检索结果-内蒙古大学图书馆

组织工程与重建外科杂志 2009年第5期5卷 260-263页

作者：柴岗崔磊张艳上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海市200011

目的研究应用RNA干扰技术早期抑制人Cathepsin K(CTSK)基因的表达对延缓软骨细胞的去分化过程及维持软骨细胞表型的影响。方法pGCsilencerTMH1/Neo/GFP/CTSK RNAi质粒体外转染人软骨细胞,并用G418筛选3周,再通过RT-PCR检测CTSK、Ⅱ型胶... 详细信息

目的研究应用RNA干扰技术早期抑制人Cathepsin K(CTSK)基因的表达对延缓软骨细胞的去分化过程及维持软骨细胞表型的影响。方法pGCsilencerTMH1/Neo/GFP/CTSK RNAi质粒体外转染人软骨细胞,并用G418筛选3周,再通过RT-PCR检测CTSK、Ⅱ型胶原和Aggrecan cDNA转录的表达,Western-Blot、免疫荧光检测转染后软骨细胞的CTSK、Ⅱ型胶原和Aggrecan在蛋白水平的表达。结果装入质粒载体转染第1代的软骨细胞,在体外通过细胞形态观察可发现,抑制CTSK基因后3周软骨细胞仍大多数保持多角形,而对照组则向成纤维样细胞形态变化。RT-PCR结果显示,在mRNA水平抑制了CTSK的表达,而不影响对软骨细胞Ⅱ型胶原和Aggrecan的mRNA表达。免疫荧光和Western-blot的结果证实了在早期抑制了软骨细胞CTSK基因表达并维持3周左右,软骨细胞的特异性基质Ⅱ型胶原和Aggrecan在蛋白水平明显增加。结论早期抑制了软骨细胞CTSK基因的表达,可使软骨细胞去分化过程中其软骨特异性基质Ⅱ型胶原和Aggrecan增加,说明可以维持软骨细胞的表型。

关键词：组织蛋白酶K RNA干扰软骨细胞去分化

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低氧培养促进小鼠骨髓间充质干细胞的增殖

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组织工程与重建外科杂志 2009年第6期5卷 307-309页

作者：张莹莹蒋婷周广东曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海市200011

目的小鼠骨髓间充质干细胞(Murine bone marrow stem cells,mBMSCs)体外培养增殖相对缓慢,细胞表型会逐渐丧失。本研究采用低氧培养观察mBMSCs的增殖和表型维持情况,以期寻找一种更简便和快速扩增mBMSCs的方法。方法用低氧浓度(4%O_2)... 详细信息

目的小鼠骨髓间充质干细胞(Murine bone marrow stem cells,mBMSCs)体外培养增殖相对缓慢,细胞表型会逐渐丧失。本研究采用低氧培养观察mBMSCs的增殖和表型维持情况,以期寻找一种更简便和快速扩增mBMSCs的方法。方法用低氧浓度(4%O_2)和常规氧浓度(20%O_2)培养、扩增mBMSCs,观察比较两种氧浓度培养的细胞增殖速度、细胞形态和细胞周期分析等。结果低氧浓度(4%O_2)促进mBMSCs增殖,同代次细胞倍增时间明显短于常规氧浓度(20%O_2)细胞;相比低氧浓度(4%O_2),常规氧浓度(20%O_2)培养的细胞更容易发生去分化。在细胞周期分析中,低氧浓度培养的mBMSCs处于复制期的比例高于常规氧浓度培养细胞的比例。结论低氧(4%O_2)培养可以促进mBMSCs增殖,是一种简便的体外迅速扩增mBMSCs的较好方法。

关键词：低氧培养小鼠骨髓间充质干细胞增殖

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间充质干细胞体外软骨定向诱导条件的研究进展

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中国美容医学 2009年第9期18卷 1366-1369页

作者：李琼张路周广东曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院整形外科上海市组织工程重点实验室上海200011

种子细胞来源一直是限制软骨组织工程发展的主要瓶颈。软骨细胞增殖能力有限,体外大量扩增后易发生老化及去分化,丧失软骨形成能力,且软骨细胞的增殖能力随年龄增长逐渐下降进一步限制了其在组织工程中的应用。如何寻找到最佳的种子细... 详细信息

