检索结果-内蒙古大学图书馆

上海交通大学学报 2021年第S01期55卷 49-50页

作者：王思颖郑幸玲覃文新上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所癌基因与相关基因国家重点实验室上海200032

为了探讨癌症患者长期生存的可能性,从美国癌症研究现状出发,简述了在癌症防诊治技术的支持下,癌症患者总体5年生存率自20世纪70年代起有所改善,并于近几年显著提高.这表明随着癌症研究和医疗方法的进步,癌症有望脱离高死亡率疾病范畴,... 详细信息

为了探讨癌症患者长期生存的可能性,从美国癌症研究现状出发,简述了在癌症防诊治技术的支持下,癌症患者总体5年生存率自20世纪70年代起有所改善,并于近几年显著提高.这表明随着癌症研究和医疗方法的进步,癌症有望脱离高死亡率疾病范畴,癌症患者有望长期生存.

关键词：癌症 5年生存率免疫治疗长期生存

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前哨淋巴结活检在早期宫颈癌术中应用的研究进展

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肿瘤 2018年第9期38卷 907-912页

作者：包州州狄文上海交通大学医学院附属仁济医院妇产科上海交通大学医学院附属仁济医院上海市妇科肿瘤重点实验室上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室上海200127

淋巴结转移状态是评估宫颈癌患者预后的一项重要指标。广泛性全子宫切除加盆腔淋巴结清扫仍是宫颈癌的标准术式。早期宫颈癌患者淋巴结转移率低,而盆腔淋巴结清扫可能会导致许多并发症的出现,影响患者的生活质量。前哨淋巴结是接受肿瘤... 详细信息

淋巴结转移状态是评估宫颈癌患者预后的一项重要指标。广泛性全子宫切除加盆腔淋巴结清扫仍是宫颈癌的标准术式。早期宫颈癌患者淋巴结转移率低,而盆腔淋巴结清扫可能会导致许多并发症的出现,影响患者的生活质量。前哨淋巴结是接受肿瘤淋巴引流的第一站淋巴结,也是最先可能受累的淋巴结。通过对前哨淋巴结活检可以判断区域淋巴结的转移情况,使无淋巴结转移的患者避免大范围的淋巴结清扫术,有效降低并发症。在宫颈癌中,有关前哨淋巴结活检的临床研究也在积极开展并取得了理想的临床治疗效果,已被纳入宫颈癌美国国立综合癌症网络(National Comprehensive Cancer Network,NCCN)治疗指南,是一项非常具有应用前景的手术方法。

关键词：宫颈肿瘤前哨淋巴结前哨淋巴结活组织检查示踪剂

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纳米级载RNA系统在卵巢癌治疗中的应用研究进展

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肿瘤 2018年第2期38卷 152-156页

作者：崔晓娟狄文上海交通大学医学院附属仁济医院妇产科上海200127 上海交通大学医学院附属仁济医院上海市妇科肿瘤重点实验室上海200127 上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室上海200127

目前,卵巢恶性肿瘤的一线治疗方案为手术及化疗,但化疗耐药性患者日趋增多。虽然分子靶向治疗和免疫治疗已取得一定疗效,但卵巢癌患者的5年总生存率仍未有明显提高。RNA干扰可引发转录后水平的基因沉默,因此基于RNA干扰的基因治疗可能... 详细信息

目前,卵巢恶性肿瘤的一线治疗方案为手术及化疗,但化疗耐药性患者日趋增多。虽然分子靶向治疗和免疫治疗已取得一定疗效,但卵巢癌患者的5年总生存率仍未有明显提高。RNA干扰可引发转录后水平的基因沉默,因此基于RNA干扰的基因治疗可能成为治疗卵巢癌的一条新途径。非病毒纳米级载RNA系统具有毒性低和核酸载量高的优点,其载体材料主要分为高分子聚合物、脂类、介孔硅纳米材料以及天然纳米材料等。近年来,非病毒纳米级载RNA系统在卵巢癌基因治疗的研究中取得了一定的良好效果。本文重点综述近年来国内外有关纳米级载RNA系统的相关文献,并介绍其在卵巢恶性肿瘤领域的应用研究进展。

关键词：卵巢肿瘤纳米技术 RNA干扰基因治疗

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KCMF1促进结直肠癌细胞增殖和NF-κB信号转导的机制研究

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中国癌症杂志 2024年第11期34卷 987-997页

