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杨梅素通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路诱导MTB感染巨噬细胞发生自噬的研究

中国防痨杂志 2020年第2期42卷 101-107页

作者：孙锦霞张晴雯李银虹姜昕上海中医药大学基础医学院免疫学与病原生物学教研室 201203

目的对杨梅素通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路诱导MTB感染的巨噬细胞发生自噬进行研究,从而探讨杨梅素抗结核作用的机理。方法用CCK8法检测杨梅素对细胞增殖的影响,确定安全的用药范围;... 详细信息

目的对杨梅素通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路诱导MTB感染的巨噬细胞发生自噬进行研究,从而探讨杨梅素抗结核作用的机理。方法用CCK8法检测杨梅素对细胞增殖的影响,确定安全的用药范围;以H37Ra菌株感染的小鼠巨噬细胞Raw 264.7为模型组,并设空白组和药物处理组。按感染复数(MOI,即细菌∶细胞=10∶1)加入模型组、药物处理组,共孵育4h后,磷酸盐缓冲液(PBS)洗3次以弃掉未进入胞内的MTB。药物处理组分别用不同浓度(12.5、25、50、100μmol/L)的杨梅素作用24h,Western blot法检测自噬相关蛋白即“微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和p62”表达水平的变化,并以此筛选出杨梅素促进自噬的最佳作用浓度;100μmol/L杨梅素作用于感染细胞72h后,0.1%聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)冰上裂解细胞10min,菌落形成单位(CFU)法检测巨噬细胞胞内荷菌量;杨梅素作用感染细胞不同时间(30、60、180min)后Western blot测定PI3K/Akt/mTOR信号通路中Akt、mTOR的磷酸化水平。以Image J软件做蛋白定量分析,用GraphPad Prism 7.0制图,采用单因素方差分析(ANOVA)进行统计分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果杨梅素在100μmol/L浓度以下细胞生存率在90%左右,对细胞毒性较小;Western blot结果显示:与模型组(0.52±0.01)相比,杨梅素不同浓度(12.5、25、50、100μmol/L)处理均能促进LC3Ⅱ的表达(0.59±0.02、0.65±0.01、0.71±0.01、0.83±0.01),差异有统计学意义(t=2.97、P=0.04,t=7.91、P=0.00,t=9.77、P=0.00,t=16.37、P=0.00);而较模型组p62蛋白(0.86±0.02),药物处理亦能抑制p62的表达(0.72±0.01、0.86±0.00、0.60±0.02、0.58±0.01),25μmol/L杨梅素处理组差异无统计学意义(t=0.81、P=0.46),12.5、50、100μmol/L处理组差异均有统计学意义(t=6.50、P=0.00,t=9.53、P=0.00,t=12.01、P=0.00);杨梅素促进自噬的最佳药物浓度为100μmol/L;100μmol/L杨梅素作用于感染细胞72h后,对胞内MTB的抑制率为21.02%;模型组细胞在MTB感染后30、60、180min时,PI3K/Akt/mTOR通路中Akt蛋白的磷酸化(p-Akt)水平(1.23±0.01、1.52±0.01、0.74±0.02)明显增加,而杨梅素作用相同的时间后,可明显抑制Akt蛋白的磷酸化(0.99±0.01、0.96±0.01、0.43±0.01),差异有统计学意义(t=27.60、P=0.00,t=30.06、P=0.00,t=18.60、P=0.00);而模型组磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白水平仅在MTB感染后180min(0.57±0.00)明显增加(t=94.61、P=0.00),杨梅素作用180min亦能抑制mTOR蛋白的磷酸化(0.46±0.01),差异有统计学意义(t=21.60、P=0.00)。结论杨梅素通过抑制Akt和mTOR蛋白的磷酸化来抑制PI3K/Akt/mTOR通路,从而诱导MTB感染的巨噬细胞发生自噬来杀灭胞内的MTB。

关键词：分枝杆菌结核巨噬细胞自噬磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白杨梅素

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芹菜素抗肝细胞癌作用及机制的研究进展

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中药新药与临床药理 2020年第5期31卷 616-620页

作者：王守梅张树辉胡旭东上海中医药大学基础医学院生物教研室上海201203 上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院病理科上海200437

芹菜素是一种具有多种生物活性的黄酮类化合物,因其低毒性及潜在的抗氧化、抗炎和抗癌特性而被人们关注。芹菜素可通过抑制肝细胞癌的细胞增殖、诱导细胞凋亡和分化、抑制肝细胞癌的侵袭和血管生成、增强化疗药物敏感性等而发挥抗癌作... 详细信息

