检索结果-内蒙古大学图书馆

组织工程与重建外科杂志 2009年第5期5卷 260-263页

作者：柴岗崔磊张艳上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海市200011

目的研究应用RNA干扰技术早期抑制人Cathepsin K(CTSK)基因的表达对延缓软骨细胞的去分化过程及维持软骨细胞表型的影响。方法pGCsilencerTMH1/Neo/GFP/CTSK RNAi质粒体外转染人软骨细胞,并用G418筛选3周,再通过RT-PCR检测CTSK、Ⅱ型胶... 详细信息

目的研究应用RNA干扰技术早期抑制人Cathepsin K(CTSK)基因的表达对延缓软骨细胞的去分化过程及维持软骨细胞表型的影响。方法pGCsilencerTMH1/Neo/GFP/CTSK RNAi质粒体外转染人软骨细胞,并用G418筛选3周,再通过RT-PCR检测CTSK、Ⅱ型胶原和Aggrecan cDNA转录的表达,Western-Blot、免疫荧光检测转染后软骨细胞的CTSK、Ⅱ型胶原和Aggrecan在蛋白水平的表达。结果装入质粒载体转染第1代的软骨细胞,在体外通过细胞形态观察可发现,抑制CTSK基因后3周软骨细胞仍大多数保持多角形,而对照组则向成纤维样细胞形态变化。RT-PCR结果显示,在mRNA水平抑制了CTSK的表达,而不影响对软骨细胞Ⅱ型胶原和Aggrecan的mRNA表达。免疫荧光和Western-blot的结果证实了在早期抑制了软骨细胞CTSK基因表达并维持3周左右,软骨细胞的特异性基质Ⅱ型胶原和Aggrecan在蛋白水平明显增加。结论早期抑制了软骨细胞CTSK基因的表达,可使软骨细胞去分化过程中其软骨特异性基质Ⅱ型胶原和Aggrecan增加,说明可以维持软骨细胞的表型。

关键词：组织蛋白酶K RNA干扰软骨细胞去分化

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低氧培养促进小鼠骨髓间充质干细胞的增殖

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组织工程与重建外科杂志 2009年第6期5卷 307-309页

作者：张莹莹蒋婷周广东曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海市200011

目的小鼠骨髓间充质干细胞(Murine bone marrow stem cells,mBMSCs)体外培养增殖相对缓慢,细胞表型会逐渐丧失。本研究采用低氧培养观察mBMSCs的增殖和表型维持情况,以期寻找一种更简便和快速扩增mBMSCs的方法。方法用低氧浓度(4%O_2)... 详细信息

目的小鼠骨髓间充质干细胞(Murine bone marrow stem cells,mBMSCs)体外培养增殖相对缓慢,细胞表型会逐渐丧失。本研究采用低氧培养观察mBMSCs的增殖和表型维持情况,以期寻找一种更简便和快速扩增mBMSCs的方法。方法用低氧浓度(4%O_2)和常规氧浓度(20%O_2)培养、扩增mBMSCs,观察比较两种氧浓度培养的细胞增殖速度、细胞形态和细胞周期分析等。结果低氧浓度(4%O_2)促进mBMSCs增殖,同代次细胞倍增时间明显短于常规氧浓度(20%O_2)细胞;相比低氧浓度(4%O_2),常规氧浓度(20%O_2)培养的细胞更容易发生去分化。在细胞周期分析中,低氧浓度培养的mBMSCs处于复制期的比例高于常规氧浓度培养细胞的比例。结论低氧(4%O_2)培养可以促进mBMSCs增殖,是一种简便的体外迅速扩增mBMSCs的较好方法。

关键词：低氧培养小鼠骨髓间充质干细胞增殖

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采用明胶海绵置入法建立大鼠皮肤切口瘢痕模型的实验研究

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中华整形外科杂志 2008年第1期24卷 42-45页

作者：武晓莉刘伟高振蔡泽浩邓丹宗丽娟殷德民曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室200011

目的采用明胶海绵置入皮肤切除型切口的方法增加大鼠皮肤切口的瘢痕宽度。方法在SD大鼠背部右侧作皮肤全层切除型切口，置入特定规格的无菌明胶海绵，左侧作同等长度线性切口后用镊子夹闭；对照组1的两侧均作切除型切口，伤口内均置入... 详细信息

