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中国实验血液学杂志 2009年第4期17卷 1026-1031页

作者：吕媛婧苏晓瑜阮铮奚晓东上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所、医学基因组学国家重点实验室上海200025

本研究目的是明确整合素β3亚单位胞浆段序列在整合素αIIbβ3介导的信号转导中的重要作用,并进一步了解在无αIIb亚单位存在的条件下其对信号转导及特异性的影响程度。运用由IL-2R胞外段和跨膜段(Tac)与整合素β3胞浆段组成的融合蛋白(... 详细信息

本研究目的是明确整合素β3亚单位胞浆段序列在整合素αIIbβ3介导的信号转导中的重要作用,并进一步了解在无αIIb亚单位存在的条件下其对信号转导及特异性的影响程度。运用由IL-2R胞外段和跨膜段(Tac)与整合素β3胞浆段组成的融合蛋白(Tac/β3),使其在表达GPIbIX、整合素αIIbβ3的CHO细胞株(IbIX/IIbIIIa-CHO细胞株)中稳定表达(即得到IbIX/IIbIIIa-CHO/Tac-762细胞),并进行多项试验,包括在固相纤维蛋白原的伸展、稳定黏附试验、细胞纤维蛋白凝块回缩功能试验以及游离纤维蛋白原结合试验(分别代表了外向内及内向外信号转导事件)。结果表明,在稳定表达有Tac/β3的IbIX/IIbIIIa-CHO/Tac-762细胞中αIIbβ3介导的双向信号转导严重受到抑制。结论:Tac/β3可以在IbIX/IIbIIIa-CHO/Tac-762细胞中发挥显著有效的显性阴性作用,并且证实整合素β3亚单位胞浆段的单独存在即可影响由αIIbβ3介导的双向信号转导。

关键词：显性阴性整合素 αⅡbβ3 信号转导

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293T细胞模型中整合素β3胞浆尾段不同氨基酸基序对αⅡbβ3介导的细胞功能的影响

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中国实验血液学杂志 2019年第1期27卷 227-232页

作者：李东亚毛建华张威陈欣洁肖兵阮铮王韵蒋国雄施小凤奚晓东江苏大学附属医院血液科江苏镇江212100 医学基因组学国家重点实验室上海血液学研究所上海交通大学医学院附属瑞金医院上海200025

目的:建立含有Calpain切割相关的β3胞浆尾段突变体的293T细胞模型,研究β3胞浆尾段不同氨基酸基序对αⅡbβ3介导的细胞功能的影响。方法:利用293T细胞模型建立共表达人类野生型整合素αⅡb和野生型β3或突变型β3(β3ΔNITY(β3胞浆... 详细信息

目的:建立含有Calpain切割相关的β3胞浆尾段突变体的293T细胞模型,研究β3胞浆尾段不同氨基酸基序对αⅡbβ3介导的细胞功能的影响。方法:利用293T细胞模型建立共表达人类野生型整合素αⅡb和野生型β3或突变型β3(β3ΔNITY(β3胞浆段截去NITY基序)、β3Δ754(β3胞浆段截去羧基末端最后8个氨基酸TNITYRGT)、β3Δ759(β3胞浆段截去羧基末端最后3个氨基酸RGT)的稳转细胞株,通过细胞在固相化纤维蛋白原上的黏附及伸展试验检测各稳转细胞株的黏附及伸展功能。结果:成功建立了293T-αⅡbβ3ΔNITY、293T-αⅡbβ3Δ754、293T-αⅡbβ3Δ759、293T-αⅡbβ3细胞株,稳定表达野生型整合素β3全长的293T--αⅡbβ3细胞株较293T细胞具有良好的在固相化纤维蛋白原上的黏附和伸展能力,可以作为血小板的替代模型,而293T-αⅡbβ3ΔNITY稳转细胞株的黏附和伸展能力稍低于293T-αⅡbβ3稳转细胞株,但293T-αⅡbβ3Δ754细胞、293T-αⅡbβ3Δ759细胞株的黏附和伸展能力均明显受损。结论:对整合素β3介导的细胞伸展功能,RGT基序至关重要,而NITY并非必不可少,同时所建β3胞浆尾段不同突变体的293T细胞株也为进一步的质谱分析数据库比对奠定了基础。

