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上海交通大学学报（医学版） 2011年第10期31卷 1393-1397页

作者：翟华玲吴晖张岚陆颖理上海交通大学医学院附属第九人民医院内分泌代谢科上海200011 上海交通大学基础医学院生物化学与细胞分子生物学教研室上海200025

目的研究雄激素和高脂饮食对雌性SD大鼠卵巢、垂体和肾上腺超微结构的影响。方法 24只21日龄雌性SD大鼠随机分为对照组、雄激素注射组和雄激素注射+高脂饮食组。8周后,检测空腹血糖及血清胰岛素、睾酮、三酰甘油和胆固醇水平;透射电子... 详细信息

目的研究雄激素和高脂饮食对雌性SD大鼠卵巢、垂体和肾上腺超微结构的影响。方法 24只21日龄雌性SD大鼠随机分为对照组、雄激素注射组和雄激素注射+高脂饮食组。8周后,检测空腹血糖及血清胰岛素、睾酮、三酰甘油和胆固醇水平;透射电子显微镜观察卵巢、垂体、肾上腺组织超微结构。结果雄激素注射组、雄激素注射+高脂饮食组大鼠血糖、胰岛素、睾酮、三酰甘油、胆固醇水平均高于对照组;卵巢呈多囊性改变,垂体、肾上腺超微结构显示凋亡细胞增多。雄激素注射+高脂饮食组大鼠肾上腺上皮细胞的细胞质内脂滴增多。结论雄激素可诱导多囊卵巢的形成,同时可导致血糖升高;联合高脂饮食可构建较理想的大鼠多囊卵巢综合征模型。

关键词：多囊卵巢综合征超微结构雄激素高脂饮食

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急性糖负荷对正常大鼠血管功能的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2011年第11期31卷 1560-1563,1573页

作者：郑俊王渊梁云兴钟梅芳杨洁陈红上海交通大学基础医学院药理学教研室上海200025 上海交通大学医学院附属仁济医院内分泌科上海200001 上海医药高等专科学校基础部上海201318 上海交通大学基础医学院生物化学与细胞分子生物学教研室上海200025

目的探讨急性糖负荷对正常大鼠血管功能的影响及机制。方法取Wistar大鼠(n=5)的胸主动脉进行离体血管功能测定。血管环在含不同浓度葡萄糖(25、50、100 mmol/L)的高糖溶液(高糖组)和含不同浓度甘露醇(25、50、100 mmol/L)的高渗溶液(高... 详细信息

目的探讨急性糖负荷对正常大鼠血管功能的影响及机制。方法取Wistar大鼠(n=5)的胸主动脉进行离体血管功能测定。血管环在含不同浓度葡萄糖(25、50、100 mmol/L)的高糖溶液(高糖组)和含不同浓度甘露醇(25、50、100 mmol/L)的高渗溶液(高渗对照组)中分别孵育10 min,设立空白对照组。运用张力换能器测定各组血管对苯肾上腺素(PE)的收缩反应及对乙酰胆碱(Ach)的舒张反应,分别采用DCF法和DAF-FM荧光探针检测血管环活性氧(ROS)和一氧化氮(NO)的相对生成量。结果空白对照组、高糖组和高渗对照组血管对1μmol/L PE诱导的收缩反应比较差异无统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,高糖组和高渗对照组对1μmol/L Ach诱导的舒张反应随葡萄糖浓度和渗透压的升高呈逐渐减弱趋势(P<0.05),且高渗对照组舒张反应的减弱程度较高糖组更为显著(P<0.05)。高糖组和高渗对照组血管环NO相对生成量以及高糖组ROS相对生成量均显著高于空白对照组(P<0.05或P<0.01),高渗对照组ROS相对生成量与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论急性糖负荷可使血管舒张功能减弱,并呈现一定的浓度依赖性,可能与ROS生成量增加造成内皮功能损伤有关;高渗透压导致NO生成过多也可能作为自由基损伤血管。

