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基于单细胞转录组测序对牙周炎小鼠脑膜生物学改变与认知障碍相关性的研究初探

中华口腔医学杂志 2024年第6期59卷 595-603页

作者：江旖婷徐丽娜赵旭日沈慧邱澈何智妍周薇宋忠臣上海交通大学医学院附属第九人民医院牙周病科上海交通大学口腔医学院国家口腔医学中心国家口腔疾病临床医学研究中心上海市口腔医学重点实验室上海市口腔医学研究所上海200011 上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔微生态与系统性疾病实验室上海交通大学口腔医学院国家口腔医学中心国家口腔疾病临床医学研究中心上海市口腔医学重点实验室上海市口腔医学研究所上海200011

目的运用单细胞转录组测序分析牙周炎小鼠脑膜的生物学改变,探讨牙周炎小鼠脑膜生物学改变与认知障碍的相关性。方法将30只C57BL/6小鼠按随机数字表法随机分为2组(每组15只),在对照组小鼠上颌双颊侧局部涂抹不含牙龈卟啉单胞菌(Pg)的2%... 详细信息

目的运用单细胞转录组测序分析牙周炎小鼠脑膜的生物学改变,探讨牙周炎小鼠脑膜生物学改变与认知障碍的相关性。方法将30只C57BL/6小鼠按随机数字表法随机分为2组(每组15只),在对照组小鼠上颌双颊侧局部涂抹不含牙龈卟啉单胞菌(Pg)的2%羧甲基纤维素(CMC),在实验组小鼠上颌双颊侧局部涂抹Pg W83和2%CMC的混合物,3次/周,持续16周。观察对照组和实验组小鼠上颌牙槽骨吸收情况、自主活动能力与认知功能的变化、大脑皮层中小胶质细胞和星形胶质细胞激活情况、检测小鼠脑膜和大脑内紧密连接蛋白Occludin mRNA表达情况。然后使用统一流形逼近与投影(UMAP)算法对单细胞转录组各细胞亚群数据进行降维整合处理。对内皮细胞差异基因进行基因本体(GO)和京都基因和基因组数据库(KEGG)富集分析,进一步采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证差异基因转录激活因子3(Atf3)、含载脂蛋白L域1(Apold1)的表达情况。结果亚甲蓝染色实验显示,实验组小鼠上颌颊、腭侧釉质牙骨质界到牙槽嵴顶的距离[分别为(185.60±17.60)、(206.90±13.37)μm]均显著大于对照组[分别为(135.33±9.57)、(163.05±14.98)μm](t=5.02,P=0.002;t=4.37,P=0.005)。旷场实验显示实验组小鼠的总路程和平均速度[(971.88±164.57)cm和(3.25±0.55)cm/s]与对照组[(914.24±278.81)cm和(3.05±0.93)cm/s]相比差异均无统计学意义(t=0.65,P=0.525;t=0.65,P=0.520)。新物体识别实验中实验组小鼠相对辨别指数[(48.02±16.92)%]显著低于对照组[(66.27±17.90)%](t=2.40,P=0.027)。Y迷宫实验显示,实验组小鼠的自发交替率[(50.99±14.17)%]显著低于对照组[(63.56±11.88)%](t=2.33,P=0.030)。免疫组化染色结果显示,实验组小鼠脑内小胶质细胞和星形胶质细胞被激活。RT-qPCR结果显示,实验组小鼠脑膜和大脑中紧密连接蛋白Occludin mRNA的表达(分别为0.61±0.10、0.64±0.20)均显著低于对照组(分别为1.02±0.25、1.04±0.31)(t=3.47,P=0.010;t=2.66,P=0.024)。单细胞转录组测序显示,脑膜存在11种细胞类型,包括内皮细胞、成纤维细胞、免疫细胞等,其中内皮细胞占比最大[对照组为26.47%(1589/6004),实验组为26.26%(807/3073)],是脑膜中最主要的细胞类型;实验组小鼠脑膜组织中粒细胞比例[11.65%(358/3073)]较对照组[5.56%(334/6004)]增加。进一步聚类分析内皮细胞,GO富集分析显示差异基因与血管生成、细胞黏附、细胞凋亡等有关;KEGG分析显示差异基因与白细胞介素-17信号通路、松弛素信号通路等相关。RT-qPCR显示,实验组小鼠脑膜组织中Atf3和Apold1 mRNA表达(分别为0.42±0.24、0.54±0.27)均显著低于对照组(分别为1.03±0.26、1.02±0.23)(t=3.88,P=0.005;t=3.02,P=0.017)。结论Pg W83慢性感染的牙周炎小鼠认知能力下降,存在神经炎症,屏障功能改变;单细胞转录组测序发现脑膜组织存在免疫细胞浸润,Atf3和Apold1基因表达下调,提示脑膜免疫和屏障功能的改变在牙周炎导致的认知障碍中发挥作用。

