检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2007年第1期27卷 6-10页

作者：彭海林宋凯叶赛宋怀光刘锋徐斌张庆华上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室上海200025 生物芯片上海国家工程研究中心上海201203 国家人类基因组南方研究中心上海201203 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所上海200025

应用基因免疫方法制备日本血吸虫Sj22蛋白的抗体,并研究CpG佐剂和蛋白加强策略在增强基因免疫效果中的作用。采用肌肉注射的方法免疫小鼠,实验动物分为4组:A组注射pVAX1-sj22质粒100μg/只;B组注射pVAX1-sj22质粒50μg/只,同时注射CpG佐... 详细信息

应用基因免疫方法制备日本血吸虫Sj22蛋白的抗体,并研究CpG佐剂和蛋白加强策略在增强基因免疫效果中的作用。采用肌肉注射的方法免疫小鼠,实验动物分为4组:A组注射pVAX1-sj22质粒100μg/只;B组注射pVAX1-sj22质粒50μg/只,同时注射CpG佐剂20μg/只;C、D组注射pcDNA3.1-sj22质粒100μg/只。分别在0、3、6周进行免疫,第9周A、B、C组用30μg重组sj22蛋白加强免疫,D组则用pcDNA3.1-sj22质粒100μg加强免疫。第0、9、10周割尾采血,使用ELISA方法进行抗体效价测定,Westernblot验证抗体的特异性。结果表明:使用基因免疫的方法获得了针对Sj22的特异性抗血清,CpG佐剂能够有效降低质粒用量,基因免疫-蛋白加强的策略使得抗体的滴度提高了40～1280倍。

关键词：基因免疫抗体 CpG佐剂日本血吸虫 Sj22

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大鼠髁突软骨细胞发育中差异蛋白的表达变化

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中国口腔颌面外科杂志 2013年第1期11卷 15-23页

作者：江莉婷谢银银魏立朱雅萍高益鸣上海交通大学医学院附属瑞金医院口腔科上海200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室上海200025 上海市伤骨科研究所上海200025

目的:初步建立大鼠髁突软骨细胞发育过程中蛋白表达差异谱,寻找并鉴定其差异表达蛋白。方法:体外培养出生后1、7、14、28 d共4组SD大鼠髁突软骨细胞,应用甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定软骨细胞。提取各组软骨细胞总蛋白,采用i... 详细信息

目的:初步建立大鼠髁突软骨细胞发育过程中蛋白表达差异谱,寻找并鉴定其差异表达蛋白。方法:体外培养出生后1、7、14、28 d共4组SD大鼠髁突软骨细胞,应用甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定软骨细胞。提取各组软骨细胞总蛋白,采用iTRAQ标记定量蛋白,2D nano-HPLC和基质辅助激光解吸/电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF)技术动态、定量观察出生后大鼠髁突软骨细胞发育过程中差异蛋白的表达及其量变情况,所得数据用MASCOT软件处理,筛选样本之间有意义的差异蛋白,运用GO法进行蛋白分类。结果:共鉴定500种差异蛋白,其中137种具有可信度表达,包括15种高可信度表达,相对分子量在7806.24～608459.2,主要功能为参与各类代谢及发育过程、细胞骨架结构、信号转导,响应各类刺激、免疫应答以及细胞间联系及运输等。结论:本研究获得了目前较为全面的大鼠髁突软骨细胞发育中差异蛋白表达谱,并运用质谱技术成功鉴定了差异表达蛋白,为进一步研究髁突软骨细胞内蛋白功能及在颞下颌关节疾病中的改变与作用奠定基础。

关键词： iTRAQ 髁突软骨细胞蛋白质组学

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实时定量PCR检测骨髓移植转基因动物模型移植嵌合率

实时定量PCR检测骨髓移植转基因动物模型移植嵌合率

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第13届全国实验血液学会议

作者：施小凤黄建松周玉兰崔雄鹰刘萍陶岚岚奚晓东上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室

目的:用带有突变整合素β3基因和GFP基因的逆转录病毒MSCV MigR1感染小鼠造血干细胞并移植到野生型小鼠体内,建立血小板整合素β3转基因小鼠模型,从而在体内研究整合素β3对血小板功能的调控作用。造血干细胞移植效率的高低对该模型的... 详细信息

