检索结果-内蒙古大学图书馆

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS分析覆盆子不同部位的化学成分及其9种成分含量的快速测定

中草药 2023年第15期54卷 4789-4803页

作者：沈瑶黄思红刘依茹李靖蕾陈昌伦刘考铧刘伟秦路平李荣胜吴建军浙江中医药大学药学院浙江杭州310053 上海中医药大学附属曙光医院宝山分院儿科上海201900 上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所肝肾疾病病证教育部重点实验室上海市中医临床重点实验室上海201203

目的采用UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS法对覆盆子Rubus chingii不同部位(小核果和花托)化学成分进行分析鉴定,并建立快速测定覆盆子中9种成分含量的方法。方法采用Acquity UPLC HSS T_(3)(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱,以0.1%... 详细信息

目的采用UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS法对覆盆子Rubus chingii不同部位(小核果和花托)化学成分进行分析鉴定,并建立快速测定覆盆子中9种成分含量的方法。方法采用Acquity UPLC HSS T_(3)(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱,以0.1%甲酸水与乙腈为流动相,梯度洗脱;覆盆子化学成分鉴定时采用正负离子Full MS/dd-MS^(2)模式,通过化合物的一级、二级质谱信息,结合对照品比对确认,进行覆盆子不同部位主要化学成分的快速、精准识别。采用ACQUITY BEH C_(18)(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱在负离子Full MS/SIM模式,建立快速测定覆盆子不同部位中9种成分(没食子酸、芦丁、鞣花酸、金丝桃苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、紫云英苷、椴树苷、槲皮素和山柰酚)含量的UHPLC-Q-Exactive OrbitrapHRMS方法,并测定其含量。结果从覆盆子小核果和花托中共鉴定122种化学成分,包括黄酮类66种、有机酸类28种、萜类24种、其他类4种。成功建立一种6 min完成覆盆子中9种成分含量测定的方法,各成分在其线性范围内线性关系良好;精密度、重复性及稳定性良好(RSD≤6.30%);加样回收率在99.45%~105.30%(RSD≤4.43%),并发现小核果中芦丁的含量显著高于花托;而花托中的鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷和椴树苷的含量显著高于小核果。结论覆盆子小核果和花托部位的化学成分存在差异性,运用UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS建立的定量方法分析时间短、灵敏度高、准确性好,方法学考察结果均符合含量测定的要求,可用于覆盆子中9种成分的快速测定。

关键词：覆盆子小核果花托超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱没食子酸芦丁鞣花酸金丝桃苷山柰酚-3-O-芸香糖苷紫云英苷椴树苷槲皮素山柰酚

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尿酸排泄及其相关转运蛋白在高尿酸血症中的研究进展

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中国全科医学 2023年第15期26卷 1916-1922页

作者：辛家东周嘉宝吴志远张栩铭高建东上海中医药大学附属曙光医院肾病科上海市200120 上海中医药大学中医肾病研究所上海市200000 肝肾疾病病证教育部重点实验室上海市200000 上海市中医临床重点实验室 201203

高尿酸血症(HUA)是人体内尿酸生成和排泄稳态失调从而导致血清尿酸水平升高超过参考范围的一类异质性疾病。既往研究发现3个常见尿酸转运蛋白基因(ABCG2、SLC2A9和SLC22A12)对人体血清尿酸水平的影响程度较大,其他尿酸相关的转运蛋白基... 详细信息

高尿酸血症(HUA)是人体内尿酸生成和排泄稳态失调从而导致血清尿酸水平升高超过参考范围的一类异质性疾病。既往研究发现3个常见尿酸转运蛋白基因(ABCG2、SLC2A9和SLC22A12)对人体血清尿酸水平的影响程度较大,其他尿酸相关的转运蛋白基因(如SLC16A9、SLC22A6、SLC22A7、SLC22A8、SLC22A9、SLC22A11、SLC22A13和ABCC4等)也对尿酸水平的调节起着至关重要的作用。本文对上述已发现的与HUA发生和发展相关的尿酸转运蛋白做一综述,主要包括肾脏中的尿酸重吸收转运蛋白和尿酸分泌转运蛋白以及肠道中的尿酸转运蛋白,旨在为今后HUA的临床治疗提供理论和数据支持。