关键词：整合素αⅡbβ3 293T细胞整合素β3胞浆尾端伸展粘附细胞功能

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151例纵隔肿块起病的淋巴瘤临床特征以及预后分析

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临床血液学杂志 2021年第11期34卷 765-770,775页

作者：李潇张慕晨钱樱程澍许彭鹏赵维莅沈志祥王黎上海交通大学医学院附属瑞金医院医学基因组学国家重点实验室上海血液学研究所上海200025

目的:探究纵隔肿块起病的淋巴瘤患者临床特征以及预后分析。方法:回顾性收集2010年1月至2021年4月收治的151例以纵隔肿块起病的淋巴瘤患者临床资料,采用Kaplan-Meier方法计算生存期,并采用COX模型进行预后因素分析。结果:纳入研究的151... 详细信息

目的:探究纵隔肿块起病的淋巴瘤患者临床特征以及预后分析。方法:回顾性收集2010年1月至2021年4月收治的151例以纵隔肿块起病的淋巴瘤患者临床资料,采用Kaplan-Meier方法计算生存期,并采用COX模型进行预后因素分析。结果:纳入研究的151例患者中,男76例,女75例,中位年龄32岁。按照病理分型分析,44例(29.1%)霍奇金淋巴瘤,35例(23.2%)弥漫大B细胞淋巴瘤,32例(21.2%)原发纵隔大B细胞淋巴瘤,32例(21.2%)淋巴母细胞淋巴瘤,3例(2.0%)成熟外周T细胞淋巴瘤,3例(2.0%)灰区淋巴瘤,2例(1.3%)黏膜相关淋巴组织淋巴瘤。肿块侵犯部位以前纵隔居多(140例,92.7%),其次为前中纵隔(7例,4.6%),后纵隔(2例,1.3%)和后中纵隔(2例,1.3%)。根据病理类型进行生存分析,霍奇金淋巴瘤患者的预后最佳,3年无进展生存率和3年总生存率分别为93.2%和100.0%。多因素分析发现,疾病分期晚(Ⅲ~Ⅳ期)是影响患者无进展生存(P=0.0051)和总生存(P=0.0337)的独立预后不良因素。结论:纵隔肿块起病的淋巴瘤以霍奇金淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、原发纵隔弥漫大B细胞淋巴瘤和淋巴母细胞淋巴瘤这几种病理亚型为主,侵犯部位主要为前纵隔,在这些亚型中,霍奇金淋巴瘤预后最佳。

关键词：纵隔肿块淋巴瘤预后

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六例遗传性易栓症的血栓发生与实验表型及基因型关联分析

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中华血液学杂志 2013年第3期34卷 256-258页

作者：曹雅楠夏燕王学锋丁秋兰许冠群张利伟戴菁陆晔玲奚晓东王鸿利上海交通大学医学院附属瑞金医院、上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室 200025

易栓症包括遗传性和获得性。获得性易栓症继发于手术创伤、制动、口服避孕药、母体免疫性疾病、恶性肿瘤等，遗传性易栓症主要是由蛋白c（Pc）、蛋白s（Ps）和抗凝血酶（AT）缺陷导致。AT缺陷的发病率为1／5000—1／500，病情较为严重... 详细信息

易栓症包括遗传性和获得性。获得性易栓症继发于手术创伤、制动、口服避孕药、母体免疫性疾病、恶性肿瘤等，遗传性易栓症主要是由蛋白c（Pc）、蛋白s（Ps）和抗凝血酶（AT）缺陷导致。AT缺陷的发病率为1／5000—1／500，病情较为严重。遗传性Pc缺陷为常染色体显性遗传病，

关键词：遗传性易栓症实验表型血栓发生基因型常染色体显性遗传病获得性易栓症口服避孕药免疫性疾病

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实体肿瘤病史对弥漫大B细胞淋巴瘤患者的疗效和生存的影响

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中华血液学杂志 2019年第8期40卷 639-643页

