检索结果-内蒙古大学图书馆

检验医学 2016年第6期31卷 521-526页

作者：占霞顾学范琳娜叶军邱文娟韩连书张惠文梁黎黎上海交通大学医学院附属新华医院上海市儿科医学研究所小儿内分泌遗传代谢病研究室上海200092

目的建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术测定干血滤纸片中酸性葡萄糖脑苷脂酶(ABG)和酸性鞘磷脂酶(ASM)活性的方法。方法将干血滤纸片样本提取液与酶作用底物和内标的混合溶液孵育过夜,反应液经萃取、氮气吹干及复溶后采用UPL... 详细信息

目的建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术测定干血滤纸片中酸性葡萄糖脑苷脂酶(ABG)和酸性鞘磷脂酶(ASM)活性的方法。方法将干血滤纸片样本提取液与酶作用底物和内标的混合溶液孵育过夜,反应液经萃取、氮气吹干及复溶后采用UPLC-MS/MS检测产物浓度及内标,计算酶活性。评价该方法的线性、精密度和准确性。结果 UPLC-MS/MS测定ABG和ASM活性的批内、批间精密度为3.6%~8.4%,批内、批间准确度为101%~115%。正常新生儿中ABG和ASM活性呈偏态分布(P<0.01),以第0.5~99.5百分位数法确定ABG及ASM活性的参考区间分别为5.52~49.50和2.02~15.44μmol·L^(-1)·h^(-1)。经临床验证,UPLC-MS/MS能有效检出戈谢病(GD)或尼曼匹克病A/B型(NPA/B)患儿,检出率为100%。结论UPLC-MS/MS能同时测定干血滤纸片中ABG、ASM活性。该法快速、特异,可用于新生儿中GD、NPA/B的高通量筛查及临床检测。

关键词：酸性葡萄糖脑苷脂酶酸性鞘磷脂酶串联质谱干血滤纸片

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极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症11例的临床和ACADVL基因突变谱分析

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中华儿科杂志 2015年第4期53卷 262-267页

作者：曹金俊邱文娟章瑞南叶军韩连书张惠文张其刚顾学范上海交通大学医学院附属新华医院上海儿科医学研究所内分泌、遗传代谢病研究室 200092

目的探讨极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症（VLCADD）的临床表现,实验室检查特点以及基因型与表型的相关性.方法对2006年9月至2014年5月在上海新华医院儿科就诊的11例极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症的临床表现、实验室检查、基因型、诊治和... 详细信息

目的探讨极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症（VLCADD）的临床表现,实验室检查特点以及基因型与表型的相关性.方法对2006年9月至2014年5月在上海新华医院儿科就诊的11例极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症的临床表现、实验室检查、基因型、诊治和预后等进行分析.11例患儿中男9例、女2例,就诊年龄2d～17岁,诊断主要依靠血串联质谱和基因分析结合临床及其他检查.结果 11例均有血十四烯酰基肉碱（C14∶1）特异性升高.6例为新生儿早发型,3例为婴儿型,2例为成人迟发型.其中4例新生儿早发型和2例婴儿型在生后2～8个月死亡,目前存活的2例新生儿早发型患儿均通过新生儿疾病筛查得以早期诊断和治疗.11例中共检出17种ACADVL基因突变,检出率95.45％（21/22）,包括11种已知突变（p.S22X,p.G43D,p.A213T,p.C215R,p.G222R,p.W427X,p.R450H,p.R456H,p.R511Q,c.296-297delCA,c.1605＋ 1G＞T）和6种新突变（p.S72F,p.Q100X,p.M437T,p.D466Y,c.1315delG insAC,IVS7 ＋4 A＞G）.p.R450H检出率最高,占总突变的13.63％（3/22）,其次为S22X和D466Y突变,各占9.09％（2/22）.结论 11例VLCADD患儿的ACADVL基因突变谱具有高度异质性,新生儿型和婴儿型较成人迟发型患者死亡率高,提示基因型和表型间存在一定相关性.早期的诊断和治疗对患者的预后有重要意义.

