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REPLI-g~? Single Cell Kit应用于微量DNA扩增的效率评估

法医学杂志 2019年第2期35卷 210-215页

作者：徐倩南沈琼张佳怡张轶伦李莉刘希玲李成涛温州医科大学基础医学院法医学系浙江温州325035 司法鉴定科学研究院上海市法医学重点实验室上海市司法鉴定专业技术服务平台上海200063 上海交通大学医学院附属第九人民医院超声诊断科上海201999 内蒙古医科大学法医学教研室内蒙古呼和浩特010030 内蒙古科技大学包头医学院内蒙古包头014060

目的评估REPLI-g~?Single Cell Kit应用于检材DNA扩增的效率,探讨该试剂盒在法医学微量DNA扩增方面的应用价值。方法选取3种微量DNA提取试剂盒,对来自10名无关个体的外周血进行DNA提取,并对所提DNA的产量和纯度进行比较。根据比较结果选... 详细信息

目的评估REPLI-g~?Single Cell Kit应用于检材DNA扩增的效率,探讨该试剂盒在法医学微量DNA扩增方面的应用价值。方法选取3种微量DNA提取试剂盒,对来自10名无关个体的外周血进行DNA提取,并对所提DNA的产量和纯度进行比较。根据比较结果选取1例DNA样本进行浓缩稀释作为全基因组扩增起始样本,使用REPLI-g~?Single Cell Kit对起始样本进行全基因组扩增,计算扩增产量及扩增倍数,并进行琼脂糖凝胶电泳检测片段分布情况。使用Goldeneye~? DNA身份鉴定系统20A对起始样本和经全基因组扩增所得DNA进行STR分型。结果经比较后选取由QIAsymphony~? DNA Investigator~? Kit所提取的1例DNA进行浓缩稀释作为全基因组扩增起始样本。经REPLI-g~?Single Cell Kit对一系列起始样本全基因组扩增后,发现扩增产量均值最低可达到8.77×10~3ng,相应的扩增倍数均值为1.40×10~6,DNA片段大且集中。全基因组扩增样本随着起始样本量的减少,STR分型成功率降低,但当起始样本量低于0.5ng时,全基因组扩增后样本的STR分型成功率高于相同起始量未经全基因组扩增样本的STR分型成功率。结论应用REPLI-g~?Single Cell Kit可有效提高模板DNA总量,特别对于微量DNA,可在一定程度上提高STR分型成功率。

关键词：法医遗传学短串联重复全基因组扩增多重置换扩增微量检材

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Cu^2＋-Aβ复合物与Aβ单体诱导神经元H2O2释放作用的比较研究

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现代生物医学进展 2018年第8期18卷 1401-1406页

作者：倪雯雯谭小芳于丰祥宫平陈功侯丽娜李娟上海交通大学医学院基础医学院药理学教研室上海200025 上海交通大学医学院临床医学系上海200025

目的:比较不同摩尔比Cu^(2+)-Aβ复合物与Aβ单体诱导神经元H_2O_2释放作用的差异。方法:制备不同摩尔比(0.1-5)的Cu^(2+)-Aβ复合物,通过检测硫磺素T(Thioflavin T,Th T)荧光强度考察Cu^(2+)对Aβ纤丝形成的影响。利用原代培养的大鼠... 详细信息

