检索结果-内蒙古大学图书馆

中华检验医学杂志 2016年第10期39卷 761-765页

作者：占霞顾学范琳娜叶军邱文娟韩连书张惠文梁黎黎上海交通大学医学院附属新华医院上海市儿科医学研究所小儿内分泌遗传代谢病研究室 200092

目的建立串联质谱法测定干血滤纸片中半乳糖神经酰胺酶（GALC）、酸性α－葡萄糖苷酶（GAA）、α－半乳糖苷酶（GLA）、α－L－艾杜糖苷酸酶（IDUA）活性。方法方法学建立。收集2013年7月、11月在上海市新华医院新生儿筛查中心进行遗... 详细信息

目的建立串联质谱法测定干血滤纸片中半乳糖神经酰胺酶（GALC）、酸性α－葡萄糖苷酶（GAA）、α－半乳糖苷酶（GLA）、α－L－艾杜糖苷酸酶（IDUA）活性。方法方法学建立。收集2013年7月、11月在上海市新华医院新生儿筛查中心进行遗传代谢性疾病筛查的2 175份干血滤纸片标本和2012年9月至2014年1月在新华医院儿科就诊的20例溶酶体贮积病（lysosomal storage disorders，LSDs）患儿干血滤纸片样本。干血滤纸片提取液与酶底物及内标孵育后，经液液和固相萃取，氮气吹干，复溶后串联质谱分析酶反应产物和内标，计算酶活性。评价方法的线性、精密度、准确度和最低检测限；检测2 175份新生儿－干血滤纸片样本，0.5～99.5百分位数法确立4种酶活性参考区间；同时检测20例LSDs患儿干血滤纸片样本进行临床验证。结果酶活性测定批内和批间精密度为1.7%～11.8%，批内和批间准确度为85%～115%，产物和内标实测浓度比值与添加的理论浓度比值线性系数为0.997～0.999。GALC、GAA、GLA和IDUA的最低检测限分别为0.03 μmol/（L·h）、0.09 μmol/（L·h），0.12 μmol/（L·h），0.16 μmol/（L·h）；初步确定新生儿酶活性参考区间分别为GALC[0.51～8.51 μmol/（L·h）]，GAA[1.99～22.22 μmol/（L·h）]，GLA[1.68～41.59 μmol/（L·h）]，IDUA [2.36～19.21 μmol/（L·h）]；20例LSDs患儿酶活性明显低于参考区间，串联质谱法能有效检出Krabbe、Pompe、Fabry、MPSⅠ患儿。结论成功建立了串联质谱法检测干血滤纸片中GALC、GAA、GLA、IDUA活性。

关键词：溶酶体贮积病串联质谱法干燥血斑检测半乳糖神经酰胺酶 d葡糖苷酶类 α-半乳糖苷酶艾杜糖醛酸酶

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高通量检测戈谢病和尼曼匹克病A/B型的超高效液相色谱-串联质谱法的建立

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检验医学 2016年第6期31卷 521-526页

作者：占霞顾学范琳娜叶军邱文娟韩连书张惠文梁黎黎上海交通大学医学院附属新华医院上海市儿科医学研究所小儿内分泌遗传代谢病研究室上海200092

目的建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术测定干血滤纸片中酸性葡萄糖脑苷脂酶(ABG)和酸性鞘磷脂酶(ASM)活性的方法。方法将干血滤纸片样本提取液与酶作用底物和内标的混合溶液孵育过夜,反应液经萃取、氮气吹干及复溶后采用UPL... 详细信息

目的建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术测定干血滤纸片中酸性葡萄糖脑苷脂酶(ABG)和酸性鞘磷脂酶(ASM)活性的方法。方法将干血滤纸片样本提取液与酶作用底物和内标的混合溶液孵育过夜,反应液经萃取、氮气吹干及复溶后采用UPLC-MS/MS检测产物浓度及内标,计算酶活性。评价该方法的线性、精密度和准确性。结果 UPLC-MS/MS测定ABG和ASM活性的批内、批间精密度为3.6%~8.4%,批内、批间准确度为101%~115%。正常新生儿中ABG和ASM活性呈偏态分布(P<0.01),以第0.5~99.5百分位数法确定ABG及ASM活性的参考区间分别为5.52~49.50和2.02~15.44μmol·L^(-1)·h^(-1)。经临床验证,UPLC-MS/MS能有效检出戈谢病(GD)或尼曼匹克病A/B型(NPA/B)患儿,检出率为100%。结论UPLC-MS/MS能同时测定干血滤纸片中ABG、ASM活性。该法快速、特异,可用于新生儿中GD、NPA/B的高通量筛查及临床检测。

