检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学教育 2025年第3期27卷 283-286页

作者：杨旭东陈妍珂朱二强刘坤侯妮李冬民西安交通大学医学部人体分子与细胞教研室西安交通大学基础医学院生物化学与分子生物学系西安交通大学基础医学院细胞生物学与遗传学系北京百迈客生物科技有限公司科服事业部艾普拜生物(江苏)科技有限公司技术服务部

为了满足培养具有创新意识的复合型医工交叉人才的需要，西安交通大学人体分子与细胞教研室在人体分子与细胞整合课程的教学过程中先后邀请了北京百迈客生物科技有限公司、艾普拜生物(江苏)科技有限公司以及北京达科为生物技术有限公司... 详细信息

为了满足培养具有创新意识的复合型医工交叉人才的需要，西安交通大学人体分子与细胞教研室在人体分子与细胞整合课程的教学过程中先后邀请了北京百迈客生物科技有限公司、艾普拜生物(江苏)科技有限公司以及北京达科为生物技术有限公司，在核酸测序、PCR技术以及细胞流式技术等领域的工程师开展校企联合双师授课(简称“双师授课”)。文章以核酸测序技术的授课过程为例介绍了双师授课教学的实施过程，希望为医工交叉专业其他课程开展双师授课提供有价值的经验。

关键词：高等教育校企联合双师授课医工交叉专业复合型人才培养理论结合实践

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增强C/EBPε表达对人粒-单核性白血病细胞U-937分化的作用(英文)

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癌症 2006年第11期25卷 1368-1373页

作者：蔡蓉戴冰冰李珂王红洁许伟榕王家敏卢健上海交通大学医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025

背景与目的:CCAAT-增强子结合蛋白(CCAAT-enhancerbindingproteinε,C/EBPε)是一种在髓系细胞中特异性表达的核内转录因子,可能是髓系细胞分化过程中重要的调控因子,并且参与了一系列髓系细胞特异性基因的转录激活。本研究拟探讨C/EBP... 详细信息

背景与目的:CCAAT-增强子结合蛋白(CCAAT-enhancerbindingproteinε,C/EBPε)是一种在髓系细胞中特异性表达的核内转录因子,可能是髓系细胞分化过程中重要的调控因子,并且参与了一系列髓系细胞特异性基因的转录激活。本研究拟探讨C/EBPε的细胞特异性表达,研究过量表达C/EBPε对人粒-单核性白血病细胞U-937中c-Myc表达、细胞周期及细胞分化的影响。方法:应用逆转录-聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)检测五种不同类型的造血系细胞中C/EBPε的表达水平。根据RT-PCR的结果,选择人粒-单核性白血病细胞U-937作为过量表达C/EBPε的对象。电穿孔转染C/EBPε表达质粒pcDNA3.1-C/EBPε,G418筛选稳定表达细胞并命名为U-937-C/EBPε32。RT-PCR与Westernblot检测转染细胞内C/EBPε与c-Myc的表达水平,流式细胞仪检测过量表达C/EBPε对U-937细胞周期及细胞分化的影响。结果:过量表达C/EBPε可以显著增强转染U-937细胞表面粒细胞特异性表面抗原CD11b的表达,U-937-C/EBPε32细胞表面CD11b的阳性率达92.56%,而在U937与U-937-pcDNA3.1细胞表面分别为77.46%与74.81%,但c-Myc的表达与细胞周期分布未受影响。结论:C/EBPε可能是髓系细胞向粒细胞分化过程中非常重要的转录调控因子。

关键词： CCAAT-增强子结合蛋白细胞分化 c—Myc 人粒-单核性白血病 U-937细胞

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特异AT序列结合蛋白-1促进胰岛素样生长因子结合蛋白-2在K562细胞中的表达

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中国生物化学与分子生物学报 2009年第2期25卷 169-176页

作者：乔福锋蔡蓉蔡霞许伟榕卢健上海交通大学医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025

探讨过表达特异AT序列结合蛋白-1(special AT-rich sequence binding protein,SATB1)核基质结合区(MAR)结合蛋白对胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP2)基因表达的影响,并对其影响机制进行初步探索.首先用脂质体将SATB1的真核表达载体pcD... 详细信息