关键词：急性糖负荷渗透压血管功能活性氧一氧化氮

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不同刺激物对过敏性哮喘产妇脐血中嗜碱性粒细胞分泌IL-4的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2011年第7期31卷 962-966页

作者：杨玲许以平姚苏杭熊瑛祝捷王克敏上海交通大学医学院附属新华医院老年科上海200092 上海交通大学医学院附属仁济医院过敏中心上海200127 上海交通大学医学院附属新华医院妇产科上海200092 上海交通大学医学院附属仁济医院妇产科上海200127 上海交通大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025

目的研究不同刺激物干预对过敏性哮喘产妇新生儿脐血中嗜碱性粒细胞分泌白介素4(IL-4)的影响。方法将源自过敏性哮喘产妇和健康产妇的新生儿脐血分为哮喘组(n=12)和正常对照组(n=16),采用流式细胞术分选提纯嗜碱性粒细胞,锥虫蓝染色鉴... 详细信息

目的研究不同刺激物干预对过敏性哮喘产妇新生儿脐血中嗜碱性粒细胞分泌白介素4(IL-4)的影响。方法将源自过敏性哮喘产妇和健康产妇的新生儿脐血分为哮喘组(n=12)和正常对照组(n=16),采用流式细胞术分选提纯嗜碱性粒细胞,锥虫蓝染色鉴定细胞活性。在两组提纯后的嗜碱性粒细胞中分别加入ACM缓冲液(阴性对照)、肽聚糖(PGN)、粉尘螨浸液及甘露醇,采用ELISA法测定细胞培养上清液中IL-4的质量浓度。结果细胞分选结果显示:嗜碱性粒细胞纯度为(95.64±3.15)%,回收率为(60.22±7.18)%;锥虫蓝染色显示细胞活性为(99.4±0.89)%。与阴性对照比较,经PGN、粉尘螨浸液和甘露醇刺激后的哮喘组细胞培养上清液中IL-4质量浓度显著升高(P<0.05或P<0.01);经PGN和甘露醇刺激后,哮喘组细胞培养上清液中IL-4质量浓度显著高于正常对照组(P<0.05和P<0.01)。结论 PGN、粉尘螨及甘露醇可刺激过敏性哮喘产妇新生儿脐血中嗜碱性粒细胞IL-4的分泌增加,通过诱导辅助性T淋巴细胞亚群Th2细胞的分化,参与哮喘的发生和发展。

关键词：过敏性哮喘嗜碱性粒细胞脐血白介素4

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辐射诱导溶瘤腺病毒联合放疗对宫颈癌细胞HeLa S3的作用效果

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中国肿瘤生物治疗杂志 2011年第6期18卷 641-646页

作者：李笑梅王海波黄建上海健康职业技术学院生物化学教研室上海200237 上海交通大学医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025

目的:构建受辐射诱导的EGR-1启动子调控的携带人TRAIL基因的新型溶瘤腺病毒Ad-EGR-TRAIL,研究其联合放疗对宫颈癌细胞株HeLa S3的杀伤效果。方法:构建重组腺病毒Ad-EGR-TRAIL,用腺病毒Ad-GFP检测对HeLa S3细胞的感染效率。CCK-8法检测Ad... 详细信息

目的:构建受辐射诱导的EGR-1启动子调控的携带人TRAIL基因的新型溶瘤腺病毒Ad-EGR-TRAIL,研究其联合放疗对宫颈癌细胞株HeLa S3的杀伤效果。方法:构建重组腺病毒Ad-EGR-TRAIL,用腺病毒Ad-GFP检测对HeLa S3细胞的感染效率。CCK-8法检测Ad-EGR-TRAIL组、单纯放疗组以及Ad-EGR-TRAIL联合放疗组对HeLa S3细胞的杀伤效应,同时观察它们对人正常宫颈细胞的作用。结果:成功构建腺病毒Ad-EGR-TRAIL,当MOI为100时,HeLa S3细胞的腺病毒感染效率最高。单纯Ad-EGR-TRAIL或放疗对HeLa S3细胞增殖的抑制率分别为(8.07±3.02)%和(23.02±4.03)%,Ad-EGR-TRAIL联合放疗对HeLa S3细胞增殖的抑制率达(79.77±9.15)%;同样的处理对正常宫颈细胞无明显抑制作用。结论:Ad-EGR-TRAIL联合放疗对宫颈癌细胞HeLa S3有显著的杀伤作用。

