检索结果-内蒙古大学图书馆

组织工程与重建外科杂志 2013年第4期9卷 190-194页

作者：蒋婷杨泽龙白倩周广东刘伟南充市中心医院烧伤整形美容外科川北医学院第二临床学院南充市中心医院骨科川北医学院第二临床学院四川省南充市637000 上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室

目的观察不同代次小鼠脂肪干细胞(mASCs)增殖能力及体外成脂能力,为组织工程种子细胞的合理选用提供实验依据。方法采用胶原酶消化小鼠腹股沟皮下脂肪组织,贴壁培养,体外传代扩增。实验采用原代(P0)、第2代(P2)和第5代(P5)细胞。观察不... 详细信息

目的观察不同代次小鼠脂肪干细胞(mASCs)增殖能力及体外成脂能力,为组织工程种子细胞的合理选用提供实验依据。方法采用胶原酶消化小鼠腹股沟皮下脂肪组织,贴壁培养,体外传代扩增。实验采用原代(P0)、第2代(P2)和第5代(P5)细胞。观察不同代次mASCs的细胞形态及增殖能力;经高密度接种培养4周及成脂诱导2周,通过油红染色、RT-PCR检测,探讨其诱导成脂分化潜能及自发成脂能力。结果小鼠脂肪干细胞经传代后,外观主要呈长梭形及不规则形,不同代次的mASCs均具有很强的体外增殖能力;P0细胞具有极强的体外自发成脂能力,P2细胞自发成脂能力明显降低,至P5时基本没有体外自发成脂能力;P0、P2、P5细胞具有相似的诱导成脂分化潜能。结论随着培养代次的增加,mASCs自发成脂能力降低而诱导成脂分化潜能基本不变,扩增至第5代时仍维持了较强的增殖能力及良好的干细胞特性。在一定范围内mASCs体外传代扩增能明显减少其脂肪前体细胞的含量,有助于间充质干细胞纯化。

关键词：小鼠脂肪干细胞不同代次成脂分化

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糖尿病裸鼠的皮肤组织改变及其与创面愈合的相关性

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上海交通大学学报（医学版） 2012年第1期32卷 59-63页

作者：黄昕沈向前吴守成曹谊林浙江大学医学院附属第一医院手外科杭州310003 上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

目的研究糖尿病裸鼠的皮肤组织改变及其与皮肤创面愈合的相关性。方法采用150 mg/kg链脲佐菌素(STZ)一次性腹腔注射建立糖尿病裸鼠模型。对正常对照组裸鼠(n=20)和诱导成模后4周的糖尿病裸鼠(n=20)分别切取背部直径为1.8 cm的全层皮肤... 详细信息

目的研究糖尿病裸鼠的皮肤组织改变及其与皮肤创面愈合的相关性。方法采用150 mg/kg链脲佐菌素(STZ)一次性腹腔注射建立糖尿病裸鼠模型。对正常对照组裸鼠(n=20)和诱导成模后4周的糖尿病裸鼠(n=20)分别切取背部直径为1.8 cm的全层皮肤。采用苏木精-伊红(HE)染色,观察裸鼠皮肤的组织学改变并测量真皮层和表皮层厚度。采用苦味酸天狼猩红染色并分析相对胶原含量;应用氧化酶法测量皮肤组织糖含量。于术后第3、5、7、14和21天观察创面的愈合率。结果糖尿病组裸鼠的皮肤真皮层和表皮层厚度较正常对照组明显变薄,真皮层相对胶原含量也明显少于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。糖尿病组裸鼠的血糖浓度和皮肤糖含量均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01);皮肤组织糖含量与血糖浓度呈正相关(r=0.951,P<0.01)。糖尿病组裸鼠在术后第3、5、7、14和21天的创面愈合率显著低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论应用STZ诱导的糖尿病裸鼠模型的皮肤组织改变明显,这些改变可能与局部糖基化终末产物蓄积,导致糖尿病皮肤创面不易愈合有关。

关键词：链脲佐菌素糖尿病裸鼠皮肤创面愈合

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细胞形态对间充质干细胞定向分化作用的影响

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国际生物医学工程杂志 2012年第5期35卷 303-307,F0003页

作者：王文波李洁刘伟上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科 200011 上海市组织工程重点实验室组织工程国家工程中心

【摘要】间充质干细胞（MSCs）来源于中胚层，具有多向分化潜能、免疫原性低、自我更新能力强特点，是再生医学的理想细胞来源。以往研究多使用生长因子诱导MSCs定向分化。随着生物微工程技术的发展，应用纳米技术对材料表面进行修饰从... 详细信息

