检索结果-内蒙古大学图书馆

中华内分泌代谢杂志 2012年第12期28卷 989-993页

作者：梁军王玉赵双霞施静艺彭永德高冠起潘春明袁国跃韩兵苏青高聆陈名道赵家军宋怀东江苏省徐州市中心医院徐州医学院徐州临床学院内分泌科221009 上海交通大学附属瑞金医院医学分子中心、医学基因组学国家重点实验室、上海市内分泌代谢病研究所上海交通大学附属第一人民医院内分泌科山东省临沂人民医院内分泌科江苏大学附属医院内分泌科上海交通大学医学院附属新华医院内分泌科山东大学附属省立医院内分泌科

目的探讨SCGB3A2基因启动子区单核苷酸多态性（SNPs）与Graves病（GD）的相关性。方法对与甲亢发生紧密连锁的微卫星标志D5s2090周围3．0Mb区域内（上游及下游3．0Mb范围内）的179个SNPs进行病例对照分析，筛选出相关基因。结果对与甲... 详细信息

目的探讨SCGB3A2基因启动子区单核苷酸多态性（SNPs）与Graves病（GD）的相关性。方法对与甲亢发生紧密连锁的微卫星标志D5s2090周围3．0Mb区域内（上游及下游3．0Mb范围内）的179个SNPs进行病例对照分析，筛选出相关基因。结果对与甲亢发生紧密连锁的微卫星标志D5s2090周围***区域内的179个SNPs筛查。发现SNPrsl368408在病例组与对照组间的差异有统计学意义（P=3．69×10^-5），进一步通过精细定位，对该SNP位点附近的大量SNP进行关联分析，发现SCGB3A2基因启动子区的SNP76（P=4．11×10^-8）和SNP75（P=1．37×10^-8）与甲亢发生密切相关，回归分析发现这两个SNP位点可能是该区段的甲亢致病易感位点。结论提示SCGB3A2为GD相关基因。

关键词：格雷夫斯病 SCGB3A2基因启动子多态性单核苷酸

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白血病细胞中不同启动子驱动外源基因表达能力差异分析

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遗传 2011年第8期33卷 879-885页

作者：周雁黄秋花上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室上海200025

为了分析不同启动子在白血病细胞中驱动外源基因表达能力的差异,文章选择了4种含不同启动子EF1α、PGK、Ubiquitin和CMV驱动的GFP报告基因的慢病毒载体,用以感染4种不同的白血病细胞株——NB4、HL60、Kasumi和THP1,利用荧光显微镜、流... 详细信息

为了分析不同启动子在白血病细胞中驱动外源基因表达能力的差异,文章选择了4种含不同启动子EF1α、PGK、Ubiquitin和CMV驱动的GFP报告基因的慢病毒载体,用以感染4种不同的白血病细胞株——NB4、HL60、Kasumi和THP1,利用荧光显微镜、流式细胞仪和荧光定量PCR的方法检测其GFP表达效率,发现EF1α启动子驱动GFP表达的能力最强,CMV最弱,PGK和Ubiquitin则介于两者之间。该结果提示在白血病细胞中研究基因功能时,应根据不同的研究需求选择最为合适的启动子。

关键词：启动子 GFP报告基因慢病毒载体白血病细胞

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二例Ⅰ型抗凝血酶缺陷症患者反复发生静脉血栓的分子机制研究

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中华血液学杂志 2011年第12期32卷 848-853页

作者：夏燕丁秋兰许冠群张利伟戴菁陆晔玲王学锋奚晓东王鸿利上海交通大学医学院附属瑞金医院、上海血液学研究所；医学基因组学国家重点实验室 200025 上海交通大学医学院临床输血科 200025

目的对2例Ⅰ型抗凝血酶（AT）缺陷症家系进行表型诊断、基因分析，并探讨其静脉血栓发生的分子机制。方法常规筛查凝血功能，凝血酶生成试验评估高凝状态。用ELISA法及稀释的蝰蛇毒法分别检测抗心磷脂抗体（ACA）及狼疮抗凝物质（LA）... 详细信息

