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上海交通大学学报（医学版） 2008年第3期28卷 270-272页

作者：高华施君葛盛芳狄文上海交通大学医学院仁济医院妇产科上海 200127 上海交通大学基础医学院生物化学和分子生物学教研室上海 200025

目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF1)及其受体(IGF1R)在卵巢癌HO8910PM细胞增殖中的作用。方法以不同浓度的IGF1作用于HO8910PM细胞24、48、72和96 h,通过CCK-8法检测细胞增殖活性;在脂质体介导下转染特异性IGF1R小干扰RNA(siRNA),通过实时... 详细信息

目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF1)及其受体(IGF1R)在卵巢癌HO8910PM细胞增殖中的作用。方法以不同浓度的IGF1作用于HO8910PM细胞24、48、72和96 h,通过CCK-8法检测细胞增殖活性;在脂质体介导下转染特异性IGF1R小干扰RNA(siRNA),通过实时PCR和Western blotting验证其在IGF1R mRNA和蛋白表达水平的抑制效果;于转染后48 h给予IGF1刺激,通过CCK-8法测定细胞增殖活性。结果IGF1作用48 h后可明显刺激细胞的增殖(P<0.05);转染IGF1R siRNA后48 h,IGF1R mRNA和蛋白表达均明显下调(P<0.05);转染IGF1R siRNA后48 h给予IGF1刺激,IGF1的促细胞增殖效应明显被抑制(P<0.05)。结论IGF1通过IGF1R途径促进HO8910PM细胞的增殖,IGF1R siRNA可以有效抑制该作用。

关键词：胰岛素样生长因子受体卵巢癌小干扰RNA 增殖

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沉默结缔组织生长因子对大鼠肝纤维化及细胞外基质积聚的影响

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中华肝脏病杂志 2008年第3期16卷 188-192页

作者：李光明李定国谢青史毅姜山周慧娟陆汉明金由辛上海交通大学医学院附属新华医院消化科 200092 上海交通大学医学院附属瑞金医院感染科中国科学院上海生命研究院、生物化学与细胞生物学研究所、分子生物学国家重点实验室

目的研究结缔组织生长因子（CTGF）小干扰RNA（siRNA）在CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型中的抗肝纤维化作用及其对细胞外基质积聚的影响。方法雄性SD大鼠30只，随机分成5组。模型组：皮下注射CCl4及经门静脉注射等渗盐水，3d1次，连续6周... 详细信息

目的研究结缔组织生长因子（CTGF）小干扰RNA（siRNA）在CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型中的抗肝纤维化作用及其对细胞外基质积聚的影响。方法雄性SD大鼠30只，随机分成5组。模型组：皮下注射CCl4及经门静脉注射等渗盐水，3d1次，连续6周；预防组：皮下注射CCh及经门静脉注射CTGFsiRNA，连续6周；治疗组：皮下注射CCl4 2周，随后给予CTGFsiRNA及CCl4 4周；对照siRNA干预组：皮下注射CCla及经门静脉注射对照siRNA，连续6周；空白对照组：经门静脉注射等渗盐水6周。用HE和SiNusred染色评估大鼠肝组织学变化，RTPCR或（和）Westernblot检测肝组织CTGF、Ⅰ与Ⅲ型胶原及层黏连蛋白的表达，放射免疫法检测外周血Ⅲ型前胶原及透明质酸含量。结果模型组及对照siRNA组大鼠肝组织CTGF、Ⅰ与Ⅲ型胶原及层黏连蛋白基因表达显著上调；与模型组相比，预防组及治疗组由CCl4诱导的CTGFmRNA和蛋白表达及Ⅰ与Ⅲ型胶原、层黏连蛋白mRNA表达分别下调76%±8％、95％±2％、74%±8％、78％±8％、31％±7％和80％±3％、93％±3％、57％±6%、59％±10％、43％±9％（F值分别为68．630，21．234，24．219，16．315和9．716，P值均〈0．01），肝纤维化程度明显减轻，大鼠外周血Ⅲ型前胶原和透明质酸含量也显著降低。结论经门静脉注射CTGF siRNA能显著抑制实验大鼠肝CTGF基因表达，由此通过阻止细胞外基质积聚而缓解肝纤维化。