作者：吴志柏许桂琴张力杨兆娟刘昀焦琨陈泽宏许晨左佑郑宁倩叶志谦刘永忠上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所肿瘤系统医学全国重点实验室上海200032 上海交通大学生物医学工程学院上海市肿瘤研究所肿瘤系统医学国家重点实验室上海200032

背景与目的:结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是危害全球人类生命健康的主要恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率长期居高不下。钾离子通道调节因子1(potassium channel modulatory factor 1,KCMF1)属于E3泛素连接酶家族的一员,通过RING结构... 详细信息

背景与目的:结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是危害全球人类生命健康的主要恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率长期居高不下。钾离子通道调节因子1(potassium channel modulatory factor 1,KCMF1)属于E3泛素连接酶家族的一员,通过RING结构域与靶蛋白结合,参与调节体内多种生物学过程。然而,KCMF1在CRC中的作用尚不清楚。本研究旨在探索KCMF1在CRC中的表达情况,并探讨其对CRC细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法:利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和基因型-组织表达(Genotype-Tissue Expression,GTEx)数据库,分析CRC组织中KCMF1的表达水平及其与CRC患者预后的相关性。通过免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测90例配对的人CRC组织样本中KCMF1的蛋白表达水平。通过慢病毒感染肠癌HCT116和HCT15细胞,转导针对KCMF1基因的短发夹RNA(shKCMF1),分别采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazoyl terazolium,MTT)实验和克隆形成实验检测敲降KCMF1对细胞增殖的影响;采用蛋白质印迹法(Western blot)和流式细胞学实验检测敲降KCMF1对细胞凋亡和细胞周期的影响;利用转录组测序(RNA sequencing,RNA-Seq)检测敲降KCMF1对HCT116细胞的转录谱的影响,运用生物信息学分析受KCMF1调控的信号通路;利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQPCR)、Western blot、荧光素酶报告基因实验及细胞免疫荧光实验等验证相关信号通路的改变。结果:TCGA和GTEx数据库分析以及IHC结果显示,与癌旁组织相比,CRC组织中KCMF1 mRNA的表达及蛋白水平均显著升高(P<0.01),其表达水平与患者的生存时间呈负相关(P<0.01),并与CRC临床分期呈正相关(P<0.05)。与对照细胞相比,敲降KCMF1的HCT116和HCT15细胞的增殖能力显著降低(P<0.001),细胞凋亡水平显著增高(P<0.001),细胞周期停滞在G1期(P<0.01)。RNA-Seq分析发现,KCMF1参与调控核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)等多个信号通路。敲降KCMF1后,NF-κB信号通路下游靶基因BCL-XL、XIAP和CIAP的转录水平降低(P<0.05),p65的磷酸化水平下降,同时p65的核转移受抑制(P<0.01),NF-κB信号报告基因活性降低(P<0.01)。结论:KCMF1在人CRC组织中呈高表达,并与患者的高临床分期和不良预后呈正相关;KCMF1可能通过激活NF-κB信号通路促进CRC细胞增殖。KCMF1可能是CRC的一个潜在治疗新靶点。

关键词：结直肠癌钾离子通道调节因子1 细胞凋亡核因子-κB信号通路

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沉默EFNA3基因表达抑制缺氧诱导的肝细胞癌细胞的迁移与侵袭

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肿瘤 2020年第5期40卷 305-316页

作者：陈静余君铭刘腾飞金文姣苗春晓李红上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所癌基因与相关基因国家重点实验室上海200032

目的 :探讨肝细胞癌中缺氧对肝配蛋白A3(ephrin A3,EFNA3)的调控作用,以及沉默EFNA3基因表达对缺氧诱导的肝细胞癌细胞迁移和侵袭的影响。方法 :肝细胞癌HCC-LY10和MHCC-97L细胞缺氧条件下培养0、12、24和48h,采用实时荧光定量PCR法检测... 详细信息

