检索结果-内蒙古大学图书馆

上海交通大学学报（医学版） 2023年第7期43卷 795-803页

作者：王千懿冉欣悦张沛灵慈政雷东周广东潍坊医学院整形外科研究所潍坊261042 上海市组织工程研究重点实验室上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海200125

目的·利用软骨脱细胞基质(acellular cartilage matrix,ACM)与复合天然丝素蛋白(silk fibroin,SF)生物材料,构建具有双网络交联的生物活性组织工程支架,用于软骨组织再生。方法·用核酸酶消化法消化掉软骨组织中细胞相关的免... 详细信息

目的·利用软骨脱细胞基质(acellular cartilage matrix,ACM)与复合天然丝素蛋白(silk fibroin,SF)生物材料,构建具有双网络交联的生物活性组织工程支架,用于软骨组织再生。方法·用核酸酶消化法消化掉软骨组织中细胞相关的免疫原性成分,并将细胞外基质相关糖蛋白、胶原结构保留,用DNA、组织糖胺多糖、胶原定量试剂盒通过分光光度仪检测软骨组织脱细胞效率。将ACM和SF配置成混合溶液,通过加入乙二醇二缩水甘油醚与两者所含羟基、氨基发生亲核交联反应,冷冻干燥制成多孔仿生支架(n=5),同时以相同方法制备仅含有ACM或SF的多孔支架(n=5)。扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)观察支架微观孔隙结构,并通过力学测试对不同组支架的力学强度、弹性模量以及回弹性进行评估,以吸水率反映支架的内外物质交换能力。分离并培养兔耳软骨细胞,接种于ACM-SF支架上,SEM观察培养1、4、7 d后细胞在支架上的黏附、分布与基质分泌情况,活/死细胞双染色观察细胞活力状况,通过CCK-8检测支架的细胞毒性,并于裸鼠皮下植入细胞支架复合物,体内培养4周、8周后,行组织学检测。各组间比较采用单因素方差分析。P<0.05为差异具有统计学意义。结果·经酶消化后的软骨脱细胞基质几乎无细胞残留,并保留了软骨细胞外基质活性成分。ACM-SF制备的复合支架具有相互连通的微孔结构和良好的弹性,湿态下多次压缩后能恢复原状,ACM-SF的吸水率达到了近20倍,为细胞黏附环境提供了有效的物质交换条件。此外,该支架无生物毒性,具有促进软骨细胞增殖的能力;组织学检测显示,ACM-SF支架可在体内再生均质、典型的软骨组织。结论·ACM-SF复合多孔支架具有良好的仿生微环境,可应用于组织工程软骨再生。

关键词：软骨脱细胞外基质丝素蛋白多孔支架软骨再生

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同种异体组织工程化软骨局部免疫豁免诱导的实验(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第14期11卷 2757-2760页

作者：胡洪亮曹谊林陈婷婷樊绮诗胡翊群上海交通大学医学院附属瑞金医院检验系上海市200025 上海交通大学医学院附属第九人民医院组织工程重点实验室上海市200011 上海交通大学医学院附属仁济医院内科上海市200127

背景:同种异体软骨移植存在局部免疫排斥反应,有必要进一步减少其排斥反应,以促进软骨修复的临床应用,为此进行一系列局部免疫豁免诱导的实验很有意义。目的:观察FasL基因重组逆转录病毒载体转染软骨细胞形成同种异体组织工程化软骨在... 详细信息