目的采用明胶海绵置入皮肤切除型切口的方法增加大鼠皮肤切口的瘢痕宽度。方法在SD大鼠背部右侧作皮肤全层切除型切口，置入特定规格的无菌明胶海绵，左侧作同等长度线性切口后用镊子夹闭；对照组1的两侧均作切除型切口，伤口内均置入明胶海绵；对照组2两侧也均作切除型切口，但仅在一侧置入明胶海绵。于术后不同时段取材进行各项检测。结果置入明胶海绵后，伤口或瘢痕宽度为对照侧的4～11倍（P〈0．01），伤口上皮化延迟。对照组1的两侧伤口或瘢痕宽度无差别，同一伤口或瘢痕不同部位宽度一致。对照组2未加明胶海绵侧伤口收缩呈不规则状而非线性。结论采用明胶海绵置入的方法可以稳定增加大鼠皮肤伤口愈合后的瘢痕宽度，从而为皮肤瘢痕研究提供一种新的动物模型。

关键词：动物模型明胶海绵置入法大鼠皮肤瘢痕吸收性

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反应器内构建组织工程血管平滑肌层的实验研究

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中华整形外科杂志 2008年第3期24卷 220-224页

作者：许志成李宏周广东李纲刘阳张文杰崔磊刘伟曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院整形外科上海市组织工程重点实验室上海组织工程研究与开发中心200011

目的探讨生物反应器内构建组织工程血管的可行性。方法于6个月龄犬颈总动脉血管获取平滑肌细胞，经体外培养扩增后接种于聚羟基乙酸（PGA）上，形成细胞一材料复合物，并将其置于生物反应器内培养。实验组模拟成年哺乳动物循环系统的参... 详细信息

目的探讨生物反应器内构建组织工程血管的可行性。方法于6个月龄犬颈总动脉血管获取平滑肌细胞，经体外培养扩增后接种于聚羟基乙酸（PGA）上，形成细胞一材料复合物，并将其置于生物反应器内培养。实验组模拟成年哺乳动物循环系统的参数予以动态力学刺激培养（搏动频率：75次，分；扩张量〈5％）；对照组为静态培养，其余与实验组相同，分别于3与6周后取材检测。结果生物反应器内培养的血管大体观察具有良好的弹性，管腔圆，色泽光亮；HE染色显示平滑肌纤维成分排列较规则，有层次感；弹力纤维染色显示弹力纤维成分较多而密；免疫组织化学检测显示为棕黄色层状排列的平滑肌纤维。对照组弹性欠佳，管腔塌陷，色泽暗淡；平滑肌纤维与弹力纤维成分较少且排列紊乱，层次感差。结论应用生物反应器可构建具有良好结构的血管样结构的平滑肌层组织。

关键词：组织工程生物反应器血管

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快速获得和纯化骨髓基质干细胞的方法

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上海交通大学学报（医学版） 2008年第2期28卷 228-231页

作者：周佳沈尊理金羽青刘伟沈华上海交通大学第一人民医院整形外科上海200080 上海交通大学医学院第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

目的研究在体外快速获得骨髓基质干细胞及纯化的方法。方法采用流式细胞仪筛选法获得CD45-、CD90+原代细胞,复合胶原酶差速消化逐级传代、纯化;对第3代(P3代)细胞进行脂肪细胞、软骨细胞、骨细胞三向诱导;2～4周后,分别行oilred’O、Saf... 详细信息

目的研究在体外快速获得骨髓基质干细胞及纯化的方法。方法采用流式细胞仪筛选法获得CD45-、CD90+原代细胞,复合胶原酶差速消化逐级传代、纯化;对第3代(P3代)细胞进行脂肪细胞、软骨细胞、骨细胞三向诱导;2～4周后,分别行oilred’O、Safranin’O和茜素红染色,倒置显微镜下观察诱导结果。结果经流式细胞仪初筛和复合胶原酶差速消化,传代至P3代,细胞形态已呈现均一性。向脂肪细胞诱导后第4周,oilred’O染色见细胞内大量红染的脂滴;向软骨细胞诱导后第4周,Safranin’O染色见多数切片呈阳性,细胞团块中存在大量软骨特异性的陷窝样结构;向骨细胞诱导后第4周,茜素红染色发现肉眼可见广泛散在的红色阳性钙结节。结论本研究所采用的流式细胞仪初筛和复合胶原酶差速消化法,可快速获得高纯度的骨髓基质干细胞。