目的对2例Ⅰ型抗凝血酶（AT）缺陷症家系进行表型诊断、基因分析，并探讨其静脉血栓发生的分子机制。方法常规筛查凝血功能，凝血酶生成试验评估高凝状态。用ELISA法及稀释的蝰蛇毒法分别检测抗心磷脂抗体（ACA）及狼疮抗凝物质（LA）。用发色底物法或凝固法检测蛋白C、蛋白S和抗凝血酶活性（PC：A，PS：A及AT：A），用免疫比浊法检测抗凝血酶抗原（AT：Ag）。Western blot方法分析血浆中AT的含量及相对分子质量。用PCR方法扩增AT基因的全部外显子及侧翼序列，用DNA直接测序法进行基因分析，并对静脉血栓相关的基因多态性进行筛查。用定点突变法构建ATAla404Asp突变体表达质粒，脂质体介导瞬时转染293T细胞，检测细胞上清液和裂解液中AT：Ag。结果2例先证者的凝血筛查指标均未见异常，凝血酶生成试验显示先证者1的凝血酶生成潜力（ETP）和生成峰值分别为正常人的2．8倍和1．5倍，表明体内呈现明显高凝状态。PC：A、PS：A、ACA及LA检测均未见异常。先证者1、2的AT：A分别为45％和32％，AT：Ag分别为121mg／L和158mg／L。血浆Western blot结果显示2例先证者AT含量较正常混合血浆减少，但相对分子质量正常。基因分析发现2例先证者各携带一个杂合突变，分别为g．3291c—T（Thr9811e）和g．13863C→A（Ala404Asp），未发现静脉血栓相关的基因多态性。体外转染实验结果显示Ala404Asp突变质粒转染细胞的上清液和裂解液中的AT：Ag分别为野生型的4．8％和60．6％。结论Thi9811e和Ala404Asp两种AT突变与先证者1、2反复静脉血栓发生明显相关。其中Ala404Asp突变为国际首次报道。其分子发病机制研究显示Ala404Asp突变蛋白存在分泌障碍和细胞内降解增多，导致Ⅰ型AT缺陷症。

关键词：抗凝血酶类血栓形成倾向 DNA突变分析静脉血栓形成

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三个遗传性血管性血友病家系表型诊断和基因型研究

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中华血液学杂志 2011年第2期32卷 99-102页

作者：秦欢欢王学锋丁秋兰许冠群张利伟戴菁陆晔玲奚晓东王鸿利上海交通大学医学院附属瑞金医院、上海血液学研究所、医学基因组学国家重点实验室上海交通大学医学院附属瑞金医院临床输血科

目的对3个遗传性血管性血友病（vWD）家系进行表型诊断和基冈型分析，探讨其分子发病机制。方法分别采用出血时间（BT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、瑞斯托霉素诱导的血小板凝集试验（RIPA）、血管性血友病因子（vWF）瑞斯托霉素... 详细信息

目的对3个遗传性血管性血友病（vWD）家系进行表型诊断和基冈型分析，探讨其分子发病机制。方法分别采用出血时间（BT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、瑞斯托霉素诱导的血小板凝集试验（RIPA）、血管性血友病因子（vWF）瑞斯托霉素辅因子（vWF：RCo）、vWF抗原（vWF：锥）、vWF活性（vWF：A）测定，vWF胶原结合试验（vWF：CB），vWF与FⅧ结合试验（vWF：FⅧ：B）和多聚体分析对3例vWD先证者和家系成员进行表型诊断。提取3例先证者外周血基因组DNA，用PCR法扩增vWF基因的52个外显子及侧翼序列，通过直接测序分析vWF基因变异。结果3例先证者Am均延长，BT除先证苦3外均正常，血浆R1PA、vWF：RCo、vWF：Ag、vWF：A和vWF：CB均有不同程度的减低。多聚体分析结果显示先证者3中、高分子质量多聚体缺失，而先证者1、2基本正常。对3例先证者进千亍基冈测序，共发现3个杂合突变，分别为vWF基因的C144067A（112287Q）、GI10374A（R1374H）、CI10770T（S1506I，）以及28号外显子G110667A（D1472H）杂合多态性。结论R2287Q、R1374H和S15061．这3种杂合错义突变及D1472H杂合多态性足分别导致3例先证者发生遗传性vWD的分子发病机制。其中R2287Q是国际首次报道的新突变．

关键词：血管性血友病因子血管性血友病 DNA突变分析

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三个遗传性异常纤维蛋白原血症家系的表型和基因型分析

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中华血液学杂志 2011年第3期32卷 153-157页