关键词：酸性葡萄糖脑苷脂酶酸性鞘磷脂酶串联质谱干血滤纸片

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Apr3条件性基因敲除小鼠模型的建立及初步表型研究

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上海交通大学学报（医学版） 2015年第8期35卷 1091-1097页

作者：谭冬琼叶军韩连书邱文娟顾学范张惠文上海交通大学医学院附属新华医院上海市儿科医学研究所内分泌遗传代谢病研究室上海200092

目的建立凋亡相关蛋白3(Apr3)条件性基因敲除小鼠模型,并初步研究其表型。方法设计基因敲除方案,获得Apr3flox(+/-)嵌合体小鼠,繁殖获得Apr3(-/+)小鼠后,再自交得到Apr3基因全身敲除Apr3(-/-)纯合小鼠和对照野生型小鼠。提取小鼠鼠尾组... 详细信息

目的建立凋亡相关蛋白3(Apr3)条件性基因敲除小鼠模型,并初步研究其表型。方法设计基因敲除方案,获得Apr3flox(+/-)嵌合体小鼠,繁殖获得Apr3(-/+)小鼠后,再自交得到Apr3基因全身敲除Apr3(-/-)纯合小鼠和对照野生型小鼠。提取小鼠鼠尾组织基因组DNA,PCR扩增野生型和敲除基因片段,在DNA水平判断小鼠的基因型;提取小鼠肝脏RNA和蛋白,利用RT-PCR和Western blotting技术检验Apr3基因的表达;观察基因敲除小鼠的遗传性状、体质量变化趋势以及可能影响生长发育和代谢的指标如血糖、血脂、肝功能;对小鼠溶酶体富集的主要脏器行苏木精-伊红染色(H-E染色)观察。结果成功建立Apr3基因敲除小鼠模型,其中Apr3(-/-)小鼠存活并且可育,在2月龄时体质量落后于野生型小鼠。肝功能检测结果显示,2月龄Apr3(-/-)小鼠谷草转氨酶(AST)较野生型小鼠升高(P<0.05);H-E染色结果显示,肝组织出现明显肝细胞水肿样变性和汇管区炎症细胞浸润。结论初步建立了Apr3条件性基因敲除小鼠模型;Apr3基因敲除引起2月龄小鼠体质量落后、肝脏组织形态学异常和AST升高。

关键词： Apr3基因基因敲除表型小鼠

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应用第二代测序对一个范可尼贫血家系进行基因突变检测和产前诊断

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中华医学遗传学杂志 2015年第2期32卷 204-207页

作者：龚珠文余永国张其刚顾学范上海交通大学医学院附属新华医院上海市儿科医学研究所内分泌、遗传代谢病研究室 200092

目的对一例范可尼贫血（Fanconi anemia，FA）先证者在母亲再次怀孕时采用第二代测序技术结合Sanger测序验证的方法进行快速诊断，并应用于产前诊断。方法采用全基因外显子组高通量测序方法，分析全基因组外显子数据，在FA相关基因中发... 详细信息

目的对一例范可尼贫血（Fanconi anemia，FA）先证者在母亲再次怀孕时采用第二代测序技术结合Sanger测序验证的方法进行快速诊断，并应用于产前诊断。方法采用全基因外显子组高通量测序方法，分析全基因组外显子数据，在FA相关基因中发现FANCA基因有两个低频致病突变，随后对可疑致病突变进行Sanger测序验证，再对孕母抽取羊水，细胞培养并提取基因组DNA，对FANCA基因做突变检测。结果检测到先证者在FANCA基因中携带母源性e．989_995del（p．H330LfsX2）和父源性C．3971C＞T（p．P1324L）突变，胎儿与先证者均携带此两种突变。结论应用第二代测序技术对一例范可尼贫血患者进行快速亚型分型及基因突变检测，加快了对该患者家系再次生育的产前诊断速度。

关键词：范尼克贫血 FANCA基因第二代测序产前诊断

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以新生儿胆汁淤积症为首要表现的尼曼匹克病C型三例

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中华儿科杂志 2015年第1期53卷 57-61页

作者：杨蕊谭冬琼王瑜叶军韩连书邱文娟顾学范张惠文上海交通大学医学院附属新华医院上海市儿科医学研究所内分泌遗传代谢病研究室 200092

目的探讨以新生儿胆汁淤积症为首要表现的尼曼匹克病c型的临床特点，提高对尼曼匹克病C型的认识。方法对3例尼曼匹克病c型患儿的临床特点、实验室检查和影像学表现、基因测序结果进行回顾性分析。结果3例患儿男2例女I例，2月龄～5岁10... 详细信息

