检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2024年第9期37卷 1056-1061,1069页

作者：冯光恩朱晓霞贾瑜琦柴蔚然陈崇伟于保锋山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室山西太原030001 上海交通大学医学院附属第九人民医院辅助生殖科上海200011 山西医科大学第二医院骨科山西太原030001

目的探讨氧化应激对人卵巢颗粒细胞生长发育的影响。方法体外培养人卵巢颗粒细胞KGN,用不同浓度的过氧化氢(H2O2)处理KGN细胞,采用CCK8法检测细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞内活性氧族(reactive oxygen species,ROS)产生量及细胞凋亡... 详细信息

目的探讨氧化应激对人卵巢颗粒细胞生长发育的影响。方法体外培养人卵巢颗粒细胞KGN,用不同浓度的过氧化氢(H2O2)处理KGN细胞,采用CCK8法检测细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞内活性氧族(reactive oxygen species,ROS)产生量及细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞自噬和凋亡相关蛋白的表达水平。结果随着H2O2浓度的升高,颗粒细胞增殖受到明显抑制,且呈剂量依赖性(F分别为4.906、4.825、4.653、4.614和4.587,P均<0.001)。细胞内ROS水平随着H2O2浓度的增加而升高,同时细胞凋亡率不断升高;加入抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)后,ROS水平恢复,细胞凋亡率下降,表明细胞凋亡与ROS的产生有关。H2O2处理后,KGN细胞中LC3-Ⅱ、cleaved-caspase3蛋白的表达水平显著升高(t分别为4.809和5.789,P均<0.05),LC3-Ⅰ、BCL-2、P62蛋白的表达水平显著降低(t分别为4.014、3.982和4.415,P均<0.05),表明H2O2能够诱导KGN细胞的自噬和凋亡。结论H2O2能够抑制人卵巢颗粒细胞增殖,诱导其自噬凋亡。氧化应激状态抑制人卵巢颗粒细胞的生长发育,降低卵母细胞质量,卵巢储备功能下降。

关键词：过氧化氢人卵巢颗粒细胞氧化应激

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肾缺血／再灌注损伤中近曲小管Legumain表达的研究

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徐州医科大学学报 2017年第5期37卷 281-286页

作者：高帅夏安周侯筱宇郭义峰上海交通大学附属第一人民医院泌尿外科上海200080 徐州医科大学药理学教研室江苏徐州221004 徐州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学研究中心

目的建立小鼠肾缺血／再灌注损伤模型，观察小鼠肾缺血／再灌注后的损伤、Legumain的表达，探讨Legumain在小鼠肾脏缺血／再灌注损伤中的作用及可能机制。方法30只C57BL／6小鼠行右肾切除后随机分为缺血／再灌注损伤组（IRI组）、对照... 详细信息

目的建立小鼠肾缺血／再灌注损伤模型，观察小鼠肾缺血／再灌注后的损伤、Legumain的表达，探讨Legumain在小鼠肾脏缺血／再灌注损伤中的作用及可能机制。方法30只C57BL／6小鼠行右肾切除后随机分为缺血／再灌注损伤组（IRI组）、对照组，夹闭左肾蒂45min缺血，缺血后再灌注不同时间（1h、6h、24h），检测各组小鼠血肌酐、尿素氮水平，观察肾组织形态学变化，免疫组化技术与蛋白印迹分析Legumain的表达。结果IRI组肾脏经过缺血／再灌注后，血肌酐及尿素氮水平在1h、6h、24h再灌注时间点较对照组明显升高（P〈0．05）。IRI组小鼠肾损伤程度较对照组明显加重，表现为肾小管细胞坏死脱落、间质水肿、炎症细胞浸润增多，损伤随着再灌注时间的延长而加重。IRI组肾近曲小管中Legumain的表达较对照组明显增强（P〈0．01）。结论肾缺血后再灌注会造成损伤，导致肾功能下降、肾小管细胞损伤坏死、Legumain表达增强，Legumain的表达变化可能在肾缺血／再灌注损伤中起重要作用。

关键词：肾脏缺血/再灌注损伤 Legumain

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FAK突变体的亚细胞定位及生物学特性

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中华临床实验室管理电子杂志 2014年第1期2卷 32-36页

作者：方旭前刘湘帆姚玲顾志冬陈长强倪培华郑新民樊绮诗上海交通大学医学院附属瑞金医院北院检验科 201801 上海交通大学医学院检验系上海交通大学基础医学院生化与分子生物学教研室

目的探讨外显子33缺失型黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)突变体(FAK-Del33)的亚细胞定位及生物学特性。方法采用基础实验研究设计。将野生型FAK以及突变型FAK-Del33分别构建到pEGFP表达载体,并转染乳腺癌细胞株,以研究分析其细... 详细信息