关键词：遗传代谢突变极长链酰基辅酶A脱氢酶 ACADVL基因

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Apr3条件性基因敲除小鼠模型的建立及初步表型研究

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上海交通大学学报（医学版） 2015年第8期35卷 1091-1097页

作者：谭冬琼叶军韩连书邱文娟顾学范张惠文上海交通大学医学院附属新华医院上海市儿科医学研究所内分泌遗传代谢病研究室上海200092

目的建立凋亡相关蛋白3(Apr3)条件性基因敲除小鼠模型,并初步研究其表型。方法设计基因敲除方案,获得Apr3flox(+/-)嵌合体小鼠,繁殖获得Apr3(-/+)小鼠后,再自交得到Apr3基因全身敲除Apr3(-/-)纯合小鼠和对照野生型小鼠。提取小鼠鼠尾组... 详细信息

目的建立凋亡相关蛋白3(Apr3)条件性基因敲除小鼠模型,并初步研究其表型。方法设计基因敲除方案,获得Apr3flox(+/-)嵌合体小鼠,繁殖获得Apr3(-/+)小鼠后,再自交得到Apr3基因全身敲除Apr3(-/-)纯合小鼠和对照野生型小鼠。提取小鼠鼠尾组织基因组DNA,PCR扩增野生型和敲除基因片段,在DNA水平判断小鼠的基因型;提取小鼠肝脏RNA和蛋白,利用RT-PCR和Western blotting技术检验Apr3基因的表达;观察基因敲除小鼠的遗传性状、体质量变化趋势以及可能影响生长发育和代谢的指标如血糖、血脂、肝功能;对小鼠溶酶体富集的主要脏器行苏木精-伊红染色(H-E染色)观察。结果成功建立Apr3基因敲除小鼠模型,其中Apr3(-/-)小鼠存活并且可育,在2月龄时体质量落后于野生型小鼠。肝功能检测结果显示,2月龄Apr3(-/-)小鼠谷草转氨酶(AST)较野生型小鼠升高(P<0.05);H-E染色结果显示,肝组织出现明显肝细胞水肿样变性和汇管区炎症细胞浸润。结论初步建立了Apr3条件性基因敲除小鼠模型;Apr3基因敲除引起2月龄小鼠体质量落后、肝脏组织形态学异常和AST升高。

关键词： Apr3基因基因敲除表型小鼠

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应用第二代测序对一个范可尼贫血家系进行基因突变检测和产前诊断

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中华医学遗传学杂志 2015年第2期32卷 204-207页

作者：龚珠文余永国张其刚顾学范上海交通大学医学院附属新华医院上海市儿科医学研究所内分泌、遗传代谢病研究室 200092

目的对一例范可尼贫血（Fanconi anemia，FA）先证者在母亲再次怀孕时采用第二代测序技术结合Sanger测序验证的方法进行快速诊断，并应用于产前诊断。方法采用全基因外显子组高通量测序方法，分析全基因组外显子数据，在FA相关基因中发... 详细信息

目的对一例范可尼贫血（Fanconi anemia，FA）先证者在母亲再次怀孕时采用第二代测序技术结合Sanger测序验证的方法进行快速诊断，并应用于产前诊断。方法采用全基因外显子组高通量测序方法，分析全基因组外显子数据，在FA相关基因中发现FANCA基因有两个低频致病突变，随后对可疑致病突变进行Sanger测序验证，再对孕母抽取羊水，细胞培养并提取基因组DNA，对FANCA基因做突变检测。结果检测到先证者在FANCA基因中携带母源性e．989_995del（p．H330LfsX2）和父源性C．3971C＞T（p．P1324L）突变，胎儿与先证者均携带此两种突变。结论应用第二代测序技术对一例范可尼贫血患者进行快速亚型分型及基因突变检测，加快了对该患者家系再次生育的产前诊断速度。

关键词：范尼克贫血 FANCA基因第二代测序产前诊断

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以新生儿胆汁淤积症为首要表现的尼曼匹克病C型三例

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中华儿科杂志 2015年第1期53卷 57-61页

作者：杨蕊谭冬琼王瑜叶军韩连书邱文娟顾学范张惠文上海交通大学医学院附属新华医院上海市儿科医学研究所内分泌遗传代谢病研究室 200092

目的探讨以新生儿胆汁淤积症为首要表现的尼曼匹克病c型的临床特点，提高对尼曼匹克病C型的认识。方法对3例尼曼匹克病c型患儿的临床特点、实验室检查和影像学表现、基因测序结果进行回顾性分析。结果3例患儿男2例女I例，2月龄～5岁10... 详细信息