背景:同种异体软骨移植存在局部免疫排斥反应,有必要进一步减少其排斥反应,以促进软骨修复的临床应用,为此进行一系列局部免疫豁免诱导的实验很有意义。目的:观察FasL基因重组逆转录病毒载体转染软骨细胞形成同种异体组织工程化软骨在体内生长情况。设计:随机对照观察。单位:上海交通大学。材料:选用36只同种异体新西兰兔为受者,45只新生1周龄青紫蓝兔为供者,雌雄均不限。购自中国科学院实验动物研究中心。双嗜性逆转录病毒包装细胞系PT67购自Clontech公司;细胞培养基DMEM、胎牛血清、G418、Polybrene购自GIBCO BRL。方法:实验于2000-01/2005-07在原上海第二医科大学完成。摸球法随机将新西兰兔分为3组:同种异体软骨细胞-FasL组、同种异体软骨细胞组及空白组。每组各12只。利用重组逆转录病毒载体转染的青紫蓝兔软骨细胞和组织工程材料pluronic F-127复合物构建兔同种异体组织工程软骨。①移植物观察其大体观察与质量变化:各组均将相应材料注入新西兰白兔的皮下,移植接种后1,2,3个月取出移植物观察其大体观察与质量变化。②染色观察:移植接种后1,2,3月取出移植物,切片,行苏木精-伊红、Safranin’O、Masson’s trichrome染色观察。③抗体检测:移植接种后1,2月抽血1mL,将青紫蓝兔的软骨细胞用裂解液冻融裂解作为混合抗原,于琼脂糖介质中电泳分离,与受者新西兰兔血清作用,观察有无相应抗体产生。④补体依赖细胞毒实验:将青紫蓝兔的软骨细胞制备成2×109L-1的细胞悬液,接种于96孔板上,贴壁生长24h,加受者新西兰兔血清进行细胞毒试验,在显微镜下计数凋亡细胞的百分率。主要观察指标:①两组移植物的大体观察与质量变化。②组织学变化。③抗体检测结果。④凋亡细胞的百分率。结果:纳入实验兔81只均进入结果分析。①移植物的大体观察与质量变化:接种2周后,同种异体软骨细胞-FasL组及同种异体软骨细胞组兔接种细胞-材料复合物处,均有明显的结节形成,对照组未形成接节。同种异体软骨细胞组新生软骨组织随时间推移有逐渐缩小的趋势,并在第4个月后完全消失。同种异体软骨细胞-FasL组虽也有缩小的趋势,但7个月后尚存。同种异体软骨细胞-FasL组移植物质量高于同种异体软骨细胞组(P<0.05)。②组织学观察:同种异体软骨细胞组软骨组织周围可见大量的淋巴细胞浸润,同种异体软骨细胞-FasL组明显减少。软骨细胞内部,未见淋巴细胞侵入。麦松染色,光镜下观察,中部小部分白色为未成熟的软骨细胞,大部分成熟软骨细胞周围有染成绿色的胶原分泌。Safranin’O染色呈强阳性反应,表明基质中富含糖胺多糖。③抗体检测:将青紫蓝兔的软骨细胞用裂解液冻融裂解作为混合抗原,与受者新西兰兔血清作用,显示相应无抗体产生。④凋亡细胞的百分率:结果同种异体软骨细胞-FasL组、同种异体软骨细胞组及空白组血清CDC凋亡细胞的百分率分别为5%,6%和1%,均为阴性。结论:FasL基因重组逆转录病毒载体转染的软骨细胞能形成组织工程软骨,且能延迟退化3个月。

关键词：组织工程同种异体软骨逆转录病毒载体 FasL

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组织工程尿道粘膜的体外构建

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中华男科学杂志 2008年第12期14卷 1072-1076页

作者：卢慕峻王忠周广东俞斌刘伟曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院泌尿外科上海200011 上海交通大学医学院附属第九人民医院组织工程重点实验室上海200011

目的:利用组织工程方法在体外构建形成尿道粘膜结构。方法:酶消化法获得猪膀胱尿路上皮细胞(UC),以免疫荧光和RT-PCR方法进行UC鉴定。制备膀胱脱细胞基质移植物(BAMG)作为支架材料,以苏木精-伊红染色、Masson染色、免疫组化和扫描电镜... 详细信息