关键词：牙周炎紫单胞菌,龈认知障碍神经炎症单细胞转录组测序脑膜

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牙龈素提取物对口腔鳞癌细胞HN6生物学特性的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2024年第2期44卷 161-168页

作者：李虎虓李笑甜赵旭日张桓瑜周薇宋忠臣上海交通大学医学院附属第九人民医院牙周病科上海交通大学口腔医学院国家口腔医学中心国家口腔疾病临床医学研究中心上海市口腔医学重点实验室上海市口腔医学研究所上海200011 上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔微生态与系统性疾病实验室上海交通大学口腔医学院国家口腔医学中心国家口腔疾病临床医学研究中心上海市口腔医学重点实验室上海200125

目的·观察牙龈素提取物对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞HN6生物学特性的影响。方法·选取人OSCC细胞系HN6,加入牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,***)牙龈素提取物进行培养。根据牙龈素提取... 详细信息

目的·观察牙龈素提取物对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞HN6生物学特性的影响。方法·选取人OSCC细胞系HN6,加入牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,***)牙龈素提取物进行培养。根据牙龈素提取物的蛋白浓度不同分为对照组(control组),及牙龈素提取物蛋白浓度3.125μg/mL组、6.25μg/mL组、12.5μg/mL组、25μg/mL组、50μg/mL组和100μg/mL组,培养24、48 h后,采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)检测牙龈素提取物对HN6细胞增殖活性的影响。后续其他实验,分为control组、25μg/mL组和50μg/mL组进行。通过流式细胞术检测牙龈素提取物对细胞周期的影响,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)和Western blotting检测细胞E-cadherin和N-cadherin蛋白和基因的表达。结果·在牙龈素提取物刺激HN6细胞24 h时,相比较control组,牙龈素提取物蛋白浓度25μg/mL组(P=0.025),50μg/mL组(P=0.000)和100μg/mL组(P=0.049)的HN6细胞增殖活性显著增加;当刺激48 h时,6.25μg/mL组(P=0.024)、12.5μg/mL组(P=0.006)、25μg/mL组(P=0.000)、50μg/mL组(P=0.000)和100μg/mL组(P=0.000)均较control组HN6细胞增殖活性有显著增加。细胞周期检测结果显示,与control组相比,经牙龈素提取物刺激24 h,HN6细胞G1期比例下降,S+G2期比例显著性上升(25μg/mL组:P=0.024;50μg/mL组:P=0.001)。细胞迁移实验结果显示,与control组相比,随着牙龈素提取物浓度升高,划痕愈合的百分比显著增加(P=0.001)。细胞Transwell侵袭实验结果显示,与control组相比,随着牙龈素提取物浓度升高,细胞穿过小室底部的数量显著性增加。RT-PCR和Western blotting实验结果显示,与control组相比,随着牙龈素提取物浓度增加,HN6细胞中N-cadherin mRNA和蛋白表达量显著性增加,E-cadherin mRNA和蛋白表达量显著性减少。结论·牙龈素提取物对OSCC细胞HN6的增殖、迁移和侵袭有促进作用。

关键词：牙龈素牙周炎口腔鳞状细胞癌细胞增殖细胞迁移细胞侵袭

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口腔微生物与全身系统性疾病的关系

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四川大学学报（医学版） 2023年第1期54卷 1-6页

作者：周陆军陈柏延李雨霖段胜仲上海交通大学口腔医学院、国家口腔疾病临床医学研究中心、上海市口腔医学重点实验室、上海市口腔医学研究所、上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔微生态与系统性疾病实验室上海200011