种子细胞来源一直是限制软骨组织工程发展的主要瓶颈。软骨细胞增殖能力有限,体外大量扩增后易发生老化及去分化,丧失软骨形成能力,且软骨细胞的增殖能力随年龄增长逐渐下降进一步限制了其在组织工程中的应用。如何寻找到最佳的种子细胞是目前组织工程研究的热点之一。

关键词：体外大量扩增间充质干细胞诱导条件软骨组织工程骨定向细胞增殖能力种子细胞细胞来源

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重组hTGF-β1腺病毒转染BMSCs及对其增殖的影响

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解剖科学进展 2009年第1期15卷 1-5页

作者：夏万尧丁文龙刘伟钟梅芳周广东崔磊曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院整形外科上海组织工程重点实验室上海200011 上海交通大学医学院人体解剖学教研室上海200011

目的探讨携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(adeno-hTGF-β1)转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)表达及对其增殖的影响。方法重组adeno-hTGF-β1转染猪BMSCs,转染72h后以酶联免疫吸附分析(ELISA)方法定量检测重组腺病毒转染后hTGF-... 详细信息

目的探讨携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(adeno-hTGF-β1)转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)表达及对其增殖的影响。方法重组adeno-hTGF-β1转染猪BMSCs,转染72h后以酶联免疫吸附分析(ELISA)方法定量检测重组腺病毒转染后hTGF-β1蛋白的表达,MTT法测定水貂肺上皮细胞(MV-1-Lu)的生长抑制率,验证转染后所表达的hTGF-β1蛋白的生物学活性,及MTT法检测转染后对BMSCs增殖的影响。结果转染72h,BMSCs表达hTGF-β1蛋白量是转染Adeno-lacZ的BMSCs2.65倍(P<0.05);MV-1-Lu细胞生长抑制率测定显示BMSCs分泌的hTGF-β1蛋白有生物学活性,MTT法检测结果提示adeno-hTGF-β1转染BMSCs的增殖能力较对照组弱。结论转染重组adeno-hTGF-β1的BMSCs表达有生物学活性的hTGF-β1蛋白,hTGF-β1蛋白对BMSCs的增殖有一定的抑制作用。

关键词：骨髓间充质干细胞增殖腺病毒转化生长因子β1 猪

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大鼠睾丸间质细胞体外培养不同时间3β-羟基类固醇脱氢酶的表达

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组织工程与重建外科杂志 2009年第1期5卷 7-11页

作者：毕宏达王晓云周广东刘伟李鸣邢新第二军医大学长海医院整形外科上海市200433 上海交通大学医学院附属第九人民医院上海市200011 上海组织工程重点实验室

目的探讨通过差速贴壁法获得的7天龄、3周龄大鼠睾丸间质内细胞的细胞群体构成、体外培养不同时间3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)的表达水平变化,以及细胞睾酮分泌功能变化。方法联合应用胶原酶消化、不锈钢滤网过滤及差速贴壁法获得7... 详细信息

目的探讨通过差速贴壁法获得的7天龄、3周龄大鼠睾丸间质内细胞的细胞群体构成、体外培养不同时间3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)的表达水平变化,以及细胞睾酮分泌功能变化。方法联合应用胶原酶消化、不锈钢滤网过滤及差速贴壁法获得7天龄、3周龄雄性Wistar大鼠睾丸间质组织内细胞,贴壁细胞以DMEM/F12培养液培养,分别对原代培养2h、4d细胞进行3β-HSD免疫化学染色及流式细胞分析,原代培养细胞同时给予人绒毛膜促性腺激素(HCG)刺激,测定HCG刺激组和非刺激组各代细胞培养液上清中睾酮水平及其对HCG刺激的反应。结果7天龄、3周龄鼠差速贴壁法获得的睾丸间质内细胞群经流式细胞鉴定,3β-HSD阳性细胞所占比例分别为(5.4±1.2)%、(59.2±3.2)%;培养4d后,两组3β-HSD阳性细胞比例分别为(93.6±1.2)%、(95.4±3.2)%。两组原代培养细胞均有睾酮生成功能,在HCG刺激下睾酮分泌均明显上升,7天龄组培养细胞睾酮分泌高峰迟于3周龄组。结论差速贴壁法获得的7天龄、3周龄大鼠睾丸间质细胞群中均含有部分Leydig干细胞(Stem Leydig cells,SLCs),SLCs在体外培养过程中逐渐分化,表达3β-羟基类固醇脱氢酶,并产生睾酮。

