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1 篇 细胞周期
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1 篇 急性t淋巴细胞白血...
1 篇 sirna逆转录病毒
1 篇 细胞凋亡

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1 篇 重庆医科大学

作者

1 篇 张佳

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排序：

S1PR3促进急性T淋巴细胞白血病体内外进展研究

S1PR3促进急性T淋巴细胞白血病体内外进展研究

引用

作者：张佳重庆医科大学

学位级别：硕士

第一部分构建稳定敲低S1PR3基因的T-ALL细胞系目的:通过鞘氨醇-1-磷酸盐受体3(Sphingosine-1-phosphate receptor 3,S1PR3)sirna逆转录病毒载体技术,构建稳定敲低S1PR3的多个T淋巴细胞白血病(T cell acute lymphocytic leukemia,T-ALL)... 详细信息

第一部分构建稳定敲低S1PR3基因的T-ALL细胞系目的:通过鞘氨醇-1-磷酸盐受体3(Sphingosine-1-phosphate receptor 3,S1PR3)sirna逆转录病毒载体技术,构建稳定敲低S1PR3的多个T淋巴细胞白血病(T cell acute lymphocytic leukemia,T-ALL)细胞系(Jurkat、Cutll1和Molt-4细胞)。方法:通过构建S1PR3 sirna逆转录病毒载体,包装与浓缩病毒,分别感染多个T-ALL细胞系(Jurkat、Cutll1和Molt-4细胞),利用q-PCR和Western blot检测病毒感染细胞后S1PR3的表达。结果:成功构建S1PR3 sirna逆转录病毒载体;q-PCR和Western blot结果显示成功建立稳定敲低S1PR3的多个T-ALL细胞系(Jurkat、Cutll1和Molt-4细胞)。结论:成功建立稳定敲低S1PR3基因的多个T-ALL细胞系(Jurkat、Cutll1和Molt-4细胞),为后续的研究提供实验材料。第二部分S1PR3对T-ALL细胞功能的影响目的:明确S1PR3对多个T-ALL细胞系(Jurkat、Cutll1和Molt-4细胞)细胞凋亡和周期的影响。方法:分别通过Annexin V和碘化丙啶(Propidium iodide,PI)染色,检测敲低S1PR3基因对多个T-ALL细胞系(Jurkat、Cutll1和Molt-4细胞)细胞凋亡和周期的影响。结果:Annexin V染色结果显示,敲低S1PR3后,T-ALL细胞系Jurkat、Cutll1和Molt-4细胞凋亡水平分别增加24.7%(p<0.01)、10.49%(p<0.05)和11.61%(p<0.001);PI染色结果显示:敲低S1PR3后,Jurkat细胞G2期比例增加7.22%(p<0.01),S期比例降低23.04%(p<0.01),G0期比例增加11.3%(p<0.05)。PI染色结果显示:敲低S1PR3后,Cutll1细胞S期比例降低12.41%(p<0.05)。结论:敲低S1PR3后促进3个T-ALL细胞系(Jurkat、Cutll1和Molt-4细胞)细胞凋亡,引起Jurkat和Cutll1细胞周期阻滞。第三部分S1PR3表达促进异种移植小鼠T-ALL进展目的:探讨S1PR3对T-ALL细胞(Jurkat、Molt-4细胞)异种移植NCG小鼠模型疾病进展的影响。方法:建立稳定表达荧光素酶的人Jurkat细胞系,酶标仪检测其荧光素酶强度;将Jurkat-Luc、Jurkat-Luc si、Molt-4和Molt-4 si分别接种于亚致死计量辐射后NCG小鼠体内;动态记录小鼠移植后的生存状况与时间;利用活体荧光成像系统检测Jurkat细胞异种移植小鼠模型体内肿瘤进展。结果:成功构建稳定表达荧光素酶Jurkat细胞系(Jurkat-Luc、Jurkat-Luc si)。NCG小鼠T-ALL异种移植模型小鼠生存时间显示,Jurkat-Luc si组细胞受体小鼠生存时间显著长于Jurkat-Luc组细胞受体小鼠(p<0.05);Molt-4 si组细胞受体小鼠生存时间显著长于Molt-4组细胞受体小鼠(p<0.01);活体荧光成像结果显示,肿瘤细胞移植后21天,Jurkat-Luc si组细胞受体小鼠体内T-ALL细胞荧光强度显著弱于Jurkat-Luc组细胞受体小鼠(p<0.05)。结论:敲低S1PR3表达可抑制T-ALL细胞系中的Jurkat、Molt-4细胞异种移植小鼠T-ALL进展。

关键词：急性T淋巴细胞白血病 sirna逆转录病毒鞘氨醇-1-磷酸盐受体3 鞘氨醇-1-磷酸盐受体3 细胞凋亡细胞周期鞘氨醇-1-磷酸盐受体3 小鼠异种移植模型活体荧光成像

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