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基于microRNA芯片发现参与调控绿原酸抑制对乙酰氨基酚肝毒性的miRNA及其靶信号分子

中国中药杂志 2023年第4期48卷 1014-1022页

作者：张红顾鑫楠卫梦娟季莉莉上海中医药大学中药研究所、中药标准化教育部重点实验室、上海市复方中药重点实验室上海201203

研究绿原酸(chlorogenic acid,CGA)抵御对乙酰氨基酚(N-acetyl-p-aminophenol,APAP)诱导肝损伤过程中对微小RNA(microRNA,miRNA)的影响。将18只C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组(300 mg·kg-1APAP)和给药组(40 mg·kg^(-1)CGA)。通过灌胃给药APAP(300 mg·kg^(-1))诱导小鼠肝毒性,小鼠给药APAP 1 h后被灌胃给药CGA(40 mg·kg^(-1)),在APAP给药6 h后结束实验。检测小鼠血清中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)的活力,并对肝组织病理切片进行分析。利用microRNA芯片结合real-time PCR实验发现发挥重要作用的miRNA。通过miRWalk和TargetScan 7.2数据库对miRNA的靶基因进行预测,利用real-time PCR验证,并进行功能聚类和信号通路分析。结果显示,CGA给药后可以降低由于APAP升高的小鼠血清ALT和AST,减轻肝脏损伤程度。通过对芯片结果的筛选发现9个潜在的miRNA,接着利用real-time PCR实验验证发现小鼠肝组织中miR-2137和miR-451a的表达在APAP给药后显著增加,CGA给药后显著降低,与芯片结果一致。对miR-2137和miR-451a的靶基因预测并通过验证发现有11个靶基因参与CGA保护APAP诱导肝损伤过程,利用DAVID数据库及R语言进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析发现这11个靶基因功能富集于Rho蛋白相关的信号转导以及血管模式化相关的生物过程,和转录因子结合相关的分子功能以及鸟苷酸交换因子活性的分子功能。以上实验结果表明miR-2137和miR-451a在CGA抑制APAP诱导的肝毒性中发挥了重要作用。

关键词：对乙酰氨基酚绿原酸肝损伤 miR-2137 miR-451a

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黄酮类化合物在防治神经退行性疾病中作用的研究进展

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中国药理学与毒理学杂志 2015年第3期29卷 457-463页

作者：曹秦吴辉张蓓蓓吴晓俊上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室上海市复方中药重点实验室上海201203

帕金森病、阿尔茨海默病及亨廷顿病等一系列神经退行性疾病的发病因素很多,其中包括神经炎症、内源性抗氧化剂缺失、谷氨酸兴奋性神经毒性损伤以及铁离子代谢异常等。研究表明,黄酮类化合物对神经退行性疾病的临床防治具有一定的疗效。... 详细信息

帕金森病、阿尔茨海默病及亨廷顿病等一系列神经退行性疾病的发病因素很多,其中包括神经炎症、内源性抗氧化剂缺失、谷氨酸兴奋性神经毒性损伤以及铁离子代谢异常等。研究表明,黄酮类化合物对神经退行性疾病的临床防治具有一定的疗效。黄酮类化合物可抑制神经炎症、抗氧化应激、抗细胞凋亡、抗谷氨酸神经毒性并调节铁代谢平衡,从而减缓神经细胞损伤并改善学习记忆和脑血管功能。

关键词：神经退行性疾病黄酮炎症神经保护药学习记忆认知

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实时直接分析质谱技术在中药分析中的应用

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质谱学报 2023年第4期44卷 461-475,I0001页

作者：王星宇顾文怡张方丽张丹李林楠王峥涛杨莉上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室国家中医药管理局中药新资源与质量评价重点实验室上海市复方中药重点实验室上海201203 上海中药标准化研究中心上海201203

以中药为代表的天然药物具有悠久的药用历史,其功效物质基础解析和质量评价对于促进中医药的传承和创新发展具有重要意义。由于中药化学组成复杂,准确分析和鉴定与临床药效密切相关的指标成分较为困难,亟需开发和运用新型分离表征手段... 详细信息