关键词： TRAIL 腺病毒基因疗法放射治疗凋亡

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抗TNF-α单链抗体噬菌体展示文库的建立和鉴定

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中国生物化学与分子生物学报 2010年第10期26卷 930-936页

作者：杨涛柴蔚然杨利军程牛亮解军牛勃山西医科大学生物化学与分子生物学教研室省部共建细胞生理学教育部重点实验室太原030001 上海交通大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025 首都儿科研究所北京100020

应用噬菌体展示技术构建抗肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor α,TNF-α)单链抗体(single chain Fv,scFv)文库,从中筛选抗TNF-αscFv并进行鉴定.利用重组人TNF-α(rhTNF-α)免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因,经重叠延伸反应将VH和VL... 详细信息

应用噬菌体展示技术构建抗肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor α,TNF-α)单链抗体(single chain Fv,scFv)文库,从中筛选抗TNF-αscFv并进行鉴定.利用重组人TNF-α(rhTNF-α)免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因,经重叠延伸反应将VH和VL基因拼接成scFv基因,以SfiⅠ/NotⅠ位点定向插入pCANTAB 5E噬菌粒载体,转化*** TG1,构建了库容为4.6×108的抗TNF-α单链抗体库.对抗体库进行3轮富集筛选后,ELISA检测阳性克隆的抗原特异性,取1株阳性克隆进行测序分析.结果表明,抗TNF-αscFv基因序列长774bp,编码258个氨基酸.将此阳性克隆转化***2151,IPTG诱导可溶性scFv的表达,经SDS-PAGE和Western印迹分析,scFv的分子量约为28kD.经亲和纯化后的scFv可与rhTNF-α结合,并可中和由rhTNF-α引起的L929细胞毒性.本文利用噬菌体抗体库筛选到了高亲和力的抗TNF-αscFv,为研制临床免疫治疗的新型抗体奠定了实验基础.

关键词：噬菌体展示技术肿瘤坏死因子-α 单链抗体

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hVEGF基因工程生物膜对全层皮肤缺损创面中flt-1和TSP-1表达的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2009年第1期29卷 47-50页

作者：赵雷王莉姜叙诚郑林张帆赵涵芳许伟榕上海交通大学基础医学院病理学教研室上海200025 上海交通大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025

目的探讨人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)基因工程生物膜对创面组织fms样酪氨酸酶(flt-1)和血小板反应蛋白-1(TSP-1)表达的影响。方法建立hVEGF基因工程生物膜覆盖大鼠全层皮肤缺损创面的动物模型,将80只SD大鼠随机分为A、B、C、D四组,每... 详细信息

目的探讨人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)基因工程生物膜对创面组织fms样酪氨酸酶(flt-1)和血小板反应蛋白-1(TSP-1)表达的影响。方法建立hVEGF基因工程生物膜覆盖大鼠全层皮肤缺损创面的动物模型,将80只SD大鼠随机分为A、B、C、D四组,每组20只,所有动物于背部制备皮肤全层缺损创面。A组:创面覆盖hVEGF基因工程生物膜和Tegaderm切口膜;B组:创面覆盖空白生物膜和Tegaderm切口膜,C组:创面覆盖含空质粒的成纤维细胞种植的生物膜和Tegaderm切口膜;D组:创面覆盖Tegaderm切口膜。采用免疫组化和图像分析的方法,观察各组在术后3、7、14、29d时创面中flt-1和TSP-1表达的情况。结果术后3、7、14d时,A组flt-1阳性细胞数显著高于B、C、D组(P<0.05或P<0.01);术后7、14、29d时A组创面中TSP-1表达显著低于B、C、D组(P<0.01)。结论将hVEGF基因工程生物膜覆盖于大鼠全层皮肤缺损创面,能使创面持续表达flt-1并抑制TSP-1表达,从而促进新生血管形成,有利于创面愈合。