作者：蒙延娜施晴程澍王黎赵维莅上海交通大学医学院附属瑞金医院医学基因组学国家重点实验室上海血液学研究所200025 徐州市中心医院血液科 221009

目的观察合并实体肿瘤病史是否会影响弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者的治疗效果以及生存情况.方法回顾性收集2013-2018年在上海交通大学医学院附属瑞金医院血液科治疗的DLBCL患者836例,其中34例有实体肿瘤病史的DLBCL患者归为双癌组,从... 详细信息

目的观察合并实体肿瘤病史是否会影响弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者的治疗效果以及生存情况.方法回顾性收集2013-2018年在上海交通大学医学院附属瑞金医院血液科治疗的DLBCL患者836例,其中34例有实体肿瘤病史的DLBCL患者归为双癌组,从802例无实体肿瘤病史的DLBCL患者中,应用倾向评分匹配方法,根据性别、年龄、分期、IPI评分等因素进行1:2匹配,筛选出68例作为对照组.通过门诊、住院资料及电话随访,比较两组患者的治疗缓解率、3年总生存(OS)及无进展生存(PFS)期的差异.结果双癌组和对照组RCHOP(利妥昔单抗+环磷酰胺+长春新碱+阿霉素50 mg/m2或表阿霉素或脂质体阿霉素+泼尼松)治疗完全缓解率分别为79.4%及67.6%,差异无统计学意义(P=0.210);3年OS率分别为(74.7±9.5)%及(63.5±6.1)%(χ2=2.791,P=0.095),差异无统计学意义;3年PFS率分别为(72.1±8.8)%及(54.3±6.4)%(χ2=1.400,P=0.237),差异亦无统计学意义.结论 DLBCL合并实体瘤病史不影响患者近期生存及RCHOP方案疗效.

关键词：实体肿瘤弥漫大B细胞淋巴瘤治疗反应生存

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凝血因子Ⅸ Arg327Ile突变蛋白功能缺陷机制研究

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中华检验医学杂志 2011年第11期34卷 1006-1011页

作者：周佳维戴菁郁婷婷陆晔玲丁秋兰王学锋王鸿利上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室 200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院输血科 200025

目的研究FⅨ Arg327Ile（R327I）及Arg327Ala（R327A）突变蛋白功能，探讨R327I突变导致血友病B的分子发病机制。方法采用潮霉素筛选稳定表达细胞株，ELISA法筛选高效表达FIX重组蛋白细胞株，采用快流速Q琼脂糖凝胶和离子交换两步法分... 详细信息

目的研究FⅨ Arg327Ile（R327I）及Arg327Ala（R327A）突变蛋白功能，探讨R327I突变导致血友病B的分子发病机制。方法采用潮霉素筛选稳定表达细胞株，ELISA法筛选高效表达FIX重组蛋白细胞株，采用快流速Q琼脂糖凝胶和离子交换两步法分离纯化重组蛋白。ELISA和SDS—PAGE电泳分别检测重组蛋白含量和纯度。FⅦa／TF／Ca“和FⅨa／Ca^2＋活化野生型及R327I和R327A突变FⅨ蛋白，用WB法分别检测不同时间内活化生成的FⅨa。野生型及两种突变FIXa在不同FⅧa浓度下活化激活FX，以此计算野生型及两种突变FⅨa与FⅧa的解离常数；在含或不含FⅧa的条件下，检测野生型及两种突变FⅨa对不同浓度FX的激活能力，以此计算其催化效率。结果表达分离纯化野生型、R327I和R327A FⅨ重组蛋白总量分别为450、210和64μg，SDS—PAGE电泳结果显示重组蛋白纯度符合要求。两种突变蛋白均能被FⅦa／TF／Ca^2＋和FⅪa／Ca^2＋正常激活。R3271与R327A两种FIXa突变蛋白与FⅧa的结合力分别为野生型的1／4和1／5。在含FⅧa条件下，R327I和R327I突变FⅨa对FX催化效率分别为野生型的1／6和1／8。而不含FⅧa条件下，催化效率分别为野生型的1／3和1／7．4。结论R327I和R327A两种突变FⅨa与FⅧa结合异常，R327位点参与FⅧa结合，同时也与底物活化相关。R327I突变与FⅧa结合力降低导致重型血友病B的发生.