芹菜素是一种具有多种生物活性的黄酮类化合物,因其低毒性及潜在的抗氧化、抗炎和抗癌特性而被人们关注。芹菜素可通过抑制肝细胞癌的细胞增殖、诱导细胞凋亡和分化、抑制肝细胞癌的侵袭和血管生成、增强化疗药物敏感性等而发挥抗癌作用。芹菜素有望成为未来的抗肝细胞癌药物或放化疗协同剂。该文综述芹菜素抗肝细胞癌作用及机制的研究进展。

关键词：芹菜素黄酮类化合物肝细胞癌作用机制综述

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外泌体介导的miR-21传递参与电针促进大鼠坐骨神经损伤后修复的研究

外泌体介导的miR-21传递参与电针促进大鼠坐骨神经损伤后修复的研...

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中国解剖学会2021年年会

作者：刘玉璞邵水金国海东上海中医药大学基础医学院解剖学教研室

周围神经损伤(peripheralnerve inj ury,PNI)后损伤神经和血清中miR-21表达发生变化,外泌体是miRNA的重要载体,电针可促进PNI后修复,故本课题深入探讨电针是否通过调控外泌体介导的miR-21传递参与电针促进大鼠坐骨神经损伤后修复。通过... 详细信息

周围神经损伤(peripheralnerve inj ury,PNI)后损伤神经和血清中miR-21表达发生变化,外泌体是miRNA的重要载体,电针可促进PNI后修复,故本课题深入探讨电针是否通过调控外泌体介导的miR-21传递参与电针促进大鼠坐骨神经损伤后修复。通过制备离断性坐骨神经损伤大鼠模型,电针"环跳""足三里"治疗7 d后使用超速离心法提取血清中外泌体,经透射电镜和蛋白印迹检测CD9、CD63的表达对外泌体进行鉴定

关键词：外泌体坐骨神经损伤 miR-21

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靶向β2-AR抑制M2极化的华蟾素分子对接及实验验证

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时珍国医国药 2021年第11期32卷 2589-2591页

作者：缪珠雷李玉虎杨鸣泽上海中医药大学基础医学院免疫学与病原生物学教研室上海201203 海门市康泉蟾衣科技打限公司江苏海门226100

目的探讨华蟾素预防肿瘤侵袭转移的机制。方法用LeDock软件对华蟾素水溶性成分与β2-AR进行分子对接计算筛选,ELISA方法检测筛选得到的候选单体对巨噬细胞M1和M2型相关细胞因子分泌的影响。结果分子对接显示蟾蜍噻咛在候选单体中与β2-A... 详细信息

目的探讨华蟾素预防肿瘤侵袭转移的机制。方法用LeDock软件对华蟾素水溶性成分与β2-AR进行分子对接计算筛选,ELISA方法检测筛选得到的候选单体对巨噬细胞M1和M2型相关细胞因子分泌的影响。结果分子对接显示蟾蜍噻咛在候选单体中与β2-AR结合自由能最低,ELISA实验结果显示其能下调异丙肾上腺素诱导的巨噬细胞分泌M2型相关细胞因子,上调M1型相关细胞因子分泌。结论蟾蜍噻咛可通过靶向β2-AR发挥抑制M2极化的作用。

关键词：华蟾素 β2肾上腺素能受体巨噬细胞极化分子对接蟾蜍噻咛

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中药在干细胞治疗心肌梗死中的作用及机制

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中国中西医结合杂志 2020年第10期40卷 1277-1280页

作者：宣守松牟芳芳李涵蔡昊邵水金国海东上海中医药大学基础医学院人体解剖教研室上海201203 上海市嘉定区中医医院推拿科上海201800

据统计,2016年中国心血管病患病人数为2.9亿,心血管病病死率高举榜首,其中农村和城市心肌梗死(myocardial infarction,MI)死亡率分别为74.72/10万和58.69/10万,并且随着人口老龄化有持续上升趋势[1,2]。MI发生后,死亡的心肌细胞被成纤... 详细信息

据统计,2016年中国心血管病患病人数为2.9亿,心血管病病死率高举榜首,其中农村和城市心肌梗死(myocardial infarction,MI)死亡率分别为74.72/10万和58.69/10万,并且随着人口老龄化有持续上升趋势[1,2]。MI发生后,死亡的心肌细胞被成纤维细胞代替,引起心脏结构的重构、室壁变薄和瘢痕形成,最终导致心力衰竭,甚至死亡[3-5]。

关键词：瘢痕形成心血管病干细胞治疗室壁心肌梗死成纤维细胞心肌细胞心脏结构

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神经退行性疾病中医证候、证素临床分布规律研究

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光明中医 2021年第11期36卷 1736-1739页