关键词：骨髓基质干细胞纯化流式筛选复合胶原酶

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骨髓基质细胞修复颅骨缺损的实验研究

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组织工程与重建外科杂志 2008年第4期4卷 189-191页

作者：张艳柴岗麻荪香袁捷上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海市200011

目的为验证三维打印研究中动物模型的可靠性,采用骨髓基质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)修复裸鼠颅骨缺损。方法共10只裸鼠,其中实验组(n=5只):颅骨缺损区植入BMSCs/脱钙骨;材料对照组:颅骨缺损区植入单纯脱钙骨,... 详细信息

目的为验证三维打印研究中动物模型的可靠性,采用骨髓基质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)修复裸鼠颅骨缺损。方法共10只裸鼠,其中实验组(n=5只):颅骨缺损区植入BMSCs/脱钙骨;材料对照组:颅骨缺损区植入单纯脱钙骨,采用实验组自身对照(n=5只);空白对照组(n=5只):双侧颅骨区造成缺损后旷置。术后3个月取材进行大体观察、组织学和免疫组化(骨钙蛋白)检查。结果术后3个月,实验侧组织质地较硬,组织学表现为骨结构,骨钙蛋白免疫组化阳性;对照侧质地较软,组织学表现为结缔组织,骨钙蛋白免疫组化阴性;空白对照组仍表现为颅骨缺损。结论采用BMSCs可修复裸鼠颅骨缺损,验证了三维打印研究中动物模型的可靠性。

关键词：骨缺损组织工程骨髓基质干细胞

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人脂肪来源细胞体内构建组织工程化脂肪的实验研究

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组织工程与重建外科杂志 2008年第2期4卷 89-93页

作者：薛桂松张英蒋婷郭妤周广东祁佐良上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海市200011

目的探讨以组织工程技术,应用脂肪来源细胞(Adipose-derived cells,ADCs)体内构建脂肪组织的可行性。方法吸脂术获得人脂肪组织,一部分直接植入裸鼠体内;另一部分用酶消化法分离、培养ADCs,将第三代细胞接种于纤维凝胶(Fibrin glue)支架... 详细信息

目的探讨以组织工程技术,应用脂肪来源细胞(Adipose-derived cells,ADCs)体内构建脂肪组织的可行性。方法吸脂术获得人脂肪组织,一部分直接植入裸鼠体内;另一部分用酶消化法分离、培养ADCs,将第三代细胞接种于纤维凝胶(Fibrin glue)支架中,经成脂肪培养液诱导1周后,植入裸鼠体内,4周后取材,用称重法及油红、HE染色检测结果。实验分为直接注射脂肪组、单纯支架组、细胞-支架复合体脂肪诱导组、非诱导组。结果直接注射组在裸鼠皮下形成脂肪组织,但吸收量大;细胞-支架复合体诱导组有大量脂肪类组织形成,油红染色显示组织有脂滴形成;细胞-支架复合体非诱导组和单纯支架组均未发现脂肪组织形成。结论采用组织工程技术将吸脂术获得脂肪来源细胞接种纤维凝胶支架,体内构建脂肪组织,具有可行性。

关键词：脂肪来源细胞组织工程脂肪纤维凝胶体内

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不同比例的PLA-PGA支架对软骨细胞复合的影响

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组织工程与重建外科杂志 2008年第6期4卷 305-307页

作者：张路李琼周广东邓丹刘伟曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海市200011

目的研究经聚乳酸(PLA)包埋后的不同比例PLA-聚羟基乙酸(PGA)组织工程支架对软骨细胞复合的影响及原因。方法分离培养小猪软骨细胞,并以5×107cells/mL的密度接种在经PLA包埋的不同比例PGA-PLA支架材料上,4h后检测软骨细胞在支架材... 详细信息