探讨过表达特异AT序列结合蛋白-1(special AT-rich sequence binding protein,SATB1)核基质结合区(MAR)结合蛋白对胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP2)基因表达的影响,并对其影响机制进行初步探索.首先用脂质体将SATB1的真核表达载体pcDNA3.1-SATB1转染至K562细胞,通过6周G418的筛选获得阳性克隆,RT-PCR、实时PCR及Western印迹验证过表达情况,对阳性克隆细胞中IGFBP2的表达用RT-PCR、实时PCR及Western印迹方法进行检测;然后用RNAi的方法干扰阳性细胞中SATB1的表达后,同样用上述3种方法再次检测IGFBP2的表达状况;用生物信息学方法对IGFBP2基因进行MAR序列与SATB1结合位点搜索分析,寻找SATB1影响IGFBP2基因表达的机制.结果显示,在稳定转染的情况下,实验组K562-SATB1细胞与转染空载体pcDNA3.1的K562-3.1细胞和未转染细胞K562相比,IGFBP2 mRNA水平上调了近7倍,而蛋白水平变化不明显.RNA干扰后,IGFBP2的表达在mRNA水平也相应下调,蛋白水平的变化同样不明显.通过生物信息学分析发现,IGFBP2第1个内含子中可能存在2.5 kb MAR样序列,且MAR样序列上存在多个SATB1的潜在结合位点.综上所述,过表达SATB1可以使K562细胞中IGFBP2 mRNA表达水平提高,而且其调控机制可能与SATB1直接和IGFBP2基因中的MAR样序列结合有关.

关键词：特异AT序列结合蛋白-1 核基质结合区胰岛素样生长因子结合蛋白-2 K562细胞

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过表达PTPα促进K562细胞体外增殖能力和体内致瘤性

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中国生物化学与分子生物学报 2007年第9期23卷 757-763页

作者：王红洁蔡蓉李珂许伟榕乔福峰郑新民卢健上海交通大学医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025

探讨蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)在血液肿瘤细胞中的特异性表达,研究过量表达PTPα对人红白血病细胞K562生物学行为的影响及在裸鼠体内致瘤能力的改变.首先应用RT-PCR和Western印迹检测3种不同类型造血系肿瘤细胞(K562、NB4、Jurkat T)... 详细信息

探讨蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)在血液肿瘤细胞中的特异性表达,研究过量表达PTPα对人红白血病细胞K562生物学行为的影响及在裸鼠体内致瘤能力的改变.首先应用RT-PCR和Western印迹检测3种不同类型造血系肿瘤细胞(K562、NB4、Jurkat T)中PTPα的表达水平.根据检测结果,选择K562细胞作为研究对象,利用脂质体将PTPα真核表达载体转染K562细胞,通过G418筛选获得阳性克隆,RT-PCR和Western印迹验证过表达情况;经MTT法检测细胞增值能力的改变;用流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞分化状态;并将阳性克隆细胞皮下接种裸鼠,观察PTPα基因转染前后细胞系在裸鼠体内的致瘤能力及瘤体的组织化学变化.上述实验结果表明,通过G418压力筛选获得了PTPα高表达多克隆细胞系K562-PTPα;经体外增殖实验分析,实验组K562-PTPα细胞与未转染组细胞K562和转染空载体组细胞K562-splice相比,细胞生长速度增快,G2/M期细胞比例增加(P<0.05),而细胞分化状态无明显变化;裸鼠体内致瘤实验显示,K562组、K562-splice组和K562-PTPα组平均瘤重分别为(1.1±0.3)g、(1.3±0.2)g和(2.5±0.5)g;病理切片显示,K562-PTPα组瘤体组织分化程度较对照组低、恶性程度高,细胞的致瘤能力增强(P<0.01).综上所述,过表达PTPα使K562细胞具有更强的体外增殖能力和体内致瘤性,表明PTPα可能在造血系统恶性肿瘤的发生发展中发挥促进作用.