关键词：因子Ⅸ 重组蛋白质类突变血友病B

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体外表达探讨凝血因子IXArg327Ile新突变导致血友病B的分子发病机制

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中华血液学杂志 2012年第8期33卷 642-647页

作者：周佳维王鸿利戴菁郁婷婷陆晔玲丁秋兰王学锋上海交通大学医学院附属瑞金医院、上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室 200025 现在浙江大学医学院附属第一医院 310003 上海交通大学临床检验科

目的探讨凝血因子Ⅸ（FIX）Arg327Ile（R327I）突变导致血友病B的分子发病机制。方法在野生型FIX表达质粒FIX”peDNA3．1（一）的基础上，定点突变法构建FIXR327I、R327Ala（A）、R327Lys（K）和R327Asn（N）突变的表达质粒，重叠PCR构... 详细信息

目的探讨凝血因子Ⅸ（FIX）Arg327Ile（R327I）突变导致血友病B的分子发病机制。方法在野生型FIX表达质粒FIX”peDNA3．1（一）的基础上，定点突变法构建FIXR327I、R327Ala（A）、R327Lys（K）和R327Asn（N）突变的表达质粒，重叠PCR构建FIX324～329（B折叠结构域）换成FVIl298～303同源结构突变表达质粒[FⅨBFVIIpeDNA3．1（一）]。将野生型及各种突变体表达质粒分别瞬时转染胚肾293T细胞，一期法检测培养上清液中FIX活性（FIX：C）及ELISA法检测细胞培养上清和细胞裂解液中FⅨ抗原（FⅨ：Ag），Westernblot法检测突变蛋白的相对分子质量及表达水平。荧光蛋白表达载体瞬时转染法检测活细胞中突变蛋白合成与分泌。结果体外瞬时转染FIXR327I突变基因的细胞FIX：C为正常野生型的4．49％，细胞上清液和细胞裂解液FIX：Ag水平分别为野生型的31．02％和129．29％，为交叉反应减低型（CRMR）。活细胞免疫荧光观察发现FIXR327I突变蛋白在细胞内含量较野生型显著增高，并且在细胞溶酶体内的含量较野生型也显著增多。FIXR327A、R327K、R327N及FIXl3FVII突变基因转染的细胞FIX：c水平较野生型减低，其中以FIXl3FVII突变降低最为明显；转染的细胞培养上清FIX：Ag水平除R327K突变型较野生型增加，其余突变型均比野生型有不同程度的降低。Westernblot法检测显示各种突变蛋白的相对分子质量与野生型相同而表达水平降低。结论FIXR327I突变基因可影响蛋白质合成和分泌，R327位点与FⅨ功能特异有关，其所在的B折叠结构域在FⅨ特异性功能中发挥重要作用。

关键词：血友病B 凝血因子IX 基因突变瞬时表达

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应用IP-2D nano-HPLC-MALDI-TOF-TOF鉴定蛋白质泛素化修饰

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生物化学与生物物理进展 2008年第7期35卷 839-847页

作者：毛建华张群业黄秋花陈竺陈俭陈赛娟中国科学院动物研究所北京100101 上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室上海200025 中国科学院研究生院北京100049

近年来,在蛋白质研究中,特别是在蛋白质翻译后修饰(PTM)的研究中,生物质谱技术的应用越来越广泛,与纳升级HPLC的联合应用,使这一技术手段更加有效.针对泛素化在细胞功能调控中发挥关键作用的PTM的特点,将免疫沉淀、2Dnano-HPLC和基质辅... 详细信息

近年来,在蛋白质研究中,特别是在蛋白质翻译后修饰(PTM)的研究中,生物质谱技术的应用越来越广泛,与纳升级HPLC的联合应用,使这一技术手段更加有效.针对泛素化在细胞功能调控中发挥关键作用的PTM的特点,将免疫沉淀、2Dnano-HPLC和基质辅助激光解吸/电离串联飞行时间质谱(IP-2D nano-HPLC-MALDI-TOF-TOF)有机整合,建立了天然状态下蛋白质泛素化位点的鉴定方法,并应用这一方法确定出K562细胞内具有酪氨酸激酶活性的蛋白c-ABL的泛素化位点.为定性鉴定生理和病理状态下内源性蛋白的泛素化修饰提供了借鉴.