作者：欧阳琦丁秋兰黄丹丹许冠群张利伟戴菁陆晔玲王学锋奚晓东王鸿利上海交通大学医学院附属瑞金医院、上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室 200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院临床输血科

目的对3个遗传性异常纤维蛋白原血症家系进行临床表型和基因型分析。方法检测3个家系所有成员外周血活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TF）、靳蛇酶时间（RT）、抗凝血酶活性（AT：C）、蛋白C活性（PC：... 详细信息

目的对3个遗传性异常纤维蛋白原血症家系进行临床表型和基因型分析。方法检测3个家系所有成员外周血活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TF）、靳蛇酶时间（RT）、抗凝血酶活性（AT：C）、蛋白C活性（PC：C）和蛋白S活性（PS：C），纤维蛋白原（Fg）抗原和活性分别用免疫比浊法和Clauss法测定，分别用SDS—PAGE和Western blot法检测3例先证者血浆纤维蛋白原三条肽链的相对分子质量。抽提DNA，PCR扩增Fg3个基因FGA、FGB和FGG所有外显子及其侧翼序列，DNA测序并进行基因分析。结果3例先证者APTT、PT以及抗凝指标（AT：C、PC：C和PS：C）都正常，而TT和RT明显延长，如的活性降低，分别为0．90、0．84及0．44g／L，而抗原正常，分别为2．0、3．2及3．1g／L；SDS—PAGE和Western blot法均未检测到异常条带。基因分析发现3例先证者各携带1个杂合错义突变，分别为FGGg．7476G→A（γArg275His）、FGAg．1209C→T（Aα Pro18Leu）和FGA g．1202 C→T（Aα LArg16Cys）。结论3例先证者遗传性异常纤维蛋白原血症分别由γ Arg275His、Aα Pro18Leu和Aα Arg16Cys突变所致，其中Aa Pro18Leu和Aα Arg16Cys突变为国内首次报道。

关键词：异常纤维蛋白原血症,遗传性纤维蛋白原基因突变表型和基因型

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凝血因子Ⅸ Arg327Ile突变蛋白功能缺陷机制研究

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中华检验医学杂志 2011年第11期34卷 1006-1011页

作者：周佳维戴菁郁婷婷陆晔玲丁秋兰王学锋王鸿利上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室 200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院输血科 200025

目的研究FⅨ Arg327Ile（R327I）及Arg327Ala（R327A）突变蛋白功能，探讨R327I突变导致血友病B的分子发病机制。方法采用潮霉素筛选稳定表达细胞株，ELISA法筛选高效表达FIX重组蛋白细胞株，采用快流速Q琼脂糖凝胶和离子交换两步法分... 详细信息

目的研究FⅨ Arg327Ile（R327I）及Arg327Ala（R327A）突变蛋白功能，探讨R327I突变导致血友病B的分子发病机制。方法采用潮霉素筛选稳定表达细胞株，ELISA法筛选高效表达FIX重组蛋白细胞株，采用快流速Q琼脂糖凝胶和离子交换两步法分离纯化重组蛋白。ELISA和SDS—PAGE电泳分别检测重组蛋白含量和纯度。FⅦa／TF／Ca“和FⅨa／Ca^2＋活化野生型及R327I和R327A突变FⅨ蛋白，用WB法分别检测不同时间内活化生成的FⅨa。野生型及两种突变FIXa在不同FⅧa浓度下活化激活FX，以此计算野生型及两种突变FⅨa与FⅧa的解离常数；在含或不含FⅧa的条件下，检测野生型及两种突变FⅨa对不同浓度FX的激活能力，以此计算其催化效率。结果表达分离纯化野生型、R327I和R327A FⅨ重组蛋白总量分别为450、210和64μg，SDS—PAGE电泳结果显示重组蛋白纯度符合要求。两种突变蛋白均能被FⅦa／TF／Ca^2＋和FⅪa／Ca^2＋正常激活。R3271与R327A两种FIXa突变蛋白与FⅧa的结合力分别为野生型的1／4和1／5。在含FⅧa条件下，R327I和R327I突变FⅨa对FX催化效率分别为野生型的1／6和1／8。而不含FⅧa条件下，催化效率分别为野生型的1／3和1／7．4。结论R327I和R327A两种突变FⅨa与FⅧa结合异常，R327位点参与FⅧa结合，同时也与底物活化相关。R327I突变与FⅧa结合力降低导致重型血友病B的发生.

