检索结果-内蒙古大学图书馆

优化反向PCR法对hTF转基因小鼠整合位点旁侧序列分析

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中国医药生物技术 2011年第3期6卷 228-232页

作者：谢俊许淼龚秀丽曲立娟颜景斌黄英上海交通大学医学院 200025 上海市儿童医院上海医学遗传研究所/卫生部医学胚胎与分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室 200040

自1982年世界上首次通过转基因动物技术获得＂巨鼠＂[1]以来,转基因动物的研究发展迅速。随着多种转基因动物的成功获得,研究者设想利用动物表达外源基因,以动物个体作为一个反应器来生产有价值的蛋白质。

关键词：转基因小鼠序列分析整合位点 PCR法转基因动物技术 hTF 优化外源基因

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应用实时荧光定量PCR测定牛体细胞端粒长度

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中国畜牧兽医 2010年第9期37卷 154-158页

作者：吕昆林丹许淼朱怡文黄英上海交通大学医学院上海市儿童医院上海医学遗传研究所卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室上海市生殖与胚胎工程重点实验室上海200040

本研究为了验证应用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative PCR,Q-PCR)测定牛基因组端粒长度的可行性,选取18个不同来源牛耳成纤维细胞抽提基因组DNA为样本,对Q-PCR和经典的Southern印迹法进行了相关性分析。结果显示,Q-PCR测定端粒长... 详细信息

本研究为了验证应用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative PCR,Q-PCR)测定牛基因组端粒长度的可行性,选取18个不同来源牛耳成纤维细胞抽提基因组DNA为样本,对Q-PCR和经典的Southern印迹法进行了相关性分析。结果显示,Q-PCR测定端粒长度相对T/S为1.16±0.24,Southern印迹法测量端粒平均TRF值为16.99 kb±0.85 kb,两种方法获得的结果相关性分析R2=0.5612(P<0.01),因此实时荧光定量PCR是一种测定牛基因组端粒长度的可靠的方法。

关键词：荧光定量聚合酶链式反应印迹法牛体细胞端粒长度

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奶牛体外受精胚胎的性别控制研究

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中国畜牧兽医 2010年第11期37卷 119-122页

作者：李晓晨李华蔡勤曹辉黄英上海交通大学附属儿童医院上海医学遗传研究所上海200040 上海交通大学医学院上海200025 卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海200040

为加速母牛胚胎的生产,实现性控制胚胎产业化和体外扩繁优质品种的奶业工程发展,本研究在体外受精技术(invitro fertilization,IVF)不断成熟和完善的基础上,通过对牛非性控IVF胚胎与常规人工受精体内胚胎移植的妊娠成功率及其两者出生... 详细信息

为加速母牛胚胎的生产,实现性控制胚胎产业化和体外扩繁优质品种的奶业工程发展,本研究在体外受精技术(invitro fertilization,IVF)不断成熟和完善的基础上,通过对牛非性控IVF胚胎与常规人工受精体内胚胎移植的妊娠成功率及其两者出生后牛的性别比例进行比较分析,结果发现,两组妊娠成功率基本相同,且IVF胚胎出生的公牛比例高于体内胚;采用性控和非性控精液进行IVF试验,并对非性控IVF胚胎及性控IVF胚胎用牛Y染色体性别决定特异基因(SRY)核心序列进行分子生物学性别鉴定,结果显示,性控IVF胚胎的公牛比例显著低于普通IVF胚胎;此外,作者还比较了性控IVF与普通非性控IVF的囊胚发育率,结果显示两者并无显著差异。以上研究结果证明,体外扩繁优质良种母牛的奶业工程必须依靠性别控制体外授精技术来提高其效率和有效性。

关键词：牛体外扩繁技术体外受精胚胎移植性别控制

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不同亚种牛卵母细胞克隆效率和胚胎移植效果分析

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上海交通大学学报（农业科学版） 2010年第4期28卷 305-309页

作者：颜昊严忠海李华黄淑帧曾凡一曾溢滔上海交通大学医学遗传研究所卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海200040

在体细胞核移植(克隆)试验中,作为受体细胞的卵母细胞是制约克隆效率的重要因素之一。本文通过对鲁西黄牛和荷斯坦奶牛进行活体取卵(OPU)试验,并以两个不同亚种的卵母细胞分别作为受体细胞进行奶牛体细胞克隆和胚胎移植试验,经卵母细胞... 详细信息