关键词：高尿酸血症尿酸尿酸转运蛋白基因表达综述

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尿酸结晶在非布司他治疗尿酸性肾病患者中的临床意义

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中国临床药理学杂志 2023年第19期39卷 2752-2755页

作者：辛家东高建东上海中医药大学附属曙光医院肾病科上海中医药大学中医肾病研究所肝肾疾病病证教育部重点实验室上海市中医临床重点实验室

目的观察尿酸结晶在非布司他片治疗尿酸性肾病患者的临床意义。方法将B超显示是否有肾结晶沉积分为对照组（无结晶）和试验组（有结晶）。2组患者均给予非布司他每次40 mg,每天1次，口服治疗12周。比较2组患者的临床疗效、血尿酸、肾... 详细信息

目的观察尿酸结晶在非布司他片治疗尿酸性肾病患者的临床意义。方法将B超显示是否有肾结晶沉积分为对照组（无结晶）和试验组（有结晶）。2组患者均给予非布司他每次40 mg,每天1次，口服治疗12周。比较2组患者的临床疗效、血尿酸、肾功能，以及药物不良反应的发生情况。结果试验组和对照组各纳入36例进行统计分析。治疗后，试验组和对照组的总有效率分别为83.33%（30例/36例）和55.55%（20例/36例）,差异有统计学意义（P<0.05）。试验组治疗前和治疗后的血尿酸分别为（495.89±71.25）和（352.22±39.53）μmol·L-1,对照组分别为（476.54±96.89）和（383.83±80.61）μmol·L-1,差异均有统计学意义（均P<0.05）,且试验组治疗后的血尿酸显著低于对照组（P<0.05）。治疗后，试验组和对照组的血清肌酸酐分别为102.00和110.00μmol·L-1,肾小球滤过率估计值分别为59.98和55.88 mL·min-1·1.73 m-2,尿β2微球蛋白（β2-MG）分别为0.30和1.45 mg·L-1,尿视黄醇结合蛋白（RBP）分别为0.50和1.25 mg·L-1,尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶（NAG）分别为7.45和11.70 U·L-1;试验组治疗后的尿β2-MG、尿RBP和尿NAG与对照组比较，差异均有统计学意义（均P<0.05）,而对照组患者肾功能改善不明显。入组患者共有8例发生药物不良反应。结论当发生高尿酸血症伴有肾结晶沉积时，及时采取降尿酸治疗具有明显的积极意义，非布司他在降低血尿酸浓度的同时可以延缓慢性肾病的进展。

关键词：非布司他片高尿酸血症尿酸结晶慢性肾病尿酸性肾病临床试验

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扶正化瘀方对马兜铃酸Ⅰ诱导肾小管上皮细胞损伤的影响

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中成药 2024年第10期46卷 3455-3460页

作者：王帆王四园王静彭渊刘成海陶艳艳上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所上海201203 上海市中医临床重点实验室上海201203 肝肾疾病病证教育部重点实验室上海201203

目的探讨扶正化瘀方对马兜铃酸Ⅰ诱导的肾小管上皮细胞HK-2损伤的保护作用。方法以不同浓度马兜铃酸Ⅰ孵育HK-2细胞24 h,确定最佳造模浓度。HK-2细胞分为正常组、模型组、N-乙酰半胱氨酸组及扶正化瘀方低、高剂量组,模型组以400μmol/L... 详细信息