目的探讨以新生儿胆汁淤积症为首要表现的尼曼匹克病c型的临床特点，提高对尼曼匹克病C型的认识。方法对3例尼曼匹克病c型患儿的临床特点、实验室检查和影像学表现、基因测序结果进行回顾性分析。结果3例患儿男2例女I例，2月龄～5岁10个月，均以新生儿病理性黄疸为首发症状，黄疸轻度到中度，胆汁酸56．3-104．2μmol／L，总胆红素116．7-182．3μmol／L，直接胆红素77．8-133．1μmol／L，伴肝脾肿大，高密度脂蛋白胆固醇0．65～0．79mmol／L，其中2例X线显示双肺纹理增多。基因测序结果明确3例患儿均携带NPCI基因杂合致病突变：C．2741G〉T＋13．3020C〉G（P．C914F＋P．P1007R），C．2177G〉C＋c．3734-3735delCT（P．R726T＋P．P1245RfsX12）和c．2054T〉C＋c．2128C〉T（P．1685T＋P．Q710x），尼曼匹克病c型诊断明确。结论新生儿期出现病理性黄疸，伴胆汁淤积症和肝脾肿大者需排除尼曼匹克病c型，NPCI基因检测发现致病性突变能明确诊断。

关键词：尼曼匹克病C型新生儿胆汁淤积症 NPC1 基因突变

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儿童脑脊髓液氨基酸及酰基肉碱参考范围的初步建立

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中华检验医学杂志 2015年第4期38卷 251-255页

作者：何大可韩凤宋小青韩连书高晓岚金晶吴洁蔡嘉琳顾学范上海交通大学医学院附属新华医院上海市儿科医学研究所儿内科 200092 内分泌遗传代谢病研究室

目的初步建立儿童脑脊髓液氨基酸及酰基肉碱参考范围，为临床诊治遗传代谢病提供依据。方法回顾性分析了采用串联质谱检测2010至2014年间来上海交通大学医学院附属新华医院儿科就诊的152例癫痫儿童脑脊髓液中氨基酸及酰基肉碱水平，分... 详细信息

目的初步建立儿童脑脊髓液氨基酸及酰基肉碱参考范围，为临床诊治遗传代谢病提供依据。方法回顾性分析了采用串联质谱检测2010至2014年间来上海交通大学医学院附属新华医院儿科就诊的152例癫痫儿童脑脊髓液中氨基酸及酰基肉碱水平，分析其与年龄、性别的相关性；分析其中60例儿童脑脊髓液与血液氨基酸及酰基肉碱水平的差异。数据采用方差分析、Wileoxon秩和检验及Spearman相关分析。结果初步建立了儿童脑脊髓液氨基酸及酰基肉碱参考范围。血甲硫氨酸水平为18．66（15．24—24．11）μmol／L，戊二酰基肉碱水平为0．03（0．02～0．04）Ixmol／L，与脑脊髓液水平[23．41（13．80～28．58）μmol／L、0．03（0．02～0．04）μmol／L]相近，差别无统计学意义（Z值分别为-0．69、-0．09，P均〉0．05）；血精氨酸水平为3．82（2．00—8．36）mol／L，低于脑脊髓液水平[38．37（34．15～48．41）μmol／L]，差别有统计学意义（Z=-6．74，P〈0．05）；其余9种氨基酸、13种酰基肉碱血液浓度均高于脑脊髓液浓度，差异有统计学意义（P均〈0．05）。结论本研究初步建立了脑脊髓液氨基酸、酰基肉碱参考范围。

关键词：氨基酸类肉碱脑脊髓液参考值儿童

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以干血纸片为载体的酶学检测在戈谢病筛查及诊断中的应用

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中华儿科杂志 2015年第7期53卷 552-554页

作者：张惠文黄永兰顾学范上海交通大学医学院附属新华医院上海市儿科医学研究所内分泌遗传代谢病研究室 200092 广州市妇女儿童医疗中心

干血纸片（dried blood spots,DBS）法是一种便捷的临床血液样本采集和运输技术,它既保证了待检测样品的生物稳定性又便于储存和运输,是罕见遗传代谢性疾病筛查和诊断的有效工具.DBS早在20世纪60年代就已被用于苯丙酮尿症的新生儿筛查[... 详细信息

干血纸片（dried blood spots,DBS）法是一种便捷的临床血液样本采集和运输技术,它既保证了待检测样品的生物稳定性又便于储存和运输,是罕见遗传代谢性疾病筛查和诊断的有效工具.DBS早在20世纪60年代就已被用于苯丙酮尿症的新生儿筛查[1].近年来,随着自动化检验技术的发展,DBS在遗传代谢类疾病的诊断及筛查中的应用价值日渐突显[2].戈谢病是一种罕见的常染色体隐性遗传代谢类疾病,临床表现为多脏器受累并呈进行性加重,并可危及生命.DBS技术的发展使戈谢病的筛查和诊断工作有了很大的进展,多个研究中心不断对方法进行优化,大大的提升了临床戈谢病筛查和诊断的准确性.目前,多个国家已经针对新生儿开展了大规模的戈谢病筛查工作,极大的改善了戈谢病的治疗情况.现综述DBS为载体进行的戈谢病筛查和诊断,为开展新生儿及高危戈谢病患者的筛查提供借鉴和参考.