关键词：睾丸间质细胞差速贴壁法睾酮 3β-羟基类固醇脱氢酶组织工程

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采用明胶海绵置入法建立大鼠皮肤切口瘢痕模型的实验研究

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中华整形外科杂志 2008年第1期24卷 42-45页

作者：武晓莉刘伟高振蔡泽浩邓丹宗丽娟殷德民曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室200011

目的采用明胶海绵置入皮肤切除型切口的方法增加大鼠皮肤切口的瘢痕宽度。方法在SD大鼠背部右侧作皮肤全层切除型切口，置入特定规格的无菌明胶海绵，左侧作同等长度线性切口后用镊子夹闭；对照组1的两侧均作切除型切口，伤口内均置入... 详细信息

目的采用明胶海绵置入皮肤切除型切口的方法增加大鼠皮肤切口的瘢痕宽度。方法在SD大鼠背部右侧作皮肤全层切除型切口，置入特定规格的无菌明胶海绵，左侧作同等长度线性切口后用镊子夹闭；对照组1的两侧均作切除型切口，伤口内均置入明胶海绵；对照组2两侧也均作切除型切口，但仅在一侧置入明胶海绵。于术后不同时段取材进行各项检测。结果置入明胶海绵后，伤口或瘢痕宽度为对照侧的4～11倍（P〈0．01），伤口上皮化延迟。对照组1的两侧伤口或瘢痕宽度无差别，同一伤口或瘢痕不同部位宽度一致。对照组2未加明胶海绵侧伤口收缩呈不规则状而非线性。结论采用明胶海绵置入的方法可以稳定增加大鼠皮肤伤口愈合后的瘢痕宽度，从而为皮肤瘢痕研究提供一种新的动物模型。

关键词：动物模型明胶海绵置入法大鼠皮肤瘢痕吸收性

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反应器内构建组织工程血管平滑肌层的实验研究

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中华整形外科杂志 2008年第3期24卷 220-224页

作者：许志成李宏周广东李纲刘阳张文杰崔磊刘伟曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院整形外科上海市组织工程重点实验室上海组织工程研究与开发中心200011

目的探讨生物反应器内构建组织工程血管的可行性。方法于6个月龄犬颈总动脉血管获取平滑肌细胞，经体外培养扩增后接种于聚羟基乙酸（PGA）上，形成细胞一材料复合物，并将其置于生物反应器内培养。实验组模拟成年哺乳动物循环系统的参... 详细信息

目的探讨生物反应器内构建组织工程血管的可行性。方法于6个月龄犬颈总动脉血管获取平滑肌细胞，经体外培养扩增后接种于聚羟基乙酸（PGA）上，形成细胞一材料复合物，并将其置于生物反应器内培养。实验组模拟成年哺乳动物循环系统的参数予以动态力学刺激培养（搏动频率：75次，分；扩张量〈5％）；对照组为静态培养，其余与实验组相同，分别于3与6周后取材检测。结果生物反应器内培养的血管大体观察具有良好的弹性，管腔圆，色泽光亮；HE染色显示平滑肌纤维成分排列较规则，有层次感；弹力纤维染色显示弹力纤维成分较多而密；免疫组织化学检测显示为棕黄色层状排列的平滑肌纤维。对照组弹性欠佳，管腔塌陷，色泽暗淡；平滑肌纤维与弹力纤维成分较少且排列紊乱，层次感差。结论应用生物反应器可构建具有良好结构的血管样结构的平滑肌层组织。

关键词：组织工程生物反应器血管

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重组hTGF-β1腺病毒转染BMSCs对其向软骨分化的影响

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中华显微外科杂志 2008年第3期31卷 195-198,I0007页

作者：夏万尧刘伟丁文龙钟梅芳周广东崔磊曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院整形外科上海组织工程重点实验室