目的探讨扶正化瘀方对马兜铃酸Ⅰ诱导的肾小管上皮细胞HK-2损伤的保护作用。方法以不同浓度马兜铃酸Ⅰ孵育HK-2细胞24 h,确定最佳造模浓度。HK-2细胞分为正常组、模型组、N-乙酰半胱氨酸组及扶正化瘀方低、高剂量组,模型组以400μmol/L马兜铃酸Ⅰ分别孵育6、12、24 h,扶正化瘀方低、高剂量组及N-乙酰半胱氨酸组分别以100、200μg/mL扶正化瘀方浸膏粉及5 mmol/L N-乙酰半胱氨酸孵育24 h。CCK8法检测细胞活力,试剂盒测定细胞上清LDH活性,RT-qPCR法检测fos mRNA表达,免疫荧光法检测细胞FOS蛋白表达,Western blot法检测细胞FOS、JNK、p-JNK、ERK、p-ERK、IL-1β蛋白表达。结果HK-2细胞活力随着马兜铃酸Ⅰ处理时间延长而降低,细胞损伤逐渐加重(P<0.01)。与溶剂对照组比较,马兜铃酸Ⅰ作用后HK-2细胞fos mRNA表达及FOS、p-JNK、p-ERK、IL-1β蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,扶正化瘀方各剂量组和N-乙酰半胱氨酸组细胞活力升高(P<0.05,P<0.01),fos mRNA表达及FOS、p-JNK、p-ERK蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),JNK、ERK蛋白表达无明显变化(P>0.05);扶正化瘀方高剂量组和N-乙酰半胱氨酸组细胞IL-1β表达降低(P<0.01)。结论扶正化瘀方可通过抑制FOS及p-JNK、p-ERK蛋白表达,抑制炎症因子释放,从而改善马兜铃酸Ⅰ诱导的HK-2细胞损伤。

关键词：扶正化瘀方马兜铃酸Ⅰ 慢性肾病肾小管上皮细胞炎症 FOS JNK ERK

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黄芪提取物调节IL-6/STAT3信号通路治疗马兜铃酸Ⅰ诱导肝肾损伤小鼠模型的效果观察

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临床肝胆病杂志 2023年第8期39卷 1903-1910页

作者：朱哿瑞皮亚妮王静黄恺彭渊陈高峰刘成海陶艳艳上海中医药大学附属曙光医院·肝病研究所上海201203 上海中医药大学中医药国际标准化研究所上海201203 上海市中医临床重点实验室上海201203 肝肾疾病病证教育部重点实验室(上海中医药大学) 上海201203

目的探讨黄芪提取物(AR)改善马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)致小鼠急性肝、肾损伤效果及其调控IL-6/STAT3信号通路的作用机制。方法健康雄性C57BL/6小鼠38只,采用简单随机分组法分为正常组(n=8)、模型组(n=10)、AR组(n=10)和N-乙酰半胱氨酸(NAC)组(n=... 详细信息

目的探讨黄芪提取物(AR)改善马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)致小鼠急性肝、肾损伤效果及其调控IL-6/STAT3信号通路的作用机制。方法健康雄性C57BL/6小鼠38只,采用简单随机分组法分为正常组(n=8)、模型组(n=10)、AR组(n=10)和N-乙酰半胱氨酸(NAC)组(n=10)。模型组小鼠以20 mg/kg AAⅠ腹腔注射,1次/d,持续5 d。正常组小鼠腹腔注射相同容积羧甲基纤维素钠。AR组、NAC组20 mg/kg AAⅠ腹腔注射,1次/d,持续3 d;第4天分别按AR 75 mg/kg、NAC 150 mg/kg小鼠体质量剂量灌胃,1次/d,持续8 d。NAC为阳性对照药。给药造模结束后,处死小鼠并收集血清及肝、肾组织。试剂盒检测血清ALT、AST、肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平;HE染色观察肝、肾组织病理;荧光PCR及免疫组化分析肝、肾组织中p-STAT3表达量;酶联免疫吸附实验检测肝、肾组织IL-6、IL-1β及TNF-α表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两组间比较采用SNK-q检验。结果与正常组小鼠相比,模型组小鼠肾体比上升(P<0.05);与模型组相比,AR组ALT、AST、SCr和BUN水平显著降低(F值分别为49.29、31.31、58.89、85.88,P值均<0.01);HE染色结果表明,AR可有效减轻AAⅠ导致的肝、肾组织结构破坏和炎性细胞浸润;荧光PCR及免疫组化染色结果表明,AR可减少肝、肾组织p-STAT3表达;酶联免疫吸附检测发现,AR可下调IL-6、IL-1β及TNF-α表达。NAC与AR效应相似,两者间无明显差异。结论AR对AAⅠ所致急性肝、肾损伤有保护作用,其部分作用机制可能与抑制IL-6/STAT3信号通路激活,减轻炎症反应有关。