关键词：新生儿筛查诊断工作戈谢病干血纸片酶学检测应用载体遗传代谢性

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新生儿鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺乏症一例及孕母围产期管理

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中华围产医学杂志 2015年第3期18卷 195-199页

作者：杨凌云邱文娟何振娟朱建幸上海交通大学医学院附属新华医院新生儿科 200092 上海交通大学医学院附属新华医院上海儿科医学研究所内分泌、遗传代谢病研究室

目的提高对新生儿鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺乏症（ornithine carbamoyltransferase deficiency，OTCD）的临床和基因特征的认识，并探讨新生儿期发病的OTCD患儿治疗及迟发型OTCD孕妇的围产期综合管理。方法总结2013年4月上海交通大学医学... 详细信息

目的提高对新生儿鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺乏症（ornithine carbamoyltransferase deficiency，OTCD）的临床和基因特征的认识，并探讨新生儿期发病的OTCD患儿治疗及迟发型OTCD孕妇的围产期综合管理。方法总结2013年4月上海交通大学医学院附属新华医院收治的1例OTCD患儿及其母亲的临床资料，并对该家系鸟氨酸氨甲酰基转移酶（ornithine transcarbamylase，OTC）基因进行分析。结果患儿生后开始出现血氨进行性升高，生后48h血氨升高至1020μmol／L。入院第3天家属放弃治疗，患儿死亡。患儿母亲为围产期发病的OTCD患者，经药物及限制蛋白等饮食治疗，围产期及产后血氨水平基本控制在正常范围。患儿血串联质谱分析显示精氨酸升高（97．43μmol／L，参考范围：1．00～25．00μmol／L）、瓜氨酸正常（27．43μmol／L，参考范围：4．00～30．00μmol／L）、鸟氨酸升高（161．66μmol／L，参考范围：10．00～120．00μmol／L）、蛋氨酸升高（70．45μmol／L，参考范围：10．00～50．00μmol／L）；尿气相质谱分析提示尿嘧啶也升高（67．11μmol／mol肌酐）、乳清酸升高（1372．66μmol／mol肌酐，参考范围：0．00～1．50μmol／mol肌酐）。患儿母亲血串联质谱显示精氨酸正常（8．44μmol／L，参考范围：1．50～25．00μmol／L）、瓜氨酸正常（8．41μmol／L，参考范围：7．00～35．00μmol／L）、谷氨酸升高（279．15μmol／L，参考范围：45．00～200．00μmol／L）；尿气相质谱分析显示尿嘧啶升高（51．55μmol／mol肌酐，参考范围：0．00～7．00μmol／mol肌酐）、乳清酸升高（38．75μmol／mol肌酐，参考范围：0．00～1．50μmol／mol肌酐）。患儿OTC基因的第6外显子上存在c．583G〉A（G195R）纯合突变，患儿母亲及外祖母OTC基因的第6外显子上存在C．583G〉A（G195R）杂合突变。结论综合管理有助于使OTCD孕妇顺利渡过围产期。新生儿期起病的男性OTCD患者预后不佳。

关键词：鸟氨酸氨甲酰转移酶缺乏症尿素循环障碍先天性婴儿新生围产期

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多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏症的临床特点、基因突变谱及其突变的病理功能研究

多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏症的临床特点、基因突变谱及其突变的病...

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第十四次全国医学遗传学学术会议

作者：邱文娟曹金俊章瑞南叶军韩连书张惠文顾学范上海交通大学医学院附属新华医院上海儿科医学研究所内分泌遗传代谢病研究室

目的:多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(MADD)是一种中国人常见的脂肪酸氧化代谢紊乱。本研究分析了42例MADD患者的临床特点、基因突变谱及其突变的病理功能。方法:分析了MADD患者的临床及实验室特点和ETFDH基因。取4例MADD患者皮肤进行原代培... 详细信息

