查结果显示广州市宠物犬蜱螨感染的种类为血红扇头蜱、犬疥螨和犬蠕形螨。血红扇头蜱、犬疥螨和犬蠕形螨全年感染率分别为1.18％、1.18％和3.27％；血红扇头蜱一年中感染率最高的时间是在10月，感染率为4.21％；犬疥螨一年中感染率最高的时间是在06月，感染率为2.60％；而犬蠕形螨则出现在3月，感染率为4.15％；调查中发现1-5岁年龄段的犬蠕形螨和血红扇头蜱感染率是最高的，分别为3.57％和1.62％，而年龄小于1岁的宠物犬疥螨的感染率最高，为1.35％，5岁以上的犬的蠕形螨、疥螨和血红扇头蜱的感染率均是最低的，但各年龄段间感染率的差异不显著。调查中还发现广州市宠物犬蜱螨感染率与性别无明显相关性。在接受调查的53个品种的犬中，藏獒犬和比熊犬蜱螨感染率是相对较高的；蠕形螨感染在犬皮肤病中所占的比例为13.31％，血红扇头蜱和犬疥螨感染的比例均为4.81％。本调查首次揭示了广州市宠物犬蜱螨的流行情况，为制定宠物犬蜱螨的防治措施提供了依据。\n 本研究的第二部分对来自广东省8个流行区的犬血红扇头蜱的核糖体ITS-1、5.8S和ITS-2序列进行了PCR扩增及序列分析，并与GenBankTM公布的血红扇头蜱相应序列进行比较。结果发现，血红扇头蜱rDNA序列长度为3282 bp或3277 bp(GPF1和CHF2)，其中18S rDNA片段为187 bp、ITS-1序列为1685 bp或1680 bp(GPF1和CHF2)，5.8S rDNA序列为152 bp，ITS-2序列为1116 bp，28S片段为142 bp。来自广东省8个地区的代表性样本的rDNA ITS序列相似性为99.1％-99.9％，其中ITS-2序列与GenBankTM上公布的血红扇头蜱(JF758643)相应序列的相似性为98.9-99.8％，与GenBankTM上公布的血红扇头蜱(AF271283)相应序列的相似性为98.9-100.0％，与GenBankTM上公布的图兰扇头蜱(DQ901321)的相似性为99.4％-99.6％。研究结果表明血红扇头蜱ITS序列种内差异很小，不存在明显的地区差异性。本研究为血红扇头蜱的进一步分子分类研究提供了基础数据，为该病的检测、鉴别诊断提供了分子标记。\n 本研究的第三部分对来自广东省8个流行地区的血红扇头蜱在线粒体cox1、cytb基因序列的遗传变异情况进行研究，经过扩增测序分别得到802 bp的pcox1片段和528 bp的pcytb片段。两段基因的A+T平均含量分别为68.83-69.20％(pcox1)和74.24-74.81％(pcytb)。这与已报道的扇头蜱线粒体基因AT含量偏高相一致。对所有样品的pcox1及pcytb核苷酸序列分别进行互对比较，结果显示血红扇头蜱样品间差异均为0.0-1.0％。种内核苷酸变异有转换(A()G或C()T)(pcox1有14处，pcytb均有10处)和颠换(A()C或A()T)(pcox1有9处、pcytb无)。核苷酸变异

关键词：犬血红扇头蜱分子检测核糖体DNA 内转录间隔区线粒体基因组 microrna表达谱

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恒河猴胚胎干细胞microrna表达谱和灵长类快速进化的miR-513家族的功能分化研究

恒河猴胚胎干细胞microRNA表达谱和灵长类快速进化的miR-513家族...

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作者：孙正华中国科学院研究生院

学位级别：博士

microrna（miRNA）是一类广泛存在于动植物基因组中的非编码小RNA。通过与基因3\' UTR区的互补结合介导其降解或者抑制翻译，从而在转录后水平发挥重要的调控作用，几乎影响着生命过程的各个方面，例如胚胎发育、细胞分化和肿瘤发... 详细信息