目的探讨外显子33缺失型黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)突变体(FAK-Del33)的亚细胞定位及生物学特性。方法采用基础实验研究设计。将野生型FAK以及突变型FAK-Del33分别构建到pEGFP表达载体,并转染乳腺癌细胞株,以研究分析其细胞表达和定位情况。另构建过表达FAK或FAK-Del33的MDA-MB-468乳腺癌稳转细胞株,研究评价其细胞表达和体外克隆形成能力。结果构建FAK-GFP融合蛋白表达载体转染MDA-MB-468后的细胞定位显示,野生型FAK在胞浆中弥散分布,而FAK突变体蛋白在胞浆中呈点状不均匀分布,并聚集成簇。经限制性内切酶酶切分析与测序分析,成功构建出过表达FAK的慢病毒载体,以293T细胞包装的重组慢病毒能够高效感染乳腺癌细胞;经抗生素puromycin筛选和荧光定量PCR鉴定,成功筛选到稳定表达FAK的细胞株。在软琼脂克隆形成实验中,FAK野生型的克隆形成数为(335±48)/1000个,FAK突变体为(735±91)/1000个,后者对MDA-MB-468乳腺癌稳转细胞株的增殖能力高于前者(t=9.437,P<0.01)。结论初步研究表明外显子33缺失可改变FAK的亚细胞定位;并能增强肿瘤细胞株的体外克隆形成能力,这种FAK突变体可能参与肿瘤的发生发展。

关键词：剪接突变体酪氨酸激酶黏着斑激酶肿瘤

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结核分枝杆菌Rv0315重组蛋白ELISPOT辅助诊断活动性肺结核的应用价值

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上海交通大学学报（医学版） 2013年第7期33卷 970-974页

作者：周业成陈翠翠叶娟赵俊伟玄松花杨志荣张舒林四川大学生命科学学院成都610065 郑州大学第一附属医院郑州450001 河南中医学院分子生物学教研室郑州450008 上海交通大学基础医学院病原生物学教研室上海200025

目的用酶联免疫斑点试验(ELISPOT)评价结核分枝杆菌重组蛋白Rv0315在活动性肺结核病诊断中的应用价值。方法选取初治肺结核病患者25例和健康体检者28名分别作为结核组和对照组,应用Rv0315蛋白作为抗原对受试者外周血单核细胞进行ELISPO... 详细信息

目的用酶联免疫斑点试验(ELISPOT)评价结核分枝杆菌重组蛋白Rv0315在活动性肺结核病诊断中的应用价值。方法选取初治肺结核病患者25例和健康体检者28名分别作为结核组和对照组,应用Rv0315蛋白作为抗原对受试者外周血单核细胞进行ELISPOT检测斑点形成细胞(SFCs)的数量,判断结核分枝杆菌感染情况,并与结核早期分泌靶向抗原(ESAT6)和培养滤液蛋白10(CFP10)抗原的检测结果进行比较。结果以Rv0315、EAST6和CFP10作为抗原,用ELISPOT方法检测结核分枝杆菌感染的敏感度分别为84.0%(21/25)、80.0%(20/25)和92.0%(23/25),特异度分别为89.2%(25/28)、89.2%(25/28)和92.8%(26/28),其中Rv0315的敏感度高于EAST6但低于CFP10。结论应用重组蛋白Rv0315作为抗原建立的ELISPOT方法具有应用于活动性肺结核病辅助诊断的潜在价值。

关键词：结核分枝杆菌 Rv0315 酶联免疫斑点技术细胞免疫

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结核分枝杆菌特异性抗原ESXO的重组制备及其免疫原性评估

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上海交通大学学报（医学版） 2012年第11期32卷 1426-1429,1447页

作者：封莉叶娟王凤平赵俊伟吴兴福张舒林江苏省苏州市第五人民医院检验科苏州215007 河南中医学院分子生物学教研室郑州450008 上海交通大学基础医学院病原生物学教研室上海200025

目的评估结核分枝杆菌(MTB)重组特异性抗原ESXO在大肠埃希菌中的高效表达,并评价其免疫原性。方法采用常规分子克隆方法获得MTB重组蛋白ESXO。酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测84份确诊结核病(TB)患者血清和48份健康人血清中相应的抗结... 详细信息

目的评估结核分枝杆菌(MTB)重组特异性抗原ESXO在大肠埃希菌中的高效表达,并评价其免疫原性。方法采用常规分子克隆方法获得MTB重组蛋白ESXO。酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测84份确诊结核病(TB)患者血清和48份健康人血清中相应的抗结核ESXO抗体水平,评价血清学抗原活性,并与结核早期分泌蛋白ESAT-6和CFP-10的检测结果进行比较。结果重组特异性抗原ESXO在大肠杆菌中获得成功表达,其在*** BL 21 plysS(DE3)中以可溶性和包涵体两种形式存在,相对分子质量(27 300)与预期相符,血清学抗原活性评估结果显示其特异度和敏感度分别为94.0%(45/48)和32.1%(27/84),特异度与ESAT-6和CFP-10相当,敏感度高于ESAT-6。结论结核特异性抗原ESXO有望成为新的TB诊断与疫苗设计的候选抗原。