以中药为代表的天然药物具有悠久的药用历史,其功效物质基础解析和质量评价对于促进中医药的传承和创新发展具有重要意义。由于中药化学组成复杂,准确分析和鉴定与临床药效密切相关的指标成分较为困难,亟需开发和运用新型分离表征手段。实时直接分析质谱(direct analysis in real-time mass spectrometry,DART-MS)是近年来新兴的常压敞开式离子化质谱技术,具有分析速度快、原位、样品前处理简单等特点。自2005年被报道以来,DART-MS在生物医学、环境监测、公共安全、药物分析等领域应用广泛。该技术为解析中药复杂化学成分和质量控制提供了新方式,具有较好的应用前景。本文概述了DART-MS技术的原理、特点、影响因素及技术进展,总结其在中药分析中的应用情况,并展望其发展前景。

关键词：原位电离质谱实时直接分析质谱(DART-MS) 中草药天然药物质量控制

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黄芩素对2,4,6-三硝基苯磺酸诱导的小鼠实验性肠炎的作用和机制

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中国药理学与毒理学杂志 2017年第6期31卷 541-546页

作者：罗晓平于之伦邓超张晶晶王峥涛窦薇上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室暨上海市复方中药重点实验室上海201203

目的探讨黄芩素对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠肠炎实验模型的作用及机制。方法将BALB/c小鼠随机分成3组(n=10):正常对照组、模型组(TNBS)和黄芩素组(TNBS+黄芩素20 mg·kg-1)。黄芩素组于造模前2 d ig给予黄芩素,每天1次,共... 详细信息

目的探讨黄芩素对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠肠炎实验模型的作用及机制。方法将BALB/c小鼠随机分成3组(n=10):正常对照组、模型组(TNBS)和黄芩素组(TNBS+黄芩素20 mg·kg-1)。黄芩素组于造模前2 d ig给予黄芩素,每天1次,共9 d。测量结肠长度,并取结肠组织进行HE染色,进行组织损伤和炎症细胞浸润评分;ELISA测定结肠组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。体外制备细菌脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7炎症细胞模型,黄芩素(10,25和50 mmol·L-1)给药干预,Griess试剂法测定上清中一氧化氮(NO)含量;荧光定量PCR检测炎症介质TNF-α、白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、诱导型NO合酶(i NOS)、环氧合酶2(COX-2)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)m RNA表达;Western蛋白印迹法检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/NF-κB(PI3K/AKT/NF-κB)通路磷酸化蛋白(p-PI3K,p-AKT,p-p65和p-IκBa)表达。结果与正常对照组相比,模型组小鼠结肠缩短,组织病理损伤,炎症细胞浸润,组织TNF-α含量增高;黄芩素给药组上述症状得到显著改善(P<0.05)。与细胞对照组相比,LPS模型组细胞NO分泌、炎症介质(TNF-α,IL-6,IL-1β,i NOS,COX-2和MCP-1)m RNA表达及PI3K/AKT/NF-κB通路磷酸化蛋白表达均增高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,黄芩素给药组上述指标均降低(P<0.05,P<0.01)。结论黄芩素可减轻TNBS诱导的小鼠实验性肠炎的症状,作用机制可能与抑制PI3K/AKT/NF-κB通路的激活从而抑制炎症介质的表达和减少炎症因子释放有关。

关键词：肠炎磷脂酰肌醇3-激酶蛋白激酶B NF-κB 黄芩素

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神经退行性疾病、胃肠动力异常和肠道菌群失调相互关系的研究进展

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中国药理学与毒理学杂志 2019年第7期33卷 517-524页

作者：杨纯石海莲吴晓俊上海市复方中药重点实验室教育部中药标准化重点实验室上海中医药大学中药研究所

阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)和多发性硬化症(MS)是常见的神经退行性疾病,往往伴随胃肠道动力异常和肠道菌群失调。肠道菌群已被证明通过神经内分泌系统以及神经免疫系统调控大脑功能,进而影响神经退行性疾病的发生发展。一些神经退... 详细信息

阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)和多发性硬化症(MS)是常见的神经退行性疾病,往往伴随胃肠道动力异常和肠道菌群失调。肠道菌群已被证明通过神经内分泌系统以及神经免疫系统调控大脑功能,进而影响神经退行性疾病的发生发展。一些神经退行性疾病患者被确诊前就存在胃肠道功能失调,而肠道菌群与胃肠动力异常关系密切,提示肠道菌群也可能通过肠道神经系统影响神经退行性疾病。本文综述了肠道菌群通过神经内分泌-神经免疫互作参与介导胃肠道动力异常的神经退行性疾病的研究进展。