作者：张洋何建成上海中医药大学协同创新中心科技信息中心上海201203 上海中医药大学基础医学院诊断学教研室上海201203

为探讨神经退行性疾病的临床常见中医证候、证素分布规律,对数据库中公开发表的相关临床研究文献进行计量分析。帕金森病病变主要在“肝”“肾”二脏,“阴虚”是根本,主要证候为“气血亏虚”和“肝肾阴虚”,常见证素为“肝”“肾”和“... 详细信息

为探讨神经退行性疾病的临床常见中医证候、证素分布规律,对数据库中公开发表的相关临床研究文献进行计量分析。帕金森病病变主要在“肝”“肾”二脏,“阴虚”是根本,主要证候为“气血亏虚”和“肝肾阴虚”,常见证素为“肝”“肾”和“阴虚”。阿尔茨海默病的病位主要在“肾”,常见证候为“痰浊阻窍”“脾肾两虚”和“髓海不足”,主要证素为“肾”“精亏”“血瘀”和“痰浊”,“精亏髓减”为本,“痰瘀阻窍”为标。

关键词：神经退行性疾病帕金森病阿尔茨海默病中医证候中医证素

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低氧对心脏成纤维细胞增殖迁移活性的影响及作用机制

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心脏杂志 2021年第6期33卷 573-578页

作者：李赞程培培丰明慧吕嵘徐明上海中医药大学基础医学院中西医结合基础学科上海201203 上海市第一人民医院嘉定分院上海市嘉定区江桥医院上海201803 上海中医药大学基础医学院生理学教研室上海201203

目的探讨低氧对乳鼠心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖和迁移活性的影响及其作用机制。方法原代分离培养C57BL/6J乳鼠CFs,给予低氧(10 ml/L O_(2))、常氧(210 ml/L O_(2))处理,CCK-8和免疫荧光法检测CFs增殖能力;划痕实验观... 详细信息

目的探讨低氧对乳鼠心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖和迁移活性的影响及其作用机制。方法原代分离培养C57BL/6J乳鼠CFs,给予低氧(10 ml/L O_(2))、常氧(210 ml/L O_(2))处理,CCK-8和免疫荧光法检测CFs增殖能力;划痕实验观察CFs的迁移活性;蛋白质免疫印迹法检测相关蛋白的改变;药物阻断和基因干预关键分子观察对CFs生物活性的影响。结果相较于常氧组,低氧可显著促进CFs的增殖、迁移活性;低氧下CFs中HIF1α蛋白表达水平升高;应用药物特异性阻断以及siRNA抑制HIF1α的表达均可显著降低CFs的增殖和迁移活性。结论低氧可通过HIF1α促进CFs增殖和迁移,这可能是心脏纤维化发生的重要机制之一。

关键词：低氧心脏成纤维细胞增殖迁移缺氧诱导因子

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淫羊藿苷联合白藜芦醇促进诱导性多能干细胞向心肌细胞分化的作用及机制研究

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中国中医药信息杂志 2020年第8期27卷 57-62页

作者：宣守松罗志荣李涵赵恬田牟芳芳邵水金国海东上海中医药大学基础医学院解剖教研室上海201203

目的研究淫羊藿苷和白藜芦醇联合应用是否可进一步提高诱导性多能干细胞(iPS)向心肌细胞分化的作用,探讨其可能的机制。方法CCK8法检测淫羊藿苷和白藜芦醇对iPS增殖的影响;分别加入不同浓度淫羊藿苷和白藜芦醇诱导iPS向心肌细胞分化,RT-... 详细信息

目的研究淫羊藿苷和白藜芦醇联合应用是否可进一步提高诱导性多能干细胞(iPS)向心肌细胞分化的作用,探讨其可能的机制。方法CCK8法检测淫羊藿苷和白藜芦醇对iPS增殖的影响;分别加入不同浓度淫羊藿苷和白藜芦醇诱导iPS向心肌细胞分化,RT-qPCR检测TNNI3、Cx43、α-actinin心肌细胞标志物和Oct4干细胞标志物;在常规诱导基础上,加入0.05μmol/L淫羊藿苷和0.1μmol/L白藜芦醇联合诱导iPS,Western blot检测心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达,RT-qPCR检测miR-1和miR-133的表达。结果0.05μmol/L淫羊藿苷对iPS增殖无明显影响,0.1、1、10μmol/L淫羊藿苷均能促进iPS增殖,各浓度白藜芦醇均可抑制iPS增殖;不同浓度淫羊藿苷均可下调Oct4的表达,上调TNNI3、α-actinin和Cx43的表达;白藜芦醇可下调Oct4的表达,上调TNNI3、α-actinin和Cx43的表达。与常规诱导方法比较,添加淫羊藿苷和白藜芦醇联合处理可明显上调α-actinin mRNA、cTnT蛋白和miR-1的表达,显著下调miR-133的表达。结论淫羊藿苷和白藜芦醇联合诱导可进一步促进iPS向心肌细胞的分化,其机制可能与调控miR-1和miR-133的表达有关。

