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第六届全国组织工程与再生医学大会

作者：金羽青杨晓楠毕会吴巍程佳刘璋寅沈尊理祁佐良曹谊林上海交通大学医学院附属第一人民医院整形美容外科上海中国上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海中国天津市人民医院肾内科天津中国上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海中国中国国家组织工程中心上海组织工程重点实验室上海中国

相比于其他生物材料或人工材料,骨骼肌作为一种自体组织具有良好的生物相容性以及能够促进神经再生的结构和成分,但是其合理有效的应用仍有待进一步探讨.本研究旨在探讨能否使用带骨骼肌纤维的肌外膜薄片卷曲制备成中空的神经导管,并有... 详细信息

相比于其他生物材料或人工材料,骨骼肌作为一种自体组织具有良好的生物相容性以及能够促进神经再生的结构和成分,但是其合理有效的应用仍有待进一步探讨.本研究旨在探讨能否使用带骨骼肌纤维的肌外膜薄片卷曲制备成中空的神经导管,并有效修复周围神经缺损.为此,尝试应用显微外科技术将CAG-EGFP转基因小鼠的腹外斜肌制备成具有管腔结构的神经导管(即AMT),桥接修复野生型小鼠5mm坐骨神经缺损.手术后8周和12周,分别对再生的神经组组织进行系统的组织学及功能学方面的评测.结果显示，AMT能够有效地修复小鼠坐骨神经缺损，且在各方面均明显优于人工材料导管组的修复效果，但是在某些指标上仍逊色于自体神经移植。此外，实验还发现来源于AMT的部分细胞成分迁移进入再生神经区域并参与再生神经结构的重建。本研究证实了自体肌源性组织制备的中空导管可以作为理想的神经导管用于周围神经缺损的修复，并且移植物中的细胞成分参与了神经再生及其结构重塑，为临床急诊一期修复神经缺损提供了一个可选择的方法。

关键词：坐骨神经缺损腹外斜肌神经导管修复效果

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应用带内核支架构建组织工程耳廓形态软骨

应用带内核支架构建组织工程耳廓形态软骨

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第六届全国组织工程与再生医学大会

作者：殷宗琦刘豫周广东曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海市制造局路639号 200011

由于缺乏合适的支架材料,构建临床应用型组织工程化人耳廓形态软骨,仍然是一个巨大的挑战.本课题组前期研究证实,聚羟基乙酸(PGA)与软骨细胞复合构建成熟软骨组织效果稳定,并且具有良好的生物相容性和生物可降解性,经聚乳酸(PLA)包埋后... 详细信息

由于缺乏合适的支架材料,构建临床应用型组织工程化人耳廓形态软骨,仍然是一个巨大的挑战.本课题组前期研究证实,聚羟基乙酸(PGA)与软骨细胞复合构建成熟软骨组织效果稳定,并且具有良好的生物相容性和生物可降解性,经聚乳酸(PLA)包埋后可提高PGA支架的强度.但PLA含量过高会降低细胞粘附率,同时酸性降解产物增多,植入动物体内无菌性免疫反应严重.为平衡支架材料对细胞粘附率和强度的要求,本课题主要探讨构建人耳廓形态带内核组织工程化软骨的可行性.实验组以人耳廓形态的PCL-PGA(10％PLA包埋)复合材料为支架，取小乳猪耳软骨分离培养软骨细胞，将体外培养的软骨细胞，按10×107/ml的细胞浓度均匀接种于支架，即刻种植于裸鼠皮下。对照组以人耳廓形态的PGA(10%PLA包埋)为支架，同时以相同浓度的软骨细胞均匀接种于支架，阳性对照组接种后用耳廓形态的高分子聚合物作为内支撑固定，阴性对照组不作处理，分别种植于裸鼠皮下12周后取材。行大体观察、激光轮廓扫描、组织学、组织化学、免疫组化及糖氨聚糖(GAG)定量等检测。实验组所构建的产物有足够的强度对抗植入皮下所带来的张力从而维持原先复杂精确的形状。

关键词：组织工程耳廓形态软骨支架材料性能评价

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诱导多能干细胞体内外分化残留特性的初步研究

诱导多能干细胞体内外分化残留特性的初步研究

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第六届全国组织工程与再生医学大会

作者：付炜王书军张文杰周广东刘伟曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海市制造局路639号200011 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心心胸外科儿科转化医学研究所上海市东方路1678号上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海市制造局路639号200011

目的:探讨诱导多能干细胞体内外分化残留特性,评估其作为组织工程种子细胞的致瘤性风险. 方法:小鼠Oct-4-GFP诱导多能干细胞(iPSCs)体外类胚体分化20天或者裸鼠皮下注射6-8周形成畸胎瘤后消化打散,重新给予诱导多能干细胞常规培养液... 详细信息