关键词：人血管内皮细胞生长因子 flt-1 血小板反应蛋白创面愈合

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特异AT序列结合蛋白-1促进胰岛素样生长因子结合蛋白-2在K562细胞中的表达

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中国生物化学与分子生物学报 2009年第2期25卷 169-176页

作者：乔福锋蔡蓉蔡霞许伟榕卢健上海交通大学医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025

探讨过表达特异AT序列结合蛋白-1(special AT-rich sequence binding protein,SATB1)核基质结合区(MAR)结合蛋白对胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP2)基因表达的影响,并对其影响机制进行初步探索.首先用脂质体将SATB1的真核表达载体pcD... 详细信息

探讨过表达特异AT序列结合蛋白-1(special AT-rich sequence binding protein,SATB1)核基质结合区(MAR)结合蛋白对胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP2)基因表达的影响,并对其影响机制进行初步探索.首先用脂质体将SATB1的真核表达载体pcDNA3.1-SATB1转染至K562细胞,通过6周G418的筛选获得阳性克隆,RT-PCR、实时PCR及Western印迹验证过表达情况,对阳性克隆细胞中IGFBP2的表达用RT-PCR、实时PCR及Western印迹方法进行检测;然后用RNAi的方法干扰阳性细胞中SATB1的表达后,同样用上述3种方法再次检测IGFBP2的表达状况;用生物信息学方法对IGFBP2基因进行MAR序列与SATB1结合位点搜索分析,寻找SATB1影响IGFBP2基因表达的机制.结果显示,在稳定转染的情况下,实验组K562-SATB1细胞与转染空载体pcDNA3.1的K562-3.1细胞和未转染细胞K562相比,IGFBP2 mRNA水平上调了近7倍,而蛋白水平变化不明显.RNA干扰后,IGFBP2的表达在mRNA水平也相应下调,蛋白水平的变化同样不明显.通过生物信息学分析发现,IGFBP2第1个内含子中可能存在2.5 kb MAR样序列,且MAR样序列上存在多个SATB1的潜在结合位点.综上所述,过表达SATB1可以使K562细胞中IGFBP2 mRNA表达水平提高,而且其调控机制可能与SATB1直接和IGFBP2基因中的MAR样序列结合有关.

关键词：特异AT序列结合蛋白-1 核基质结合区胰岛素样生长因子结合蛋白-2 K562细胞

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黏着斑激酶异形体及其突变体

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生命的化学 2009年第1期29卷 26-28页

作者：姚玲郑新民上海交通大学医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025

黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)是一种非受体依赖型酪氨酸激酶,在细胞增殖和粘附等过程中起重要作用。它在很多肿瘤组织中高表达,参与了肿瘤的发生、发展和侵袭转移。它的异构体和突变体的激酶活性与野生型相比增高或者降低,其... 详细信息

黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)是一种非受体依赖型酪氨酸激酶,在细胞增殖和粘附等过程中起重要作用。它在很多肿瘤组织中高表达,参与了肿瘤的发生、发展和侵袭转移。它的异构体和突变体的激酶活性与野生型相比增高或者降低,其生物学功能也表现为增强或者减弱。因此研究它们与肿瘤发生发展的关系具有重要意义。

关键词：黏着斑激酶异构体突变体

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辛伐他汀对老年大鼠骨髓基质干细胞成骨和成脂分化的影响

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中国骨质疏松杂志 2009年第6期15卷 414-422页