目的探讨以新生儿胆汁淤积症为首要表现的尼曼匹克病c型的临床特点，提高对尼曼匹克病C型的认识。方法对3例尼曼匹克病c型患儿的临床特点、实验室检查和影像学表现、基因测序结果进行回顾性分析。结果3例患儿男2例女I例，2月龄～5岁10个月，均以新生儿病理性黄疸为首发症状，黄疸轻度到中度，胆汁酸56．3-104．2μmol／L，总胆红素116．7-182．3μmol／L，直接胆红素77．8-133．1μmol／L，伴肝脾肿大，高密度脂蛋白胆固醇0．65～0．79mmol／L，其中2例X线显示双肺纹理增多。基因测序结果明确3例患儿均携带NPCI基因杂合致病突变：C．2741G〉T＋13．3020C〉G（P．C914F＋P．P1007R），C．2177G〉C＋c．3734-3735delCT（P．R726T＋P．P1245RfsX12）和c．2054T〉C＋c．2128C〉T（P．1685T＋P．Q710x），尼曼匹克病c型诊断明确。结论新生儿期出现病理性黄疸，伴胆汁淤积症和肝脾肿大者需排除尼曼匹克病c型，NPCI基因检测发现致病性突变能明确诊断。

关键词：尼曼匹克病C型新生儿胆汁淤积症 NPC1 基因突变

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儿童脑脊髓液氨基酸及酰基肉碱参考范围的初步建立

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中华检验医学杂志 2015年第4期38卷 251-255页

作者：何大可韩凤宋小青韩连书高晓岚金晶吴洁蔡嘉琳顾学范上海交通大学医学院附属新华医院上海市儿科医学研究所儿内科 200092 内分泌遗传代谢病研究室

目的初步建立儿童脑脊髓液氨基酸及酰基肉碱参考范围，为临床诊治遗传代谢病提供依据。方法回顾性分析了采用串联质谱检测2010至2014年间来上海交通大学医学院附属新华医院儿科就诊的152例癫痫儿童脑脊髓液中氨基酸及酰基肉碱水平，分... 详细信息

目的初步建立儿童脑脊髓液氨基酸及酰基肉碱参考范围，为临床诊治遗传代谢病提供依据。方法回顾性分析了采用串联质谱检测2010至2014年间来上海交通大学医学院附属新华医院儿科就诊的152例癫痫儿童脑脊髓液中氨基酸及酰基肉碱水平，分析其与年龄、性别的相关性；分析其中60例儿童脑脊髓液与血液氨基酸及酰基肉碱水平的差异。数据采用方差分析、Wileoxon秩和检验及Spearman相关分析。结果初步建立了儿童脑脊髓液氨基酸及酰基肉碱参考范围。血甲硫氨酸水平为18．66（15．24—24．11）μmol／L，戊二酰基肉碱水平为0．03（0．02～0．04）Ixmol／L，与脑脊髓液水平[23．41（13．80～28．58）μmol／L、0．03（0．02～0．04）μmol／L]相近，差别无统计学意义（Z值分别为-0．69、-0．09，P均〉0．05）；血精氨酸水平为3．82（2．00—8．36）mol／L，低于脑脊髓液水平[38．37（34．15～48．41）μmol／L]，差别有统计学意义（Z=-6．74，P〈0．05）；其余9种氨基酸、13种酰基肉碱血液浓度均高于脑脊髓液浓度，差异有统计学意义（P均〈0．05）。结论本研究初步建立了脑脊髓液氨基酸、酰基肉碱参考范围。

关键词：氨基酸类肉碱脑脊髓液参考值儿童

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以干血纸片为载体的酶学检测在戈谢病筛查及诊断中的应用

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中华儿科杂志 2015年第7期53卷 552-554页

作者：张惠文黄永兰顾学范上海交通大学医学院附属新华医院上海市儿科医学研究所内分泌遗传代谢病研究室 200092 广州市妇女儿童医疗中心

干血纸片（dried blood spots,DBS）法是一种便捷的临床血液样本采集和运输技术,它既保证了待检测样品的生物稳定性又便于储存和运输,是罕见遗传代谢性疾病筛查和诊断的有效工具.DBS早在20世纪60年代就已被用于苯丙酮尿症的新生儿筛查[... 详细信息