目的:探讨诱导多能干细胞体内外分化残留特性,评估其作为组织工程种子细胞的致瘤性风险. 方法:小鼠Oct-4-GFP诱导多能干细胞(iPSCs)体外类胚体分化20天或者裸鼠皮下注射6-8周形成畸胎瘤后消化打散,重新给予诱导多能干细胞常规培养液培养.观察类胚体或者畸胎瘤中残留未分化细胞形态;流式细胞仪和免疫荧光检测和观察类胚体和畸胎瘤中残留细胞表面标志物及体内外再次分化能力.将残留细胞扩增后注入裸鼠皮下,6周后取材进行大体观和组织学检测. 结果:体外分化20天的类胚体和体内分化6-8周的畸胎瘤中，始终存在小部分的残留未分化的诱导多能干细胞，这些细胞生长形态呈克隆羊，AKP染色呈阳性，表达Oct-4和SSEA-1。这些残留细胞可以再次体内形成类胚体分化和畸胎瘤，并且可以反复残留。结论:应用诱导多能干细胞作为组织工程种子细胞具有致瘤性的风险，需要解决其分化残留问题。

关键词：组织工程诱导多能干细胞体内外分化残留致瘤性风险

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组织工程研究进展

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上海交通大学学报（医学版） 2012年第9期32卷 1241-1250页

作者：曹谊林刘伟张文杰周广东上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室组织工程国家工程中心上海200011

各种原因导致的组织、器官缺损或功能障碍是危害人类健康的主要原因,组织、器官缺损的修复和功能重建是医学领域面临的挑战。组织工程学的建立和发展,改变了传统的"以创伤修复创伤"的组织移植治疗模式。从人体获取少量自体组... 详细信息

各种原因导致的组织、器官缺损或功能障碍是危害人类健康的主要原因,组织、器官缺损的修复和功能重建是医学领域面临的挑战。组织工程学的建立和发展,改变了传统的"以创伤修复创伤"的组织移植治疗模式。从人体获取少量自体组织,提取种子细胞并经过体外扩增后种植到支架材料上,经过体外培养形成工程化组织后再植入体内,修复相关组织缺损并恢复原有功能。这样的组织再生模式可以真正实现无创或微创的组织器官再生和功能重建。围绕种子细胞、生物材料、组织构建等组织工程基本要素,以组织构建为核心,开展了包括骨、软骨、肌腱等多种组织构建和大动物组织缺损修复的研究,取得了一系列重要进展,并成功开展了组织工程骨的小规模临床应用。这些研究成果,证实了组织工程的广阔应用前景,奠定了向临床应用的基础。该成果于2008年荣获国家科技发明二等奖。

关键词：组织工程骨软骨肌腱血管干细胞

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不同代次小鼠脂肪干细胞增殖能力及体外成脂能力的实验研究

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组织工程与重建外科杂志 2013年第4期9卷 190-194页

作者：蒋婷杨泽龙白倩周广东刘伟南充市中心医院烧伤整形美容外科川北医学院第二临床学院南充市中心医院骨科川北医学院第二临床学院四川省南充市637000 上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室

目的观察不同代次小鼠脂肪干细胞(mASCs)增殖能力及体外成脂能力,为组织工程种子细胞的合理选用提供实验依据。方法采用胶原酶消化小鼠腹股沟皮下脂肪组织,贴壁培养,体外传代扩增。实验采用原代(P0)、第2代(P2)和第5代(P5)细胞。观察不... 详细信息

目的观察不同代次小鼠脂肪干细胞(mASCs)增殖能力及体外成脂能力,为组织工程种子细胞的合理选用提供实验依据。方法采用胶原酶消化小鼠腹股沟皮下脂肪组织,贴壁培养,体外传代扩增。实验采用原代(P0)、第2代(P2)和第5代(P5)细胞。观察不同代次mASCs的细胞形态及增殖能力;经高密度接种培养4周及成脂诱导2周,通过油红染色、RT-PCR检测,探讨其诱导成脂分化潜能及自发成脂能力。结果小鼠脂肪干细胞经传代后,外观主要呈长梭形及不规则形,不同代次的mASCs均具有很强的体外增殖能力;P0细胞具有极强的体外自发成脂能力,P2细胞自发成脂能力明显降低,至P5时基本没有体外自发成脂能力;P0、P2、P5细胞具有相似的诱导成脂分化潜能。结论随着培养代次的增加,mASCs自发成脂能力降低而诱导成脂分化潜能基本不变,扩增至第5代时仍维持了较强的增殖能力及良好的干细胞特性。在一定范围内mASCs体外传代扩增能明显减少其脂肪前体细胞的含量,有助于间充质干细胞纯化。