口腔微生物组作为人体种类最为丰富的微生物群体之一,是维持人体健康的重要组成部分。口腔的不同部位具有差异明显的微生物组成,通过与外部环境、口腔局部以及远端器官的交流实现动态平衡。研究表明,口腔微生物稳态失衡与全身多种系统... 详细信息

口腔微生物组作为人体种类最为丰富的微生物群体之一,是维持人体健康的重要组成部分。口腔的不同部位具有差异明显的微生物组成,通过与外部环境、口腔局部以及远端器官的交流实现动态平衡。研究表明,口腔微生物稳态失衡与全身多种系统性疾病的发生或进展显著相关。本文基于口腔微生物与全身系统性疾病关系的研究进展,针对口腔微生物与全身健康之间的相互作用、病理机制进行综述,为全身系统性疾病的早期预防及临床诊疗提供新的思路。

关键词：口腔微生物稳态失衡系统性疾病

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小胶质细胞Stat3基因条件性敲除小鼠的构建及鉴定

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上海交通大学学报（医学版） 2023年第6期43卷 689-698页

作者：朱晓晨谢欣宜赵旭日徐丽娜何智妍周薇上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔微生态与系统性疾病实验室上海交通大学口腔医学院国家口腔医学中心国家口腔疾病临床医学研究中心上海市口腔医学重点实验室上海市口腔医学研究所上海200125

目的·基于Cre-Loxp系统构建小胶质细胞Stat3基因条件性敲除小鼠并验证其敲除效率。方法·将Cx3cr1^(creERT2)与Stat3^(fl/fl)基因型小鼠多代交配繁育,直到获得足够数量的Stat3^(fl/fl);Cx3cr1^(creERT2)基因型小鼠,即条件敲除... 详细信息

目的·基于Cre-Loxp系统构建小胶质细胞Stat3基因条件性敲除小鼠并验证其敲除效率。方法·将Cx3cr1^(creERT2)与Stat3^(fl/fl)基因型小鼠多代交配繁育,直到获得足够数量的Stat3^(fl/fl);Cx3cr1^(creERT2)基因型小鼠,即条件敲除小鼠(conditional knockout,CKO);同窝Stat3^(fl/fl)基因型小鼠,即对照小鼠(wild type,WT)。利用小鼠组织提取DNA后通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR),结合特异性引物分别扩增的结果来判断小鼠基因型。在CKO及WT小鼠6周龄时通过腹腔注射他莫昔芬诱导小胶质细胞中Stat3基因的敲除;2周后,随机选取CKO小鼠(n=4)及WT小鼠(n=4),利用磁珠分选法(magnetic activated cell sorting,MACS)分选出小胶质细胞后通过实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)技术从基因水平检测基因敲除效率;通过脑组织切片免疫荧光染色标记小胶质细胞和STAT3蛋白观察小胶质细胞中STAT3的表达情况;利用流式细胞术分别检测STAT3在小胶质细胞及脾巨噬细胞中的变化。通过尼氏染色检测神经元细胞的情况;通过脑组织切片荧光染色标记小胶质细胞,观察皮层和海马区域小胶质细胞的情况;通过流式细胞术检测小胶质细胞表型。结果·成功繁育出CKO小鼠和WT小鼠。MACS后脑细胞中小胶质细胞的占比从10%提升到85%。RT-PCR结果显示,相对于WT小鼠,CKO小鼠小胶质细胞中Stat3的mRNA相对表达量为0.3317±0.0414,mRNA水平下调(P=0.001)。脑组织免疫荧光染色结果显示,CKO小鼠小胶质细胞中STAT3蛋白的荧光强度较WT小鼠弱。脑组织流式细胞术显示:WT小鼠小胶质细胞中STAT3的阳性细胞占比为(85.30±5.69)%;CKO小鼠小胶质细胞中STAT3的阳性细胞占比为(39.70±3.88)%,STAT3表达率下降(P=0.001)。脾组织流式细胞术显示,CKO小鼠与WT小鼠脾巨噬细胞中STAT3的阳性细胞占比的差异无统计学意义(P>0.05)。尼氏染色显示,CKO小鼠与WT小鼠神经元细胞无显著差异。脑组织切片荧光染色结果显示,CKO小鼠与WT小鼠的小胶质细胞在形态上无明显差异。小胶质细胞流式细胞术显示CKO小鼠与WT小鼠小胶质细胞表型无显著差别。结论·成功构建小胶质细胞Stat3基因条件性敲除小鼠,为后续相关研究提供动物模型。