目的研究经聚乳酸(PLA)包埋后的不同比例PLA-聚羟基乙酸(PGA)组织工程支架对软骨细胞复合的影响及原因。方法分离培养小猪软骨细胞,并以5×107cells/mL的密度接种在经PLA包埋的不同比例PGA-PLA支架材料上,4h后检测软骨细胞在支架材料上的流失率,24h后检测软骨细胞在支架材料上的粘附率,并对支架材料进行电镜扫描,分析原因。结果随着支架材料中PLA比例的提高,软骨细胞的接种流失率上升,支架材料的接种负荷下降,24h时软骨细胞粘附率无明显差异。扫描电镜证实其原因。结论PLA包埋的PGA支架材料会降低对软骨细胞的接种负荷,但细胞粘附率无变化。

关键词：组织工程聚羟基乙酸聚乳酸粘附率软骨细胞

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自体骨髓基质干细胞复合珊瑚修复犬下颌骨节段缺损的初步研究

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中华整形外科杂志 2007年第1期23卷 51-55页

作者：袁捷刘广鹏柴岗刘波许锋崔磊刘伟曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室200011

目的应用自体骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）复合珊瑚构建组织工程化骨，修复犬下颌骨节段性缺损。方法体外扩增培养、成骨诱导犬BMSCs。将第二代细胞复合珊瑚后修复犬自体右侧3cm的下颌骨节段缺损（n=6）；以单... 详细信息

目的应用自体骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）复合珊瑚构建组织工程化骨，修复犬下颌骨节段性缺损。方法体外扩增培养、成骨诱导犬BMSCs。将第二代细胞复合珊瑚后修复犬自体右侧3cm的下颌骨节段缺损（n=6）；以单纯珊瑚植入缺损处为对照（n=6），术后12、32周分别通过影像学，大体形态观察，组织学和生物力学的方法检测骨缺损的修复效果。结果成骨诱导的BMSCs在珊瑚支架上生长良好。X线片显示12周时实验组骨痂较多，对照组材料明显吸收；32周时CT、X线片和大体观察显示术后实验组骨愈合良好，对照组为骨不连；骨密度检测示实验组显著高于对照组（P〈0．05）；组织学示实验组有较多成熟骨呈骨性愈合，对照组为纤维性愈合；生物力学测试实验组与正常下颌骨力学强度差异无统计学意义（P〉0．05）。结论自体成骨诱导BMSCs复合珊瑚形成的组织工程化骨可修复犬下颌骨节段缺损。

关键词：下颌骨骨髓基质干细胞珊瑚组织工程

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化学剂法对兔卵母细胞孤雌激活的效果

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上海交通大学学报（医学版） 2007年第6期27卷 666-669页

作者：唐郑雅匡延平陆峻泓曹谊林张文杰上海交通大学医学院第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

目的研究钙离子载体A23187和6-二甲基氨基嘌呤（6-DMAP）及3种酶对兔卵母细胞的激活率,并观察其体外发育情况。方法兔超排后获得卵母细胞,经脱颗粒处理后用A23187和6-DMAP处理不同时间,体外培养5-7d,观察细胞发育与囊胚形成情况。结果... 详细信息

目的研究钙离子载体A23187和6-二甲基氨基嘌呤（6-DMAP）及3种酶对兔卵母细胞的激活率,并观察其体外发育情况。方法兔超排后获得卵母细胞,经脱颗粒处理后用A23187和6-DMAP处理不同时间,体外培养5-7d,观察细胞发育与囊胚形成情况。结果钙离子载体A23187激活处理5min后,继续在2.0mmol/L6-DMAP中分别处理3.5、4.0、4.5、5.0h,均能激活兔卵母细胞;以处理4.0h的卵裂率最高（58.82%,20/34）,并有15%（3/20）的囊胚发育率。透明质酸酶、胶原酶和胰酶处理20min后,均能激活兔卵母细胞,其中透明质酸酶处理20min的激活率和卵裂率最高,分别为58.33%（28/48）和63.64%（28/44）。结论兔卵母细胞孤雌激活率与激活方法密切相关。化学激活剂的处理时间及消化酶的不同均对兔卵母细胞的激活产生显著影响。

关键词：孤雌激活 A23187 6-二甲基氨基嘌呤透明质酸酶

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