关键词：马兜铃酸化学性与药物性肝损伤急性肾损伤 STAT3转录因子黄芪

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中草药相关肝损伤的管理与治疗

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临床肝胆病杂志 2024年第8期40卷 1538-1542页

作者：孙鑫罗琼杨涛刘成海上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所上海201203 上海中医药大学附属曙光医院心血管病研究所上海201203 上海市中医临床重点实验室上海201203 肝肾疾病病证教育部重点实验室上海201203

由于我国中草药产品应用形式多样,使用人群广泛,用药情况复杂,近年来中草药相关肝损伤等不良反应事件频发,为进一步科学认识中草药相关肝损伤,规范其风险管理与防治措施,本文结合近年的临床研究进展与相关经验,对中草药相关肝损伤的风... 详细信息

由于我国中草药产品应用形式多样,使用人群广泛,用药情况复杂,近年来中草药相关肝损伤等不良反应事件频发,为进一步科学认识中草药相关肝损伤,规范其风险管理与防治措施,本文结合近年的临床研究进展与相关经验,对中草药相关肝损伤的风险管理、临床评价、预防及治疗展开论述。在中药研发生产、上市后的临床应用等多环节,建立涉及中药产品质量控制、患者安全教育、临床医师合理用药、定期监测、分级分型治疗等全方位的中草药相关肝损伤的管控体系,对于预防和处理肝损伤等不良反应事件非常重要,为中草药临床安全合理用药提供参考和借鉴。

关键词：中草药化学性与药物性肝损伤治疗学

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扶正化瘀方调控TGF-β/Smad信号通路对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的影响

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中成药 2024年第6期46卷 2042-2047页

作者：冯嘉文黄恺景菲邢枫彭渊刘成海上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所上海201203 上海市中医临床重点实验室上海201203 肝肾疾病病证教育部重点实验室上海201203

目的探讨扶正化瘀方对博来霉素诱导肺纤维化小鼠的作用。方法将小鼠随机分为模型组、扶正化瘀方组(5.6 g/kg)和尼达尼布组(60 mg/kg),每组15只,采用无创气管插管经气道滴注博来霉素(2.5 mg/kg)复制小鼠肺纤维化模型;另取10只正常小鼠予... 详细信息

目的探讨扶正化瘀方对博来霉素诱导肺纤维化小鼠的作用。方法将小鼠随机分为模型组、扶正化瘀方组(5.6 g/kg)和尼达尼布组(60 mg/kg),每组15只,采用无创气管插管经气道滴注博来霉素(2.5 mg/kg)复制小鼠肺纤维化模型;另取10只正常小鼠予气道滴注等体积生理盐水,作为正常组。造模7 d后,各组灌胃相应剂量药物,连续给药14 d。末次给药24 h后,使用肺功能仪测定小鼠气道狭窄指数、呼吸频率和潮气量,试剂盒检测血清羟脯氨酸(Hyp)水平,苏木素-伊红和Masson染色分别观察肺组织炎症和胶原沉积水平,ELISA法检测肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6水平,免疫组化观察肺组织α-SMA表达,蛋白印迹法检测小鼠肺组织α-SMA、TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达。结果与正常组比较,模型组小鼠呼吸急促,体质量降低(P<0.01),Penh值增加(P<0.01),f、TV减少(P<0.01),肺组织大量炎性细胞浸润和大量胶原纤维沉积并有纤维节结生成,血清Hyp、IL-6、TNF-α水平升高(P<0.01),肺组织α-SMA、TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,扶正化瘀方组和尼达尼布组小鼠呼吸平稳,Penh值降低(P<0.01),f、TV增加(P<0.01),肺组织炎性细胞浸润和胶原纤维沉积减少(P<0.01),血清Hyp、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.01),肺组织α-SMA、TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达降低(P<0.01)。结论扶正化瘀方可抑制博来霉素诱导的小鼠实验性肺纤维化,其作用机制可能与调控TGF-β/Smad信号通路有关。

