检索结果-内蒙古大学图书馆

中华男科学杂志 2008年第12期14卷 1072-1076页

作者：卢慕峻王忠周广东俞斌刘伟曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院泌尿外科上海200011 上海交通大学医学院附属第九人民医院组织工程重点实验室上海200011

目的:利用组织工程方法在体外构建形成尿道粘膜结构。方法:酶消化法获得猪膀胱尿路上皮细胞(UC),以免疫荧光和RT-PCR方法进行UC鉴定。制备膀胱脱细胞基质移植物(BAMG)作为支架材料,以苏木精-伊红染色、Masson染色、免疫组化和扫描电镜... 详细信息

目的:利用组织工程方法在体外构建形成尿道粘膜结构。方法:酶消化法获得猪膀胱尿路上皮细胞(UC),以免疫荧光和RT-PCR方法进行UC鉴定。制备膀胱脱细胞基质移植物(BAMG)作为支架材料,以苏木精-伊红染色、Masson染色、免疫组化和扫描电镜进行评价。经过体外培养和扩增后,将P3代UC接种在BAMG上。结果:BAMG支架上的UC经过体外培养1周后即可形成沿基膜排列的复层上皮结构。扫描电镜显示细胞-材料复合良好,免疫组化检测支架上的UC广谱角蛋白表达阳性。结论:运用组织工程方法能够在体外快速进行尿道粘膜上皮结构的初步构建,为进一步临床修复诸如尿道下裂、尿道狭窄等尿道缺损奠定技术基础。

关键词：尿路上皮细胞组织工程尿道粘膜膀胱猪

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皮肤成纤维细胞构建组织工程化猪角膜基质样组织

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上海交通大学学报（医学版） 2007年第2期27卷 156-160页

作者：张艳青张文杰胡晓洁周广东崔磊刘伟曹谊林上海交通大学医学院第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室

目的探讨以皮肤成纤维细胞为种子细胞,在猪角膜微环境中构建组织工程化角膜基质组织的可行性。方法分离获取胎猪皮肤成纤维细胞经体外培养、扩增。通过转染绿色荧光蛋白(GFP)基因标记细胞,示踪细胞的转归。选取第3代的细胞接种于可吸收... 详细信息

目的探讨以皮肤成纤维细胞为种子细胞,在猪角膜微环境中构建组织工程化角膜基质组织的可行性。方法分离获取胎猪皮肤成纤维细胞经体外培养、扩增。通过转染绿色荧光蛋白(GFP)基因标记细胞,示踪细胞的转归。选取第3代的细胞接种于可吸收生物材料聚羟基乙酸(PGA),形成细胞-生物材料复合物,体外培养1周后,移植于猪的角膜基质层内,于第8周取材进行大体、组织学检查及超微结构观察。以角膜基质细胞为种子细胞构建的组织工程化角膜基质组织作为对照。结果术后8周,实验组角膜逐渐恢复透明,与对照组角膜无明显差别。组织学检查显示形成新生的角膜基质样组织,呈板层状,排列较规则,与对照组角膜组织相似。超微结构观察及胶原纤维直径检测显示,实验组与对照组角膜组织差异无统计学意义。荧光显微镜观察到GFP阳性细胞存在。结论皮肤成纤维细胞可能替代角膜基质细胞,在猪角膜内构建角膜基质样组织。

关键词：组织工程角膜基质皮肤成纤维细胞

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自体骨髓间充质干细胞复合β-磷酸三钙修复犬下颌骨节段缺损

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中华创伤杂志 2006年第9期22卷 663-668页

作者：袁捷祝联刘广鹏许锋翁雨来崔磊刘伟曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室 200011

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)复合β-磷酸三钙(β-TCP)构建的组织工程骨修复犬下颌骨节段缺损的可行性方法体外成骨诱导犬BMSCs,将第2代细胞复合β- TCP后修复6只犬右侧3cm的下颌骨节段缺损；6只犬以单纯β-TCP植入作为对照,术后4,1... 详细信息