干血纸片（dried blood spots,DBS）法是一种便捷的临床血液样本采集和运输技术,它既保证了待检测样品的生物稳定性又便于储存和运输,是罕见遗传代谢性疾病筛查和诊断的有效工具.DBS早在20世纪60年代就已被用于苯丙酮尿症的新生儿筛查[1].近年来,随着自动化检验技术的发展,DBS在遗传代谢类疾病的诊断及筛查中的应用价值日渐突显[2].戈谢病是一种罕见的常染色体隐性遗传代谢类疾病,临床表现为多脏器受累并呈进行性加重,并可危及生命.DBS技术的发展使戈谢病的筛查和诊断工作有了很大的进展,多个研究中心不断对方法进行优化,大大的提升了临床戈谢病筛查和诊断的准确性.目前,多个国家已经针对新生儿开展了大规模的戈谢病筛查工作,极大的改善了戈谢病的治疗情况.现综述DBS为载体进行的戈谢病筛查和诊断,为开展新生儿及高危戈谢病患者的筛查提供借鉴和参考.

关键词：新生儿筛查诊断工作戈谢病干血纸片酶学检测应用载体遗传代谢性

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甲基丙二酰辅酶A变位酶基因新错义突变功能研究

甲基丙二酰辅酶A变位酶基因新错义突变功能研究

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第十四次全国医学遗传学学术会议

作者：韩连书黄倬叶军邱文娟张惠文龚珠文王瑜季文君顾学范上海交通大学医学院附属新华医院上海市儿科医学研究所小儿内分泌遗传代谢病研究室

目的:对8种甲基丙二酰辅酶A变位酶(methylmalonyl-CoA mutase,MCM)基因(MUT)的变异进行MCM蛋白表达量和酶活性的分析,验证这8种突变的致病性。方法:(1)选取8例甲基丙二酸血症患者的8种未报道的MUT基因错义突变(L140P、A141T、G161V、Q5... 详细信息

目的:对8种甲基丙二酰辅酶A变位酶(methylmalonyl-CoA mutase,MCM)基因(MUT)的变异进行MCM蛋白表达量和酶活性的分析,验证这8种突变的致病性。方法:(1)选取8例甲基丙二酸血症患者的8种未报道的MUT基因错义突变(L140P、A141T、G161V、Q514K、I597R、G723D、W309G、I505T),利用生物信息学软件预测这些突变对MCM蛋白结构和功能的影响;(2)构建携带野生型及这8种突变型MUT cDNA的表达载体并转染293T细胞;(3)Western blot检测野生型及突变型MCM蛋白在293T细胞中的表达量;(4)UPLC检测293T细胞中野生型及突变型MCM酶活性。结果:(1)成功构建了含MUT cDNA的野生型和8种突变型(L140P、A141T、G161V、Q514K、I597R、G723D、W309G、I505T)表达载体;(2)Real time PCR提示8种错义突变型质粒未影响转染后293T细胞的MUT基因mRNA水平的表达;(3)western blot结果提示7种错义变异(G161V、W309G、Q514K、G723D、L140P、A141T及I505T)较野生型MCM蛋白表达量显著下降(P<0.05),而I597R与野生型相比较无差异(P>0.05);(4)UPLC结果提示8种错义突变型质粒转染后293T细胞的MCM蛋白酶活性(0.31±0.15、1.66±0.01、0.76±0.02、0.19±0.09、1.37±0.1 7、0.47±0.07、0.86±0.1 9和1.37±0.09 nmol/min/mg protein)均较野生型(3.1 1±0.09 nmol/min/mg protein)减低(P均<0.05);(5)结合患者临床表型分析,证实这8种MUT基因错义突变均为致病突变。结论:MUT基因的8种错义突变(G1 61V、W309G、Q514K、G723D、L140P、A141T及I505T)均未影响mRNA表达水平,而是通过降低MCM蛋白量的表达,导致酶活性降低,证实为致病突变。

关键词：错义突变野生型甲基丙二酰突变型变位酶功能研究

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新生儿筛查疑诊3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶缺乏症患儿的随访及基因分析