关键词：泛素化蛋白质翻译后修饰 IP-2D nano-HPLC-MALDI-TOF-TOF

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中华血液学杂志 2020年第1期41卷 34-39页

作者：毛建华沈艳王嫱王韵阮铮奚晓东医学基因组学国家重点实验室上海血液学研究所上海交通大学医学院附属瑞金医院200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院实验医学研究中心 200025 南京农业大学动物医学院 210095

目的评价携带人凝血因子FⅧ(hFⅧ)的重组腺相关病毒(AAV)血清型8(AAV8/hFⅧ)病毒治疗血友病A(HA)小鼠效果。方法应用pAAV-CB-EGFP,pH22(AAV2血清型)和pfΔ6(腺病毒辅助质粒)摸索在HEK-293细胞中AAV的包装条件,pH22、pfΔ6及pAAV-CB-EGF... 详细信息

目的评价携带人凝血因子FⅧ(hFⅧ)的重组腺相关病毒(AAV)血清型8(AAV8/hFⅧ)病毒治疗血友病A(HA)小鼠效果。方法应用pAAV-CB-EGFP,pH22(AAV2血清型)和pfΔ6(腺病毒辅助质粒)摸索在HEK-293细胞中AAV的包装条件,pH22、pfΔ6及pAAV-CB-EGFP质粒按照1∶1∶1的比例进行转染,免疫荧光显微镜观察四个条件(包括10 cm培养皿转10μg质粒,20 cm培养皿分别转20、30和40μg质粒)的病毒包装效果。应用最佳包装条件在HEK-293细胞中包装AAV2-EGFP,通过冻融法获得AAV2粗提液,感染HEK-293细胞和16095细胞,应用荧光显微镜观察包装效果。应用最佳转染条件将pAAV-TTR-hFⅧ、pH28、pfΔ6按1∶1∶1的比例转染HEK-293细胞获得AAV8/hFⅧ,两轮的氯化铯梯度离心法纯化病毒,以8×10^12 vg/kg剂量经尾静脉注射HA小鼠进行基因治疗,活化部分凝血活酶时间(APTT)测定分析FⅧ的活性。结果20 cm培养皿转染20μg质粒的条件能够在24、48和72 h都达到最佳的转染效果,且该条件包装的AAV2粗提液在16095细胞中具有较高的感染率。HA小鼠体内AAV8/hFⅧ能够在注射后12周仍有维持在治疗水平的FⅧ活性。结论利用优化包装条件制备的AAV8/hFⅧ能够在HA小鼠体内有效维持治疗水平的FⅧ活性达12周。

关键词：腺相关病毒人凝血因子FⅧ 血友病A 基因治疗

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ACE2/Apelin信号与动脉粥样硬化

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上海交通大学学报（医学版） 2016年第6期36卷 917-920页

作者：张振洲宋蓓钟久昌上海交通大学医学院附属瑞金医院医学基因组学国家重点实验室上海市高血压研究所上海200025

动脉粥样硬化性疾病已成为人类死亡的首要病因。肾素血管紧张素系统是促进粥样硬化性心血管疾病的发生及发展的重要因素。研究表明ACE2/Apelin信号发挥心血管保护作用。文章就ACE2/Apelin信号研究新进展及其在动脉粥样硬化病程中的调控... 详细信息

动脉粥样硬化性疾病已成为人类死亡的首要病因。肾素血管紧张素系统是促进粥样硬化性心血管疾病的发生及发展的重要因素。研究表明ACE2/Apelin信号发挥心血管保护作用。文章就ACE2/Apelin信号研究新进展及其在动脉粥样硬化病程中的调控作用作一综述。

关键词：动脉粥样硬化肾素血管紧张素系统血管紧张素转换酶2 Apelin

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