目的研究重组hTGF—β1腺病毒（adeno—hTGF—β1）转染BMSCs对其向软骨分化的作用。方法重组adeno—hTGF—β1转染第一代猪BMSCs，对照组转染adeno—LacZ，腺病毒的量以200pfu／细胞计算，转染后1d，消化收集重组腺病毒转染后的BMSCs... 详细信息

目的研究重组hTGF—β1腺病毒（adeno—hTGF—β1）转染BMSCs对其向软骨分化的作用。方法重组adeno—hTGF—β1转染第一代猪BMSCs，对照组转染adeno—LacZ，腺病毒的量以200pfu／细胞计算，转染后1d，消化收集重组腺病毒转染后的BMSCs，置于无菌15ml聚丙烯试管中．体外细胞团聚集连续诱导培养21d，然后分别从大体观察、组织学和Ⅱ型胶原蛋白免疫组化的检测对形成组织进行评价。结果实验组细胞团收缩成近似小球形的组织块，外观成乳白色．触之有一定的弹性。苏木素-伊红染色观察可见细胞团外周为由数层扁平状成纤维样细胞组成的纤维软骨膜．下层和中部区域有巢状软骨形成，软骨陷窝明显可见，软骨细胞较均匀分布，包埋在软骨陷窝内。Safranin’O染色显示，形成的软骨组织区域有大量被染成桔红色蛋白多糖类基质分泌，Ⅱ型胶原免疫组化染色检测显示细胞团中央出现较明显的阳性染色区域，可见棕黄色的颗粒分布于胞浆内。而对照组形成的组织块略小，苏木素一伊红染色观察见无软骨样组织形成，主要为较致密无结构特征的纤维样组织．Safranin’O染色也无被染成桔红色蛋白多糖类基质分泌，Ⅱ型胶原免疫组化染色检测显示也无明显的阳性染色区。结论应用重组hTGF—β1腺病毒转染的BMSCs进行细胞团聚集诱导培养，可诱导BMSCs向软骨细胞表型分化而形成软骨，为hTGF—β1基因转染的BMSCs在软骨组织工程应用中奠定了基础。

关键词：骨髓间充质干细胞基因转染腺病毒转化生长因子β1

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组织工程尿道粘膜的体外构建

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中华男科学杂志 2008年第12期14卷 1072-1076页

作者：卢慕峻王忠周广东俞斌刘伟曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院泌尿外科上海200011 上海交通大学医学院附属第九人民医院组织工程重点实验室上海200011

目的:利用组织工程方法在体外构建形成尿道粘膜结构。方法:酶消化法获得猪膀胱尿路上皮细胞(UC),以免疫荧光和RT-PCR方法进行UC鉴定。制备膀胱脱细胞基质移植物(BAMG)作为支架材料,以苏木精-伊红染色、Masson染色、免疫组化和扫描电镜... 详细信息

目的:利用组织工程方法在体外构建形成尿道粘膜结构。方法:酶消化法获得猪膀胱尿路上皮细胞(UC),以免疫荧光和RT-PCR方法进行UC鉴定。制备膀胱脱细胞基质移植物(BAMG)作为支架材料,以苏木精-伊红染色、Masson染色、免疫组化和扫描电镜进行评价。经过体外培养和扩增后,将P3代UC接种在BAMG上。结果:BAMG支架上的UC经过体外培养1周后即可形成沿基膜排列的复层上皮结构。扫描电镜显示细胞-材料复合良好,免疫组化检测支架上的UC广谱角蛋白表达阳性。结论:运用组织工程方法能够在体外快速进行尿道粘膜上皮结构的初步构建,为进一步临床修复诸如尿道下裂、尿道狭窄等尿道缺损奠定技术基础。

关键词：尿路上皮细胞组织工程尿道粘膜膀胱猪

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应用CAD与快速成型技术制作个性化耳廓再造支架

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中华整形外科杂志 2008年第3期24卷 233-234页

作者：张路詹明坤周广东韦敏刘伟曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院整形外科上海市组织工程重点实验室200011

我们拟将CAD、快速成型技术与组织工程支架材料制备技术相结合，建立制作个性化精确耳廓形态组织工程支架材料的技术平台，为利用组织工程技术构建特定形状的软骨组织奠定技术基础。

关键词：组织工程支架材料快速成型技术个性化 CAD 耳廓再造制作组织工程技术制备技术

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