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)复合β-磷酸三钙(β-TCP)构建的组织工程骨修复犬下颌骨节段缺损的可行性方法体外成骨诱导犬BMSCs,将第2代细胞复合β- TCP后修复6只犬右侧3cm的下颌骨节段缺损；6只犬以单纯β-TCP植入作为对照,术后4,12,26,32周分别通过影像学、大体形态、组织学和生物力学检测判断骨缺损的修复效果。结果诱导后第2代细胞已具成骨活性。4～26周X线片示实验组新骨形成增加,密度增高,对照组则材料吸收形成明显阴影区,只有少量骨痂。32周实验组骨愈合良好,有较多板层骨；对照组为纤维性愈合骨不连,骨密度检测实验组显著高于对照组。实验组力学强度与正常下颌骨差异无统计学意义。结论自体成骨诱导BMSCs复合β-TCP形成的织工程骨可良好修复犬下颌骨节段缺损。

关键词：下颌损伤骨髓基质干细胞 β-磷酸三钙组织工程

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组织工程的突破与挑战——组织工程国家工程中心科研进展

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中国科学：生命科学 2014年第2期44卷 132-138页

作者：张文杰曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院整形外科上海市组织工程重点实验室组织工程国家工程中心上海200011

组织工程技术已被普遍认为是解决组织、器官缺损修复与功能重建的有效手段,它的飞速发展依赖于细胞学、材料学、工程学、临床医学等多学科的交叉渗透.作为组织工程的三大核心,种子细胞、生物材料、组织构建各方面的突破,为组织工程技术... 详细信息

组织工程技术已被普遍认为是解决组织、器官缺损修复与功能重建的有效手段,它的飞速发展依赖于细胞学、材料学、工程学、临床医学等多学科的交叉渗透.作为组织工程的三大核心,种子细胞、生物材料、组织构建各方面的突破,为组织工程技术的发展奠定了基础.组织工程国家工程中心近年来围绕上述核心开展了系列研究,通过研究胚胎干细胞、成体干细胞、同种异体干细胞、以及发育同源细胞替代的探索,为解决种子细胞来源问题提供了多种选择;生物支架材料的开发,为细胞增殖分化、组织再生提供理想的支持与空间,而生物反应器的开发与应用,进一步提高了组织构建技术,为促进组织的体外形成、重塑和功能成熟创造了条件.在此基础上,开展了大动物体内组织构建和缺损修复的研究,形成了以应用为目标的研究特色,并成功将部分技术应用于临床治疗.本文将对组织工程国家工程中心已有进展做简单介绍并对面临的挑战进行分析.

关键词：再生医学组织工程干细胞生物材料

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利用增强型绿色荧光蛋白体外表达探讨逆转录病毒转染软骨细胞的最佳条件(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第19期11卷 3850-3853页

作者：胡洪亮陈婷婷曹德君樊绮诗胡翊群上海交通大学医学院附属瑞金医院检验系上海市200025 上海交通大学医学院附属第九人民医院组织工程重点实验室上海市200011

背景:增强型绿色荧光蛋白是目前最佳标记分子,具有荧光特异性高、易于检测等独特的优势,利用基因工程技术构建能稳定表达增强型绿色荧光蛋白的重组逆转录病毒载体EGFP-pLNCX2,转染同种异体软骨细胞值得研究。目的:构建能稳定表达增强型... 详细信息

背景:增强型绿色荧光蛋白是目前最佳标记分子,具有荧光特异性高、易于检测等独特的优势,利用基因工程技术构建能稳定表达增强型绿色荧光蛋白的重组逆转录病毒载体EGFP-pLNCX2,转染同种异体软骨细胞值得研究。目的:构建能稳定表达增强型绿色荧光蛋白的重组逆转录病毒载体EGFP-pLNCX2,探讨转染同种异体软骨细胞的最佳条件。设计:随机对照观察。单位:上海交通大学。材料:选用30只出生1周的新西兰白兔,雌雄不限,均购自中国科学院实验动物研究中心。双嗜性逆转录病毒包装细胞系PT67购自Clontech公司;小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞购自ATCC公司;DH5a大肠杆菌由本实验室保存;逆转录病毒载体pLNCX2购自Clontech公司;带有增强型绿色荧光蛋白的pEGFP-C1质粒由中科院细胞所丛笑倩教授惠赠。方法:实验于2005-08在上海交通大学完成。分离提取并培养新西兰白兔软骨细胞,利用基因工程技术构建能稳定表达增强型绿色荧光蛋白的重组逆转录病毒载体EGFP-pLNCX2,转染培养后的新西兰白兔软骨细胞,荧光显微镜观察转染的效果。于直径10cm的平皿接种6×105个软骨细胞,分别立即转染及接种12,24,48h后转染逆转录病毒-EGFP,1周后作流式细胞仪测定EGFP表达效率,观察逆转录病毒转染原代软骨细胞最佳时机。软骨酶消化后的软骨细胞接种24h后转染逆转录病毒,分别于第2,3,4,5,6天加250mg/LG418进行筛选。PBS洗涤后作流式细胞仪检测其效率,观察G418筛选的最佳时机。主要观察指标:①EGFP-pLNCX2转染效果。②逆转录病毒转染原代软骨细胞及G418筛选最佳时机。结果:①重组逆转录病毒载体EGFP-pLNCX2转染原代兔软骨细胞,经G418初步筛选而获得的高表达格局,可见软骨细胞经过筛选和表达绿色荧光蛋白后,保持正常的形态学,细胞伸出伪足贴壁,基质分泌旺盛。②逆转录病毒转染原代软骨细胞的最佳时机为细胞接种培养后24h,第7天用流式细胞仪测定转染效率为19.14%,G418筛选的最佳时机为培养后第5天,第7天测定表达效率提升为55.75%。结论:重组逆转录病毒载体EGFP-pLNCX2能有效地转染软骨细胞,逆转录病毒转染原代软骨细胞的最佳时机为细胞接种培养后24h,G418筛选的最佳时机为培养后第5天。