目的:利用组织工程方法在体外构建形成尿道粘膜结构。方法:酶消化法获得猪膀胱尿路上皮细胞(UC),以免疫荧光和RT-PCR方法进行UC鉴定。制备膀胱脱细胞基质移植物(BAMG)作为支架材料,以苏木精-伊红染色、Masson染色、免疫组化和扫描电镜进行评价。经过体外培养和扩增后,将P3代UC接种在BAMG上。结果:BAMG支架上的UC经过体外培养1周后即可形成沿基膜排列的复层上皮结构。扫描电镜显示细胞-材料复合良好,免疫组化检测支架上的UC广谱角蛋白表达阳性。结论:运用组织工程方法能够在体外快速进行尿道粘膜上皮结构的初步构建,为进一步临床修复诸如尿道下裂、尿道狭窄等尿道缺损奠定技术基础。

关键词：尿路上皮细胞组织工程尿道粘膜膀胱猪

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PGA支架上人与猪皮肤成纤维细胞增殖和基质分泌的比较

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上海交通大学学报（医学版） 2006年第10期26卷 1138-1142页

作者：徐福李鹏程刘伟王玉明魏娴周广东崔磊曹谊林上海交通大学医学院第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011 贵州遵义医学院

目的对人与猪皮肤成纤维细胞作为肌腱组织工程种子细胞,进行可行性比较。方法酶消化法获取人与猪皮肤成纤维细胞,培养扩增,取第2代细胞,以1×106/mL的细胞密度接种至聚羟基乙酸(PGA)圆柱形支架上体外培养。通过大体、组织学及增殖... 详细信息

目的对人与猪皮肤成纤维细胞作为肌腱组织工程种子细胞,进行可行性比较。方法酶消化法获取人与猪皮肤成纤维细胞,培养扩增,取第2代细胞,以1×106/mL的细胞密度接种至聚羟基乙酸(PGA)圆柱形支架上体外培养。通过大体、组织学及增殖曲线观察,羟脯氨酸定量测定以及免疫组化检测,比较两种细胞在PGA支架的黏附、增殖及基质分泌能力。结果组织学及三维增殖曲线观察结果显示,与猪皮肤成纤维细胞比较,人皮肤成纤维细胞与支架的黏附能力及细胞增殖能力良好;接种后第6天和第12天,HE染色可见人皮肤成纤维细胞-PGA复合物有连续的基质形成,两者羟脯氨酸含量分别为(2.23±0.25)μg/mgprotvs(1.07±0.18)μg/mgprot和(3.72±0.39)μg/mgprotvs(0.27±0.04)μg/mgprot,差异具有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示,接种后第12天,两种复合物的Ⅰ、Ⅲ型胶原表达均呈阳性。结论与猪皮肤成纤维细胞相比,人皮肤成纤维细胞更有希望作为肌腱组织工程的种子细胞。

关键词：组织工程肌腱皮肤成纤维细胞聚羟基乙酸

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应用比较蛋白质组学技术筛查组织工程化软骨力学性能相关蛋白

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中华整形外科杂志 2013年第1期29卷 49-54页

作者：丁金萍刘宏伟晏丹叶明亮邹汉法刘伟张文杰曹谊林周广东上海交通大学医学院附属第九人民医院整形外科、上海市组织工程研究重点实验室上海200011 中科院大连化学物理研究所湖南省郴州市人民医院

目的应用比较蛋白质组学分析方法筛选组织工程化软骨成熟过程中变化显著的细胞外基质蛋白，通过线性相关分析，研究与软骨力学性能相关的蛋白。方法分离人胎儿软骨细胞培养并扩增，接种到聚羟基乙酸／聚乳酸（PGA／PLA）支架材料，体外... 详细信息