microrna（miRNA）是一类广泛存在于动植物基因组中的非编码小RNA。通过与基因3\' UTR区的互补结合介导其降解或者抑制翻译，从而在转录后水平发挥重要的调控作用，几乎影响着生命过程的各个方面，例如胚胎发育、细胞分化和肿瘤发生等。研究表明miRNA在小鼠和人的胚胎干细胞自我更新和分化过程中也起着重要作用，然而恒河猴（Rhesus macaca）胚胎干细胞的miRNA表达调控模式之前还没有报道。\n 本论文通过高通量测序技术首次揭示了恒河猴胚胎干细胞miRNA的表达模式，并发现了新的miRNA分子，为研究miRNA在恒河猴胚胎干细胞中的作用提供了基础数据。研究结果显示，三株恒河猴胚胎干细胞系共享92.4％的miRNA分子。通过四种检验方法对miRNA基因簇和总体miRNA水平的比较均证实三株胚胎干细胞miRNA的表达模式是高度一致的。在miRNA靶基因预测及功能注释中，MAPK、Wnt、TGFβ等对胚胎干细胞维持干细胞特性及分化十分重要的信号通路受到miRNA的显著调控。这进一步提示了miRNA在恒河猴胚胎干细胞的自我更新和分化过程中起到重要的调控作用。对miRNA与靶基因作用网络的分析表明:靶基因受miRNA调控的程度与其进化速率呈负相关。通过与现有人和小鼠胚胎干细胞的miRNA表达谱数据的比较，我们发现大多数miRNA在不同物种间的表达情况比较保守，这也印证了功能重要的miRNA更趋于保守的结论。由于亲缘关系较近，人与恒河猴胚胎干细胞的miRNA表达模式更为相似。但我们发现了三个miRNA基因簇在不同物种中的表达情况存在显著差异，这可能对不同物种胚胎干细胞的特性有一定贡献。\n 本论文还对快速进化的miR-513家族各成员的序列分歧时间及是否存在功能上的分歧进行了探讨。序列分析表明这一miRNA家族的频繁复制是由重复转座元件MER91C介导的，发生在阔鼻小目（Platyrrhini）和狭鼻小目（Catarrhini）分化之后，但在旧大陆猴与猿及人分化之前。通过对靶基因的实验验证分析，我们证明了不同成员确实存在功能上的分歧。其中，miR-513b特异地抑制靶基因down-regulator of transcription1(DR1)的mRNA和蛋白质水平的表达，而DR1在幼年和成熟恒河猴睾丸中的表达量也正好和miR-513b相反，提示miR-513b通过对DR1表达的负调控作用来影响雄性生殖发育过程。

关键词：恒河猴胚胎干细胞 microrna表达谱灵长类 miR-513家族功能分化

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肺癌患者血清外周血单个核细胞microrna表达谱变化及其意义

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中华肿瘤防治杂志 2016年第S2期23卷 39-40页

作者：苏州罗文娟税莲四川绵阳四0四医院肿瘤科四川绵阳621000

目的对肺癌患者的血清外周血单个细胞的microrna表达谱变化及其临床意义进行分析。方法随机选取2012-07-2013-07我院进行治疗的42例肺癌患者为观察组;另外再选取42例健康人员为对照组。对两组患者的外周血单个核细胞的miR表达分析。结... 详细信息

目的对肺癌患者的血清外周血单个细胞的microrna表达谱变化及其临床意义进行分析。方法随机选取2012-07-2013-07我院进行治疗的42例肺癌患者为观察组;另外再选取42例健康人员为对照组。对两组患者的外周血单个核细胞的miR表达分析。结果观察组患者的血清外周血单个核细胞各表达量检测结果显著,均高于对照组,两组差异有统计学意义,P<0.05。结论肺癌患者血清外周血单个核细胞的microrna表达谱变化,和肺癌病情变化具有直接的关系。

关键词：肺癌患者血清外周血 microrna表达谱

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F81细胞在感染水貂肠炎病毒(MEV)后microrna表达谱的改变及作用于病毒的micrornas的筛选鉴定

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畜牧与兽医 2012年第S1期44卷 373-374页

作者：孙佳增王吉贵袁道莉王爽毛亚萍侯蔷李智丽刘维全中国农业大学农业生物技术国家重点实验室生物学院北京100193

水貂肠炎病毒(Mink enteritis virus,MEV)是细小病毒科的一种。由于MEV有强大的抵抗力并且传播速度很快,所有该病毒在水貂饲养殖场流行能够造成养貂业的巨大损失。MEV是一种单链DNA病毒,属于细小病毒科,普遍认为是猫细小病毒的一个变种... 详细信息

水貂肠炎病毒(Mink enteritis virus,MEV)是细小病毒科的一种。由于MEV有强大的抵抗力并且传播速度很快,所有该病毒在水貂饲养殖场流行能够造成养貂业的巨大损失。MEV是一种单链DNA病毒,属于细小病毒科,普遍认为是猫细小病毒的一个变种,它的基因组长度为5000nt左右,在线性基因组DNA分子的两端均存在发卡结构。3’端的发卡结构长115~116 nt。

关键词：貂肠炎病毒 F81 MEV micrornas microrna表达谱细小病毒科线性基因组 enteritis 发卡结构衣壳蛋白

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二期梅毒患者外周血单个核细胞microrna表达谱的分析

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中国皮肤性病学杂志 2018年第8期32卷 878-882页

作者：赵玉磊乐文静李洋李赛朱小凤苏晓红苏州大学附属第三医院皮肤科江苏常州213003 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏南京210042

目的研究二期梅毒患者外周血单个核细胞microrna表达谱,探索机体抗梅毒免疫的分子机制。方法采用高通量Illumina测序技术,比较4例二期梅毒患者和4例健康志愿者外周血单个核细胞microrna表达谱差异,并用RT-q PCR对测序结果进行验证。结... 详细信息