【摘要】间充质干细胞（MSCs）来源于中胚层，具有多向分化潜能、免疫原性低、自我更新能力强特点，是再生医学的理想细胞来源。以往研究多使用生长因子诱导MSCs定向分化。随着生物微工程技术的发展，应用纳米技术对材料表面进行修饰从而控制细胞形态，能够深入研究不同形态对MSCs定向分化的影响。总结了不同细胞形态对MSCs定向分化的影响以及潜在的机制，如细胞牵张力改变、黏着斑激酶（FAK）的激活、小分子G蛋白的活化等。控制细胞形态，并结合力学刺激、基质的软硬度等相关因素，可优化组织工程支架材料的设计，为再生医学提供理论基础。

关键词：间充质干细胞形态分化机制

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重组hTGF-β1基因转染人脂肪干细胞对其向软骨分化的影响

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解剖科学进展 2012年第4期18卷 357-361页

作者：夏万尧陈瑾君孙恒赟刘伟周广东曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院整形外科上海组织工程重点实验室上海200011

目的研究重组hTGF-β1腺病毒(AdhTGF-β1)转染人脂肪干细胞(ADSCs)对其向软骨分化的作用。方法重组AdhTGF-β1转染人ADSCs,对照组转染AdLacZ,腺病毒的量以200pfu/细胞计算,体外细胞团聚集连续诱导培养21d,酶联免疫吸附定量检测(ELISA)hT... 详细信息

目的研究重组hTGF-β1腺病毒(AdhTGF-β1)转染人脂肪干细胞(ADSCs)对其向软骨分化的作用。方法重组AdhTGF-β1转染人ADSCs,对照组转染AdLacZ,腺病毒的量以200pfu/细胞计算,体外细胞团聚集连续诱导培养21d,酶联免疫吸附定量检测(ELISA)hTGF-β1蛋白的表达,然后分别从大体观察、组织学和II型胶原蛋白免疫组化的检测对形成组织进行评价。结果 hTGF-β1蛋白量在14d时达最高峰,随后逐渐降低。连续细胞团聚集诱导培养21d,细胞团收缩成近似小球形的组织块,外观成乳白色。HE染色可见细胞团外周为由数层扁平状成纤维样细胞组成的纤维软骨膜,下部区域有巢状软骨样细胞组成,有些区域可见软骨样细胞包埋在软骨陷窝内。Safranin'O染色显示,形成的软骨组织区域有被染成桔红色蛋白多糖类基质分泌。而对照组苏木素-伊红染色观察见无软骨样组织形成或有向软骨分化现象。Ⅱ型胶原免疫组化染色检测显示实验组细胞团出现较明显的阳性染色区域,可见棕黄色的颗粒分布于胞浆内。对照组Ⅱ型胶原免疫组化染色检测显示无明显的阳性染色区。结论重组hTGF-β1腺病毒转染人ADSCs诱导人ADSCs向软骨细胞表型分化形成软骨样组织,为hTGF-β1基因转染的人ADSCs在软骨组织工程应用中奠定了基础。

关键词：人脂肪干细胞基因转染腺病毒转化生长因子β1

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CD204阴性人脂肪来源细胞体外成软骨潜能的初步研究

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组织工程与重建外科杂志 2012年第1期8卷 1-5页

作者：丁金萍孙恒赟陈谨君张文杰刘伟曹谊林周广东 200011 上海市上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室

目的比较CD204+和CD204-两种人脂肪来源细胞的干细胞特性和体外诱导成软骨的能力.方法分离培养人脂肪来源细胞并进行流式细胞分选,分别获得CD204+和CD204-两种细胞.将这两种细胞培养扩增至第2代,观察其形态学特点；成脂、成骨定向诱... 详细信息

目的比较CD204+和CD204-两种人脂肪来源细胞的干细胞特性和体外诱导成软骨的能力.方法分离培养人脂肪来源细胞并进行流式细胞分选,分别获得CD204+和CD204-两种细胞.将这两种细胞培养扩增至第2代,观察其形态学特点；成脂、成骨定向诱导分化,油红O染色、茜素红染色定性；同时将两种细胞进行pellet成软骨诱导分化,比较体外诱导成软骨的能力,并以HE、Safranin O和Ⅱ型胶原免疫组化染色等进行鉴定.结果经流式细胞分选,脂肪来源细胞中CD204表达阳性率约为10％.分选后的CD204+和CD204-细胞均呈成纤维细胞样贴壁生长,但CD204-细胞具有更强的增殖能力.成脂诱导10d后,两组细胞油红O染色均可见胞浆内有大量红染脂滴,但 CD204+细胞具有更强的成脂潜能.成骨诱导2周后,两组细胞茜素红染色均可见钙结节红染,而CD204-细胞具有更强的成骨潜能.同时,细胞pellet成软骨诱导4周后,大体观可见CD204-细胞组pellet形成白色透明样软骨成分,而CD204+细胞组pellet外观微黄.HE和Ⅱ型胶原免疫组化染色均显示CD204-组pellet可见成熟软骨陷窝形成,SafraninO染色显示CD204-组软骨特异性细胞外基质沉积；而CD204+细胞组pellet则呈纤维化改变.结论脂肪组织来源的CD204-细胞具有干细胞的生物学特点,且有良好的成软骨潜能,可以成为软骨组织工程良好的种子细胞来源.