关键词：小鼠脂肪干细胞不同代次成脂分化

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糖尿病裸鼠的皮肤组织改变及其与创面愈合的相关性

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上海交通大学学报（医学版） 2012年第1期32卷 59-63页

作者：黄昕沈向前吴守成曹谊林浙江大学医学院附属第一医院手外科杭州310003 上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

目的研究糖尿病裸鼠的皮肤组织改变及其与皮肤创面愈合的相关性。方法采用150 mg/kg链脲佐菌素(STZ)一次性腹腔注射建立糖尿病裸鼠模型。对正常对照组裸鼠(n=20)和诱导成模后4周的糖尿病裸鼠(n=20)分别切取背部直径为1.8 cm的全层皮肤... 详细信息

目的研究糖尿病裸鼠的皮肤组织改变及其与皮肤创面愈合的相关性。方法采用150 mg/kg链脲佐菌素(STZ)一次性腹腔注射建立糖尿病裸鼠模型。对正常对照组裸鼠(n=20)和诱导成模后4周的糖尿病裸鼠(n=20)分别切取背部直径为1.8 cm的全层皮肤。采用苏木精-伊红(HE)染色,观察裸鼠皮肤的组织学改变并测量真皮层和表皮层厚度。采用苦味酸天狼猩红染色并分析相对胶原含量;应用氧化酶法测量皮肤组织糖含量。于术后第3、5、7、14和21天观察创面的愈合率。结果糖尿病组裸鼠的皮肤真皮层和表皮层厚度较正常对照组明显变薄,真皮层相对胶原含量也明显少于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。糖尿病组裸鼠的血糖浓度和皮肤糖含量均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01);皮肤组织糖含量与血糖浓度呈正相关(r=0.951,P<0.01)。糖尿病组裸鼠在术后第3、5、7、14和21天的创面愈合率显著低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论应用STZ诱导的糖尿病裸鼠模型的皮肤组织改变明显,这些改变可能与局部糖基化终末产物蓄积,导致糖尿病皮肤创面不易愈合有关。

关键词：链脲佐菌素糖尿病裸鼠皮肤创面愈合

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细胞形态对间充质干细胞定向分化作用的影响

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国际生物医学工程杂志 2012年第5期35卷 303-307,F0003页

作者：王文波李洁刘伟上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科 200011 上海市组织工程重点实验室组织工程国家工程中心

【摘要】间充质干细胞（MSCs）来源于中胚层，具有多向分化潜能、免疫原性低、自我更新能力强特点，是再生医学的理想细胞来源。以往研究多使用生长因子诱导MSCs定向分化。随着生物微工程技术的发展，应用纳米技术对材料表面进行修饰从... 详细信息

【摘要】间充质干细胞（MSCs）来源于中胚层，具有多向分化潜能、免疫原性低、自我更新能力强特点，是再生医学的理想细胞来源。以往研究多使用生长因子诱导MSCs定向分化。随着生物微工程技术的发展，应用纳米技术对材料表面进行修饰从而控制细胞形态，能够深入研究不同形态对MSCs定向分化的影响。总结了不同细胞形态对MSCs定向分化的影响以及潜在的机制，如细胞牵张力改变、黏着斑激酶（FAK）的激活、小分子G蛋白的活化等。控制细胞形态，并结合力学刺激、基质的软硬度等相关因素，可优化组织工程支架材料的设计，为再生医学提供理论基础。

关键词：间充质干细胞形态分化机制

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脂肪组织工程的研究现状和未来应用前景展望

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解剖科学进展 2012年第3期18卷 296-299页

作者：夏万尧陈瑾君周广东上海交通大学医学院附属第九人民医院整形外科上海组织工程重点实验室上海200011

软组织缺失是整形外科关注的焦点问题之一,传统软组织重建方法存在供皮区缺损、植入物移动和吸收以及产生异物反应。近年干细胞被认为可能是一种新颖的治疗方法,脂肪干细胞(adipose-derived Stem Cells,ADSCs)是存在于脂肪组织内的一种... 详细信息

软组织缺失是整形外科关注的焦点问题之一,传统软组织重建方法存在供皮区缺损、植入物移动和吸收以及产生异物反应。近年干细胞被认为可能是一种新颖的治疗方法,脂肪干细胞(adipose-derived Stem Cells,ADSCs)是存在于脂肪组织内的一种多能干细胞,具有多向分化潜能,且数量充足、获取方便,它们在临床前试验治疗的研究和临床实验方面已有良好的记录。本文主要从ADSCs获取、ADSCs的分离和扩增、生物材料和ADSCs、生长因子在脂肪组织工程应用以及脂肪组织工程策略等研究进展做一综述,这也是脂肪组织工程研究中不可缺少的重要环节。