目的研究二期梅毒患者外周血单个核细胞microrna表达谱,探索机体抗梅毒免疫的分子机制。方法采用高通量Illumina测序技术,比较4例二期梅毒患者和4例健康志愿者外周血单个核细胞microrna表达谱差异,并用RT-q PCR对测序结果进行验证。结果与健康对照者相比较,二期梅毒患者外周血单个核细胞共发现107个差异表达miRNAs。一些micrornas(hsa-miR-146a-5p、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-155-5p等)与机体免疫应答复杂调节、机体抗微生物效应相关。结论二期梅毒患者外周血单个核细胞多种失衡micrornas参与免疫病理机制。

关键词：二期梅毒外周血单个核细胞 microrna表达谱免疫病理机制

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人类卵丘颗粒细胞microrna表达谱的特性microrna调节Notch信号通路与PCOS有关

人类卵丘颗粒细胞microRNA表达谱的特性microRNA调节Notch信号通...

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作者：蒋秀敏安徽医科大学

学位级别：硕士

【背景】多囊卵巢综合征（PCOS）是育龄女性最常见的生殖内分泌综合征，特点是卵巢多囊，雄激素过多症、胰岛素抵抗和长期不排卵。这是一个多因素、一系列症状和体征的综合征，PCOS不仅与不孕有关，但也与代谢性疾病的风险增加，如胰岛... 详细信息

【背景】多囊卵巢综合征（PCOS）是育龄女性最常见的生殖内分泌综合征，特点是卵巢多囊，雄激素过多症、胰岛素抵抗和长期不排卵。这是一个多因素、一系列症状和体征的综合征，PCOS不仅与不孕有关，但也与代谢性疾病的风险增加，如胰岛素抵抗，糖尿病，肥胖。一些遗传和环境因素被报道，可能有助于多囊卵巢综合征的发展。卵母细胞周围的卵丘颗粒细胞在不同的方面参与 PCOS的病理生理过程。microrna（MiRNA）作为真核生物体内重要的小RNA调控分子，广泛参与女性卵泡发育成熟、受精、着床及早期胚胎发育等过程，对维持女性正常生育功能起着不可替代的作用。一些研究已经证明miRNA在卵丘颗粒细胞转录后水平发挥重要的调节作用。然而，由于miRNA对于调控下游靶基因及具体的网络作用尚未明确，对miRNA在颗粒细胞中的作用机制及靶基因的确定有待于进一步研究。　　【目的】旨在研究分析PCOS患者中差异表达的 miRNA，及其影响 PCOS的下游靶信号通路。　　【方法】（1）临床资料的收集及分析收集2013年1月-2014年3月于安徽医科大学附属省立医院生殖中心行因男方因素行 ICSI-ET长方案助孕的 PCOS患者的作为实验研究组（n=21），同时收集同期行 ICSI助孕的卵巢功能正常患者作为实验对照组（n=20）。分析比较两组间的年龄、体重指数、基础性激素五项、胰岛素、血糖等。　　（2）颗粒细胞miRNA的实验研究1）收集实验研究组及实验对照组的卵丘颗粒细胞2）利用新一代高通量测序技术（NGS）Illumina Hiseq2000和CPSS工具对小RNA进行深度测序及数据分析。3）检测两组颗粒细胞miRNA的表达图谱，并比较分析差异表达的miRNA。4）对差异表达miRNA的下游靶基因进行预测，然后运用Gene Ontology（GO）和KEGGPathway analysis软件对其潜在的下游调控通路进行富集和筛选。5）运用实时定量RT-PCR、Western Blot对PCOS患者差异表达miRNA的表达及预测的调控通路进行实验验证。　　【结果】（1）临床资料的回顾性分析年龄、雌激素（E2）、泌乳素（PRL）、卵泡刺激素（FSH）在PCOS组跟正常对照组之间没有差异;而PCOS组中体重指数（BMI）、睾酮（T）、黄体生成素（LH）、胰岛素（INS）、血糖（Glu）均显著高于正常组。　　（2）颗粒细胞miRNA的实验研究1）通过对两颗粒细胞小RNA深度测序及分类，发现有59种已知的miRNA在PCOS组中差异表达，包括21种上调的miRNA和38种下调的miRNA;2）两组中新发现的miRNA(Novel miRNA);3）由GO和KEGG通路分析miRNA在PCOS的病理生理潜在的调控机制及几个重要的被确定由差异表达的miRNA靶向调控的过程，如Notch信号通路，调节激素，能量代谢和谷氨酸脱氢酶活性;4）此外实验验证，Notch信号和ERK MAPK信号通路被证明是由差异表达的miRNA如mir-483-5p调节。　　【结论】我们的数据表明，miRNA及其靶向途径（如Notch信号通路）在多囊卵巢综合征病因和病理生理学中起着重要的作用，并在相关的 PCOS不孕症的研究提供了分子标志物或治疗靶点的新的方向。

关键词：多囊卵巢综合征卵丘颗粒细胞 microrna表达谱 Notch信号通路病理生理学

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