检索结果-内蒙古大学图书馆

Ca^(2+)和CaN凋亡信号通路参与皮质酮诱导的Leydig细胞凋亡中FasL的表达

中国男科学杂志 2006年第2期20卷 4-9页

作者：陈亮王骞高惠宝上海交通大学医学院生化与分子生物学教研室上海200025

目的观察在皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡中,Ca2+和钙调神经磷酸酶(CaN)依赖的信号通路是否参与FasL表达的调控。方法利用钙定性探针Fluo-3/AM检测皮质酮作用下的Leydig细胞中Ca2+浓度变化。通过酶底物法测定CaN活性。以Westernblot检... 详细信息

目的观察在皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡中,Ca2+和钙调神经磷酸酶(CaN)依赖的信号通路是否参与FasL表达的调控。方法利用钙定性探针Fluo-3/AM检测皮质酮作用下的Leydig细胞中Ca2+浓度变化。通过酶底物法测定CaN活性。以Westernblot检测FasL表达。用Annexin-Ⅴ-FITC和PI双标评价Leydig细胞凋亡率。结果经超生理剂量皮质酮处理的Leydig细胞中出现Ca2+浓度升高,CaN活性增加及FasL表达增加。环孢菌素A可抑制CaN活性,使FasL表达下调,细胞凋亡率下降。结论Ca2+和CaN依赖的信号通路参与了皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡;CaN介导了由Ca2+引发的FasL表达,Ca2+和CaN在大鼠Leydig细胞凋亡过程中起重要作用。

关键词：钙皮质酮 Leydig细胞凋亡

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核基质结合区修饰的附着体载体介导的EGFP基因体外表达

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上海交通大学学报（医学版） 2006年第11期26卷 1233-1238页

作者：梅文瀚吴兆平徐荣婷钱关祥卢健上海交通大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025

目的建立一个非病毒介导外源基因高效转移和稳定表达体系。方法采用EB病毒(EBV)来源的附着体质粒载体,并结合顺式作用元件IFN-MAR构建重组质粒pcDNA3-EGFP-EBVR和pcDNA3-EGFP-EBNA1-MAR。采用荧光显微镜观察并摄片,FACS及逆转录-聚合酶... 详细信息

目的建立一个非病毒介导外源基因高效转移和稳定表达体系。方法采用EB病毒(EBV)来源的附着体质粒载体,并结合顺式作用元件IFN-MAR构建重组质粒pcDNA3-EGFP-EBVR和pcDNA3-EGFP-EBNA1-MAR。采用荧光显微镜观察并摄片,FACS及逆转录-聚合酶链反应检测EGFP表达阳性的COS-7细胞比例、荧光表达强度及EGFP基因的转录。通过Southern印迹和质粒还原实验分析质粒DNA在细胞中存在的形式。结果本实验构建的重组质粒载体pcDNA3-EGFP-EBVR和pcDNA3-EGFP-EBNA1-MAR在转染进入COS-7细胞后以染色体外附着体的形式存在。由于EBVR的存在,可以在体外获得EGFP较长时间的稳定表达。IFN-MAR替代O riP后,仍可在体外获得EGFP的稳定表达。结论MAR修饰的EBV附着体载体可以在体外获得外源基因高效稳定的表达。

关键词：基因治疗 EB病毒复制子附着体质粒载体核基质结合区

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Egr参与调控皮质酮处理的睾丸Leydig细胞中FasL启动子的活性

引用

中国男科学杂志 2006年第4期20卷 15-19页

作者：冯星柴蔚然高惠宝上海交通大学医学院生化与分子生物学教研室上海200025

目的观察转录因子Egr(early growth response factor,早期生长反应因子)是否参与调控皮质酮处理的Leydig细胞中FasL启动子的活性。方法经RT-PCR检测皮质酮处理的Leydig细胞中Egr-2及Egr-3的mRNA的水平,采用双荧光素酶报告基因系统评价Eg... 详细信息