关键词：肝纤维化结缔组织生长因子小干扰RNA 细胞外基质

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乙酰化对代谢的调控及其在代谢相关疾病中的作用

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中国科学：生命科学 2015年第11期45卷 1083-1092页

作者：王义平雷群英上海交通大学医学院基础医学院生物化学与分子细胞生物学系上海200025 复旦大学上海医学院基础医学院生物化学与分子生物学系教育部代谢与分子医学重点实验室上海200032 复旦大学上海医学院生物医学研究院肿瘤代谢实验室上海200032

赖氨酸的乙酰化修饰是一种进化上高度保守的翻译后修饰机制.乙酰化酶和去乙酰化酶对特定蛋白的乙酰化状态进行动态调控.近年来的质谱研究发现,几乎所有的代谢酶都存在乙酰化修饰,表明乙酰化修饰对细胞代谢具有广泛的调控作用.除在转录... 详细信息

赖氨酸的乙酰化修饰是一种进化上高度保守的翻译后修饰机制.乙酰化酶和去乙酰化酶对特定蛋白的乙酰化状态进行动态调控.近年来的质谱研究发现,几乎所有的代谢酶都存在乙酰化修饰,表明乙酰化修饰对细胞代谢具有广泛的调控作用.除在转录水平进行调控外,乙酰化修饰还可以通过改变代谢酶的蛋白间相互作用、蛋白稳定性、催化活力和亚细胞定位等方式,对多种生物学过程如能量代谢、信号转导和氧化应激反应等进行调控.乙酰化对代谢途径的调控与代谢相关疾病如肿瘤、心血管疾病、糖尿病和肥胖等的发生和发展密切相关.本文总结了近年来乙酰化修饰调控代谢的相关研究进展,并着重阐述乙酰化修饰对代谢酶调控的具体分子机制.

关键词：乙酰化肿瘤代谢代谢相关疾病

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低切应力对体外培养动脉壁细胞PDGF表达的影响

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生物医学工程学杂志 2005年第1期22卷 5-9页

作者：刘波周瑾姜宗来张炎刘艳春严志强李玉泉上海交通大学医学院生物力学实验室上海200030 第二军医大学生物化学与分子生物学教研室上海200433 第二军医大学解剖学教研室上海200433

为了研究切应力对完整血管的生物学作用 ,探讨应力引起血管重建过程中生长因子的变化 ,用血管应力培养系统体外培养猪颈总动脉 ,通过免疫组织化学、抗体夹心法酶联免疫吸附测定实验 (EL ISA)和计算机图像分析等方法 ,观察了低切应力作... 详细信息

为了研究切应力对完整血管的生物学作用 ,探讨应力引起血管重建过程中生长因子的变化 ,用血管应力培养系统体外培养猪颈总动脉 ,通过免疫组织化学、抗体夹心法酶联免疫吸附测定实验 (EL ISA)和计算机图像分析等方法 ,观察了低切应力作用下动脉壁细胞 PDGF- A、PDGF- B表达变化情况。结果显示 ,低切应力作用下体外培养动脉 EC中 PDGF- B及 VSMC中 PDGF- A的合成与分泌皆增加。PDGF表达上升 ,促进了 VSMC表型转换与增殖。在低切应力引起的血管重建中 ,这一机制可能起着重要作用。

关键词：切应力体外培养细胞培养动脉壁细胞基因表达血管重建血小板衍生生长因子血管平滑肌细胞

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抗TNF-α单链抗体噬菌体展示文库的建立和鉴定

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中国生物化学与分子生物学报 2010年第10期26卷 930-936页