目的:用带有突变整合素β3基因和GFP基因的逆转录病毒MSCV MigR1感染小鼠造血干细胞并移植到野生型小鼠体内,建立血小板整合素β3转基因小鼠模型,从而在体内研究整合素β3对血小板功能的调控作用。造血干细胞移植效率的高低对该模型的建立至关重要,通过检测所带标记基因只能反映转基因效率但不能反映移植效率,而通过FISH及染色体形态学方法检测Y染色体来评估移植嵌合率,既昂贵又繁琐,且常需处死小鼠才能获得足够多的有核细胞。本研究拟建立一种简洁、迅速、经济、敏感、微量、特异的检测移植嵌合率的新方法。

关键词：实时定量骨髓移植 PCR 模型移植

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靶向血小板表达FⅧ基因治疗血友病A的新进展

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国际输血及血液学杂志 2020年第1期43卷 17-22页

作者：王韵施小凤毛建华肖兵阮铮刘怡晨章国卫王瑾奚晓东上海交通大学医学院附属瑞金医院上海市血液学研究所医学基因组学国家重点实验室血液学协同创新中心中法生命科学与基因组学研究中心200025

基因治疗是一种颇具临床应用前景的血友病A(HA)治疗方法,人体内有多种细胞可作为基因治疗HA的靶细胞。为克服靶向肝细胞基因治疗HA的缺陷,研究者们开发了靶向血小板表达FⅧ的基因治疗策略。该策略应用不同的血小板特异性启动子,从而实... 详细信息

基因治疗是一种颇具临床应用前景的血友病A(HA)治疗方法,人体内有多种细胞可作为基因治疗HA的靶细胞。为克服靶向肝细胞基因治疗HA的缺陷,研究者们开发了靶向血小板表达FⅧ的基因治疗策略。该策略应用不同的血小板特异性启动子,从而实现靶向血小板的FⅧ表达,常用启动子包括血小板糖蛋白αⅡb启动子,血小板糖蛋白Ⅰb启动子,血小板因子4启动子等。该策略主要具有如下优势。首先,大量FⅧ在需要止血的损伤局部聚集,促进止血并激活凝血反应。其次,FⅧ储藏在血小板的α颗粒内,极大地降低了FⅧ在血液循环中的暴露时间,减少了自身抗体的产生,以及FⅧ和自身抗体的接触机会。笔者拟就近年来靶向血小板表达FⅧ基因治疗HA的新进展进行总结。

关键词：血友病A 基因治疗靶向血小板策略异位表达FⅧ 血小板活化

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急性白血病发病的分子基础和分子分型

急性白血病发病的分子基础和分子分型

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第13届全国实验血液学会议

作者：陈赛娟颜晓菁沈杨糜坚青陈冰上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室

急性髓细胞白血病是一组临床表现及预后转归差异很大的疾病,尽管细胞遗传学是其独立的预后标志,但约有半数以上的急性髓细胞白血病缺乏特征性的染色体变化。上海血液学研究所以正常核型为主的AML-M5型白血病为例应用全外显子组捕获和第... 详细信息

急性髓细胞白血病是一组临床表现及预后转归差异很大的疾病,尽管细胞遗传学是其独立的预后标志,但约有半数以上的急性髓细胞白血病缺乏特征性的染色体变化。上海血液学研究所以正常核型为主的AML-M5型白血病为例应用全外显子组捕获和第二代测序技术进行全基因组基因突变检测,发现DNA甲基转移酶3A的编码基因--DNMT3A在AML-M5型白血病中突变率高达20.5%,其中累及第882位精氨酸密码子的突变频率达18.8%。进一步蛋白质结构生物学分析、酶活性

关键词：急性白血病分子分型分子基础

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IGF-1信号通路相关蛋白在大鼠髁突软骨细胞增殖分化中的表达

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口腔颌面外科杂志 2013年第3期23卷 171-177页

作者：江莉婷魏立谢银银周琦朱雅萍高益鸣上海交通大学医学院附属瑞金医院口腔科上海200025 上海市伤骨科研究所上海200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室上海200025

目的:研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)信号转导通路在大鼠髁突软骨细胞增殖分化调控过程中相关基因的表达。方法:体外单层培养并鉴定出生后1、7、14、28 d共4组SD大鼠髁突软骨细胞。免疫组织化学方法检测细胞内IGF-1表达情况,Real-time ... 详细信息