关键词：增强型绿色荧光蛋白逆转录病毒载体转染软骨细胞

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利用皮肤成纤维细胞重建兔角膜基质组织的初步研究

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中华眼科杂志 2009年第9期45卷 827-833页

作者：张艳青张文杰刘伟胡晓洁周广东崔磊曹谊林复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科上海200031 上海交通大学医学院附属第九人民医院整形外科上海市组织工程重点实验室上海组织工程研究与开发中心

目的探讨利用皮肤成纤维细胞替代角膜基质细胞，构建兔角膜基质组织的可行性。方法实验研究。通过酶消化的方法分离培养同种异体新生兔皮肤成纤维细胞，用腺病毒转染绿色荧光蛋白（GFP）基因标记细胞，接种细胞于聚羟基乙酸（PGA）圆盘... 详细信息

目的探讨利用皮肤成纤维细胞替代角膜基质细胞，构建兔角膜基质组织的可行性。方法实验研究。通过酶消化的方法分离培养同种异体新生兔皮肤成纤维细胞，用腺病毒转染绿色荧光蛋白（GFP）基因标记细胞，接种细胞于聚羟基乙酸（PGA）圆盘支架，形成细胞．PGA复合物，移植于成年兔角膜基质层。动态观察构建组织在角膜内的变化情况，并于第3、6、8周取材进行大体、组织学、GFP表达及角膜基质特异蛋白Keratocan的检测。透射电镜观察胶原纤维排列并测量其直径。应用t检验统计分析数据。结果术后8周，实验侧角膜逐渐恢复透明，形成的新生角膜基质样组织，排列较规则。荧光显微镜检测显示GFP阳性细胞存在，形成基质板层样组织，同时该部分细胞表达Keratocan。胶原纤维排列规则，实验组胶原纤维直径为（33．08±2．47）nm，经统计学分析，与正常角膜差异无统计学意义（t=1．80，P=0．0771）。结论皮肤成纤维细胞可以替代角膜基质细胞，在兔角膜内构建组织工程角膜基质组织。

关键词：成纤维细胞组织工程角膜基质皮肤

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应用CAD与快速成型技术制作个性化耳廓再造支架

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中华整形外科杂志 2008年第3期24卷 233-234页

作者：张路詹明坤周广东韦敏刘伟曹谊林上海交通大学医学院附属第九人民医院整形外科上海市组织工程重点实验室200011

我们拟将CAD、快速成型技术与组织工程支架材料制备技术相结合，建立制作个性化精确耳廓形态组织工程支架材料的技术平台，为利用组织工程技术构建特定形状的软骨组织奠定技术基础。

关键词：组织工程支架材料快速成型技术个性化 CAD 耳廓再造制作组织工程技术制备技术

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骨髓基质干细胞体外软骨定向诱导方法的研究进展

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上海交通大学学报（医学版） 2007年第2期27卷 234-237页

作者：刘霞周广东曹谊林上海交通大学医学院第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海200011

种子细胞来源一直是限制软骨组织工程发展的瓶颈,骨髓基质干细胞(BMSCs)具有取材创伤小、增殖能力强及具多向分化潜能等优点,已逐渐成为软骨构建种子细胞的研究热点。其关键问题是如何获得大量纯化的BMSCs并在体外定向诱导为软骨表型的... 详细信息