关键词：分枝杆菌,结核克隆 ESXO 基因表达血清学诊断

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放疗联合溶瘤病毒治疗对肿瘤细胞的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2011年第6期31卷 848-851页

作者：姚玉亭钱关祥葛盛芳上海交通大学医学院附属第九人民医院眼科上海 200011 基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海 200025

溶瘤病毒治疗是近年来兴起的一种新的肿瘤基因治疗途径。在溶瘤腺病毒被批准用于临床治疗肿瘤的情况下,溶瘤病毒治疗与放疗相结合将对恶性肿瘤的治疗产生重要影响。文章就放疗联合溶瘤病毒治疗对肿瘤细胞的杀伤作用作一综述。

关键词：溶瘤病毒放疗肿瘤基因治疗

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不同刺激物对过敏性哮喘产妇脐血中嗜碱性粒细胞分泌IL-4的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2011年第7期31卷 962-966页

作者：杨玲许以平姚苏杭熊瑛祝捷王克敏上海交通大学医学院附属新华医院老年科上海200092 上海交通大学医学院附属仁济医院过敏中心上海200127 上海交通大学医学院附属新华医院妇产科上海200092 上海交通大学医学院附属仁济医院妇产科上海200127 上海交通大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025

目的研究不同刺激物干预对过敏性哮喘产妇新生儿脐血中嗜碱性粒细胞分泌白介素4(IL-4)的影响。方法将源自过敏性哮喘产妇和健康产妇的新生儿脐血分为哮喘组(n=12)和正常对照组(n=16),采用流式细胞术分选提纯嗜碱性粒细胞,锥虫蓝染色鉴... 详细信息

目的研究不同刺激物干预对过敏性哮喘产妇新生儿脐血中嗜碱性粒细胞分泌白介素4(IL-4)的影响。方法将源自过敏性哮喘产妇和健康产妇的新生儿脐血分为哮喘组(n=12)和正常对照组(n=16),采用流式细胞术分选提纯嗜碱性粒细胞,锥虫蓝染色鉴定细胞活性。在两组提纯后的嗜碱性粒细胞中分别加入ACM缓冲液(阴性对照)、肽聚糖(PGN)、粉尘螨浸液及甘露醇,采用ELISA法测定细胞培养上清液中IL-4的质量浓度。结果细胞分选结果显示:嗜碱性粒细胞纯度为(95.64±3.15)%,回收率为(60.22±7.18)%;锥虫蓝染色显示细胞活性为(99.4±0.89)%。与阴性对照比较,经PGN、粉尘螨浸液和甘露醇刺激后的哮喘组细胞培养上清液中IL-4质量浓度显著升高(P<0.05或P<0.01);经PGN和甘露醇刺激后,哮喘组细胞培养上清液中IL-4质量浓度显著高于正常对照组(P<0.05和P<0.01)。结论 PGN、粉尘螨及甘露醇可刺激过敏性哮喘产妇新生儿脐血中嗜碱性粒细胞IL-4的分泌增加,通过诱导辅助性T淋巴细胞亚群Th2细胞的分化,参与哮喘的发生和发展。

关键词：过敏性哮喘嗜碱性粒细胞脐血白介素4

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急性糖负荷对正常大鼠血管功能的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2011年第11期31卷 1560-1563,1573页

作者：郑俊王渊梁云兴钟梅芳杨洁陈红上海交通大学基础医学院药理学教研室上海200025 上海交通大学医学院附属仁济医院内分泌科上海200001 上海医药高等专科学校基础部上海201318 上海交通大学基础医学院生物化学与细胞分子生物学教研室上海200025

目的探讨急性糖负荷对正常大鼠血管功能的影响及机制。方法取Wistar大鼠(n=5)的胸主动脉进行离体血管功能测定。血管环在含不同浓度葡萄糖(25、50、100 mmol/L)的高糖溶液(高糖组)和含不同浓度甘露醇(25、50、100 mmol/L)的高渗溶液(高... 详细信息