作者：杨涛柴蔚然杨利军程牛亮解军牛勃山西医科大学生物化学与分子生物学教研室省部共建细胞生理学教育部重点实验室太原030001 上海交通大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200025 首都儿科研究所北京100020

应用噬菌体展示技术构建抗肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor α,TNF-α)单链抗体(single chain Fv,scFv)文库,从中筛选抗TNF-αscFv并进行鉴定.利用重组人TNF-α(rhTNF-α)免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因,经重叠延伸反应将VH和VL... 详细信息

应用噬菌体展示技术构建抗肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor α,TNF-α)单链抗体(single chain Fv,scFv)文库,从中筛选抗TNF-αscFv并进行鉴定.利用重组人TNF-α(rhTNF-α)免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因,经重叠延伸反应将VH和VL基因拼接成scFv基因,以SfiⅠ/NotⅠ位点定向插入pCANTAB 5E噬菌粒载体,转化*** TG1,构建了库容为4.6×108的抗TNF-α单链抗体库.对抗体库进行3轮富集筛选后,ELISA检测阳性克隆的抗原特异性,取1株阳性克隆进行测序分析.结果表明,抗TNF-αscFv基因序列长774bp,编码258个氨基酸.将此阳性克隆转化***2151,IPTG诱导可溶性scFv的表达,经SDS-PAGE和Western印迹分析,scFv的分子量约为28kD.经亲和纯化后的scFv可与rhTNF-α结合,并可中和由rhTNF-α引起的L929细胞毒性.本文利用噬菌体抗体库筛选到了高亲和力的抗TNF-αscFv,为研制临床免疫治疗的新型抗体奠定了实验基础.

关键词：噬菌体展示技术肿瘤坏死因子-α 单链抗体

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半胱天冬氨酸蛋白酶-12小干扰RNA对小鼠肝细胞凋亡的阻抑

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中华传染病杂志 2007年第6期25卷 321-326页

作者：林兰意谢青王晖姜山周霞秋刘芸野俞红郭清金由辛上海交通大学医学院附属瑞金医院感染科 200025 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室

目的观察小鼠半胱天冬氨酸蛋白酶-12(caspase-12)基因特异性小干扰RNA (siRNA)构建的表达载体pRNAT-casp12对caspase-12基因的抑制及其对内质网应激介导的小鼠肝细胞凋亡的影响。方法以小鼠肝细胞株Hepa 1-6为靶细胞,利用脂质体与重组质... 详细信息

目的观察小鼠半胱天冬氨酸蛋白酶-12(caspase-12)基因特异性小干扰RNA (siRNA)构建的表达载体pRNAT-casp12对caspase-12基因的抑制及其对内质网应激介导的小鼠肝细胞凋亡的影响。方法以小鼠肝细胞株Hepa 1-6为靶细胞,利用脂质体与重组质粒pRNAT- caspl 2共转染,分别在转染24、48和72 h后收集细胞,采用实时荧光定量PCR分析和Western印迹检测caspase-12的表达;利用毒胡萝卜素(TG)诱导细胞,建立内质网应激介导的细胞凋亡模型,通过DNA梯带凝胶电泳检测,选出适合的诱导时间;TG诱导已转染了pRNAT-casp12的干扰组细胞后,以空质粒转染组为对照,利用Western印迹检测caspase-12蛋白表达水平的变化,通过DNA梯带凝胶电泳、流式细胞仪、Hoechst 33258染色等方法检测细胞凋亡,观察caspase-12 siRNA对细胞凋亡的影响。结果pRNAT-casp12转染细胞24、48和72 h后,caspase-12 mRNA的水平分别下降了45.6%、72.5%和59.5%;caspase-12蛋白表达下降了17.1%、37.3%和60.1%;2μmol/L TG处理细胞30 h后,成功诱导细胞凋亡;与对照组相比,干扰组细胞经TG诱导后,caspase-12蛋白表达水平下降了54.6%,流式细胞仪检测发现早期调亡率下调了51.4%(P<0.01)。结论小鼠caspase-12 siRNA对Hepa 1-6细胞caspase-12基因的表达具有显著的抑制作用,能够明显阻抑内质网应激介导的凋亡,有望发展成为新一代抗凋亡药物。