关键词：小胶质细胞信号转导和转录激活因子3(STAT3) 他莫昔芬小鼠 Cre重组酶

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牙龈素提取物对小鼠焦虑样行为的影响

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上海口腔医学 2025年第1期34卷 1-6页

作者：赵旭日江旖婷张桓瑜徐丽娜何智妍周薇上海交通大学医学院附属第九人民医院、口腔微生态与系统性疾病实验室上海200011 上海交通大学医学院附属第九人民医院牙周病科上海交通大学口腔医学院国家口腔医学中心国家口腔疾病临床医学研究中心上海市口腔医学重点实验室上海市口腔医学研究所上海200011

目的:探讨牙龈素提取物对小鼠焦虑样行为的影响。方法:培养牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,***)ATCC33277菌株,采用超声结合超速离心的方法获得牙龈素(gingipains)提取物并利用免疫印迹法和酶活性实验鉴定。通过腹腔注射牙龈... 详细信息

目的:探讨牙龈素提取物对小鼠焦虑样行为的影响。方法:培养牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,***)ATCC33277菌株,采用超声结合超速离心的方法获得牙龈素(gingipains)提取物并利用免疫印迹法和酶活性实验鉴定。通过腹腔注射牙龈素提取物和(或)碘乙酰胺(Iodoacetamide,IAM)构建小鼠牙龈素感染模型。利用酶活性实验检测小鼠血浆中精氨酸特异性牙龈素(arginine-gingipain,Rgp)和赖氨酸特异性牙龈素(lysine-gingipain,Kgp)的活性。通过旷场实验和高架零迷宫实验检测小鼠的焦虑样行为。利用脑组织切片荧光染色观察脑内星形胶质细胞的变化。采用GraphPad Prism对数据进行统计学分析。结果:培养牙龈卟啉单胞菌ATCC33277,得到具有Rgp和Kgp活性的牙龈素提取物。牙龈素提取物经腹腔注射后可在小鼠血浆中检测到Rgp和Kgp活性。与对照组相比,牙龈素组小鼠自主活动能力无显著变化,旷场实验中在中心区域活动时间显著减少(P<0.05),高架零迷宫实验中进入开放区域频率显著减少(P<0.05),焦虑样行为明显加强。免疫荧光染色显示,牙龈素组小鼠海马区域星形胶质细胞明显激活。以上结果均可被牙龈素抑制剂IAM明显缓解。结论:牙龈素提取物可引起小鼠焦虑样行为,可能与星形胶质细胞活化导致的神经炎症有关。

关键词：牙龈素焦虑样行为牙龈卟啉单胞菌旷场实验高架零迷宫实验

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星形胶质细胞在小鼠牙周炎与认知障碍相关性中的作用初探

星形胶质细胞在小鼠牙周炎与认知障碍相关性中的作用初探

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中华口腔医学会牙周病学专业委员会第16次牙周病学学术会议

作者：江旖婷周薇宋忠臣上海交通大学医学院附属第九人民医院牙周病科上海交通大学口腔医学院国家口腔医学中心国家口腔疾病临床医学研究中心上海市口腔医学重点实验室上海市口腔医学研究所上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔微生态与系统性疾病实验室上海交通大学口腔医学院国家口腔医学中心国家口腔疾病临床医学研究中心上海市口腔医学重点实验室上海市口腔医学研究所

目的:探究星形胶质细胞在牙周炎与认知障碍的相关性中的可能作用及机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分为2组,用牙龈卟啉单胞菌感染实验组小鼠口腔8周构建牙周炎模型。通过亚甲蓝染色和Micro-CT观察两组小鼠上颌牙槽骨吸收情况;通过旷场实验... 详细信息