关键词：扶正化瘀方博来霉素肺纤维化 TGF-β/Smad信号通路

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基于网络药理学和临床试验探讨降尿酸方对尿酸性肾病患者脂质代谢的影响

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中药药理与临床 2024年

作者：辛家东高建东上海中医药大学附属曙光医院肾病科/上海中医药大学中医肾病研究所/肝肾疾病病证教育部重点实验室/上海市中医临床重点实验室(20DZ2272200) 烟台毓璜顶医院中医中西医结合科

目的:基于网络药理学预测降尿酸方治疗尿酸性肾病的机制，同时采用临床试验进行验证，证实降尿酸方对尿酸性肾病患者的临床疗效以及脂质代谢的影响。方法:采用网络信息学分析技术，筛选出降尿酸方发挥疗效的核心靶点及通路，通过临床随... 详细信息

目的:基于网络药理学预测降尿酸方治疗尿酸性肾病的机制，同时采用临床试验进行验证，证实降尿酸方对尿酸性肾病患者的临床疗效以及脂质代谢的影响。方法:采用网络信息学分析技术，筛选出降尿酸方发挥疗效的核心靶点及通路，通过临床随机双盲法，将符合纳入标准的84例尿酸性肾病痰浊瘀阻证患者随机分为对照组和观察组，对照组予非布司他40 mg+降尿酸方安慰剂，试验组予非布司他40 mg+降尿酸方颗粒，治疗周期12 w，观察患者治疗前后血脂(总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白)、血尿酸、肌酐、肾小球滤过率及证候评分结果。结果:网络药理学分析显示脂质与动脉粥样硬化（Lipid and atherosclerosis）为降尿酸方治疗尿酸性肾病的最富集通路，临床试验结果表明经治疗后试验组有效率为95%，与对照组的80%相比疗效明显(P<0.05)。试验组血脂相关指标总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇与治疗前相比均得到显著改善(P<0.05)，对照组仅甘油三酯与治疗前相比具有统计学意义(P<0.05)，治疗后试验组在降低血脂方面明显优于对照组(P<0.05)。两组血尿酸、胱抑素C、血肌酐、肾小球滤过率与治疗前相比均具有统计学差异(P<0.05)，治疗后试验组在降低血尿酸、胱抑素C、血肌酐、肾小球滤过率明显优于对照组(P<0.05)，试验组的倦怠乏力、肢体困重、关节疼痛、肌肤甲错、水肿、舌苔、脉象积分与治疗前相比明显降低（P<0.05），对照组的关节疼痛、肌肤甲错、水肿积分与治疗前相比也明显降低（P<0.05），治疗后试验组的倦怠乏力、关节疼痛、肌肤甲错、水肿、脉象积分明显低于对照组（P<0.05）。结论:降尿酸方能够有效改善尿酸性肾病患者肾损伤，降低血尿酸水平，其机制之一与纠正脂质代谢紊乱有关，这与网络药理学结果Lipid and atherosclerosis为降尿酸方治疗尿酸性肾病的最富集通路相契合。

关键词：降尿酸方尿酸性肾病脂质代谢网络药理学临床试验

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基于证候积分的慢性乙型肝炎湿热证的中西医临床特征

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世界中医药 2024年第22期19卷 3523-3530页

作者：刘雅茹胡义扬赵瑜上海中医药大学附属曙光医院上海201203 上海中医药大学肝病研究所上海201203 肝肾疾病病证教育部重点实验室上海201203 上海市中医临床重点实验室上海201203

目的:依据湿热证证候积分探索慢性乙型肝炎(CHB)湿热证患者血清肝功能指标、病毒学指标、肝脏纤维化指标、炎症介质和趋化因子、细胞免疫指标及部分血常规指标的变化特征。方法:选取2009年11月至2014年5月团队临床样本库中上海中医药大... 详细信息