关键词：肝内质网细胞凋亡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 RNA干扰应激

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小鼠半胱天冬酶-12特异性小干扰RNA真核表达载体的构建及鉴定

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中华传染病杂志 2007年第2期25卷 67-71页

目的构建小鼠半胱天冬氨酸蛋白酶-12(Caspase-12)基因特异性小干扰RNA (siRNA)表达载体并检测其表达。方法参照siRNA模板设计原则,设计并合成3对针对caspase- 12不同位点的siRNA,分别在脂质体介导下转染小鼠肝癌细胞株Hepal-6,24 h收集... 详细信息

目的构建小鼠半胱天冬氨酸蛋白酶-12(Caspase-12)基因特异性小干扰RNA (siRNA)表达载体并检测其表达。方法参照siRNA模板设计原则,设计并合成3对针对caspase- 12不同位点的siRNA,分别在脂质体介导下转染小鼠肝癌细胞株Hepal-6,24 h收集细胞;RT-PCR分析不同位点siRNA对靶基因mRNA表达的抑制,筛选出抑制效率最高的位点;将此位点siRNA模板序列插入质粒pRNAT-H1.1Neo中,PCR分析及基因测序进行鉴定;构建成功的重组质粒转染Hepal-6细胞48 h和72 h后,实时荧光定量PCR分析caspase-12 mRNA表达;Western印迹检测Caspase-12的表达。数据行t检验。结果RT-PCR分析表明,第一对siRNA(siRNA*1)对caspase- 12基因表达的抑制效率最高;重组质粒pRNAT-H1.1Neo-caspase12(pRNAT-casp12)经PCR分析及测序表明,siRNA*1模板序列成功插入预计位点,且序列正确;pRNAT-easp12转染Hepal-6细胞48 h和72 h后,与空质粒对照组相比,caspase-12 mRNA水平分别下降72.5%和59.5%(P<0.05);pRNAT-casp12转染后,caspase-12酶原表达量在24、48和72 h分别下调17.1%、37.3%和60.1%,48 h和72 h的抑制率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建小鼠caspase-12特异性siRNA真核表达载体,它对小鼠肝癌细胞caspase-12基因的表达具有显著和特异的抑制作用。

关键词：内质网应激细胞凋亡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 RNA干扰

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新型非病毒纳米基因载体PEI-β-CyD对软骨细胞和骨髓间充质干细胞转染有效性评估

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上海交通大学学报（医学版） 2011年第6期31卷 733-738页

作者：童海骏黄金刚汤谷平戴尅戎张晓玲上海交通大学医学院中国科学院上海生命科学研究院健康科学研究所骨科细胞与分子生物学实验室上海200025 浙江大学化学生物和药物研究所杭州310028 上海交通大学医学院附属第九人民医院骨科上海市骨科内植物重点实验室上海200011

目的评估新型非病毒纳米基因载体聚乙烯亚胺-β-环糊精(PEI-β-CyD)对软骨细胞系C5.18和骨髓间充质干细胞系C3H10T1/2转染的有效性。方法体外培养软骨细胞系C5.18和骨髓间充质干细胞系C3H10T1/2,MTT法观察并比较PEI-β-CyD和相对分子质... 详细信息