目的:比较不同摩尔比Cu^(2+)-Aβ复合物与Aβ单体诱导神经元H_2O_2释放作用的差异。方法:制备不同摩尔比(0.1-5)的Cu^(2+)-Aβ复合物,通过检测硫磺素T(Thioflavin T,Th T)荧光强度考察Cu^(2+)对Aβ纤丝形成的影响。利用原代培养的大鼠海马神经元细胞,分别以不同摩尔比Cu^(2+)-Aβ复合物,不同浓度Cu^(2+)-Aβ复合物(摩尔比为1),以及Aβ单体和Cu^(2+)处理细胞,检测培养上清中的H_2O_2含量;分离线粒体,分别检测不同浓度Cu^(2+)-Aβ复合物(摩尔比为1),以及Aβ单体和Cu^(2+)处理后H_2O_2的释放;观察不同摩尔比Cu^(2+)-Aβ复合物,不同浓度Cu^(2+)-Aβ复合物(摩尔比为1),以及Aβ单体和Cu^(2+)对神经元细胞活力的影响。结果:(1)Th T荧光试验结果表明,Cu^(2+)与Aβ(10μM)摩尔比为1~5范围内可明显抑制Aβ纤丝形成。(2)Cu^(2+)-Aβ复合物(摩尔比为1~5;Aβ浓度为10μM)以及摩尔比为1的Cu^(2+)-Aβ复合物(Aβ浓度分别为5,10μM)可显著诱导神经元释放H_2O_2;另外,摩尔比为1时,Cu^(2+)-Aβ复合物还可诱导神经元线粒体内H_2O_2释放;上述作用均强于Aβ单体或Cu^(2+)。(3)Cu^(2+)-Aβ复合物(摩尔比为1~5)可显著降低神经元细胞活力,该作用强于Aβ单体或Cu^(2+)。结论:与Aβ单体相比,Cu^(2+)-Aβ复合物诱发神经元细胞及其线粒体释放H_2O_2作用更强,并诱发更为明显的神经元毒性。提示Cu^(2+)与Aβ之间的配位结合可能增强其引发活性氧释放以及神经元毒性反应;Cu^(2+)-Aβ复合物引发的活性氧可能主要来自线粒体。

关键词： Cu^2+-Aβ复合物 Aβ 神经元活性氧阿尔茨海默病

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呼出气中挥发性有机化合物检测在肺癌早期诊断中的应用

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肿瘤 2018年第9期38卷 874-882页

作者：张宁孙庆文李文姝李宏韩力黄鹏上海健康医学院基础医学院病理教研室上海201318 复旦大学生命科学院遗传学系上海200438 上海纽约大学文理学部上海200122 上海交通大学附属胸科医院急诊科上海200030 上海健康医学院附属浦东新区周浦医院呼吸科上海201318 上海健康医学院临床医学院上海201318

目的:探讨呼出气中挥发性有机化合物(volatile organic compounds,VOCs)检测在肺癌早期诊断中的应用价值。方法:采用气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry,GCMS)方法检测肺癌患者与健康对照者呼出气中VOC成分和含量的变... 详细信息

目的:探讨呼出气中挥发性有机化合物(volatile organic compounds,VOCs)检测在肺癌早期诊断中的应用价值。方法:采用气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry,GCMS)方法检测肺癌患者与健康对照者呼出气中VOC成分和含量的变化,筛选可用于肺癌早期诊断的挥发性物质。结果:在受试者呼出气中检测到24种VOC,其中肺癌患者呼出气中3-己烯-2-酮和3-羟基-2-丁酮的平均峰面积明显大于对照组(P值均<0.05)。进展期(Ⅲ和Ⅳ期)肺癌患者呼出气中3-己烯-2-酮和3-羟基-2-丁酮的平均峰面积均显著大于早期(Ⅰ和Ⅱ期)肺癌患者(P值均<0.05),2组患者呼出气中3-己烯-2-酮和3-羟基-2-丁酮的平均峰面积均明显大于对照组(P值均<0.05)。小细胞肺癌患者呼出气中3-羟基-2-丁酮的平均峰面积显著大于非小细胞肺癌患者(P <0.05),3-己烯-2-酮的含量在2组间的差异无统计学意义(P> 0.05)。结论:肺癌患者呼出气中3-己烯-2-酮和3-羟基-2-丁酮含量明显增高,提示这2种物质可用于肺癌早期诊断的挥发性指标,呼出气GC-MS检测方法对于肺癌的早期诊断具有良好的应用价值。

关键词：肺肿瘤挥发性有机化合物早期诊断气相色谱-质谱法

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基于液相色谱-高分辨质谱技术的厄洛替尼获得性耐药肺腺癌细胞代谢轮廓分析