目的 :探讨肝细胞癌中缺氧对肝配蛋白A3(ephrin A3,EFNA3)的调控作用,以及沉默EFNA3基因表达对缺氧诱导的肝细胞癌细胞迁移和侵袭的影响。方法 :肝细胞癌HCC-LY10和MHCC-97L细胞缺氧条件下培养0、12、24和48h,采用实时荧光定量PCR法检测2株细胞中EFNA3m RNA和长链非编码RNA(long non-coding RNA,Lnc RNA)EFNA3的表达水平,蛋白质印迹法检测EFNA3和缺氧诱导因子1α(hypoxiainduciblefactor-1α,HIF-1α)蛋白的表达水平。采用脂质体法将mi R-210-3p-mimic和阴性对照(NC-mimic)转入HCC-LY10和MHCC-97L细胞,实时荧光定量PCR检测mi R-210-3p的转染效率,以及mi R-210-3p过表达后常氧和缺氧条件下EFNA3 m RNA和Lnc RNA EFNA3表达水平的变化,同时采用蛋白质印迹法检测HIF-1α和EFNA3蛋白表达水平的变化。采用慢病毒感染法将靶向HIF-1α和HIF-2α基因的sh RNA慢病毒重组载体GV248-sh HIF-1α-1、GV248-sh HIF-1α-2、GV248-sh HIF-2α-1和GV248-sh HIF-2α-2及阴性对照GV248-NC转入HCC-LY10和MHCC-97L细胞,实时荧光定量PCR检测HIF-1α和HIF-2α的干扰效率,以及沉默HIF-1α和HIF-2α表达后缺氧条件下EFNA3m RNA和Lnc RNAEFNA3表达水平的变化;采用慢病毒感染法将靶向EFNA3基因的sh RNA重组慢病毒载体LVRU6GP-sh EFNA3-1和LVRU6GP-sh EFNA3-2及阴性对照LVRU6GPNC转入HCC-LY10和MHCC-97L细胞,采用蛋白质印迹法检测EFNA 3基因的干扰效率,Transwell小室法检测沉默EFNA3表达后缺氧条件下对肝细胞癌细胞HCC-LY10和MHCC-97L迁移和侵袭的影响。结果:在缺氧培养条件下,肝细胞癌HCC-LY10和MHCC-97L细胞中EFNA3 m RNA的表达水平无明显变化(P值均> 0.05),Lnc RNA EFNA3和EFNA3蛋白的表达水平均明显上调(P值均<0.01);HCCLY10和MHCC-97L细胞中稳定转染mi R-210-3pmimic后,mi R-210-3p的表达水平显著增加(P值均<0.001),mi R-210-3p对EFNA3 m RNA和Lnc RNAEFNA3的表达无明显影响(P值均> 0.05),但能够下调缺氧诱导的EFNA3蛋白表达水平(P值均<0.05);缺氧条件下在HCC-LY10和MHCC-97L细胞中稳定干扰HIF-1α和HIF-2α表达后,HIF-1αm RNA和HIF-2αm RNA的表达水平均明显下调(P值均<0.01);稳定干扰HIF-1α表达后对EFNA3m RNA的表达无明显影响(P值均> 0.05),稳定干扰HIF-1α表达可下调Lnc RNA EFNA3的表达水平(P值均<0.001);稳定干扰HIF-2α对EFNA3 m RNA和Lnc RNA EFNA3的表达水平均无明显影响(P值均> 0.05);稳定干扰EFNA3表达后显著抑制缺氧诱导的HCC-LY10和MHCC-97L细胞的迁移和侵袭能力的增加(P值均<0.01)。结论 :缺氧条件下,HIF-1α可上调Lnc RNAEFNA3的水平,竞争性结合mi R-210-3p,从而上调EFNA3蛋白的表达水平,干扰EFNA3的表达能抑制肝细胞癌细胞的迁移和侵袭能力。

关键词：癌,肝细胞低氧竞争内源性RNA 细胞运动

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过表达CSRP1基因可促进人肺腺癌H1299细胞的增殖、迁移和侵袭

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肿瘤 2018年第4期38卷 291-299页

作者：张笑余涛林河春耿沁潘洪玉姚明上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所癌基因与相关基因国家重点实验室上海200032

目的:探讨半胱氨酸和甘氨酸丰富蛋白1(cysteine and glycine rich protein 1,CSRP 1)基因过表达对人肺腺癌H1299细胞增殖、周期、迁移和侵袭的影响,及其可能的作用机制。方法:构建携带有CSRP 1基因的重组慢病毒质粒pCDH-CSRP1;将重组慢... 详细信息