在体细胞核移植(克隆)试验中,作为受体细胞的卵母细胞是制约克隆效率的重要因素之一。本文通过对鲁西黄牛和荷斯坦奶牛进行活体取卵(OPU)试验,并以两个不同亚种的卵母细胞分别作为受体细胞进行奶牛体细胞克隆和胚胎移植试验,经卵母细胞克隆效率和胚胎移植效果分析,探讨以鲁西黄牛代替荷斯坦奶牛作为卵母细胞的供体的可行性。结果显示,夏季鲁西黄牛OPU的效果更好,用鲁西黄牛卵母细胞构建的重构胚的融合率显著高于荷斯坦奶牛;鲁西黄牛卵母细胞形成的克隆胚移植后,其妊娠率、产犊率和活产率与荷斯坦奶牛相当;采用不同亚种克隆胚和不同类型受体牛互相组合进行胚胎移植,结果表明亚种内移植组妊娠率明显高于亚种间移植组,而且亚种内移植组非妊娠牛的返情时间也明显推后。以上结果说明,鲁西黄牛可以代替荷斯坦奶牛作为卵母细胞的供体和胚胎移植受体牛;不同亚种受体牛与克隆胚的适当组合可以显著提高胚胎移植的效果。本研究为以后开展不同亚种间克隆提供了可行性参考。

关键词：鲁西黄牛荷斯坦奶牛卵母细胞体细胞核移植胚胎移植

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卵母细胞特异表达φC31整合酶载体pZP3-INT的构建及其在小鼠卵母细胞中的表达

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遗传 2009年第6期31卷 595-599页

作者：徐焕宇龚秀丽郭歆冰马睛雯曾溢滔上海交通大学医学遗传研究所卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海200040

链霉菌噬菌体φC31整合酶是一种位点特异性重组酶(Site-specific recombinase,SSR),可介导链霉菌噬菌体attP位点(Phage attachment site)和链霉菌基因组attB位点(Bacterial attachment site)间的单向重组。为探讨它能否应用于卵母细胞... 详细信息

链霉菌噬菌体φC31整合酶是一种位点特异性重组酶(Site-specific recombinase,SSR),可介导链霉菌噬菌体attP位点(Phage attachment site)和链霉菌基因组attB位点(Bacterial attachment site)间的单向重组。为探讨它能否应用于卵母细胞特定基因的重组,文章采用卵巢针刺取卵法采集生发泡(GV)期小鼠卵母细胞,将卵透明带糖蛋白3(ZP3)启动子驱动的φC31整合酶表达载体pZP3-INT和检测φC31整合酶位点特异性重组功能的重组质粒载体pBCPB+,通过显微注射导入到小鼠卵母细胞中。培养48h后,RT-PCR检测φC31整合酶mRNA表达以及PCR检测pBCPB+载体发生重组的情况。结果表明:载体pZP3-INT在卵母细胞中表达φC31整合酶mRNA;并且pBCPB+载体发生了位点特异性重组,提示φC31整合酶在卵母细胞中可以介导位点特异性重组反应。

关键词：卵母细胞卵透明带糖蛋白3 ФC31整合酶基因操作位点特异性重组

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受精后精子线粒体的命运

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生殖与避孕 2009年第4期29卷 244-248页

作者：周在威任兆瑞上海交通大学医学院医学遗传研究所卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市生殖与胚胎工程重点实验室上海200040

人们普遍认为线粒体基因的遗传方式为母系遗传,精子线粒体在各种动物胚胎中的命运在很大程度上取决于核基因组与线粒体基因组间的相容性,而与精子线粒体相关的有些细胞组分被观察到能够在受精过程中得到传递,并且父系线粒体的遗传也在... 详细信息

人们普遍认为线粒体基因的遗传方式为母系遗传,精子线粒体在各种动物胚胎中的命运在很大程度上取决于核基因组与线粒体基因组间的相容性,而与精子线粒体相关的有些细胞组分被观察到能够在受精过程中得到传递,并且父系线粒体的遗传也在患者和种间杂交中被发现。然而用ICSI与IVF产生的正常后代中并没有发现父系mtDNA,反而在异常胚胎中检测到父系mtDNA.。本文通过对多种动物(如人、牛、小鼠和大鼠)精子线粒体在受精后的生物学特征进行总结,分析了其消失的可能机制及产生这种结果的原因。

关键词：精子线粒体命运

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低渗介导抽提牛精子线粒体DNA

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生殖与避孕 2009年第9期29卷 576-580页

作者：周在威任兆瑞上海交通大学医学院医学遗传研究所卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市生殖与胚胎工程重点实验室上海 200040