关键词：淫羊藿苷白藜芦醇诱导性多能干细胞分化 miRNA

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补肾健脾方调节Myostatin/Atrogin-1通路拮抗大鼠骨骼肌蛋白降解的研究

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时珍国医国药 2020年第7期31卷 1598-1600页

作者：韩子秋肖益添吴谦常岑金晔华龚张斌上海中医药大学基础医学院生化教研室上海201203 上海生物信息技术研究中心上海201203

目的从蛋白质降解角度探析补肾健脾方对地塞米松诱导骨骼肌萎缩的保护作用及其分子机制。方法 SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组、美雄酮组,每组6只。大鼠腹腔注射地塞米松(1 mg/kg·day)进行造模,同时实验组给予中药或美雄酮... 详细信息

目的从蛋白质降解角度探析补肾健脾方对地塞米松诱导骨骼肌萎缩的保护作用及其分子机制。方法 SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组、美雄酮组,每组6只。大鼠腹腔注射地塞米松(1 mg/kg·day)进行造模,同时实验组给予中药或美雄酮干预,共14 d。称量各组大鼠体重;测算腓肠肌湿重/体质量比值;q RT PCR、Western blot方法检测组织Myostatin,Atrogin-1,FoxO1,Myosin基因的表达水平;HPLC技术检测尿液3-甲基组氨酸(3-MH)含量。结果模型组大鼠体重逐日下降,与正常组比较,同一时间点体重有显著统计学差异(P<0.01),腓肠肌湿重/体质量比值显著下降(P<0.05);myostatin,atrogin-1,foxo1基因相对表达升高(P<0.05);myosin基因相对表达量下降(P<0.05),7 d,10 d时尿液3-MH含量升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,中药组和美雄酮组大鼠体重无明显变化,腓肠肌湿重/体质量比值显著升高,有统计学差异(P<0.05);myostatin,atrogin-1基因相对表达下降(P<0.05);myosin基因相对表达量升高(P<0.05),7 d,10 d时尿液3-MH含量下降(P<0.05,P<0.01)。结论补肾健脾方能下调Myostatin/Atrogin-1信号通路相关因子表达,抑制骨骼肌蛋白质降解,是其拮抗DXMS诱导骨骼肌萎缩的重要机制。

关键词：补肾健脾糖皮质激素肌抑素蛋白降解骨骼肌萎缩

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调控自然杀伤细胞抗肿瘤活性药物的研究进展

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中国药学杂志 2019年第6期54卷 437-443页

作者：阎学伟朱诗国上海中医药大学基础医学院上海201203 上海中医药大学免疫学与病原生物学教研室上海201203

自然杀伤(natural killer,NK)细胞是一类不同于T、B细胞的具有细胞毒作用的淋巴细胞。很多NK细胞相关的抗肿瘤免疫疗法已经应用于临床,如NK细胞过继回输、NK细胞抑制性受体抑制剂、促NK细胞因子回输、嵌合抗原受体-NK(chimeric antigen ... 详细信息

自然杀伤(natural killer,NK)细胞是一类不同于T、B细胞的具有细胞毒作用的淋巴细胞。很多NK细胞相关的抗肿瘤免疫疗法已经应用于临床,如NK细胞过继回输、NK细胞抑制性受体抑制剂、促NK细胞因子回输、嵌合抗原受体-NK(chimeric antigen receptor-NK,CAR-NK)细胞回输等。另外,使用药物强化NK细胞抗肿瘤作用的疗法也具有很好的前景。目前存在很多关于药物促进NK细胞识别和杀伤肿瘤细胞的报道,其机制主要与药物上调自然杀伤细胞2族成员D(naturalkiller group 2 member D,NKG2D)配体、自然细胞毒性受体(natural cytotoxicity receptors,NCR)配体、NKG2D受体等的表达及增加促NK细胞相关细胞因子的释放有关。笔者就近年基于药物治疗促进NK细胞抗肿瘤的研究进行综述,为以后的研究提供参考。

关键词：自然杀伤细胞肿瘤免疫治疗自然杀伤细胞2族成员D

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