作者：刘铭朱振安汤亭亭王克敏上海交通大学医学院附属第九人民医院骨科上海200011 上海交通大学医学院基础医学院生物化学和分子生物学教研室

目的从细胞和基因水平探讨辛伐他汀对老年大鼠骨髓基质干细胞成骨和成脂分化的影响。方法18月龄雄性SD大鼠的骨髓基质干细胞进行成骨和成脂诱导培养,培养介质中加入辛伐他汀（10^-6、10^-7、10^-8mol/L和10^-9mol/L）,同时设溶剂对照组... 详细信息

目的从细胞和基因水平探讨辛伐他汀对老年大鼠骨髓基质干细胞成骨和成脂分化的影响。方法18月龄雄性SD大鼠的骨髓基质干细胞进行成骨和成脂诱导培养,培养介质中加入辛伐他汀（10^-6、10^-7、10^-8mol/L和10^-9mol/L）,同时设溶剂对照组。成骨检测：碱性磷酸酶（ALP）染色和定量,茜素红矿化染色和定量,ALP和骨钙素（OC）基因分析;成脂检测：油红脂肪细胞染色和定量,脂蛋白脂酶（LPL）和过氧化物酶增殖活化受体（PPARγ2）基因分析。结果在含有低剂量地塞米松的成骨诱导条件下,辛伐他汀随浓度增加促进了细胞基质的矿化,增强了ALP的活性及染色,提高了ALP和OC的基因表达（若无地塞米松,辛伐他汀则无法单独诱导成骨,此结果未展示）;同时,辛伐他汀随浓度增加减弱了脂肪细胞的油红染色,抑制了LPL和PPARγ2的基因表达。显著性差异皆发生于10^-6mol/L和10^-7mol/L辛伐他汀组。结论辛伐他汀随浓度增加抑制了老年骨髓基质干细胞的成脂分化,并中等强度地促进了老年骨髓基质干细胞的成骨分化。这表明辛伐他汀具有促进骨合成代谢的作用,可以用于治疗常见的骨代谢疾病,如增龄性的骨质疏松症。

关键词：辛伐他汀老年骨髓基质干细胞成骨细胞脂肪细胞细胞分化

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hVEGF基因工程生物膜对大鼠全层皮肤缺损创面中Fn和整合素α5表达的研究

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实验动物与比较医学 2009年第2期29卷 100-104页

作者：赵雷王莉姜叙诚郑林张帆赵涵芳许伟榕上海交通大学医学院病理学教研室上海200025 上海交通大学医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025

目的探讨将含人血管内皮细胞生长因子（hVEGF）重组质粒的成纤维细胞种植的基因工程生物膜覆盖于大鼠全层皮肤缺损创面，在创面愈合过程中对细胞外基质中纤维连接蛋白（Fn）及其受体整合素α5表达的影响。方法通过建立hVEGF基因工程生... 详细信息

目的探讨将含人血管内皮细胞生长因子（hVEGF）重组质粒的成纤维细胞种植的基因工程生物膜覆盖于大鼠全层皮肤缺损创面，在创面愈合过程中对细胞外基质中纤维连接蛋白（Fn）及其受体整合素α5表达的影响。方法通过建立hVEGF基因工程生物膜覆盖大鼠全层皮肤缺损创面的动物模型，采用免疫组化方法并结合图像分析，分别观察并测定实验组和对照组大鼠创面愈合3、7、14、29d时创面中Fn和整合素α5表达的平均光密度值，判断其在创面中表达的强弱。结果在术后3、7、14d时，实验组中Fn表达显著高于对照组（P〈0．05）；在术后14、29d时，实验组中整合素α5表达显著高于对照组（P〈0．05）。结论将hVEGF基因工程生物膜覆盖于大鼠全层皮肤缺损创面，在创面愈合的早、中期促进Fn的表达；在创面愈合中、晚期，上调整合素α5的合成与分泌，从而有利于创面愈合。

关键词：人血管内皮细胞生长因子纤维连接蛋白整合素α5 创面愈合

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