目的:多种酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(MADD)是一种中国人常见的脂肪酸氧化代谢紊乱。本研究分析了42例MADD患者的临床特点、基因突变谱及其突变的病理功能。方法:分析了MADD患者的临床及实验室特点和ETFDH基因。取4例MADD患者皮肤进行原代培养,Western Blot及细胞免疫荧光研究患者皮肤成纤维细胞ETFDH蛋白表达量及稳定性的变化,根据in vitro probe assay方法,培养基中添加棕榈酸,96小时后分析培养上清中酰基肉碱谱。通过构建突变质粒转染293T细胞的模型探讨ETFDH基因1 3种错义突变对***蛋白酶活性及稳定性的影响。结果:儿童起病患者除肌无力症状外可伴有低血糖、脑发育不良、肝大等症状,而成人均只表现为肌病;所有患者均有短、中、长链酰基肉碱的增高,儿童患者C12、C14、C14:1较成人组显著升高。42例患者ETFDH基因突变检出率为95.2%,未发现携带ETFA/B基因突变的患者。共发现ETFDH基因44种突变,其中错义突变占多数。A84T突变为本组患者热点突变(23.5%)。Western Blot及细胞免疫荧光显示4例患者皮肤成纤维细胞的ETFDH蛋白表达量较正常人减少;皮肤成纤维细胞培养上清中短、中、长链酰基肉碱较正常对照显著升高;随着培养基中核黄素浓度升高上清中酰基肉碱水平有所下降。13种错义突变均可使***蛋白酶活性降低;FAD区及泛醌结合区的错义突变可使***蛋白表达量显著下降,前导肽区突变对蛋白表达量无明显影响。结论:儿童MADD患者临床表现较成人患者重,ETFDH基因A84T为本组患者最常见突变。ETFDH基因突变可导致***蛋白量减少,核黄素可改善患者皮肤成纤维细胞中ETFDH蛋白功能。ETFDH错义突变可使***蛋白酶活性降低及稳定性下降,但前导肽区突变对蛋白稳定性无明显影响。

关键词：基因突变谱皮肤成纤维细胞细胞免疫荧光 ETF 错义突变缺乏症临床特点功能研究

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甲基丙二酰辅酶A变位酶基因新错义突变功能研究

甲基丙二酰辅酶A变位酶基因新错义突变功能研究

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第十四次全国医学遗传学学术会议

作者：韩连书黄倬叶军邱文娟张惠文龚珠文王瑜季文君顾学范上海交通大学医学院附属新华医院上海市儿科医学研究所小儿内分泌遗传代谢病研究室

目的:对8种甲基丙二酰辅酶A变位酶(methylmalonyl-CoA mutase,MCM)基因(MUT)的变异进行MCM蛋白表达量和酶活性的分析,验证这8种突变的致病性。方法:(1)选取8例甲基丙二酸血症患者的8种未报道的MUT基因错义突变(L140P、A141T、G161V、Q5... 详细信息

目的:对8种甲基丙二酰辅酶A变位酶(methylmalonyl-CoA mutase,MCM)基因(MUT)的变异进行MCM蛋白表达量和酶活性的分析,验证这8种突变的致病性。方法:(1)选取8例甲基丙二酸血症患者的8种未报道的MUT基因错义突变(L140P、A141T、G161V、Q514K、I597R、G723D、W309G、I505T),利用生物信息学软件预测这些突变对MCM蛋白结构和功能的影响;(2)构建携带野生型及这8种突变型MUT cDNA的表达载体并转染293T细胞;(3)Western blot检测野生型及突变型MCM蛋白在293T细胞中的表达量;(4)UPLC检测293T细胞中野生型及突变型MCM酶活性。结果:(1)成功构建了含MUT cDNA的野生型和8种突变型(L140P、A141T、G161V、Q514K、I597R、G723D、W309G、I505T)表达载体;(2)Real time PCR提示8种错义突变型质粒未影响转染后293T细胞的MUT基因mRNA水平的表达;(3)western blot结果提示7种错义变异(G161V、W309G、Q514K、G723D、L140P、A141T及I505T)较野生型MCM蛋白表达量显著下降(P<0.05),而I597R与野生型相比较无差异(P>0.05);(4)UPLC结果提示8种错义突变型质粒转染后293T细胞的MCM蛋白酶活性(0.31±0.15、1.66±0.01、0.76±0.02、0.19±0.09、1.37±0.1 7、0.47±0.07、0.86±0.1 9和1.37±0.09 nmol/min/mg protein)均较野生型(3.1 1±0.09 nmol/min/mg protein)减低(P均<0.05);(5)结合患者临床表型分析,证实这8种MUT基因错义突变均为致病突变。结论:MUT基因的8种错义突变(G1 61V、W309G、Q514K、G723D、L140P、A141T及I505T)均未影响mRNA表达水平,而是通过降低MCM蛋白量的表达,导致酶活性降低,证实为致病突变。

关键词：错义突变野生型甲基丙二酰突变型变位酶功能研究

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