目的观察转录因子Egr(early growth response factor,早期生长反应因子)是否参与调控皮质酮处理的Leydig细胞中FasL启动子的活性。方法经RT-PCR检测皮质酮处理的Leydig细胞中Egr-2及Egr-3的mRNA的水平,采用双荧光素酶报告基因系统评价Egr-2和Egr-3表达载体对Leydig细胞中FasL启动子活性的影响。结果Leydig细胞经皮质酮处理后,细胞内Egr-2及Egr-3在转录水平呈显著上调。双荧光素酶报告基因检测发现,Egr-2及Egr-3表达载体均可上调皮质酮处理的Leydig细胞中FasL启动子的活性,并以Egr-3的作用为显著。结论Egr-2及Egr-3参与调控皮质酮处理的Leydig细胞中FasL启动子的活性。

关键词： Egr FasL启动子 Leydig细胞皮质酮

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hVEGF基因工程生物膜对全层皮肤缺损创面愈合的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2006年第9期26卷 1015-1018页

作者：赵雷王莉姜叙诚郑林张帆赵涵芳许伟榕上海交通大学基础医学院病理学教研室上海200025 上海交通大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025

目的探讨含人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)重组质粒的成纤维细胞种植的基因工程生物膜对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的作用。方法在SD大鼠背部皮肤制作深达皮肤全层的正方形创面,实验组大鼠创面上覆含hVEGF重组质粒的成纤维细胞种植的基... 详细信息

目的探讨含人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)重组质粒的成纤维细胞种植的基因工程生物膜对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的作用。方法在SD大鼠背部皮肤制作深达皮肤全层的正方形创面,实验组大鼠创面上覆含hVEGF重组质粒的成纤维细胞种植的基因工程生物膜;对照组分别在大鼠创面上覆整合空质粒的成纤维细胞的生物膜、空白生物膜和仅覆切口膜。采用形态学和免疫组化方法,观察术后3、7、14、29 d实验组和对照组大鼠创面肉芽组织生长及创面愈合情况。结果在各时相实验组中新生的毛细血管数以及血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达均显著高于对照组(P<0.01),且VEGF表达与新生毛细血管数正相关。结论将含hVEGF重组质粒的成纤维细胞种植的基因工程生物膜覆盖于大鼠全层皮肤缺损创面,能使创面成纤维细胞持续、有效地表达VEGF,强有力地促进肉芽组织增生,有利于创面愈合。

关键词：人血管内皮细胞生长因子基因工程生物膜肉芽组织创伤愈合

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溶瘤病毒的研究进展

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上海交通大学学报（医学版） 2006年第5期26卷 544-547页

作者：沈晓娣钱关祥上海交通大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025

近年来,溶瘤病毒用于肿瘤治疗的研究发展非常迅速,有些溶瘤病毒已进入临床试验阶段,并取得了一些令人鼓舞的成果。文章简要综述了溶瘤病毒肿瘤治疗的靶向性、杀伤性、安全性和疗效监测。

关键词：溶瘤病毒肿瘤治疗靶向性杀伤性

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CArG调控元件辐射诱导活性的研究

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上海交通大学学报（医学版） 2006年第4期26卷 385-388页

作者：徐让卢健钱关祥上海交通大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025

目的构建含有人工合成CArG调控元件的荧光素酶报告基因重组质粒,研究该元件在多种肿瘤细胞中不同剂量放射线照射下的放射诱导活性。方法将含有9个串联的CCATATAAGG结构的CArG增强子与CMVIEbasalgenepromoter构成的嵌合调控元件插入到pGL... 详细信息

目的构建含有人工合成CArG调控元件的荧光素酶报告基因重组质粒,研究该元件在多种肿瘤细胞中不同剂量放射线照射下的放射诱导活性。方法将含有9个串联的CCATATAAGG结构的CArG增强子与CMVIEbasalgenepromoter构成的嵌合调控元件插入到pGL3Basic质粒,构建荧光素酶报告质粒。利用脂质体将该报告质粒瞬时转染肿瘤细胞株HeLa、A549、HepG2,给予不同剂量137Csγ射线照射,36h后检测荧光素酶活性,观察该调控序列的放射诱导活性。结果该CArG调控元件在低剂量放射线的诱导下能明显增强下游基因的表达,在3Gy的γ射线照射下诱导活性最强。结论人工合成的CArG调控元件在低剂量的放射线作用下能有效诱导下游基因的表达,在肿瘤的放射-基因治疗中具有较强的应用潜力。