目的:依据湿热证证候积分探索慢性乙型肝炎(CHB)湿热证患者血清肝功能指标、病毒学指标、肝脏纤维化指标、炎症介质和趋化因子、细胞免疫指标及部分血常规指标的变化特征。方法:选取2009年11月至2014年5月团队临床样本库中上海中医药大学附属曙光医院、宁波市第二医院、绍兴市第六人民医院、南京市第二医院和淮安市第四人民医院收治的健康志愿者36例、CHB患者148例的临床资料作为研究对象进行回顾性分析,依据《中药新药临床指导原则》(2002版)中对肝胆湿热证的主次证进行判定,对肝胆湿热证进行评分。依据湿热证候积分及舌苔是否黄腻将患者分为典型湿热证组40例、非典型湿热证组108例。比较典型湿热证组和非典型湿热证组患者血清肝功能指标、病毒学指标、肝脏纤维化指标、炎症介质及趋化因子、细胞免疫指标及部分血常规指标。结果:与非典型湿热证组比较,典型湿热证组的血清谷草转氨酶(GOT)、碱性磷酸酶(ALP)和血小板比率指数(APRI)评分、血清单核细胞、单核细胞百分比,炎症相关细胞因子白细胞介素(IL)6、IL-8、IL-16、巨噬细胞游走抑制因子(MIF)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1/CCL2)、肝细胞生长因子(HGF)的表达显著升高(P<0.05)。结论:典型湿热证CHB患者伴随肝脏损伤相关肝功能指标、肝脏纤维化指标、免疫指标和炎症介质及趋化因子水平升高的临床表象。

关键词：慢性乙型肝炎中医证候辨证分型湿热证证候积分肝损伤免疫反应炎症反应

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降尿酸方治疗慢性尿酸性肾病痰浊瘀阻证随机对照研究

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时珍国医国药 2024年第3期35卷 657-660页

作者：辛家东高建东上海中医药大学附属曙光医院上海中医药大学中医肾病研究所肝肾疾病病证教育部重点实验室上海市中医临床重点实验室(20DZ2272200)上海201203

目的评价中药降尿酸方联合西药治疗慢性尿酸性肾病(痰浊瘀阻证)的有效性及安全性。方法纳入72例慢性尿酸性肾病(痰浊瘀阻证)患者,按1∶1比例区组随机化分为对照组和试验组,每组36例。对照组采用非布司他常规治疗,试验组在西医治疗的... 详细信息

目的评价中药降尿酸方联合西药治疗慢性尿酸性肾病(痰浊瘀阻证)的有效性及安全性。方法纳入72例慢性尿酸性肾病(痰浊瘀阻证)患者,按1∶1比例区组随机化分为对照组和试验组,每组36例。对照组采用非布司他常规治疗,试验组在西医治疗的基础上给予中药降尿酸方冲服,疗程24周。评价两组血尿酸、血肌酐、肾小球滤过率、肾小管功能、血脂水平、中医证候积分及安全性。结果治疗过程中脱落4例,终止1例。治疗周期结束后,两组患者血尿酸水平均显著性下降(P<0.05),对照组第24周血肌酐、肾小球滤过率明显改善(P<0.05),试验组第4周、12周、24周的血肌酐及肾小球滤过率与治疗前相比均明显改善(P<0.05),试验组第24周肾小管功能明显改善(P<0.05),试验组血脂水平与治疗前相比明显降低(P<0.05)且下降程度明显优于对照组(P<0.05),对照组和试验组的总有效率分别为70.59%(24例/34例)和90.91%(30例/33例),差异有统计学意义(P<0.05)。结论中药降尿酸方联合西医治疗慢性尿酸性肾病(痰浊瘀阻证)能有效改善临床症状,降低血尿酸水平,改善肾脏功能及高脂血症。

关键词：慢性尿酸性肾病高尿酸血症慢性肾脏病降尿酸方痰浊瘀阻证临床试验

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