关键词：蛋白质酪氨酸磷酸化蛋白质酪氨酸磷酸酶α 人红白血病 K562细胞

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RNA干扰技术抑制卵巢上皮性癌细胞IGF1R基因表达及增强顺铂敏感性的实验研究

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中华妇产科杂志 2008年第1期43卷 45-49页

作者：高华施君葛盛芳狄文上海交通大学医学院附属仁济医院妇产科 200127 上海交通大学医学院生物化学与分子生物学教研室

目的利用RNA干扰（RNAi）技术抑制卵巢上皮性癌（卵巢癌）H08910PM细胞胰岛素样生长因子1型受体（IGF1R）基因的表达，探讨IGF1R的生物学功能及对顺铂敏感性的影响。方法将IGF1R基因的特异性小分子干扰RNA（siRNA）、非特异性siRNA分别... 详细信息

目的利用RNA干扰（RNAi）技术抑制卵巢上皮性癌（卵巢癌）H08910PM细胞胰岛素样生长因子1型受体（IGF1R）基因的表达，探讨IGF1R的生物学功能及对顺铂敏感性的影响。方法将IGF1R基因的特异性小分子干扰RNA（siRNA）、非特异性siRNA分别转染细胞；转染后48h通过实时PCR、蛋白印迹法（western blot）、流式细胞仪分别测定IGF1R mRNA、蛋白的表达及细胞周期变化；转染后24、48、72、96h通过细胞增殖／毒性检测试剂cell counting kit-8（CCK-8）测定细胞增殖；于转染后24h给予不同浓度的顺铂作用24h，通过CCK-8法测定细胞增殖抑制率；于转染后24h给予10μg／ml顺铂作用24h，通过流式细胞仪及蛋白印迹法分别检测细胞凋亡和B淋巴细胞白血病／淋巴瘤蛋白2（Bcl-2）蛋白的表达。结果（1）转染后48h，IGF1R mRNA和蛋白的表达水平均明显下调，转染后IGF1R mRNA的表达水平下调了85．5％（P〈0．01）。（2）转染后48、72、96h，细胞增殖被明显抑制，细胞增殖活性分别为1．71±0．13、2．32±0．23、2．79±0．28，与未转染及转染非特异性siRNA的对照细胞比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。（3）转染后48h有24．37％的细胞处于G2期（P〈0．05）。（4）转染后24h联合不同浓度的顺铂作用24h，当顺铂浓度为2．5、5、10、20μg／ml时，细胞增殖被明显抑制，细胞增殖抑制率分别为（25．94±0．08）％、（40．25±0．05）％、（59．48±0．03）％、（74．18±0．08）％，差异均有统计学意义（P〈0．01）。（5）在转染siRNA24h后给予10μg／ml顺铂作用24h，可使细胞的凋亡率增加至17．95％（P〈0．05），并使Bcl-2蛋白的表达水平下调。结论通过RNAi技术可有效抑制IGF1R基因在转录和翻译水平的表达，抑制肿瘤细胞的增殖，出现G2期阻滞，明显提高细胞对顺铂化疗的敏感性。

关键词：卵巢肿瘤受体,IGF1型 RNA干扰顺铂药物筛选试验,抗肿瘤

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核基质结合区修饰的附着体载体介导的EGFP基因体外表达

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上海交通大学学报（医学版） 2006年第11期26卷 1233-1238页

作者：梅文瀚吴兆平徐荣婷钱关祥卢健上海交通大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025

目的建立一个非病毒介导外源基因高效转移和稳定表达体系。方法采用EB病毒(EBV)来源的附着体质粒载体,并结合顺式作用元件IFN-MAR构建重组质粒pcDNA3-EGFP-EBVR和pcDNA3-EGFP-EBNA1-MAR。采用荧光显微镜观察并摄片,FACS及逆转录-聚合酶... 详细信息