目的:建立一种通过低渗介导的简便、有效的抽提冷冻牛精子线粒体DNA(mtDNA)的方法。方法:低渗处理牛精子,结合去污剂破膜释放精子线粒体,饱和酚去蛋白,无水乙醇沉淀DNA,设计线粒体特异性引物进行PCR分析以及通过NlaⅢ酶切对抽提获得的mt... 详细信息

目的:建立一种通过低渗介导的简便、有效的抽提冷冻牛精子线粒体DNA(mtDNA)的方法。方法:低渗处理牛精子,结合去污剂破膜释放精子线粒体,饱和酚去蛋白,无水乙醇沉淀DNA,设计线粒体特异性引物进行PCR分析以及通过NlaⅢ酶切对抽提获得的mtDNA作酶切鉴定,并以水解法作对照。结果:低渗法获得的mtDNA的PCR产物电泳分析和酶切鉴定都清楚地显示与预期相符的目的条带,而对照组水解法抽提冷冻牛精子mtDNA存在稳定性差及重复性差等缺点。结论:低渗介导是一种抽提精子mtDNA的有效方法。

关键词：精子线粒体 DNA 低渗抽提牛

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DNA甲基化修饰与体细胞核移植的关系

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生命科学 2009年第4期21卷 542-548页

作者：颜昊上海交通大学医学遗传研究所卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室上海市胚胎与生殖工程重点实验室

成功的体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)有赖于供体细胞的基因组通过重编程恢复到支持胚胎发育的全能性状态。但是,相比起自然受精后发生的重编程来说,要诱导一个已经分化的供体细胞重编程为全能性状态,往往在时间上... 详细信息

成功的体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)有赖于供体细胞的基因组通过重编程恢复到支持胚胎发育的全能性状态。但是,相比起自然受精后发生的重编程来说,要诱导一个已经分化的供体细胞重编程为全能性状态,往往在时间上和程度上都是迟滞的和不完全的。同时,DNA甲基化状况又是影响克隆胚胎发育和基因表达的关键因素之一。因此,深入研究主导DNA甲基化修饰的分子机理,探讨DNA去甲基化在供体细胞重编程过程中扮演的角色,从而进一步提高供体细胞重编程效率,提高克隆胚的发育潜能,这对于体细胞核移植效率的提高具有重要的意义。

关键词： DNA甲基化体细胞核移植重构胚表观重编程

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克隆动物的端粒长度研究进展

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中国畜牧兽医 2009年第11期36卷 99-104页

作者：吕昆林丹黄英上海交通大学医学院医学遗传研究所卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室上海市生殖与胚胎工程重点实验室上海200040

端粒是真核染色体分子末端的DNA区域,是由重复的DNA序列和端粒结合蛋白形成的DNA-蛋白复合物,对于染色体的复制和稳定起着重要作用。近年来研究结果表明,端粒长度的缩短与人类疾病和衰老密切相关。同时,体细胞核移植(somatic cell nucle... 详细信息

端粒是真核染色体分子末端的DNA区域,是由重复的DNA序列和端粒结合蛋白形成的DNA-蛋白复合物,对于染色体的复制和稳定起着重要作用。近年来研究结果表明,端粒长度的缩短与人类疾病和衰老密切相关。同时,体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)作为一种有效的无性生殖手段,越来越多的在科研和生产中得到应用。由于体细胞核移植通常采用体细胞作为核供体细胞,因而供体细胞的端粒长度、核移植后重组胚的端粒在胚胎早期是否会被修复、端粒长度是否有变化等问题,对于研究克隆动物的重编程、发育生物学都有着重要的指导意义。作者将对端粒的结构和端粒长度的机理研究、在克隆哺乳动物中对端粒长度的探索研究,以及近几年来关于端粒方面的一些研究进展加以阐述。

关键词：端粒端粒长度哺乳动物体细胞核移植

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牛体外受精胚胎工厂化生产技术的探讨

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中国畜牧兽医 2009年第3期36卷 212-214页

作者：李松任兆瑞上海交通大学医学院医学遗传研究所卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市生殖与胚胎工程重点实验室上海200040

牛体外受精胚胎工厂化生产的目的是获得大量优良遗传性状的胚胎,用于胚胎移植。作者就该技术的5个主要环节,即活体采卵、体外成熟、体外受精、体外培养、胚胎冷冻及发展前景等作一综述。

关键词：牛体外受精胚胎工厂化生产

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