目的·检测Fas相关死亡结构域蛋白（Fas-associated protein with death domain,FADD）在头颈部鳞状细胞癌（head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC）中的表达水平，并探究FADD促进HNSCC细胞增殖的分子机制。方法·利用G...
详细信息
目的·检测Fas相关死亡结构域蛋白（Fas-associated protein with death domain,FADD）在头颈部鳞状细胞癌（head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC）中的表达水平，并探究FADD促进HNSCC细胞增殖的分子机制。方法·利用GEPIA 2数据库分析肿瘤组织中FADD表达水平及其与预后的关系；通过对HNSCC组织进行免疫组织化学染色（immunohistochemistry staining,IHC），探究FADD在正常、不典型增生和肿瘤组织中的表达水平变化；构建稳定低表达FADD的人HNSCC Fadu、HSC3细胞株，并通过蛋白印迹实验和实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法进行验证；使用LiveCyte活细胞追踪系统、克隆形成、细胞活力检测等方法探究FADD对HNSCC细胞增殖水平的调控作用；使用免疫共沉淀串联质谱（co-immunoprecipitation mass spectrum,Co-IP/MS）鉴定与FADD发生相互作用的蛋白，并应用CRISPR/Cas9技术、LiveCyte活细胞追踪系统、蛋白印迹实验等方法对与FADD相互作用的蛋白进行进一步机制研究。结果·数据库分析显示FADD在头颈鳞癌中显著高表达，并与患者不良预后相关。免疫组化染色表明FADD在HNSCC患者正常组织、不典型增生及肿瘤组织中的表达水平呈现递增趋势。在HNSCC细胞中敲低FADD后，与对照组相比，细胞的增殖能力显著降低，形成克隆数减少。Co-IP/MS结果显示，FADD与CUT样同源盒1 (CUT-like homeobox 1,CUX1)蛋白存在相互作用，敲低FADD后CUX1表达水平升高。同时，在HNSCC细胞中敲除CUX1能够显著促进肿瘤细胞增殖能力。敲除CUX1可部分逆转FADD低表达引起的增殖抑制。结论·FADD在HNSCC中具有显著促癌作用，并与不良预后相关。FADD可通过与CUX1发生相互作用降低其表达水平进一步调控肿瘤细胞的增殖能力。
暂无评论