关键词： CArG元件放射基因治疗辐射诱导活性肿瘤细胞

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MicroRNA抑制BCL2表达的初步研究

MicroRNA抑制BCL2表达的初步研究

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华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会

作者：赵涵芳黄胜林吴怡张兴黔上海交通大学医学院基础医学院生化与分子生物学教研室上海交通大学医学院基础医学院生化与分子生物学教研室上海交通大学医学院基础医学院生化与分子生物学教研室上海交通大学医学院基础医学院生化与分子生物学教研室

在实验中,我们发现一株细胞,用RT-PCR和western blot检测该株细胞BCL2的表达水平,发现转录水平上有较高的表达,而蛋白水平表达相对较低(与Hela-S3比较)。由于miRNA通常抑制的靶基因的翻译,因此我们考虑在这个细胞中BCL2是否受miRNA的调... 详细信息

在实验中,我们发现一株细胞,用RT-PCR和western blot检测该株细胞BCL2的表达水平,发现转录水平上有较高的表达,而蛋白水平表达相对较低(与Hela-S3比较)。由于miRNA通常抑制的靶基因的翻译,因此我们考虑在这个细胞中BCL2是否受miRNA的调控。利用miRNA靶位点搜索程序 TargetScan法,查找BCL2可能受调控的miRNA,发现miR-15a和miR-16可能调控BCL2的表达。经 BLAST(http:／／***／BLAST／,Search for short,nearly exact matches)搜索,找出在基因组中的定位,其序列在AF440619中,miR-15和miR-16串连排列在一起。从AF440619获取一段包含miR-15和miR-16的DNA序列,利用pemier5设计PCR引物,以正常人血液DNA为模板, PCR扩增,电泳回收并克隆了miR-15a和miR-16,构建pcDNA3-miR-15a-16,转染293细胞48h后收集细胞,抽提RNA,RT-PCR检测BCL2的表达水平,PCR结果显示pcDNA3-miR-15a-16对BCL2的转录水平无明显影响;抽提蛋白质western blot检测BCL2的表达水平,结果显示pcDNA3-miR-15a-16 与对照pCDNA3相比可抑制BCL2的表达。实验结果初步表明了BCL2蛋白质水平表达受miR-15a和 miR-16的调控。最近,Cimmino A报道了miR-15a和miR-16可抑制BCL2的表达,实验还认为过表达 miR-15a和miR-16可引起白血病细胞的凋亡是由于抑制BCL2的表达引起的,在我们的实验中也发现过表达miR-15a和miR-16可引起细胞明显的变化,但我们认为单独抑制BCL2的表达并不会引起细胞的凋亡,我们已有实验表明抑制BCL2的表达只是引起细胞对凋亡的敏感性增强,因此miR-15a和 miR-16可能引起其它凋亡相关基因的变化,这有待进一步研究。

关键词： MicroRNA 初步研究

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噬菌体展示技术构建重组人TNF-α单链抗体库

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上海交通大学学报（医学版） 2006年第2期26卷 155-158页

作者：柴蔚然杨涛胡晓年牛勃上海交通大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025 山西医科大学生物化学与分子生物学教研室中国协和医科大学基础研究所

目的应用噬菌体展示技术构建抗重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)的单链抗体库。方法利用噬菌体表面展示技术、绕过杂交瘤技术,提取经免疫BALB/c小鼠淋巴细胞总RNA,用相应引物扩增小鼠免疫球蛋白VH基因和VL基因,构建VH、VL抗体库。由L in... 详细信息