目的:研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)信号转导通路在大鼠髁突软骨细胞增殖分化调控过程中相关基因的表达。方法:体外单层培养并鉴定出生后1、7、14、28 d共4组SD大鼠髁突软骨细胞。免疫组织化学方法检测细胞内IGF-1表达情况,Real-time PCR及Western印迹法检测细胞内IGF-1R、Bcl-2、Bax mRNA及蛋白表达。饥饿培养24 h后,实验组加入质量浓度为100 ng/mL的重组大鼠IGF-1细胞因子(rrIGF-1)继续培养24、48 h,CCK-8检测细胞增殖情况,Real-time PCR技术检测各组髁突软骨细胞内IGF-1R、IGF-2R、Raf1、GSK-3、IGFBP3、NF-κB、Bcl-2、Bax、integrin、TGF-βmRNA表达情况;对照组培养液不加rrIGF-1。结果:各鼠龄组SD大鼠髁突软骨细胞内IGF-1表达均阳性,IGF-1R mRNA及蛋白表达相对平稳,Bcl-2、Bax mRNA及蛋白表达逐渐增强,在出生14 d后表达下降(P<0.05)。加入100 ng/mL rrIGF-1后,髁突软骨细胞增殖速度显著增加,细胞凋亡减少,Real-time PCR结果显示实验组IGF-1R、GSK-3、Bax、integrin mRNA表达整体呈下降趋势;IGF-2R、Raf1、IGFBP3、NF-κB、Bcl-2、TGF-βmRNA表达水平总体呈上调趋势,差异有统计学意义。结论 :IGF-1介导的信号转导途径参与了髁突软骨细胞的增殖、分化以及软骨形成早期的调控,并可能与integrin、TGF-β等其他蛋白相互作用,共同参与髁突发育过程。

关键词：胰岛素样生长因子-1 髁突软骨细胞信号通路鼠

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大鼠髁突软骨细胞发育中相关信号通路的初步筛查

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口腔颌面外科杂志 2014年第6期24卷 405-412页

作者：李宁江莉婷谢银银魏立高益鸣上海交通大学医学院附属瑞金医院口腔科上海200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室上海200025 上海市伤骨科研究所上海200025

目的:通过建立的大鼠髁突软骨细胞发育过程中蛋白表达差异谱,分析可能参与的信号通路,为进一步认识髁突软骨生理性及病理性生长改建的信号调控机制提供相关信息。方法:收获出生后1、7、14、28 d共4组SD大鼠髁突软骨细胞,甲苯胺蓝染色、... 详细信息

目的:通过建立的大鼠髁突软骨细胞发育过程中蛋白表达差异谱,分析可能参与的信号通路,为进一步认识髁突软骨生理性及病理性生长改建的信号调控机制提供相关信息。方法:收获出生后1、7、14、28 d共4组SD大鼠髁突软骨细胞,甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定软骨细胞。提取各组软骨细胞总蛋白,采用i TRAQ标记定量蛋白,2D nano-HPLC和基质辅助激光解吸/电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF),获取出生后大鼠髁突软骨细胞发育过程中差异蛋白的表达谱,所得数据用MASCOT软件处理,筛选样本之间有意义的差异蛋白,运用GO法及David软件进行KEGG信号通路分析。结果 :共鉴定137种具有可信度表达的蛋白,有44种蛋白参与至少27条KEGG信号通路,其中ECM-受体相互作用、焦点粘连、actin骨架调节、Ca2+信号通路、血管平滑肌收缩、Gn RH信号通路、肌醇三磷酸代谢、磷脂酰肌醇信号系统以及核糖体等信号通路具有统计学意义。结论:在大鼠髁突软骨发育中,各信号通路蛋白在时间、空间上差异性表达,共同形成复杂的信号传递网络。

关键词：髁突软骨细胞蛋白质组学信号通路鼠

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以TF启动子上特定片段为靶点的诱骗寡核苷酸对NB4中TF表达的抑制作用

以TF启动子上特定片段为靶点的诱骗寡核苷酸对NB4中TF表达的抑制...