目的应用比较蛋白质组学分析方法筛选组织工程化软骨成熟过程中变化显著的细胞外基质蛋白，通过线性相关分析，研究与软骨力学性能相关的蛋白。方法分离人胎儿软骨细胞培养并扩增，接种到聚羟基乙酸／聚乳酸（PGA／PLA）支架材料，体外培养4周后随机分为3组，每组6例，A组继续体外培养6周、B组回植裸鼠体内培养6周、c组回植裸鼠体内培养12周。取材后进行大体观察、湿重及体积测定、组织学及生物力学等相关检测，比较体内外构建软骨与天然软骨形成质量上的差异。同时进行蛋白质组学分析，选择细胞外基质中比值大于2倍的蛋白与相应各组杨氏模量做相关性分析，根据相关系数筛选与软骨力学性能最相关的蛋白。结果3组均能在体内外形成透明软骨样组织，c组和B组软骨外观近似天然成人软骨，组织学显示大量成熟软骨陷窝，而A组形成的软骨组织结构较松散，组织学可见不规则肥大软骨陷窝。c组湿重和生物力学检测分别为（372．5±35．4）mg和（8．68±2．65）MPa，明显高于B组的（346±34．5）mg和（3．25±1．24）MPa（P〈0．01），而A组为（184．4±12．28）mg和（0．7±0．23）MPa。应用蛋白质组学技术检测到细胞外基质中共44个差异蛋白，选择胞外基质中C组和A组之间差异最大的6个蛋白，与相应各组杨氏模量进行线性相关分析，发现核心蛋白聚糖（Decorin）、软骨粘附素（Chondroadhefin）和纤调蛋白（Fibromodulin）与软骨力学性能变化显著相关（P〈0．05）。结论蛋白质组学技术能够提供大量的蛋白质信息，组织构建与比较蛋白质组学技术相结合，有利于进一步分析组织工程化软骨胞外基质蛋白与力学性能的关系。

关键词：组织工程软骨蛋白质组学

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聚羟基乙酸作为支架材料体外构建复层膀胱壁结构的探讨

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临床泌尿外科杂志 2009年第12期24卷 935-938页

作者：卢慕峻王忠董国勤姜华周广东刘伟曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院泌尿外科上海200011 上海市组织工程研究重点实验室

目的:探讨聚羟基乙酸(polyglycolic acid,PGA)作为支架材料并复合成年猪膀胱平滑肌细胞和尿路上皮细胞,体外构建复层膀胱壁结构的可行性。方法:采用PGA作为支架材料,并以聚乳酸(polylact acid,PLA)塑形。以酶消化法分别获得猪膀胱尿路... 详细信息

目的:探讨聚羟基乙酸(polyglycolic acid,PGA)作为支架材料并复合成年猪膀胱平滑肌细胞和尿路上皮细胞,体外构建复层膀胱壁结构的可行性。方法:采用PGA作为支架材料,并以聚乳酸(polylact acid,PLA)塑形。以酶消化法分别获得猪膀胱尿路上皮细胞和平滑肌细胞,并体外扩增。以MTT法分别检测P3代膀胱平滑肌细胞(SMC)和尿路上皮细胞(UC)的体外增殖能力。将P3代膀胱平滑肌细胞先接种在支架上,再接种尿路上皮细胞。将细胞-材料复合物体外培养1～2周并行组织学鉴定。结果:酶消化法获得的膀胱平滑肌细胞和尿路上皮细胞经过体外培养仍具有较强的体外增殖能力。细胞材料复合物体外培养1周后形成分层排列结构,包括黏膜上皮层和膀胱平滑肌层。免疫组织化学显示平滑肌层α-Smooth MuscleActin表达阳性,黏膜上皮层广谱角蛋白表达阳性。而细胞材料复合物继续体外培养至2周,细胞从支架上大量脱落。结论:PGA适合作为复层膀胱壁结构体外构建的支架材料。采用PGA作为支架材料并复合膀胱平滑肌细胞和尿路上皮细胞,可以体外构建出类似复层膀胱壁结构。细胞材料复合物体外培养1周左右较适合进行体内回植修复。

关键词：膀胱组织工程学聚羟基乙酸支架

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携带人TGF-β_1腺病毒载体的构建及鉴定

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上海交通大学学报（医学版） 2006年第10期26卷 1134-1137页