目的:探讨半胱氨酸和甘氨酸丰富蛋白1(cysteine and glycine rich protein 1,CSRP 1)基因过表达对人肺腺癌H1299细胞增殖、周期、迁移和侵袭的影响,及其可能的作用机制。方法:构建携带有CSRP 1基因的重组慢病毒质粒pCDH-CSRP1;将重组慢病毒Ad-CDH-CSRP1和pCDH-GFP(空载体对照组)分别感染人肺腺癌H1299细胞。实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测CSRP1 mRNA及蛋白在H1299细胞中的表达水平。CCK-8法和克隆形成实验检测CSRP 1基因过表达对H1299细胞增殖能力的影响;FCM法检测CSRP 1基因过表达对H1299细胞周期的影响。Transwell小室迁移实验和划痕愈合实验检测CSRP 1基因过表达对H1299细胞纵向和横向迁移能力的影响,Transwell小室侵袭实验检测对细胞侵袭能力的影响。蛋白质印迹法检测CSRP 1基因过表达对H1299细胞中黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)和磷酸化FAK(phospho-FAK,p-FAK)蛋白表达水平的影响。结果:重组慢病毒质粒pCDH-CSRP1构建成功。转入重组慢病毒质粒pCDH-CSRP1的H1299细胞中CSRP1蛋白的表达水平较pCDH-GFP组明显提高(P<0.01)。CSRP 1基因过表达可促进H1299细胞增殖(P<0.05),G1期细胞所占百分比明显下降(P<0.01),S期细胞所占百分比明显上升(P<0.01);CSRP 1基因过表达可明显增强H1299细胞的迁移和侵袭能力(P值均<0.01)。CSRP 1基因过表达的H1299细胞中p-FAK蛋白的表达水平明显升高(P<0.01),而总FAK蛋白的表达水平无明显变化(P>0.05)。结论:CSRP 1基因过表达可增强人肺腺癌H1299细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与FAK信号转导通路的激活有关。

关键词：肺肿瘤细胞增殖细胞运动细胞周期 CSRP1 基因

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分选链接蛋白1在胰腺导管腺癌中的表达及其促进胰腺导管腺癌进展的机制研究

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上海交通大学学报（医学版） 2023年第3期43卷 278-292页

作者：潘泓廖颖娜盖严支钱立恒聂惠贞上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室上海200240

目的·探究分选链接蛋白1 (sorting nexin 1,SNX1)在胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)发生和发展过程中表达水平的变化,及其对PDAC细胞增殖、迁移、凋亡和巨胞饮的影响,并分析其促进PDAC进展的分子机制。方法&#... 详细信息

目的·探究分选链接蛋白1 (sorting nexin 1,SNX1)在胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)发生和发展过程中表达水平的变化,及其对PDAC细胞增殖、迁移、凋亡和巨胞饮的影响,并分析其促进PDAC进展的分子机制。方法·分别在癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库和基因型-组织表达(Genotype-Tissue Expression,GTEx)数据库、基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中的GSE15471数据集分析SNX1mRNA在PDAC及正常胰腺组织中的表达量变化。采用免疫组织化学染色(immunohistochemistry staining,IHC)检测PDAC患者的癌组织及癌旁组织中SNX1的表达变化。利用实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,qPCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测SNX1在hTERT-HPNE细胞及PDAC细胞中的表达水平。分别采用CCK8实验、平板克隆形成实验、划痕实验和流式细胞术检测由转染siRNA引起SNX1下调导致的AsPC-1、Capan-1细胞的增殖能力、迁移能力、凋亡水平的变化。构建稳定敲除SNX1的Capan-1细胞株,使用裸鼠皮下成瘤实验检测下调SNX1对细胞在裸鼠体内增殖能力的影响。利用免疫荧光染色(immunofluorescence,IF)确定SNX1在PDAC细胞中的分布,并用四甲基罗丹明-葡聚糖(TMRdextran)检测由转染siRNA引起SNX1下调导致的AsPC-1、Capan-1细胞巨胞饮水平的变化。利用基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA)软件预测与SNX1相关的信号通路,并选取转化生长因子-β (transforming growth factor-β,TGF-β)通路进行后续分析及实验验证。构建稳定过表达SNX1的Capan-1、AsPC-1细胞株,使用TGF-β通路抑制剂氧化苦参碱(oxymatrine,Oxy)处理上述过表达细胞,并采用CCK8实验、平板克隆形成实验、划痕实验、流式细胞术和TMRdextran检测Oxy处理对过表达SNX1引起的细胞的增殖、迁移、凋亡、巨胞饮水平变化的影响。结果·TCGA和GTEx数据库的合并分析的结果显示SNX1 mRNA在PDAC组织中的表达高于正常胰腺组织,GSE15471数据集分析的结果显示SNX1mRNA在PDAC组织中的表达高于癌旁组织(均P=0.000)。IHC的结果显示SNX1在PDAC患者的癌组织中的表达亦高于癌旁组织。qPCR和Western blotting的结果显示,与hTERT-HPNE细胞相比,SNX1在PDAC细胞中的mRNA、蛋白水平均有上调(均P<0.05)。下调SNX1能够抑制AsPC-1、Capan-1细胞的增殖、迁移能力,下调其巨胞饮水平,促进其凋亡;过表达SNX1则可产生相反的结果。同时,敲除SNX1能够抑制Capan-1细胞在裸鼠体内的增殖能力。IF的结果显示SNX1在PDAC细胞中与溶酶体存在共定位。GSEA的结果显示,SNX1的表达与细胞凋亡、三羧酸循环、TGF-β和磷脂酰肌醇3-激酶-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路相关;在PDAC细胞中下调SNX1能够抑制TGF-β信号通路的激活,过表达SNX1则可促进该通路的激活,且加入该通路抑制剂可抑制由过表达SNX1引起的细胞表型变化。结论·SNX1在PDAC细胞和组织中高表达,其可通过激活TGF-β信号通路增强PDAC细胞的增殖、迁移能力和巨胞饮水平,并抑制其凋亡。