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第13届全国实验血液学会议

作者：陈伟琴董雷鸣奚晓东上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室

目的:已有研究表明在急性单核细胞白血病细胞株(U937-PR9)中,PML/RARα融合蛋白与组织因子(TF)启动子上具有转录活性的(-247～-230)片段间接结合诱导TF表达调控;本文为探讨在急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4中,该融合蛋白对TF是否... 详细信息

目的:已有研究表明在急性单核细胞白血病细胞株(U937-PR9)中,PML/RARα融合蛋白与组织因子(TF)启动子上具有转录活性的(-247～-230)片段间接结合诱导TF表达调控;本文为探讨在急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4中,该融合蛋白对TF是否也存在相同的调控机制,研究针对TF启动子上(-247～-230)片段的诱骗寡核苷酸(decoy oligodeoxynucleoddes)对NB4中TF表达是否存在竞争性抑制作用。

关键词：寡核苷酸抑制作用急性早幼粒细胞白血病启动子 NB4

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整合素β3的RGT序列在肿瘤进展中的作用

整合素β3的RGT序列在肿瘤进展中的作用

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第13届全国实验血液学会议

作者：周玉兰黄建松施小凤刘萍奚晓东上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室

目的:整合素αvβ3广泛表达于各种正常细胞和肿瘤细胞,而其中的β3亚单位胞浆段与Src激酶的相互作用与肿瘤细胞的增殖、浸润迁移、凋亡等重要的病理过程相关。本研究目的是明确在与整合素αv复合的模式下,整合素β3亚单位胞浆段序列与Sr... 详细信息

目的:整合素αvβ3广泛表达于各种正常细胞和肿瘤细胞,而其中的β3亚单位胞浆段与Src激酶的相互作用与肿瘤细胞的增殖、浸润迁移、凋亡等重要的病理过程相关。本研究目的是明确在与整合素αv复合的模式下,整合素β3亚单位胞浆段序列与Src激酶相互作用的分子机制,并探讨具有膜穿透性的模拟整合素β3亚单位胞浆段尾段3个氨基酸的RGT寡肽对β3亚单位胞浆段与Src相互作用的影响,从而为寻找干扰肿瘤进展的分子靶点提供新策略,为肿瘤疾病的治疗带来新的概念。方法:利用CHO细胞模型,构建共表达整合素αv与整合素β3及其F754、T758、Y759位截短体的稳定细胞株,并检测各细胞株在固相化相应配体上的粘附、伸展功能,以及运用诱导迁移的方法观察各细胞

关键词：整合素氨基酸截短体肿瘤进展稳定细胞株 RGT

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肿瘤靶向治疗的挑战及应对策略

肿瘤靶向治疗的挑战及应对策略

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2013中国工程院医学科学前沿论坛

作者：任瑞宝上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室

近年来的肿瘤基因组大规模测序结果揭示了肿瘤遗传变异的高度复杂性,肿瘤靶向治疗研发面临以下主要挑战:①多数肿瘤细胞有多个肿瘤驱动突变基因;②肿瘤异质性及肿瘤进化;③多数肿瘤驱动突变基因难以成为治疗靶点.本文以IRF4作为肿瘤基... 详细信息

近年来的肿瘤基因组大规模测序结果揭示了肿瘤遗传变异的高度复杂性,肿瘤靶向治疗研发面临以下主要挑战:①多数肿瘤细胞有多个肿瘤驱动突变基因;②肿瘤异质性及肿瘤进化;③多数肿瘤驱动突变基因难以成为治疗靶点.本文以IRF4作为肿瘤基因和抑癌基因的双重性及肿瘤中最常见但难以成为治疗靶点的驱动突变基因之一,RAS肿瘤基因为例,阐明肿瘤靶向治疗的挑战及探讨其应对策略，文章指出IRF4在髓细胞中起抑癌基因的功能。简单增强IRF4功能则促进了骨髓瘤的发生，降低其功能又促进髓细胞或B细胞白血病的功能。因此，治疗相关疾病需要深入研究IRF4的分子机制，利用“合成致死”的原理（通过治疗药物和被肿瘤改变的调控网络节点的协同作用来杀灭肿瘤），运用RAS靶向细胞毒性的药物筛选方法及定向小分子化合物库筛选，发现了能够选择性抗RAS相关肿瘤(anti-RAS，AR)的新小分子化合物。将通过蛋白芯片和基因芯片技术，并利用小鼠模型，系统阐明AR化合物的抗肿瘤治疗机制，为RAS相关肿瘤的治疗提供新的分子靶点，也为AR化合物药物的开发奠定理论和实践基础。

关键词：恶性肿瘤靶向治疗药物选择抑癌基因

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