目的：研究经典补肾方药-左归丸对自然衰老大鼠CD4+T细胞IL-2基因启动子CpG位点甲基化水平的影响.方法：以自然衰老大鼠为模型,分组:青年对照组;老年对照组;老年左归组.流式细胞仪分选各实验组大鼠CD4+T细胞,以anti-CD3联合anti-CD28进行刺激.Q Real time RT-PCR法检测IL-2mRNA的表达;ELISA法检测DNMTs活性,甲基化特异性PCR(MSP)法检测IL-2基因启动子CpG位点甲基化水平.结果：anti-CD3联合anti-CD28刺激24h后,与青年对照组比较,老年对照组CD4+T细胞IL-2mRNA表达显著降低(P＜0.01);DNMTs活性显著增强(P＜0.01),IL-2基因SET1区域甲基化水平显著升高(P＜0.01).与老年对照组比较,老年左归组CD4+T细胞IL-2mRNA表达明显升高(P＜0.05);DNMTs活性明显减弱(P＜0.05),IL-2基因SET1区域甲基化水平明显降低(P＜0.05).结论：在体外anti-CD3联合anti-CD28刺激下,老年大鼠CD4+T细胞内DNMTs活性增强,使IL-2基因SET1区域维持高甲基化水平,IL-2表达下降.左归丸能通过抑制DNMTs活性,降低IL-2基因SET1区域甲基化水平,从而促进IL-2表达.
目的:观察不同中医治法对肝癌大鼠TKT(转酮酶)基因表达的调控差异,以及TKT基因在人肝癌细胞增殖中的作用。方法:①采用DEN(二乙基亚硝胺)诱发大鼠肝癌,分别经健脾理气、清热解毒、活血化瘀等中药治疗后,Affymetrix rat 230A基因芯片检...
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目的:观察不同中医治法对肝癌大鼠TKT(转酮酶)基因表达的调控差异,以及TKT基因在人肝癌细胞增殖中的作用。方法:①采用DEN(二乙基亚硝胺)诱发大鼠肝癌,分别经健脾理气、清热解毒、活血化瘀等中药治疗后,Affymetrix rat 230A基因芯片检测大鼠肝癌组织TKT基因表达的差异;②设计3个人TKT基因siRNA(小干扰RNA)序列,将siRNA经脂质体转入SMMC-7721人肝癌细胞株,MTT(噻唑蓝)比色法检测细胞生长增殖情况、RTqPCR(实时荧光定量聚合酶链反应)检测该基因的表达差异。结果:①芯片结果显示,TKT基因在大鼠肝癌形成后表达显著增加,不同中药对其具有不同程度的下调作用,其中健脾理气法下调作用较明显;②采用MTT比色法筛选到1个TKT基因RNAi(RNA干扰)有效靶序列,转染48小时后细胞的生长增殖得到了明显的抑制(与阴性对照组相比,P<0.01);③RTqPCR检测表明,转染48小时后该基因的表达明显降低。结论:TKT基因的高表达与肝癌细胞恶性增殖有关,而中药健脾理气治法对其具有下调作用。
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