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上海交通大学学报（医学版） 2017年第5期37卷 571-577页

作者：孟爽汪洋雷绘敏唐亚斌朱亮上海交通大学医学院上海200025 上海交通大学基础医学院药理学教研室上海200025

目的·探讨表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)厄洛替尼耐药后人肺腺癌细胞(PC9-ER)代谢组学轮廓变化,以发现与耐药相关的差异代谢物组。方法·采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF/MS)技术采集分析PC... 详细信息

目的·探讨表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)厄洛替尼耐药后人肺腺癌细胞(PC9-ER)代谢组学轮廓变化,以发现与耐药相关的差异代谢物组。方法·采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF/MS)技术采集分析PC9-ER细胞及同源亲本PC9细胞的代谢轮廓,并利用偏最小二乘判别分析(PLS-DA)等多维统计手段进一步筛选、鉴定厄洛替尼耐药相关的差异代谢物。结果·与PC9细胞相比,PC9-ER细胞共有14种差异代谢物,其中N-乙酰亚精胺、磷脂酰乙醇胺、腺嘌呤核糖核苷酸、泛酸、脯氨酸、谷氨酸、组氨酸等7种代谢物水平上调,瓜氨酸、磷酸胆碱、还原型谷胱甘肽、半胱氨酰甘氨酸、氧化型谷胱甘肽、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、S-腺苷甲硫氨酸等7种代谢物水平下调,主要涉及谷氨酸代谢、谷胱甘肽代谢、氨循环、蛋白质生物合成等代谢通路。结论·厄洛替尼耐药后人肺腺癌细胞代谢轮廓发生改变。差异代谢物信息可为耐药新机制和代谢相关药物靶点的发现提供线索。

关键词：厄洛替尼耐药代谢轮廓分析超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱肺腺癌

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包公藤甲素衍生物(S)-OTS·HCl的心脏电生理效应

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上海交通大学学报（医学版） 2017年第2期37卷 177-183页

作者：王红卫张颖李慈珍刘远谋杨智昉上海健康医学院基础医学院生理教研室上海201318 上海交通大学基础医学院实验中心上海200025 上海交通大学基础医学院生理教研室上海200025

目的·研究(S)-OTS·HCl对心脏生物电活动的影响。方法·运用细胞内生物电记录、心电图及Langendorff心脏灌流技术,在离体和在体情况下研究(S)-OTS·HCl对豚鼠和家兔心脏的作用。结果·(S)-OTS·HCl可与M_2型... 详细信息

目的·研究(S)-OTS·HCl对心脏生物电活动的影响。方法·运用细胞内生物电记录、心电图及Langendorff心脏灌流技术,在离体和在体情况下研究(S)-OTS·HCl对豚鼠和家兔心脏的作用。结果·(S)-OTS·HCl可与M_2型胆碱能受体结合,并在动物整体心电图记录中剂量依赖性地延长RR间期。(S)-OTS·HCl对心室肌的静息电位(RP)、动作电位幅值(APA)和动作电位最大上升速率(V_(max))没有影响,但(S)-OTS·HCl(1×10^(-5) mol/L)可显著缩短动作电位时程APD_(50)和APD_(90)分别至91.6%和90.9%。当(S)-OTS·HCl(1×10^(-7) mol/L)灌流家兔窦房结标本时,可使4期自动除极速率缩短至13.7%,也可有效抑制钙通道,并使窦房结自律性动作电位的APA和V_(max)减小。离体心肌收缩力亦随(S)-OTS·HCl的剂量增加而降低。结论·(S)-OTS·HCl是一个作用较强的胆碱能受体激动剂,能与心肌M_2受体结合,产生负性变时、变力和变传导效应。

关键词： (S)-OTS·HCl 胆碱能受体激动剂动作电位心电图

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Tet:基于DNA去甲基化的全新抗肿瘤药物靶标

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上海交通大学学报（医学版） 2017年第4期37卷 551-555页