目的建立一个非病毒介导外源基因高效转移和稳定表达体系。方法采用EB病毒(EBV)来源的附着体质粒载体,并结合顺式作用元件IFN-MAR构建重组质粒pcDNA3-EGFP-EBVR和pcDNA3-EGFP-EBNA1-MAR。采用荧光显微镜观察并摄片,FACS及逆转录-聚合酶链反应检测EGFP表达阳性的COS-7细胞比例、荧光表达强度及EGFP基因的转录。通过Southern印迹和质粒还原实验分析质粒DNA在细胞中存在的形式。结果本实验构建的重组质粒载体pcDNA3-EGFP-EBVR和pcDNA3-EGFP-EBNA1-MAR在转染进入COS-7细胞后以染色体外附着体的形式存在。由于EBVR的存在,可以在体外获得EGFP较长时间的稳定表达。IFN-MAR替代O riP后,仍可在体外获得EGFP的稳定表达。结论MAR修饰的EBV附着体载体可以在体外获得外源基因高效稳定的表达。

关键词：基因治疗 EB病毒复制子附着体质粒载体核基质结合区

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Dicer蛋白与Wig-1蛋白的相互作用的研究

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分子细胞生物学报 2008年第5期41卷 376-382页

作者：黄建王海波姚玲郑新民 Olof Radmark 上海交通大学医学院生物化学与分子生物学教研室 Department of Medical Biochemistry and Biophysics Karolinska Institute Stockholm S-17177 Sweden

Dicer是RNA干扰中起核心作用的一种dsRNase,Wig-1是受p53诱导的、与dsRNA特异结合的一种锌指蛋白。本研究初步证实了Dicer蛋白与Wig-1蛋白存在相互作用。GST pull-down实验表明Dicer蛋白能与GST-Wig-1结合,而Wig-1蛋白能竞争性干扰Dicer... 详细信息

Dicer是RNA干扰中起核心作用的一种dsRNase,Wig-1是受p53诱导的、与dsRNA特异结合的一种锌指蛋白。本研究初步证实了Dicer蛋白与Wig-1蛋白存在相互作用。GST pull-down实验表明Dicer蛋白能与GST-Wig-1结合,而Wig-1蛋白能竞争性干扰Dicer与GST-eIF2C1的结合;Far-western分析证实Dicer蛋白可以与结合在硝酸纤维素膜上的GST-Wig-1蛋白结合;进一步发现Wig-1能有效促进重组Dicer的dsRNase酶切活性。这些结果揭示Dicer蛋白和Wig-1蛋白很可能通过相互作用共同参与了dsRNA调控相关的生理过程。

关键词： Dicer Wig-1 GST pull—down实验 Far—western分析 dsRNase酶切活性

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VEGF siRNA降低人肝癌细胞株SMMC7721的致瘤性

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分子细胞生物学报 2007年第5期40卷 277-285页

作者：黄建王海波葛盛芳贾仁兵黄青山郑新民上海交通大学医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025 复旦大学遗传学研究所上海200433

本研究应用RNA干扰(RNAi)技术高效抑制VEGF的表达,明显降低了人肝癌细胞株SMMC7721的致瘤性。化学合成针对人VEGF基因的siRNA,体外瞬时转染人肝癌细胞株SMMC7721,RT-PCR和Elisa法检测表明VEGF siRNA实验组与对照组相比,细胞内VEGF mRNA... 详细信息

本研究应用RNA干扰(RNAi)技术高效抑制VEGF的表达,明显降低了人肝癌细胞株SMMC7721的致瘤性。化学合成针对人VEGF基因的siRNA,体外瞬时转染人肝癌细胞株SMMC7721,RT-PCR和Elisa法检测表明VEGF siRNA实验组与对照组相比,细胞内VEGF mRNA表达下降了76.16%,VEGF分泌蛋白表达则下降了96.28%,而MTT法结果显示VEGF siRNA对SMMC7721细胞增殖没有明显作用。体内实验中,不同时间对荷SMMC7721细胞瘤裸小鼠进行siRNA直接瘤内注射,同时测量瘤体积,最后取瘤块进行组织切片观察并进行分子生物学分析,结果显示,与对照组相比,VEGF siRNA实验组肿瘤体积明显缩小,瘤内出现细胞坏死,同时肿瘤组织中VEGF mRNA和蛋白表达水平均明显降低。