关键词：脂肪组织工程策略应用 ADSCs 软组织缺失脂肪干细胞多向分化潜能 Cells 多能干细胞

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重组hTGF-β1基因转染人脂肪干细胞对其向软骨分化的影响

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解剖科学进展 2012年第4期18卷 357-361页

作者：夏万尧陈瑾君孙恒赟刘伟周广东曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院整形外科上海组织工程重点实验室上海200011

目的研究重组hTGF-β1腺病毒(AdhTGF-β1)转染人脂肪干细胞(ADSCs)对其向软骨分化的作用。方法重组AdhTGF-β1转染人ADSCs,对照组转染AdLacZ,腺病毒的量以200pfu/细胞计算,体外细胞团聚集连续诱导培养21d,酶联免疫吸附定量检测(ELISA)hT... 详细信息

目的研究重组hTGF-β1腺病毒(AdhTGF-β1)转染人脂肪干细胞(ADSCs)对其向软骨分化的作用。方法重组AdhTGF-β1转染人ADSCs,对照组转染AdLacZ,腺病毒的量以200pfu/细胞计算,体外细胞团聚集连续诱导培养21d,酶联免疫吸附定量检测(ELISA)hTGF-β1蛋白的表达,然后分别从大体观察、组织学和II型胶原蛋白免疫组化的检测对形成组织进行评价。结果 hTGF-β1蛋白量在14d时达最高峰,随后逐渐降低。连续细胞团聚集诱导培养21d,细胞团收缩成近似小球形的组织块,外观成乳白色。HE染色可见细胞团外周为由数层扁平状成纤维样细胞组成的纤维软骨膜,下部区域有巢状软骨样细胞组成,有些区域可见软骨样细胞包埋在软骨陷窝内。Safranin'O染色显示,形成的软骨组织区域有被染成桔红色蛋白多糖类基质分泌。而对照组苏木素-伊红染色观察见无软骨样组织形成或有向软骨分化现象。Ⅱ型胶原免疫组化染色检测显示实验组细胞团出现较明显的阳性染色区域,可见棕黄色的颗粒分布于胞浆内。对照组Ⅱ型胶原免疫组化染色检测显示无明显的阳性染色区。结论重组hTGF-β1腺病毒转染人ADSCs诱导人ADSCs向软骨细胞表型分化形成软骨样组织,为hTGF-β1基因转染的人ADSCs在软骨组织工程应用中奠定了基础。

关键词：人脂肪干细胞基因转染腺病毒转化生长因子β1

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CD204阴性人脂肪来源细胞体外成软骨潜能的初步研究

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组织工程与重建外科杂志 2012年第1期8卷 1-5页

作者：丁金萍孙恒赟陈谨君张文杰刘伟曹谊林周广东 200011 上海市上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室

目的比较CD204+和CD204-两种人脂肪来源细胞的干细胞特性和体外诱导成软骨的能力.方法分离培养人脂肪来源细胞并进行流式细胞分选,分别获得CD204+和CD204-两种细胞.将这两种细胞培养扩增至第2代,观察其形态学特点；成脂、成骨定向诱... 详细信息

目的比较CD204+和CD204-两种人脂肪来源细胞的干细胞特性和体外诱导成软骨的能力.方法分离培养人脂肪来源细胞并进行流式细胞分选,分别获得CD204+和CD204-两种细胞.将这两种细胞培养扩增至第2代,观察其形态学特点；成脂、成骨定向诱导分化,油红O染色、茜素红染色定性；同时将两种细胞进行pellet成软骨诱导分化,比较体外诱导成软骨的能力,并以HE、Safranin O和Ⅱ型胶原免疫组化染色等进行鉴定.结果经流式细胞分选,脂肪来源细胞中CD204表达阳性率约为10％.分选后的CD204+和CD204-细胞均呈成纤维细胞样贴壁生长,但CD204-细胞具有更强的增殖能力.成脂诱导10d后,两组细胞油红O染色均可见胞浆内有大量红染脂滴,但 CD204+细胞具有更强的成脂潜能.成骨诱导2周后,两组细胞茜素红染色均可见钙结节红染,而CD204-细胞具有更强的成骨潜能.同时,细胞pellet成软骨诱导4周后,大体观可见CD204-细胞组pellet形成白色透明样软骨成分,而CD204+细胞组pellet外观微黄.HE和Ⅱ型胶原免疫组化染色均显示CD204-组pellet可见成熟软骨陷窝形成,SafraninO染色显示CD204-组软骨特异性细胞外基质沉积；而CD204+细胞组pellet则呈纤维化改变.结论脂肪组织来源的CD204-细胞具有干细胞的生物学特点,且有良好的成软骨潜能,可以成为软骨组织工程良好的种子细胞来源.

关键词： CD204(巨噬细胞清道夫受体) 脂肪组织来源干细胞软骨潜能细胞分选

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