作者：龚蔚孟周文理田娜林冠乔付天然张良上海交通大学基础医学院药理学教研室上海200025

Tet蛋白属于α-酮戊二酸(α-KG)和亚铁离子(Fe2+)依赖的双加氧酶家族。Tet特异识别基因组DNA上5-甲基胞嘧啶(5mC)的甲基并进行催化氧化,是哺乳动物基因组DNA主动去甲基化途径中唯一被发现的关键因子。通过调控基因组5mC的动态平衡分布,... 详细信息

Tet蛋白属于α-酮戊二酸(α-KG)和亚铁离子(Fe2+)依赖的双加氧酶家族。Tet特异识别基因组DNA上5-甲基胞嘧啶(5mC)的甲基并进行催化氧化,是哺乳动物基因组DNA主动去甲基化途径中唯一被发现的关键因子。通过调控基因组5mC的动态平衡分布,Tet在胚胎发育早期基因调控和胚胎干细胞定向分化中至关重要,其表达和功能异常与包括骨髓增生异常综合征、慢性骨髓单核细胞性白血病和急性白血病在内的多种血液恶性肿瘤以及实体肿瘤有密切关系。因此,Tet及其介导的DNA去甲基化是全新的抗肿瘤靶向药物靶标。对于Tet生物功能和催化机制的研究将有助于深入了解与DNA去甲基化途径相关肿瘤的发生和发展机制,同时也为研发全新的抗肿瘤靶向药物提供参考。

关键词： DNA去甲基化 Tet蛋白 5-羟甲基胞嘧啶胚胎干细胞抗肿瘤

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死亡时间推断最新研究与展望

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法医学杂志 2018年第5期34卷 459-467页

作者：王琪林汉成徐纪茹黄平王振原重庆医科大学基础医学院法医学教研室重庆400016 西安交通大学医学部法医学院陕西西安710061 西安交通大学医学部基础医学院陕西西安710061 司法鉴定科学研究院上海市法医学重点实验室上海市司法鉴定专业技术服务平台上海200063

死亡时间推断相关研究在法医学领域中有着极为重要的地位和意义,一直是法医病理学实践中亟待解决的重大问题之一。传统的方法与手段存在许多缺陷,新方法的引入势在必行。随着各种新技术的涌现,关于死亡时间推断的研究有着从简单到复杂... 详细信息

死亡时间推断相关研究在法医学领域中有着极为重要的地位和意义,一直是法医病理学实践中亟待解决的重大问题之一。传统的方法与手段存在许多缺陷,新方法的引入势在必行。随着各种新技术的涌现,关于死亡时间推断的研究有着从简单到复杂的趋势,数据量也随之不断增长。本文首先总结了既往死亡时间推断的方法,最后对基于大数据人工智能算法在法医学死亡时间推断研究中的应用进行了展望。

关键词：法医病理学死亡时间大数据人工智能综述

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NF-κB参与调控细胞凋亡

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上海交通大学学报（医学版） 2017年第10期37卷 1446-1452页

作者：杨晓晓黄虹婷刘满华黄莺上海交通大学医学院附属仁济临床医学院上海200127 上海交通大学基础医学院病理生理学教研室上海200025

细胞凋亡活性的异常改变与多种疾病包括肿瘤的发生和发展密切相关。核因子κB(NF-κB)基因被克隆30多年来,人们对它的研究日趋深入,已发现一系列受其调控的基因,这些靶基因产物广泛地参与炎症反应及细胞增殖、分化、衰老、凋亡等生理和... 详细信息

细胞凋亡活性的异常改变与多种疾病包括肿瘤的发生和发展密切相关。核因子κB(NF-κB)基因被克隆30多年来,人们对它的研究日趋深入,已发现一系列受其调控的基因,这些靶基因产物广泛地参与炎症反应及细胞增殖、分化、衰老、凋亡等生理和病理过程。该文重点介绍NF-κB调控细胞凋亡的信号调控网络及相关调控分子,以及各种不同的环境因素如何影响NF-κB对细胞凋亡活性的调控。此外,鉴于在肿瘤等疾病中NF-κB活性异常上调,寻找特异性靶向NF-κB的活性抑制剂将有助于防止此类疾病的发生。