关键词： CD204(巨噬细胞清道夫受体) 脂肪组织来源干细胞软骨潜能细胞分选

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脂肪组织工程的研究现状和未来应用前景展望

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解剖科学进展 2012年第3期18卷 296-299页

作者：夏万尧陈瑾君周广东上海交通大学医学院附属第九人民医院整形外科上海组织工程重点实验室上海200011

软组织缺失是整形外科关注的焦点问题之一,传统软组织重建方法存在供皮区缺损、植入物移动和吸收以及产生异物反应。近年干细胞被认为可能是一种新颖的治疗方法,脂肪干细胞(adipose-derived Stem Cells,ADSCs)是存在于脂肪组织内的一种... 详细信息

软组织缺失是整形外科关注的焦点问题之一,传统软组织重建方法存在供皮区缺损、植入物移动和吸收以及产生异物反应。近年干细胞被认为可能是一种新颖的治疗方法,脂肪干细胞(adipose-derived Stem Cells,ADSCs)是存在于脂肪组织内的一种多能干细胞,具有多向分化潜能,且数量充足、获取方便,它们在临床前试验治疗的研究和临床实验方面已有良好的记录。本文主要从ADSCs获取、ADSCs的分离和扩增、生物材料和ADSCs、生长因子在脂肪组织工程应用以及脂肪组织工程策略等研究进展做一综述,这也是脂肪组织工程研究中不可缺少的重要环节。

关键词：脂肪组织工程策略应用 ADSCs 软组织缺失脂肪干细胞多向分化潜能 Cells 多能干细胞

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小鼠毛囊来源间充质干细胞体外诱导成骨的实验研究

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中国口腔颌面外科杂志 2012年第1期10卷 23-28页

作者：高文岚段惠川潘晓岗上海交通大学医学院附属第九人民医院.口腔医学院口腔正畸科上海市口腔医学重点实验室上海200011 上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

目的:探索便捷而有效的小鼠毛囊来源间充质干细胞的体外培养方法,并研究该群细胞的成骨能力,以探寻新的骨组织工程种子细胞。方法:采用酶消化法分离获得小鼠毛囊来源的干细胞,用不同培养体系进行传代培养,观察各细胞的增殖能力,并对所... 详细信息

目的:探索便捷而有效的小鼠毛囊来源间充质干细胞的体外培养方法,并研究该群细胞的成骨能力,以探寻新的骨组织工程种子细胞。方法:采用酶消化法分离获得小鼠毛囊来源的干细胞,用不同培养体系进行传代培养,观察各细胞的增殖能力,并对所获得的毛囊来源的干细胞向成骨细胞诱导,行碱性磷酸酶染色、茜素红染色,对该细胞的成骨能力进行鉴定。结果:应用MEF条件培养液培养的小鼠毛囊来源的间充质干细胞具有较强的增殖能力,且诱导组和对照组能在体外被诱导成骨。结论:小鼠毛囊中存在具有较强增殖能力及成骨能力的间充质干细胞,可作为骨组织工程的种子细胞。

关键词：小鼠毛囊间充质干细胞成骨

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P17-BMP2多肽促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的实验研究

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组织工程与重建外科杂志 2012年第2期8卷 65-68页

作者：李佳滨张文杰崔福斋杜晓岩佳木斯大学附属第二医院口腔医院整形外科黑龙江省佳木斯市154004 上海市组织工程研究重点实验室上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科200011 清华大学材料科学与工程系北京市100084

目的探讨P17-BMP2对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和成骨分化的影响。方法体外培养Wistar大鼠BMSCs,分4组培养:对照组(A组)、成骨诱导组(B组)、成骨诱导+P17-BMP2组(C组)、单纯P17-BMP2组(D组)。A组:采用普通DMEM培养基培养;B组:含... 详细信息