目的探讨急性糖负荷对正常大鼠血管功能的影响及机制。方法取Wistar大鼠(n=5)的胸主动脉进行离体血管功能测定。血管环在含不同浓度葡萄糖(25、50、100 mmol/L)的高糖溶液(高糖组)和含不同浓度甘露醇(25、50、100 mmol/L)的高渗溶液(高渗对照组)中分别孵育10 min,设立空白对照组。运用张力换能器测定各组血管对苯肾上腺素(PE)的收缩反应及对乙酰胆碱(Ach)的舒张反应,分别采用DCF法和DAF-FM荧光探针检测血管环活性氧(ROS)和一氧化氮(NO)的相对生成量。结果空白对照组、高糖组和高渗对照组血管对1μmol/L PE诱导的收缩反应比较差异无统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,高糖组和高渗对照组对1μmol/L Ach诱导的舒张反应随葡萄糖浓度和渗透压的升高呈逐渐减弱趋势(P<0.05),且高渗对照组舒张反应的减弱程度较高糖组更为显著(P<0.05)。高糖组和高渗对照组血管环NO相对生成量以及高糖组ROS相对生成量均显著高于空白对照组(P<0.05或P<0.01),高渗对照组ROS相对生成量与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论急性糖负荷可使血管舒张功能减弱,并呈现一定的浓度依赖性,可能与ROS生成量增加造成内皮功能损伤有关;高渗透压导致NO生成过多也可能作为自由基损伤血管。

关键词：急性糖负荷渗透压血管功能活性氧一氧化氮

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雄激素和高脂饮食对雌性大鼠卵巢、垂体、肾上腺超微结构的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2011年第10期31卷 1393-1397页

作者：翟华玲吴晖张岚陆颖理上海交通大学医学院附属第九人民医院内分泌代谢科上海200011 上海交通大学基础医学院生物化学与细胞分子生物学教研室上海200025

目的研究雄激素和高脂饮食对雌性SD大鼠卵巢、垂体和肾上腺超微结构的影响。方法 24只21日龄雌性SD大鼠随机分为对照组、雄激素注射组和雄激素注射+高脂饮食组。8周后,检测空腹血糖及血清胰岛素、睾酮、三酰甘油和胆固醇水平;透射电子... 详细信息

目的研究雄激素和高脂饮食对雌性SD大鼠卵巢、垂体和肾上腺超微结构的影响。方法 24只21日龄雌性SD大鼠随机分为对照组、雄激素注射组和雄激素注射+高脂饮食组。8周后,检测空腹血糖及血清胰岛素、睾酮、三酰甘油和胆固醇水平;透射电子显微镜观察卵巢、垂体、肾上腺组织超微结构。结果雄激素注射组、雄激素注射+高脂饮食组大鼠血糖、胰岛素、睾酮、三酰甘油、胆固醇水平均高于对照组;卵巢呈多囊性改变,垂体、肾上腺超微结构显示凋亡细胞增多。雄激素注射+高脂饮食组大鼠肾上腺上皮细胞的细胞质内脂滴增多。结论雄激素可诱导多囊卵巢的形成,同时可导致血糖升高;联合高脂饮食可构建较理想的大鼠多囊卵巢综合征模型。

关键词：多囊卵巢综合征超微结构雄激素高脂饮食

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抗TNF-α单链抗体噬菌体展示文库的建立和鉴定

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中国生物化学与分子生物学报 2010年第10期26卷 930-936页

作者：杨涛柴蔚然杨利军程牛亮解军牛勃山西医科大学生物化学与分子生物学教研室省部共建细胞生理学教育部重点实验室太原030001 上海交通大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025 首都儿科研究所北京100020

应用噬菌体展示技术构建抗肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor α,TNF-α)单链抗体(single chain Fv,scFv)文库,从中筛选抗TNF-αscFv并进行鉴定.利用重组人TNF-α(rhTNF-α)免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因,经重叠延伸反应将VH和VL... 详细信息

应用噬菌体展示技术构建抗肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor α,TNF-α)单链抗体(single chain Fv,scFv)文库,从中筛选抗TNF-αscFv并进行鉴定.利用重组人TNF-α(rhTNF-α)免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因,经重叠延伸反应将VH和VL基因拼接成scFv基因,以SfiⅠ/NotⅠ位点定向插入pCANTAB 5E噬菌粒载体,转化*** TG1,构建了库容为4.6×108的抗TNF-α单链抗体库.对抗体库进行3轮富集筛选后,ELISA检测阳性克隆的抗原特异性,取1株阳性克隆进行测序分析.结果表明,抗TNF-αscFv基因序列长774bp,编码258个氨基酸.将此阳性克隆转化***2151,IPTG诱导可溶性scFv的表达,经SDS-PAGE和Western印迹分析,scFv的分子量约为28kD.经亲和纯化后的scFv可与rhTNF-α结合,并可中和由rhTNF-α引起的L929细胞毒性.本文利用噬菌体抗体库筛选到了高亲和力的抗TNF-αscFv,为研制临床免疫治疗的新型抗体奠定了实验基础.

关键词：噬菌体展示技术肿瘤坏死因子-α 单链抗体

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