关键词：小干扰RNA VEGF SMMC7721细胞

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FasL启动子调控的报告基因表达质粒的构建及活性分析

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中国男科学杂志 2006年第4期20卷 4-6,10页

作者：柴蔚然高惠宝上海交通大学医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025

目的扩增FasL启动子并构建带有FasL启动子的荧光素酶报告质粒,并评价在皮质酮(啮齿类动物体内的糖皮质激素)作用的睾丸Leydig细胞中,由FasL启动子调控的荧光素酶的表达活性。本研究将为进一步分析Leydig细胞中FasL启动子转录调控的作用... 详细信息

目的扩增FasL启动子并构建带有FasL启动子的荧光素酶报告质粒,并评价在皮质酮(啮齿类动物体内的糖皮质激素)作用的睾丸Leydig细胞中,由FasL启动子调控的荧光素酶的表达活性。本研究将为进一步分析Leydig细胞中FasL启动子转录调控的作用机制奠定基础。方法采用DNA重组技术构建由FasL启动子调控的荧光素酶报告基因的表达质粒。此重组质粒经阳离子脂质体LipofectAMINE介导,瞬时转染入Leydig细胞中,36h后细胞经皮质酮处理,并于48h时收集细胞。测定荧光素酶的相对表达活性。结果(1)酶切及测序证实成功扩增FasL基因启动子并构建了带有FasL基因启动子的报告基因表达质粒；(2)皮质酮处理的Leydig细胞中FasL启动子调控的荧光素酶表达质粒的表达活性显著增高。结论构建成功的带有FasL启动子的荧光素酶报告质粒可准确地评价FasL启动子在凋亡过程中的作用。

关键词： FasL启动子报告基因表达载体 Leydig细胞皮质酮

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hVEGF基因工程生物膜对全层皮肤缺损创面中flt-1和TSP-1表达的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2009年第1期29卷 47-50页

作者：赵雷王莉姜叙诚郑林张帆赵涵芳许伟榕上海交通大学基础医学院病理学教研室上海200025 上海交通大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025

目的探讨人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)基因工程生物膜对创面组织fms样酪氨酸酶(flt-1)和血小板反应蛋白-1(TSP-1)表达的影响。方法建立hVEGF基因工程生物膜覆盖大鼠全层皮肤缺损创面的动物模型,将80只SD大鼠随机分为A、B、C、D四组,每... 详细信息

目的探讨人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)基因工程生物膜对创面组织fms样酪氨酸酶(flt-1)和血小板反应蛋白-1(TSP-1)表达的影响。方法建立hVEGF基因工程生物膜覆盖大鼠全层皮肤缺损创面的动物模型,将80只SD大鼠随机分为A、B、C、D四组,每组20只,所有动物于背部制备皮肤全层缺损创面。A组:创面覆盖hVEGF基因工程生物膜和Tegaderm切口膜;B组:创面覆盖空白生物膜和Tegaderm切口膜,C组:创面覆盖含空质粒的成纤维细胞种植的生物膜和Tegaderm切口膜;D组:创面覆盖Tegaderm切口膜。采用免疫组化和图像分析的方法,观察各组在术后3、7、14、29d时创面中flt-1和TSP-1表达的情况。结果术后3、7、14d时,A组flt-1阳性细胞数显著高于B、C、D组(P<0.05或P<0.01);术后7、14、29d时A组创面中TSP-1表达显著低于B、C、D组(P<0.01)。结论将hVEGF基因工程生物膜覆盖于大鼠全层皮肤缺损创面,能使创面持续表达flt-1并抑制TSP-1表达,从而促进新生血管形成,有利于创面愈合。

关键词：人血管内皮细胞生长因子 flt-1 血小板反应蛋白创面愈合

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