关键词：胰腺导管腺癌分选链接蛋白1 巨胞饮转化生长因子-β信号通路

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可诱导表达IL-12的GPC3靶向性CAR-T细胞在免疫健全小鼠中的抗乳腺癌作用

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肿瘤 2018年第7期38卷 631-642页

作者：刘莹李宗海蒋华上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室上海200032

目的 :构建能够诱导表达白细胞介素12(interleukin-12,IL-12)且靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican 3,GPC3)的小鼠嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)修饰的T淋巴细胞(CAR-modi ed T lymphocyte,CAR-T),并探讨CAR-T细胞对免疫健全小鼠中GPC3阳性乳腺癌生长的作用。方法 :采用基因重组的方法,构建编码GPC3特异性CAR的反转录病毒载体(m9.28z),以及同时编码GPC3特异性CAR和活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)-IL-12表达系统的反转录病毒载体(m9.28z/IL-12),包装反转录病毒并感染小鼠T细胞,制备成CAR-T细胞。采用细胞毒性杀伤实验和ELISA法检测CAR-T细胞的体外生物学功能。进一步在C57BL/6小鼠体内建立GPC3阳性乳腺癌细胞E0771-GPC3的皮下移植瘤模型,然后分别注射5×10~6个小鼠未转导T细胞(murine untransduced T cells,m UTD)(作为对照组)以及5×10~6个m9.28z CAR-T细胞、2×10~6个m9.28z CAR-T细胞、5×10~6个m9.28z/IL-12 CAR-T细胞和2×10~6个m9.28z/IL-12 CAR-T细胞(作为实验组);观察裸鼠体内肿瘤的生长情况,并采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中叉头框蛋白P3(forkhead box protein P3,FOXP3)和CD8α的表达水平。结果 :成功构建了m9.28z和m9.28z/IL-12载体,并制备了m9.28z CAR-T细胞和m9.28z/IL-12 CAR-T细胞。在体外功能实验中,相比于m9.28z CAR-T细胞,m9.28z/IL-12 CAR-T细胞不仅能够有效杀伤GPC3阳性乳腺癌细胞,而且可以分泌更多的细胞因子如肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)(P值均<0.05)。在GPC3阳性乳腺癌移植瘤模型小鼠体内,相比于m9.28z CAR-T细胞,m9.28z/IL-12 CAR-T细胞能够明显抑制移植瘤生长(P<0.001),肿瘤组织中CD8+T细胞浸润更多(P<0.01),而调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)浸润更少(P<0.01)。结论 :可诱导表达IL-12的GPC3靶向性CAR-T细胞(即m9.28z/IL-12CAR-T细胞)不仅在体外能够展现更好的抗肿瘤能力,而且在免疫健全型乳腺癌移植瘤小鼠体内的抗肿瘤能力优于m9.28z CAR-T细胞。

关键词：乳腺肿瘤 T淋巴细胞磷脂酰肌醇蛋白聚糖类白细胞介素12 免疫治疗嵌合抗原受体

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新型表皮生长因子受体异构体EGFRvA对胶质瘤U87MG细胞迁移的影响及其机制探讨

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肿瘤 2015年第5期35卷 481-490页

作者：田觅张楫钦周敏潘晓蓉李宗海上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室上海200032

目的:研究新型表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)异构体EGFRv A对人恶性胶质瘤U87MG细胞迁移的影响,并深入探讨其可能的机制。方法 :首先将p WPT-GFP[重组有绿色荧光蛋白(green l uorescent protein,GFP)基因,... 详细信息