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中华儿科杂志 2014年第6期52卷 409-414页

作者：叶军宫丽霏韩连书邱文娟张惠文高晓岚金晶许浩顾学范上海交通大学医学院附属新华医院上海市儿科医学研究所内分泌遗传代谢病室 200092

目的了解新生儿筛查疑诊3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶缺乏症（MCCD）患儿的临床转归;了解中国3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶（MCC）基因突变谱及热点突变.方法 2011年9月至2013年3月,将在上海交通大学医学院附属新华医院接受新生儿筛查,并疑诊为... 详细信息

目的了解新生儿筛查疑诊3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶缺乏症（MCCD）患儿的临床转归;了解中国3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶（MCC）基因突变谱及热点突变.方法 2011年9月至2013年3月,将在上海交通大学医学院附属新华医院接受新生儿筛查,并疑诊为MCCD的42例患儿（男33例,女9例）纳入本研究,根据新生儿筛查召回时血C5-OH浓度、母亲血C5-OH浓度及尿3-MCG、3-HIVA,将42例患儿分为三组：母源性MCCD组5例、良性MCCD组6例、疑似MCCD组31例.对所有患儿的生长、智能发育等随访资料进行回顾分析;对部分患儿进行MCC基因突变检测,分析基因新变异对蛋白结构及功能的影响.结果（1）42例患儿末次随访的中位年龄29个月,最长随访至9岁.所有患儿临床无症状,生长及智能发育正常.（2）29例患儿（母源性MCCD组4例、良性MCCD组4例,疑似MCCD组21例）接受基因检测,母源性MCCD及良性MCCD基因诊断符合临床诊断;疑似MCCD 21例中仅11例检出1个MCCC1突变,余10例未检出突变.检出的14种突变中MCCC1突变占86％（12/14）,其中***1680A突变占40％,发现9种新突变：211AG＞ CC/p.Q74P、c.295G＞ A/p.G99S、c.764A＞ C/p.H255P、c.964G＞ A/p.E322K、c.1331G＞ A/p.R444H、c.1124delT、c.39_58del20、c.1518delG、c.639 ＋2T＞ A;5种新错义突变位点多为高度保守氨基酸,经分析这些突变改变了蛋白二级结构,预测对蛋白功能造成影响.（3）母源性MCCD患儿筛查、召回及末次随访的血C5-OH浓度分别为3.50（1.63 ～ 11.43）、1.84（1.00 ～9.30）、0.27（0.26 ～5.81） μmol/L,呈下降趋势;良性MCCD组患儿筛查、召回及末次随访的血C5-OH浓度分别为8.20 （3.60 ～ 9.60）、9.67（3.88 ～20.15）、23.0（5.87 ～49.10） μmol/L,呈上升趋势;疑似MCCD患儿筛查及随访血C5-OH浓度均＜2 μmol/L.良性MCCD组4例患儿召回时尿特异性指标3-MCG均增高.结论疑诊MCCD患儿最长随访至9岁,临床均无症状、体格及智能发育正常;中国患儿MCCC1突变多见,发现9种新突变,***1680A可能是热点突变.

关键词：基因突变串联质谱法新生儿筛查

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66例精神发育迟滞／发育迟缓患儿基因组拷贝数变异的染色体芯片分析

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中华医学遗传学杂志 2014年第6期31卷 703-707页

作者：李一帆邱文娟叶军韩连书张惠文顾学范上海交通大学医学院附属新华医院上海市儿科医学研究所内分泌、遗传代谢病研究室 200092

目的应用染色体芯片分析技术（chromosomal microarray analysis, CMA）对不明原因的精神发育迟滞／发育迟缓（ mental retardation/developmental delay, MR/DD）患儿进行全基因组拷贝数变异（copy number variation,CNV）分析，明确致病性CNV所致的染色体失衡，实现病因学诊断。方法根据特定条件筛选MR／DD息儿66例，用染色体芯片分析技术筛检有无CNV。针对发现的CNV，通过比对国际基因组CNV多态性数据库排除良性CNV，结合基因组异常拷贝数变异数据库与相关文献，判断CNV的临床意义。结果在66例不明原因MR／DD患儿中，16例检出19个临床致病性CNV，检出率为24．2％，Phelan-McDermid综合征比例最高（3／16，18．8％），其次为Prader-Willi综合征／Angelman综合征（2／16，12．5％）及Wolf-Hirschhorn综合征（2／16，12．5％）。结论拷贝数变异是MR／DD患儿的重要病因之一，CMA可提高MR／DD患儿致病性CNV的检出率。

关键词：精神发育迟滞发育迟缓染色体芯片分析技术拷贝数变异

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