关键词：因子Ⅸ 重组蛋白质类突变血友病B

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一个遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症家系两种新的基因突变

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中华血液学杂志 2011年第3期32卷 158-162页

作者：邢志芳王学锋戴菁陆晔玲丁秋兰许冠群奚晓东王鸿利上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室 200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院临床输血科

目的探讨遗传性凝血因子Ⅶ（FⅦ）缺陷症的分子发病机制。方法用DNA直接测序法对1例FⅦ缺陷症家系成员FⅦ基因进行分析；将含突变序列克隆插入pMD19-TSimple TA载体中，对所得两条染色体相应序列分别测序，以确定不同突变在染色体上的... 详细信息

目的探讨遗传性凝血因子Ⅶ（FⅦ）缺陷症的分子发病机制。方法用DNA直接测序法对1例FⅦ缺陷症家系成员FⅦ基因进行分析；将含突变序列克隆插入pMD19-TSimple TA载体中，对所得两条染色体相应序列分别测序，以确定不同突变在染色体上的分布。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和凝固法检测血浆中FⅦ：Ag和FⅦ：C。结果家系中有3种基因突变：第8号外显子第15386位核苷酸存在A→C（Arg353Pro）和第15386位核苷酸G→C（Gln353Pro）突变；第8号外显子第15274位核苷酸A→T（Lys316Stop）突变，家系成员中发现的这3种突变均为杂合子；发现先证者父亲存在3种杂合多态性：即启动子区2050～2059位CCTATACCT10bp的缺失／插入多态性、1号内含子IVSla＋9G→A及第15386位A→G（Arg353Gln），且均来自先证者祖父，3种多态性位于同一条染色体上。结论发现该家系存在1种FⅦ基因的错义突变（Gln353Pro）；1种无义突变（Lys316Stop），这两种突变均为国际上首次报道的新突变。

关键词：凝血因子FⅦ缺陷症基因突变多态性

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FⅧ His99Arg突变导致血友病A的分子发病机制研究

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中华血液学杂志 2011年第9期32卷 587-591页

作者：秦欢欢王学锋丁秋兰陆晔玲戴菁奚晓东王鸿利上海交通大学医学院附属瑞金医院、上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室 200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院临床输血科

目的探讨1例临床出血表现与凝血因子Ⅷ活性（Fvm：C）检测结果明显不符的血友病A患者表型、基因型诊断及其分子发病机制。方法凝血、抗凝及纤溶相关指标检测，一步法及发色底物法检测FⅧ：C，ELISA法检测FⅧ的抗原（FVIH：Ag）。活化部... 详细信息

目的探讨1例临床出血表现与凝血因子Ⅷ活性（Fvm：C）检测结果明显不符的血友病A患者表型、基因型诊断及其分子发病机制。方法凝血、抗凝及纤溶相关指标检测，一步法及发色底物法检测FⅧ：C，ELISA法检测FⅧ的抗原（FVIH：Ag）。活化部分凝血活酶时间（APTr）纠正实验筛查FⅧ抑制物；PCR扩增先证者F8基因的所有外显子及其侧翼序列，利用直接核苷酸测序法进行基因序列分析。针对先证者的基因突变位点，对其家系成员进行相应外显子基因检测；定点突变法构建B亚基缺失（760aa～1639aa）的人FⅧHis99Arg和His99Ala两种突变的表达质粒（pRC／RSV—BDhFⅧcDNA），两种突变质粒分别瞬时转染HEK293T细胞，测定细胞上清液中的FⅧ：C和细胞上清液及裂解液中的FVIU：Ag。结果先证者APTT延长，一步法及发色底物法检测的FⅧ：C均低于1．0％，血浆FⅧ：Ag为120．0％。APTT纠正试验阴性，其他凝血、抗凝及纤溶相关检测均未见异常。诊断为交叉反应阳性（CRM＋）的血友病A。患者F、8基因直接核苷酸测序发现3号外显子存在28828A→G突变，导致His99Arg氨基酸改变，其母亲该位点为杂合突变。体外表达研究结果显示细胞上清液中His99Arg突变蛋白FⅧ：Ag及FⅧ：C分别为野生型的180．0％及5，8％，His99Ala突变蛋白FⅧ：Ag及FⅧ：C分别为野生型的45．0％和20．0％。Western blot显示，His99Arg突变质粒表达上清液中FⅧ蛋白含量较野生型明显增高，而His99Ala突变质粒表达上清液FⅧ蛋白含量较野生型减少。提示His99Arg为CRM＋血友病A突变而His99Ala为CRM-血友病A突变。结论体外检测发现His99Arg和His99Ala两种FVI能够表达，但常规凝血检测His99Arg突变FⅧ基本无功能，而His99Ala凝血功能也降低。