目的:研究新型表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)异构体EGFRv A对人恶性胶质瘤U87MG细胞迁移的影响,并深入探讨其可能的机制。方法 :首先将p WPT-GFP[重组有绿色荧光蛋白(green l uorescent protein,GFP)基因,作为空白对照]、p WPT-EGFRwt(重组有野生型EGFR基因,作为阴性对照)和p WPT-EGFRv A慢病毒表达载体分别与慢病毒包装质粒ps PAX2和p MD2.G一起共转染293T细胞,获得慢病毒颗粒,然后感染胶质瘤U87MG细胞,建立U87MG GFP、U87MG EGFRwt和U87MG EGFRv A细胞系。采用蛋白质印迹法和FCM法验证EGFRwt和EGFRv A分别在感染后的U87MG EGFRwt和U87MG EGFRv A细胞中成功过表达。采用Transwell小室实验检测各组细胞迁移能力的变化。实时荧光定量PCR法验证前期基因芯片技术筛选出的各组细胞之间表达水平有明显变化的52个基因的m RNA水平,并用蛋白质印迹法检测其中4个有显著差异的肿瘤转移相关基因的蛋白表达水平。结果 :稳定感染U87MG细胞后,U87MG EGFRwt和U87MG EGFRv A细胞中分别过表达EGFRwt和EGFRv A。相对于EGFRwt过表达组,过表达的EGFRv A更能促进U87MG细胞发生迁移(P<0.001)。U87MG EGFRv A细胞中癌基因FBLN 2和ROBO 1的m RNA水平高于U87MG EGFRwt细胞,而抑癌基因CDH 13和SOX 2的m RNA水平则明显下调(P值均<0.05)。在蛋白质水平上,U87MG EGFRv A细胞中与肿瘤转移相关的CDH13和SOX2表达水平也明显下调(P值均<0.05)。结论 :EGFRv A过表达可以促进人胶质瘤U87MG细胞的迁移,它可能是通过影响肿瘤细胞中FBLN2、ROBO1、CDH13和SOX2基因的表达来发挥作用。

关键词：神经胶质瘤受体,表皮生长因子细胞迁移分析表皮生长因子受体异构体

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应激蛋白Gadd45G对人结肠癌细胞增殖影响的研究

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肿瘤 2013年第3期33卷 207-213页

作者：张力杨兆娟刘永忠上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室上海200032

目的:研究生长抑制和DNA损伤诱导45G蛋白(growtharrest and DNA-damage-inducible 45 gamma,Gadd45G)对人结肠癌细胞增殖的影响,并初步探讨可能的作用机制。方法:构建携带有四环素可调控(tetracycline-on,Tet-on)基因表达系统的真核表... 详细信息

目的:研究生长抑制和DNA损伤诱导45G蛋白(growtharrest and DNA-damage-inducible 45 gamma,Gadd45G)对人结肠癌细胞增殖的影响,并初步探讨可能的作用机制。方法:构建携带有四环素可调控(tetracycline-on,Tet-on)基因表达系统的真核表达载体pTRIPZ-Gadd45G,采用慢病毒感染的方法转入人结肠癌细胞系HCT116和SW480,并在强力霉素(doxycycline,Dox)的诱导下过表达Gadd45G。分别采用MTT法、FCM和衰老相关半乳糖苷酶染色法检测Gadd45G过表达对结肠癌细胞增殖、凋亡、细胞周期和衰老的影响,实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)和蛋白质印迹法检测Gadd45G过表达对衰老相关细胞因子白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)及细胞周期相关蛋白表达的影响。结果:在Dox诱导后,含Tet-on基因表达系统的结肠癌HCT116和SW480细胞可稳定表达Gadd45G蛋白。过表达的Gadd45G能显著抑制结肠癌HCT116和SW480细胞的增殖(P<0.001),且使细胞周期被阻滞在G2/M期。Gadd45G的表达可造成结肠癌细胞衰老(P<0.001),但不能诱导细胞凋亡。在Gadd45G过表达抑制细胞增殖的过程中,IL-8mRNA的表达水平明显提高,衰老标志物γ-H2A蛋白的表达水平明显升高,p53、p21/CDKN1a、p16/INK4a和Rb蛋白的表达水平并未发生明显变化。结论:应激蛋白Gadd45G过表达可通过诱导细胞衰老而抑制结肠癌细胞的增殖。

关键词：结肠肿瘤细胞老化细胞增殖 Gadd45G

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