目的:探究星形胶质细胞在牙周炎与认知障碍的相关性中的可能作用及机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分为2组,用牙龈卟啉单胞菌感染实验组小鼠口腔8周构建牙周炎模型。通过亚甲蓝染色和Micro-CT观察两组小鼠上颌牙槽骨吸收情况;通过旷场实验和Morris水迷宫评估小鼠自主活动和认知功能。利用GFAP抗体标记小鼠脑内星形胶质细胞并观察其活化情况。进一步使用C3和S100A10抗体分别标记A1和A2型星形胶质细胞从而探究其表型的变化;RT-PCR和Western Blot检测星形胶质细胞水通道蛋白的表达。结果:运用牙龈卟啉单胞菌感染小鼠口腔可造成牙槽骨吸收。通过旷场实验和Morris水迷宫发现牙周炎不会影响小鼠的运动能力,但会引起认知障碍。牙周炎使小鼠脑内星形胶质细胞活化,A1型星形胶质细胞的标志物C3的表达水平明显增强,导致水通道蛋白的基因和蛋白表达水平下调。结论:***诱导的小鼠牙周炎,可以活化星形胶质细胞,向A1型极化,从而影响水通道蛋白,通过改变星形胶质细胞的功能,与认知障碍密切相关。

关键词： P.gingivalis 牙周炎认知障碍星形胶质细胞

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蓝萼甲素对牙龈卟啉单胞菌体外抑菌活性研究

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实用口腔医学杂志 2021年第3期37卷 317-322页

作者：杨钰婷宋忠臣张旭周薇周鲁先宋莉南昌大学第二附属医院口腔科南昌大学牙周病研究所330000 上海交通大学医学院附属第九人民医院·口腔医学院牙周病科国家口腔疾病临床研究中心上海市口腔医学重点实验室上海交通大学医学院附属第九人民医院·口腔医学院口腔微生态与系统性疾病实验室国家口腔疾病临床研究中心上海市口腔医学重点实验室上海市口腔医学研究所上海艾济生物科技有限公司

目的:探讨蓝萼甲素(GLA)对牙龈卟啉单胞菌(***)的体外抑菌活性。方法:采用肉汤微量稀释法检测GLA对***的最小抑菌浓度(MIC)及最小杀菌浓度(MBC);采用结晶紫染色法及MTT法检测GLA对***生物膜的形成及其代谢活性的影响。结果:GLA对***的MI... 详细信息

目的:探讨蓝萼甲素(GLA)对牙龈卟啉单胞菌(***)的体外抑菌活性。方法:采用肉汤微量稀释法检测GLA对***的最小抑菌浓度(MIC)及最小杀菌浓度(MBC);采用结晶紫染色法及MTT法检测GLA对***生物膜的形成及其代谢活性的影响。结果:GLA对***的MIC值为5μmol/L,MBC值为20μmol/L,1/2 MIC时GLA对***浮游菌的生长即有显著的抑制作用。从1.25μmol/Lol/L开始GLA能够同时抑制***生物膜的形成和代谢活性,当GLA浓度达到5μmol/L时能抑制76%的***生物膜的形成和74%的生物膜代谢活性。结论:GLA在体外对***浮游菌及生物膜的生长均表现出较好的抑制作用,有望成为一种安全有效的牙周辅助治疗药物。

关键词：蓝萼甲素牙龈卟啉单胞菌微生物敏感性实验生物膜

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实验性牙周炎大鼠脑内外的炎性改变

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上海交通大学学报（医学版） 2020年第12期40卷 1579-1584页

作者：胡苡周薇宋忠臣上海交通大学医学院附属第九人民医院·口腔医学院牙周病科国家口腔疾病临床医学研究中心上海市口腔医学重点实验室上海市口腔医学研究所上海200011 上海交通大学医学院附属第九人民医院·口腔医学院口腔微生态与系统性疾病实验室国家口腔疾病临床医学研究中心上海市口腔医学重点实验室上海市口腔医学研究所上海200125

目的·观察实验性牙周炎大鼠外周及中枢内炎症水平的变化。方法·通过向SD大鼠龈沟内注射牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,***)来源的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)建立实验性牙周炎模型。采用苏木精-伊红染色观察... 详细信息

目的·观察实验性牙周炎大鼠外周及中枢内炎症水平的变化。方法·通过向SD大鼠龈沟内注射牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,***)来源的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)建立实验性牙周炎模型。采用苏木精-伊红染色观察牙周组织病理变化。采用实时定量荧光PCR评估外周血、脾脏及脑组织中白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-8的表达水平。采用免疫组织化学技术观察小胶质细胞及星形胶质细胞的激活情况。组间比较采用方差分析,进一步采用Tukey法进行两两比较。结果·龈沟注射***-LPS可造成大鼠牙周炎样病理变化。实验性牙周炎可上调大鼠外周血、脾脏及脑内炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-8)的表达水平,激活小胶质细胞及星形胶质细胞。结论·***-LPS龈沟注射法建立的实验性牙周炎可诱导外周及脑内炎症。炎症可能在牙周炎与阿尔茨海默病等系统性疾病的相关性中发挥重要作用。