关键词：肠道菌群胃肠动力神经退行性疾病肠道菌群-肠-脑轴

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含千里光中药制剂中肝毒性成分阿多尼弗林碱的含量分析

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中国中药杂志 2020年第1期45卷 92-97页

作者：熊芬姜凯元熊爱珍鞠政财杨莉王峥涛上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室暨上海市复方中药重点实验室上海201203 上海中药标准化研究中心上海201203

吡咯里西啶生物碱(PAs)是一种天然毒性物质,可导致显著的肝毒性、肺脏毒性、遗传毒性、神经毒性和胚胎毒性等,甚至死亡。因此含PAs的中草药及制剂一直是世界卫生组织等国际组织及国家严密监控的对象。PAs广泛存在于我国多种药用植物中,... 详细信息

吡咯里西啶生物碱(PAs)是一种天然毒性物质,可导致显著的肝毒性、肺脏毒性、遗传毒性、神经毒性和胚胎毒性等,甚至死亡。因此含PAs的中草药及制剂一直是世界卫生组织等国际组织及国家严密监控的对象。PAs广泛存在于我国多种药用植物中,涉及中药成方制剂数百种。《中国药典》2015年版明确规定了千里光药材中阿多尼弗林碱的限量,但对含有该药材的制剂并未做任何规定,对其他数十种相关制剂中阿多尼弗林碱的限量也未做规定。该研究收集了包括《中国药典》收录的千柏鼻炎片、千柏鼻炎胶囊等常用的14种含千里光的中药制剂,并采用UPLC-MS技术检测了阿多尼弗林碱的含量。结果在8种制剂中均检测到了阿多尼弗林碱,包括千柏鼻炎片、千柏鼻炎胶囊等,其平均含量远高于德国、荷兰和新西兰的相关标准。且同一复方不同批次间含量差异较大,最高质量分数为156.10μg·g-1,按该批制剂推荐用量每日摄入阿多尼弗林碱最高达1030.26μg,提示服用含千里光的制剂需注意其用药安全,对复方中千里光药材含量较高的制剂尤其应该注意阿多尼弗林碱的限量检查。

关键词：千里光中药制剂 UPLC-MS 阿多尼弗林碱吡咯里西啶生物碱

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豆蔻明对TLR4/MyD88/NF-κB/iNOS信号通路的调节作用

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中国药理学通报 2016年第6期32卷 779-783页

作者：邓超任改艳孙阿宁罗晓平王峥涛窦薇上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室暨上海市复方中药重点实验室上海201203

目的探讨豆蔻明(cardamonin,CDN)对RAW264.7小鼠巨噬细胞Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)/My D88/NF-κB/i NOS信号通路的调节作用。方法利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理RAW264.7细胞建立炎性细胞模型并分组:正常对照组(Vehicle组)、模型组(LPS组)和药物处理组(LPS+CDN组);CCK-8方法检测细胞活力,Griess法检测细胞培养上清一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,RT-PCR检测诱导型NO合成酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)、环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-ɑ、白介素(interleukin,IL)-1β和IL-6的mRNA表达,Western blot检测i NOS、TLR4、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)、核因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)phosphorylated(p)-p65、inhibitorκBα(IκBα)和p-IκBα的蛋白表达。结果1~50μmol·L^(-1)豆蔻明对RAW264.7细胞没有毒性,但可以剂量依赖性抑制LPS诱导的NO分泌和i NOS、COX-2、MCP-1、TNF-α、IL-1β及IL-6的mRNA表达,25μmol·L-1豆蔻明可下调LPS诱导的i NOS、TLR4、My D88、p-NF-κB p65和p-IκBα蛋白表达及抑制IκBα降解。结论豆蔻明通过抑制TLR4/My D88/NF-κB/i NOS信号通路从而抑制NO的产生。

关键词： RAW264.7细胞 TLR4 MyD88 NF-κB iNOS 豆蔻明

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“有毒”中药生物碱类成分的毒性及代谢研究进展

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药学学报 2023年第11期58卷 3285-3295页