关键词： NF-κB 细胞凋亡信号传导

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预防性给予姜黄素对大鼠溃疡性结肠炎病变及色氨酸羟化酶表达的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2017年第1期37卷 11-14,29页

作者：杨美王娟戎伟芳张国花上海交通大学基础医学院生理学教研室上海200025

目的·研究姜黄素对溃疡性结肠炎(UC)的预防作用及对色氨酸羟化酶(TPH)表达的影响。方法·使用5%多聚葡酸钠(DSS)诱导SD大鼠UC模型(连续饮用7 d),自造模第1日开始预防性给予姜黄素灌胃(60 mg/kg,连续10 d),记录大鼠疾病活动指数... 详细信息

目的·研究姜黄素对溃疡性结肠炎(UC)的预防作用及对色氨酸羟化酶(TPH)表达的影响。方法·使用5%多聚葡酸钠(DSS)诱导SD大鼠UC模型(连续饮用7 d),自造模第1日开始预防性给予姜黄素灌胃(60 mg/kg,连续10 d),记录大鼠疾病活动指数(DAI)评分。应用苏木精-伊红(H-E)染色方法对结肠进行组织学评分,评价姜黄素对炎症的影响;应用免疫印迹(Western blotting)方法检测姜黄素对炎症结肠组织5-羟色胺(5-HT)合成限速酶TPH表达的影响。结果·DSS引起大鼠结肠组织出现UC组织病理学改变,DAI评分上升,TPH蛋白水平明显升高(P=0.000)。与对照组比较,预防性给予姜黄素能减轻结肠炎症组织学评分(P=0.034),可降低DAI评分(P=0.045);但预防性给予姜黄素对炎症结肠组织中TPH的表达无影响。结论·预防性给予姜黄素可以抑制炎症反应,但不能抑制TPH表达上调,提示姜黄素的抗炎效应并不是通过抑制5-HT合成实现的。

关键词：溃疡性结肠炎姜黄素抗炎效应色氨酸羟化酶

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儿童呼吸道分离流感嗜血杆菌的耐药性和基因分型

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中国感染与化疗杂志 2017年第5期17卷 532-537页

作者：秦惠宏王春潘芬刘昌颀赵克温张泓上海交通大学医学院基础医学院病理生理学教研室上海200025 上海交通大学附属儿童医院检验科

目的研究儿童呼吸道分离流感嗜血杆菌的耐药性和该菌ftsI基因分型与耐药表型的关系。方法收集2016年第一季度住院患儿鼻咽吸出物中分离到的流感嗜血杆菌141株;用纸片扩散法检测细菌对抗菌药物的耐药性;用Nitrocefin纸片法检测细菌的β... 详细信息

目的研究儿童呼吸道分离流感嗜血杆菌的耐药性和该菌ftsI基因分型与耐药表型的关系。方法收集2016年第一季度住院患儿鼻咽吸出物中分离到的流感嗜血杆菌141株;用纸片扩散法检测细菌对抗菌药物的耐药性;用Nitrocefin纸片法检测细菌的β内酰胺酶;用PCR技术对分离菌株进行ftsI基因检测;比较不同基因型菌株对抗菌药物的耐药情况。结果141株流感嗜血杆菌β内酰胺酶检出率为40.4%(57/141)、氨苄西林耐药率为53.2%(75/141)。检出ftsI基因突变率为72.3%(102/141),以Ⅲ型为主(72/102,70.6%)。β内酰胺酶基因阴性氨苄西林耐药型菌株(g BLNAR)对氨苄西林和头孢呋辛的耐药率高于β内酰胺酶基因阴性氨苄西林敏感型菌株(g BLNAS)(P<0.05)。结论儿童呼吸道分离流感嗜血杆菌ftsI基因突变率高,以Ⅲ型为主。ftsI基因突变增加了流感嗜血杆菌对氨苄西林和头孢呋辛的耐药性。

关键词：流感嗜血杆菌耐药性 ftsI基因

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