关键词：血友病A 因子Ⅷ DNA突变分析分子发病机制

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整合蛋白β3近膜端α螺旋中的E726Q突变影响细胞膜与肌动蛋白皮质层相互作用继而诱导细胞膜形成突起小泡

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中国实验血液学杂志 2011年第6期19卷 1450-1455页

作者：孔永奎张玥林明辉奚晓东上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所、医学基因组学国家重点实验室上海200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院中法生命科学与基因组研究中心上海200025

整合蛋白β亚基胞浆段近膜端α螺旋在与诸多蛋白如踝蛋白(talin)、α-辅肌动蛋白(α-actinin)或者骨架蛋白(skelemin)等的结合上发挥着重要的功能。本研究的目的是通过对α螺旋上5个保守的带电荷氨基酸(R724,K725,E726,E731和E733)的研... 详细信息

整合蛋白β亚基胞浆段近膜端α螺旋在与诸多蛋白如踝蛋白(talin)、α-辅肌动蛋白(α-actinin)或者骨架蛋白(skelemin)等的结合上发挥着重要的功能。本研究的目的是通过对α螺旋上5个保守的带电荷氨基酸(R724,K725,E726,E731和E733)的研究,采用定点突变的方法,从而明确其在介导β3与骨架蛋白结合中的作用。实验结果表明,表达有突变型整合蛋白αⅡbβ3E726Q的CHO细胞株在固相化的纤维蛋白原上伸展不良,表型最显著。除此之外,E726Q突变可以诱导CHOαⅡbβ3E726Q细胞株在固相化的纤维蛋白原上的细胞膜起泡现象,且这种突起小泡(blebs)可以被肌凝蛋白轻链ATPase抑制剂blebbistatin所抑制。结论:整合蛋白β3亚基近膜端α螺旋在将细胞膜锚定到膜下肌动蛋白皮质层(submembraneous actin cortex)方面发挥重要作用。

关键词：整合蛋白β3 踝蛋白 E726Q突变 α-辅肌动蛋白突起小泡

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MTAP、CDKN2A和CDKN2B在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及其临床意义

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白血病．淋巴瘤 2011年第8期20卷 464-467,470页

作者：李莉许彭鹏沈志祥赵维莅上海交通大学医学院附属瑞金医院血液科上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室 200025

目的研究弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）MTAP、CDKN2A和CDKN2B基因的表达及其临床意义。方法以实时定量聚合酶链反应（PCR）方法检测40例DLBCL及19例淋巴结反应性增生组织中MTAP、CDKN2A和CDKN2B基因的表达情况，结合临床特征进行分析，并... 详细信息

目的研究弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）MTAP、CDKN2A和CDKN2B基因的表达及其临床意义。方法以实时定量聚合酶链反应（PCR）方法检测40例DLBCL及19例淋巴结反应性增生组织中MTAP、CDKN2A和CDKN2B基因的表达情况，结合临床特征进行分析，并进行随访。结果DLBCL组MTAP、CDKN2A和CDKN2B基因表达水平较淋巴结反应性增生组降低，差异有统计学意义（P值分别为0．024、0．044和0．047）；三者表达均与AnnArbor临床分期相关（P值分别为0．004、0．001和0．027）；与患者的性别、年龄、淋巴结外病变累及、ECOG体力评分、骨髓累及、血清乳酸脱氢酶水平均无明显相关（均P〉0．05）。其中MTAP与CDKN2A基因表达情况还与B症状（P值分别为0．003和0．028）和国际预后指数（IPI）相关（P值分别为0．001和0．011）。此外，生存分析结果显示，MTAP、CDKN2A和CDKN2B基因表达水平与患者总生存期相关（P值分别为0．022、0．019和0．042）。结论MTAP、CDKN2A和CDKN2B基因在DLBCL中呈低水平表达，与疾病进展和患者预后有关，可作为反映其生物学行为和评估患者临床疗效的分子标志物。

关键词：淋巴瘤大细胞弥漫型基因表达反转录聚合酶链反应

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