关键词：牙周炎牙龈卟啉单胞菌脂多糖外周炎症神经炎症

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牙周微生态与心脑血管疾病研究进展

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口腔医学 2021年第7期41卷 577-582页

作者：段胜仲口腔微生态与系统性疾病实验室上海交通大学医学院附属第九人民医院上海交通大学口腔医学院国家口腔疾病临床医学研究中心上海市口腔医学重点实验室上海市口腔医学研究所

牙周微生态失衡与牙周病以及许多全身系统性疾病关系密切。该文就牙周炎和牙周微生态失衡对高血压、动脉粥样硬化、心肌梗死、心肌肥厚、心力衰竭、脑卒中等心脑血管疾病的作用进行简要回顾。近年来牙周炎与这些心脑血管疾病之间的相关... 详细信息

牙周微生态失衡与牙周病以及许多全身系统性疾病关系密切。该文就牙周炎和牙周微生态失衡对高血压、动脉粥样硬化、心肌梗死、心肌肥厚、心力衰竭、脑卒中等心脑血管疾病的作用进行简要回顾。近年来牙周炎与这些心脑血管疾病之间的相关性已经被确立。目前牙周炎与高血压、动脉粥样硬化等部分心脑血管疾病之间的因果关系有一定的数据支持,但是尚需进一步完善,而且牙周炎与其他心脑血管疾病之间的因果关系尚待建立。已有一些数据支持牙周微生态失衡在除了脑卒中之外的其他几种心脑血管疾病中发挥重要作用,但是需要更加深入的研究来全面解析牙周微生态失衡的关键作用和机制。这些研究将为口腔疾病和心脑血管疾病的联合防控提供证据和思路。

关键词：牙周微生态牙周炎心脑血管疾病

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relA基因敲除对多黏菌素抗鲍曼不动杆菌异质性耐药的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2019年第9期39卷 1004-1010页

作者：余春波卢明邵雷蒲甜陈代杰周薇上海交通大学医学院附属第九人民医院上海200011 中国医药工业研究总院/上海医药工业研究院上海201203 上海健康医学院协同科研中心上海201318 上海交通大学药学院上海200240 上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔医学院口腔微生态与系统性疾病实验室国家口腔疾病临床研究中心上海市口腔医学重点实验室上海市口腔医学研究所上海200011

目的·观察严谨反应相关的(p)ppGpp合成酶基因(relA)对多黏菌素抗鲍曼不动杆菌异质性耐药的影响。方法·采用Red同源重组技术敲除鲍曼不动杆菌ATCC19606中relA基因;用结晶紫染色法观察鲍曼不动杆菌菌膜形成的情况;用群体分析法(... 详细信息

目的·观察严谨反应相关的(p)ppGpp合成酶基因(relA)对多黏菌素抗鲍曼不动杆菌异质性耐药的影响。方法·采用Red同源重组技术敲除鲍曼不动杆菌ATCC19606中relA基因;用结晶紫染色法观察鲍曼不动杆菌菌膜形成的情况;用群体分析法(population analysis profiles,PAP)检测在多黏菌素作用下鲍曼不动杆菌产生异质性耐药菌落数的变化并计算异质性耐药率;用杀菌曲线检测在多黏菌素作用下鲍曼不动杆菌持留菌形成情况。结果·成功敲除鲍曼不动杆菌中relA基因,获得relA基因敲除株ATCC19606-ΔrelA,鲍曼不动杆菌的菌膜形成量明显下降,多黏菌素作用下异质性耐药菌落数及持留菌形成量均显著性降低。结论·细菌严谨反应中(p)ppGpp合成酶relA基因可能是影响鲍曼不动杆菌对多黏菌素产生异质性耐药的重要因素。

关键词：鲍曼不动杆菌 relA基因多黏菌素 Red同源重组技术异质性耐药持留性菌膜

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