目的探讨P17-BMP2对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和成骨分化的影响。方法体外培养Wistar大鼠BMSCs,分4组培养:对照组(A组)、成骨诱导组(B组)、成骨诱导+P17-BMP2组(C组)、单纯P17-BMP2组(D组)。A组:采用普通DMEM培养基培养;B组:含地塞米松10-7mol/L、Vit C 10 mg/L及β-甘油磷酸钠(β-sodium glycerophos-phate,β-GP)10 mmol/L的DMEM培养基培养;C组:成骨诱导液+P17-BMP2(10μg/mL)培养;D组:含P17-BMP2(10μg/mL)的DMEM培养基培养。CCK-8法检测培养第1、3、5、7天时细胞增殖情况;培养1周后,碱性磷酸酶染色(Alkaline phosphatase,ALP),实时定量PCR检测骨钙素(Osteocalcin,OCN)、骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)、转录因子(Runt-related transcription factor 2,Runx2)的mRNA表达。结果与A组相比,D组对大鼠BMSCs增殖无影响,而B组对BMSCs细胞增殖具有促进作用,C组细胞增殖能力显著提高;各组碱性磷酸酶染色均为阳性,但染色强度有差异,C组>B组>D组>A组;Q-PCR检测结果显示:与A相比,B组和C组中所有检测基因的表达均显著提高。结论 P17-BMP2能协同成骨诱导剂促进BMSCs的成骨分化。

关键词：骨髓间充质干细胞 P-骨形态发生蛋白增殖成骨分化

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体内外环境对组织工程软骨组织结构与力学性能的影响

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中华整形外科杂志 2011年第5期27卷 367-372页

作者：晏丹周广东曹谊林刘伟张文杰湖南省郴州市第一人民医院整形美容科 423000 上海交通大学医学院组织工程研究重点实验室

目的探讨体外构建组织工程化软骨在体、内外环境中力学性能及组织结构的变化，以及微环境对组织形成的影响，为工程化软骨构建提供适当参数。方法体外培养扩增人胎儿关节软骨细胞，取第2代细胞以6×10^7个细胞／ml密度接种到聚羟... 详细信息

目的探讨体外构建组织工程化软骨在体、内外环境中力学性能及组织结构的变化，以及微环境对组织形成的影响，为工程化软骨构建提供适当参数。方法体外培养扩增人胎儿关节软骨细胞，取第2代细胞以6×10^7个细胞／ml密度接种到聚羟基乙酸／聚乳酸（Polyglycolicacid／Polylacticacid，PGA／PLA）材料制成的圆柱形三维支架上，常规体外培养4周后，分为体内组（C、D组）和体外组（A、B组），C、D组植于裸鼠皮下，A、B组继续常规培养液培养，于6、12周后取材，以正常软骨作为对照，行大体观察，以及组织学、组织化学、生物力学、超微结构等检测。结果A、B、C、D4组均形成大体形态良好的透明软骨样组织。C、D组软骨呈乳白色，表面光滑，超微结构上胶原纤维排列致密而有规则，可形成有横纹的粗大胶原纤维，类似正常成人软骨；A、B组颜色偏黄，表面略粗糙，外观及超微结构近似半透明的胎儿关节软骨。工程化软骨植入体内12周后压缩弹性模量及胶原直径分别为（38．28±3．95）MPa和（41．58±2．78）nm，明显优于体外同时期组的（4．12±0．63）MPa和（15．83±1．70）nm（P〈0．01）。结论组织工程软骨的结构和功能在体内环境逐步成熟，体内组软骨超微结构上能形成粗大胶原纤维网络，胶原的交联增强可能是其力学性能较体外组明显提高的重要原因。

关键词：软骨组织工程生物力学

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Tenomodulin基因转染对NIH3T3和C3H10T1/2细胞系肌腱相关分子表达的作用

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组织工程与重建外科杂志 2011年第1期7卷 6-10页

作者：蒋永康何晶李洁曹谊林刘伟上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海市200011

目的研究过表达Tenomodulin(TNMD)对NIH3T3和C3H10T1/2细胞系肌腱相关分子表达的作用。方法体外培养NIH3T3和C3H10T1/2细胞系,利用脂质体法在两种细胞系中分别转染pCAGGS空载体和pCAGGS-TNMD表达载体,G418进行稳定筛选。RT-PCR确认成功... 详细信息

目的研究过表达Tenomodulin(TNMD)对NIH3T3和C3H10T1/2细胞系肌腱相关分子表达的作用。方法体外培养NIH3T3和C3H10T1/2细胞系,利用脂质体法在两种细胞系中分别转染pCAGGS空载体和pCAGGS-TNMD表达载体,G418进行稳定筛选。RT-PCR确认成功转染后,利用倒置相差显微镜观察细胞形态,同时定量PCR检测肌腱相关基因的表达情况。结果两种细胞系转染后细胞形态均无明显改变。基因水平上,NIH3T3细胞过表达TNMD后,collagenⅥ和biglycan显著降低,collagenⅠ没有显著差别。而在C3H10T1/2细胞中,collagenⅠ和biglycan显著升高,collagenⅥ没有显著差别。结论过表达TNMD对NIH3T3和C3H10T1/2细胞系的细胞形态没有影响,但能影响肌腱相关基因的表达情况。

关键词：肌腱过表达 Tenomodulin NIH3T3 C3H10T1/2

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