目的评估新型非病毒纳米基因载体聚乙烯亚胺-β-环糊精(PEI-β-CyD)对软骨细胞系C5.18和骨髓间充质干细胞系C3H10T1/2转染的有效性。方法体外培养软骨细胞系C5.18和骨髓间充质干细胞系C3H10T1/2,MTT法观察并比较PEI-β-CyD和相对分子质量为25 000的聚乙烯亚胺(PEI25KDa)对C5.18细胞和C3H10T1/2细胞的细胞毒性。在不同的N/P(载体有效氮含量/外源基因有效磷含量)复合条件下,利用PEI-β-CyD和PEI25KDa分别转染C5.18细胞和C3H10T1/2细胞,倒置荧光显微镜结合流式细胞仪分析转染效率。结果 PEI-β-CyD对C5.18细胞和C3H10T1/2细胞的细胞毒性均小于PEI25KDa。PEI-β-CyD与PEI25KDa对C5.18细胞的转染效率比较,差异无统计学意义(P>0.05);PEI-β-CyD对C3H10T1/2细胞的转染效率显著高于PEI25KDa(P<0.05)。结论 PEI-β-CyD对于软骨细胞系C5.18及骨髓间充质干细胞系C3H10T1/2是一种低毒有效的非病毒纳米基因载体,在软骨组织工程和细胞治疗研究及应用领域具有良好的开发前景。

关键词：非病毒纳米基因载体 PEI-β-CyD 细胞毒性转染效率

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人血管内皮生长因子基因工程生物膜愈合大鼠皮肤创伤的初步研究

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外科理论与实践 2006年第3期11卷 244-247页

作者：许伟榕王莉赵涵芳陈诗书上海交通大学医学院生物化学和分子生物学实验室上海200025 上海交通大学医学院病理学教研室上海200025

目的:观察含有人血管内皮生长因子(hVEGF)重组质粒的成纤维细胞种植的基因工程生物膜对于大鼠创面新生血管的生成以及创伤愈合的影响,为基因工程生物膜用于临床提供进一步的资料。方法:实验大鼠分为3组3个时相,分别为实验组V:创面覆盖含... 详细信息

目的:观察含有人血管内皮生长因子(hVEGF)重组质粒的成纤维细胞种植的基因工程生物膜对于大鼠创面新生血管的生成以及创伤愈合的影响,为基因工程生物膜用于临床提供进一步的资料。方法:实验大鼠分为3组3个时相,分别为实验组V:创面覆盖含有hVEGF重组质粒的成纤维细胞种植的基因工程生物膜后常规包扎;对照组B:创面覆盖生物膜后常规包扎;对照组O:创面进行常规包扎。术后7d、14d、29d分别取创伤皮肤组织进行创面微血管密度(microvessel density,MVD)计数大鼠皮肤组织创面的新生血管量,同时观察创伤愈合的过程、通过Western印迹实验检测实验大鼠组织的VEGF蛋白表达。结果:Western印迹证实应用hVEGF制备的基因工程生物膜能使大鼠皮肤创面持续表达VEGF,表达量高于对照组;MVD计数表明创面覆盖含有hVEGF重组质粒的成纤维细胞种植的基因工程生物膜后新生血管明显多于对照组(P<0.01)。结论:提示我室研制的基因工程生物膜能促进创面新生血管生成,以达到减少瘢痕形成、促进伤口愈合的目的。

关键词：生物敷料血管内皮生长因子,人创伤和损伤伤口愈合

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TIGAR基因在thapsigargin诱导的HepG2细胞自噬与凋亡中的作用与机制研究

TIGAR基因在thapsigargin诱导的HepG2细胞自噬与凋亡中的作用与机...

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华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会

作者：叶玲钱关祥葛盛芳上海交通大学医学院生物化学和分子生物学教研室

本研究选用thapsigargin(TG)作为诱导药物,通过药敏实验筛选出实验所用的敏感瘤株,再研究TIGAR基因在TG诱导的细胞自噬与凋亡中的作用及其相关机制。TIGAR作为一个2005年首次在Cancer Research杂志上被报道的、受P53诱导的、调节

关键词： TIGAR HepG2 thapsigargin 细胞自噬

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