种子细胞来源一直是限制软骨组织工程发展的瓶颈,骨髓基质干细胞(BMSCs)具有取材创伤小、增殖能力强及具多向分化潜能等优点,已逐渐成为软骨构建种子细胞的研究热点。其关键问题是如何获得大量纯化的BMSCs并在体外定向诱导为软骨表型的细胞。该文就BMSCs体外软骨定向诱导方法的研究进展进行综述,以期为应用BMSCs构建软骨组织提供参考。

关键词：骨髓基质干细胞软骨分化组织工程

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SNL细胞作为饲养层细胞培养人胚胎干细胞

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上海交通大学学报（医学版） 2007年第7期27卷 802-804,828页

作者：谢峰张文杰王鸿陆峻泓丛笑倩曹谊林上海交通大学医学院第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海200011

目的为便于人胚胎干细胞(ES细胞)的培养和研究,寻找一种建系细胞作为人ES细胞的饲养层细胞。方法以小鼠成纤维细胞系SNL细胞作为饲养层细胞培养人ES细胞株hES1。传代17代后,检测hES细胞表面特异性标志,包括碱性磷酸酶(AKP)、Oct-4、阶... 详细信息

目的为便于人胚胎干细胞(ES细胞)的培养和研究,寻找一种建系细胞作为人ES细胞的饲养层细胞。方法以小鼠成纤维细胞系SNL细胞作为饲养层细胞培养人ES细胞株hES1。传代17代后,检测hES细胞表面特异性标志,包括碱性磷酸酶(AKP)、Oct-4、阶段特异性胚胎抗原(SSEA)-3和SSEA-4的表达;同时观察细胞的多向分化潜能。结果hES1细胞在SNL细胞饲养层上能持续生长。经多次传代后持续表达人ES细胞表面特异性标志,其注射于重症联合免疫缺陷小鼠皮下仍能形成畸胎瘤组织。结论SNL细胞能够作为饲养层细胞用于人ES细胞的培养,且操作更方便;该细胞已转染了耐受新霉素的基因,为将来对人ES细胞基因操作时进行药物筛选提供了可能。

关键词：人胚胎干细胞饲养层细胞 SNL细胞

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VSV-G蛋白修饰的GFP逆转录病毒的构建及表达

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上海交通大学学报（医学版） 2007年第7期27卷 798-801页

作者：陈瑾君刘伟刘德莉陆峻泓崔磊曹谊林上海交通大学医学院第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海200011

目的通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)共转染,使含绿色荧光蛋白(GFP)基因的逆转录病毒经超速离心得以浓缩,进一步提高GFP逆转录病毒的细胞感染效率。方法应用GFP-RV质粒转染PT67细胞,并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的... 详细信息

目的通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)共转染,使含绿色荧光蛋白(GFP)基因的逆转录病毒经超速离心得以浓缩,进一步提高GFP逆转录病毒的细胞感染效率。方法应用GFP-RV质粒转染PT67细胞,并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的病毒上清液再转染GP2-293细胞,在G418筛选的同时,瞬时转染VSV-G基因。收集该GP2-293细胞产生的重组假病毒液,并通过低温超速离心制备含GFP基因假病毒的浓缩液,测定浓缩前后含GFP基因假病毒液滴度,并分别感染NIH 3T3细胞、软骨细胞、成纤维细胞、骨髓基质干细胞等,荧光显微镜下观察GFP在上述细胞内的表达情况,流式细胞仪检测GFP基因的转染阳性表达率。结果GFP-GP2-293细胞转染VSV-G基因后产生的重组假病毒液滴度为7.36×104CFU/mL,浓缩40倍后其滴度可提高至1.82×106CFU/mL。用浓缩前后含GFP基因假病毒液分别转染NIH 3T3细胞,GFP阳性表达率可由44.21%升高至79.80%;转染兔软骨细胞和成纤维细胞、猪骨髓基质干细胞和脂肪干细胞后,均可见GFP阳性表达明显增强。结论逆转录病毒与VSV-G共转染GP2-293包装细胞可以制备出高滴度的假病毒液。浓缩病毒液的高转染率为其在组织工程种子细胞标记方面的广泛应用奠定了基础。

关键词：疱疹性口腔炎病毒糖蛋白绿色荧光蛋白转染假病毒种子细胞

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