作者：夏万尧刘伟王丹茹丁文龙钟梅芳刘德莉周广东崔磊曹谊林上海交通大学医学院第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海200011 上海交通大学基础医学院人体解剖学教研室

目的构建携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(Adeno-hTGF-β1),为hTGF-β1基因转染骨髓间质干细胞(BMSCs)的研究奠定基础。方法应用基因重组技术构建hTGF-β1腺病毒表达载体,分别用限制性内切酶酶切和聚合酶链反应(PCR)鉴定,... 详细信息

目的构建携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(Adeno-hTGF-β1),为hTGF-β1基因转染骨髓间质干细胞(BMSCs)的研究奠定基础。方法应用基因重组技术构建hTGF-β1腺病毒表达载体,分别用限制性内切酶酶切和聚合酶链反应(PCR)鉴定,并通过脂质体Fugene 6介导腺病毒DNA转染293细胞。结果重组hTGF-β1腺病毒DNA经限制性内切酶XhoⅠ酶切后,得到14.5、8.1、4.2、4.0、2.5、1.4、0.6 kb片段。与空白腺病毒相比,5.6 kb的片段已被置换成4.2 kb和4.0 kb片段;经PI-SceⅠ/I-CeuⅠ双酶切后,得到32.6 kb和2.6 kb含目的基因片段,片段大小无误,表明重组Adeno-hTGF-β1腺病毒表达系统构建成功。以重组Adeno-hTGF-β1DNA为模板的PCR产物中出现1.35 kb hTGF-β1目的基因片段,表明hTGF-β1基因成功连接至adeno-X腺病毒表达载体中。重组hTGF-β1腺病毒表达载体通过Fugene 6介导转染293包装细胞出现细胞病变效应(CPE)。采用PCR反应鉴定293细胞包装的腺病毒,证实扩增出247 bp的hTGF-β1目的基因片断和312 bp的腺病毒骨架基因片断。结论携带人hTGF-β1的腺病毒载体的构建成功,并能在293细胞包装,为hTGF-β1基因转染的BMSCs在软骨组织工程中的应用奠定了基础。

关键词：基因重组腺病毒转化生长因子β1

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诱导骨髓基质细胞成血管平滑肌细胞的研究

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中华实验外科杂志 2008年第10期25卷 1251-1253,1361页

作者：许志成李宏周广东崔磊刘伟曹谊林 200011上海交通大学医学院附属笫九人民医院整形外科、上海市组织工程重点实验室、上海组织工程研究与开发中心

目的探讨体外诱导犬骨髓基质细胞（BMSC）为血管平滑肌细胞（VSMC）及其成血管的能力。方法用含血小板源性生长因子（PDGF—BB）10μg/L的内皮细胞培养液-2（EGM-2）诱导，无PDGF-BB的EGM-2培养液为对照，检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMa... 详细信息

目的探讨体外诱导犬骨髓基质细胞（BMSC）为血管平滑肌细胞（VSMC）及其成血管的能力。方法用含血小板源性生长因子（PDGF—BB）10μg/L的内皮细胞培养液-2（EGM-2）诱导，无PDGF-BB的EGM-2培养液为对照，检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMactin）与肌钙结合蛋白（calponin）的表达并接种于聚羟基乙酸（PGA）培养4周后取材。结果诱导组（n=5）细胞逐步呈平滑肌样转变，表达μ-SM actin与calponin，流式细胞仪阳性率分别为（45．16±0．97）％、（37．54±1．15）％，可成血管样结构，对照组（n=5）变化不明显，阳性率（7．92±1．04）％、（6．37±0．83）％，成血管样结构能力差。结论体外可诱导犬BMSC为VSMC并有成血管样结构的能力。

关键词：骨髓基质细胞血管平滑肌细胞组织工程

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氟化脱细胞兔主动脉制备人工小血管的可行性研究

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上海交通大学学报（医学版） 2023年第7期43卷 814-820页