作者：陈岩唐莹莹杨莉熊爱珍王峥涛上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室暨上海市复方中药重点实验室上海201203 上海中药标准化研究中心上海201203

中药的“毒性”、安全性问题已成为舆论关注的焦点。生物碱(alkaloids)是许多种常用中药的主要药效成分,很多生物碱类成分在较低的浓度表现出很强的生物活性;但如使用不当,也会引发毒副作用。这些生物碱类既是中药的“活性”成分又是“... 详细信息

中药的“毒性”、安全性问题已成为舆论关注的焦点。生物碱(alkaloids)是许多种常用中药的主要药效成分,很多生物碱类成分在较低的浓度表现出很强的生物活性;但如使用不当,也会引发毒副作用。这些生物碱类既是中药的“活性”成分又是“毒性”成分,相关中药的安全性尤其值得注意。生物碱作用于有机体所产生的药效或毒副作用,可能是原型成分及代谢产物共同作用的结果,既与化合物的结构类型有关,还具有明显的生物种属差异。本文以《中华人民共和国药典》中“有毒”中药所含生物碱类成分为研究对象,查阅近20年来中外文献,归纳、评述不同结构类型的代表性生物碱的代谢途径及代谢机制,以期为含有此类成分中药的临床用药的安全性和有效性提供参考。

关键词：中药安全性生物碱药物代谢减毒代谢酶

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山姜素激活孕烷X受体和上调CYP3A4 mRNA转录的研究

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中国药理学通报 2012年第6期28卷 761-763页

作者：窦薇丁丽丽张晶晶王峥涛上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室暨上海市复方中药重点实验室上海201203 上海中药标准化研究中心上海201203

目的探讨山姜素能否通过活化孕烷X受体(PXR)诱导CYP3A4的转录表达及对CYP3A4 mRNA的实际诱导作用。方法在人结肠癌LS174T细胞中,用瞬时共转染报告基因实验研究山姜素(1～50μmol.L-1)对PXR介导的CYP3A4基因的转录激活;用荧光定量RT-PCR... 详细信息

目的探讨山姜素能否通过活化孕烷X受体(PXR)诱导CYP3A4的转录表达及对CYP3A4 mRNA的实际诱导作用。方法在人结肠癌LS174T细胞中,用瞬时共转染报告基因实验研究山姜素(1～50μmol.L-1)对PXR介导的CYP3A4基因的转录激活;用荧光定量RT-PCR方法检测其对CYP3A4 mRNA的实际诱导。结果 10μmol.L-1浓度山姜素能够通过活化PXR诱导CYP3A4的转录(1.63倍);10和20μmol.L-1山姜素能够明显上调CYP3A4 mRNA(2.28倍和1.65倍)的表达。结论 PXR途径也许是山姜素诱导CYP3A4基因表达的调控因素之一。

关键词：孕烷X受体 CYP3A4 共转染 mRNA 调节山姜素

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HILIC测定三七片中三七素的含量

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中国中药杂志 2015年第13期40卷 2594-2597页

作者：鞠政财何纯勇刘青杨莉王峥涛上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室暨上海市复方中药重点实验室上海201203 上海中药标准化研究中心上海201203

目的：建立三七片中三七素的HILIC含量测定方法,对不同厂家不同批次的三七片质量进行分析。方法：Thermo HILIC色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相为0.1%H3PO4-乙腈（40∶60）等度洗脱;流速1 m L·min-1;柱温25℃;检测波长21... 详细信息

目的：建立三七片中三七素的HILIC含量测定方法,对不同厂家不同批次的三七片质量进行分析。方法：Thermo HILIC色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相为0.1%H3PO4-乙腈（40∶60）等度洗脱;流速1 m L·min-1;柱温25℃;检测波长213 nm。结果：三七素在3.6～460 mg·L-1呈良好的线性关系。不同厂家不同批次的三七片中三七素质量分数为1.60～4.31 mg·g-1。结论：该方法操作简便、稳定易行、可控性强、重复性好、结果准确,可用于三七药材及其相关制剂中止血活性成分三七素的含量测定,为其质量评价提供了参考。

关键词：亲水作用色谱三七片三七素含量

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