目的应用噬菌体展示技术构建抗重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)的单链抗体库。方法利用噬菌体表面展示技术、绕过杂交瘤技术,提取经免疫BALB/c小鼠淋巴细胞总RNA,用相应引物扩增小鼠免疫球蛋白VH基因和VL基因,构建VH、VL抗体库。由L inker-prim erm ix经重叠延伸反应将重链可变区基因与轻链可变区基因拼接成单链抗体。再用RS prim erm ix以单链抗体为模板进行第二次聚合酶链反应,从而获得全套抗rhTNF-α的单链抗体基因。以SfiⅠ/NotⅠ,位点定向插入pCANTAB-5E噬菌粒载体,转化大肠杆菌TG1后,经M13KO7辅助噬菌体拯救,构建成全套抗rhTNF-α单链抗体表面展示文库。结果成功构建了rhTNF-α全套单链抗体噬菌体表面展示文库。经M13KO7超感染后,噬斑计数滴度为2.1×1011pfu。结论rhTNF-α全套单链抗体噬菌体表面展示文库的构建,为研究rhTNF-α抗体结合位点,了解其结构与功能的关系以及研究用于临床免疫治疗的新型抗体打下了基础。

关键词：肿瘤坏死因子-α 单链抗体噬菌体展示技术重组人TNF-α单链抗体库

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皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡中caspase-3活化途径的研究

皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡中caspase-3活化途径的研究

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华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会

作者：王骞陈亮高惠宝上海交通大学医学院生化与分子生物学教研室上海交通大学医学院生化与分子生物学教研室上海交通大学医学院生化与分子生物学教研室

目的:超生理剂量的皮质酮(大鼠体内的糖皮质激素)可诱导大鼠Leydig细胞凋亡,使细胞数量减少,最终导致睾酮合成水平降低。皮质酮引起大鼠Leydig细胞凋亡的细胞内机制是一经死亡受体 Fas／FasL介导,其后伴有caspase-3激活的过程。但是casp... 详细信息

目的:超生理剂量的皮质酮(大鼠体内的糖皮质激素)可诱导大鼠Leydig细胞凋亡,使细胞数量减少,最终导致睾酮合成水平降低。皮质酮引起大鼠Leydig细胞凋亡的细胞内机制是一经死亡受体 Fas／FasL介导,其后伴有caspase-3激活的过程。但是caspase-3上游的caspase家族的其他成员(如 caspase8、9)在皮质酮诱导Leydig细胞凋亡中的作用尚未进一步探讨。本研究是在我们新近研究工作的基础上,评价在皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞凋亡中是否有caspase-8和caspase-9的参与,以进一步探讨此凋亡过程的胞内信号转导机制。方法:采用荧光分光光度法检测经皮质酮处理的大鼠Leydig 细胞中caspase-8活性,以DNA梯状电泳条带作为评价细胞凋亡的指标,观察caspase-8抑制剂是否能够抑制细胞凋亡,采用RT-PCR检测皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞中caspase-9的mRNA水平。结果:在皮质酮诱导的大鼠Leydig细胞中出现caspase-8活性增高,以12小时最为显著,升高的caspase -8的活性可被caspase-8抑制剂抑制,并导致Leydig细胞的凋亡过程被阻断。Leydig细胞中 caspase-9的mRNA水平在皮质酮作用下上升,同样以12小时最为显著。结论:皮质酮诱导的大鼠Leydig 细胞凋亡与caspase-8和caspase-9有关。

关键词：皮质酮 Leydig细胞凋亡 caspase-8 caspase-9

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活化T细胞核因子的研究进展

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中国男科学杂志 2006年第5期20卷 69-72页

作者：柴蔚然高惠宝上海交通大学医学院生化与分子生物学教研室上海200025

活化T细胞核因子（nuclear factor of activated Tcells，NFAT）蛋白在许多免疫细胞中，如：T细胞、B细胞、NK细胞、肥大细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞上均有表达，在机体免疫反应中对诱导细胞因子和其它基因的转录起着重要作用。在免... 详细信息

活化T细胞核因子（nuclear factor of activated Tcells，NFAT）蛋白在许多免疫细胞中，如：T细胞、B细胞、NK细胞、肥大细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞上均有表达，在机体免疫反应中对诱导细胞因子和其它基因的转录起着重要作用。在免疫系统外，如心肌、骨骼肌、睾丸和卵巢中也有广泛的分布，提示它在这些组织和细胞中也具有重要功能。NFAT蛋白的活性受钙调蛋白磷酸酯酶（calcineurin，

关键词： NFAT CaN Ca^2+信号 T细胞核因子

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