作者：张如杰周广东王建博翁光东雷东龚文辉安徽医科大学第一附属医院心脏大血管外科合肥230088 上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200125

目的·探讨氟化脱细胞兔主动脉作为组织工程人工小血管的可行性。方法·联合聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)、脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate,SD)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)、DNA酶、RNA酶等对获取的兔... 详细信息

目的·探讨氟化脱细胞兔主动脉作为组织工程人工小血管的可行性。方法·联合聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)、脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate,SD)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)、DNA酶、RNA酶等对获取的兔主动脉进行脱细胞处理,分别对脱细胞组和未脱细胞组进行苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,H-E染色)、Masson染色、Verhoff-von Gieson染色,用场发射扫描电镜鉴定脱细胞效果,观察脱细胞血管形态学变化。使用脱细胞后的兔主动脉作为动脉化人工小血管支架,利用液体全氟化碳涂层修饰脱细胞小血管内膜(氟化组)制备一种新型人工小血管,并对其特征基团进行定性且定量测定。观察血管内表面液体消散时间和液体在45°倾斜血管表面的流动情况来分析血管的疏水性。将脱细胞组和氟化组的血管置入富含血小板的血浆后孵育,在电镜下观察,评估体外抗血小板聚集性能。取未脱细胞组、脱细胞组以及氟化组的兔主动脉连接上球囊扩张压力泵进行爆破压力测试。结果·对血管进行组织学观察发现,联合脱细胞法可以有效去除细胞并保留胶原蛋白和弹性纤维,且在电镜下内膜并未出现破损。对3组进行压力爆破测试,3组间比较差异无统计学意义。在疏水性测试中,水滴在氟化组内膜上停留的时间超过5 min,且在45°斜板上未留下明显水迹。在血小板黏附性试验中,脱细胞组内膜聚集活化了血小板,而氟化组则得到抑制。结论·联合脱细胞法可使脱细胞血管具有良好力学性能和物理稳定性,氟化涂层可使血管具有抗凝血性及较好的生物相容性。

关键词：脱细胞组织工程兔小血管内膜涂层

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体外培养人牙髓干细胞的生物学特性

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上海交通大学学报（医学版） 2006年第9期26卷 1023-1026页

作者：李昊妍梁景平吴安平张秀丽殷德民上海交通大学医学院第九人民医院口腔内科上海200011 上海市口腔医学研究所上海市组织工程研究重点实验室

目的研究体外培养的人牙髓干细胞的生物学特性。方法收集因正畸拔除的第一前磨牙,用酶消化法分离能够形成克隆且具有高增殖力的细胞,细胞以低密度接种传代培养;免疫荧光法检测第3代细胞表面标志的表达;取第4代细胞,用含有20%胎牛血清、... 详细信息

目的研究体外培养的人牙髓干细胞的生物学特性。方法收集因正畸拔除的第一前磨牙,用酶消化法分离能够形成克隆且具有高增殖力的细胞,细胞以低密度接种传代培养;免疫荧光法检测第3代细胞表面标志的表达;取第4代细胞,用含有20%胎牛血清、地塞米松、β甘油磷酸钠和维生素C的培养液诱导3周,茜素红染色观察诱导后细胞矿化情况,免疫荧光法检测牙本质涎蛋白(DSP)表达,改良Kap low氏法检测诱导前后碱性磷酸酶的表达。结果诱导前细胞表达Stro-1、Cbfa-1、和Ⅰ型胶原,碱性磷酸酶呈弱表达,不表达DSP;诱导后细胞表达DSP,碱性磷酸酶呈强表达,并可见钙结节形成。结论分离所得细胞具有较高的增殖和分化能力,与间充质干细胞具有相似的表面标志,并在诱导后表达DSP而具备牙髓干细胞的特征。

关键词：生物学特性表面标志诱导体外培养牙髓干细胞

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