检索结果-内蒙古大学图书馆

肾脏病与透析肾移植杂志 2000年第1期9卷 34-38页

作者：何永成廖履坦丁小强张月娥徐元钊徐元鼎上海医科大学附属中山医院肾内科上海200032 上海医科大学基础医学院病理教研室上海医科大学基础医学院形态研究中心

目的 :探讨高胆固醇血症对健康大鼠肾脏形态学的影响。　方法 :用 5 %高胆固醇饲料喂养健康雄性Wistar大鼠 ,分别于实验第 30、6 0和 90天进行肾脏的形态学观察。　结果 :自实验第 30天起 ,高胆固醇组表现为进行性肾小球系膜细胞增生 ... 详细信息

目的 :探讨高胆固醇血症对健康大鼠肾脏形态学的影响。　方法 :用 5 %高胆固醇饲料喂养健康雄性Wistar大鼠 ,分别于实验第 30、6 0和 90天进行肾脏的形态学观察。　结果 :自实验第 30天起 ,高胆固醇组表现为进行性肾小球系膜细胞增生 ,系膜基质增多 ,炎性细胞浸润 ,肾小球毛细血管塌陷 ,肾小球上皮细胞足突灶性融合 ,肾小管上皮细胞水样变性 ,肾小球体积进行性增大。电镜未发现肾小球内电子致密物沉积 ,直接免疫荧光显示肾组织IgG阴性。相关分析显示 ,血浆总胆固醇 (TCh)及低密度脂蛋白 (LDL)浓度与肾小球细胞数、肾小球PAS阳性物质积分光密度值及肾小球体积呈显著正相关。　结论 :饮食诱导的高胆固醇血症可导致健康大鼠肾脏非免疫复合物介导的病理损害 ,病变的程度与血浆TCh及LDL浓度呈正相关。

关键词：高胆固醇血症肾小球损害脂质肾毒性

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肝组织羟脯氨酸含量测定方法的优化

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上海医科大学学报 2000年第4期27卷 295-297页

作者：李文才张锦生李华张秀荣张月娥上海医科大学基础医学院病理学教研室上海200032

目前，评价和筛选确切有效的抗肝纤维化药物是肝脏病学者面临的一个重要的任务，药物疗效主要根据反映肝纤维化程度的指标来判定。肝纤维化量化的手段主要有定量组织学方法(组织学记分法及图像分析法等)和生化方法(3H脯氨酸掺入法及羟... 详细信息

目前，评价和筛选确切有效的抗肝纤维化药物是肝脏病学者面临的一个重要的任务，药物疗效主要根据反映肝纤维化程度的指标来判定。肝纤维化量化的手段主要有定量组织学方法(组织学记分法及图像分析法等)和生化方法(3H脯氨酸掺入法及羟脯氨酸含量测定方法)。前者或受主观影响较大，或需要昂贵的图像分析仪，后者中的同位素掺入法需要在特定的同位素实验室进行；而羟脯氨酸生化测定法可在一般实验室进行。羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)是一种非必需氨基酸，除弹性蛋白含少量羟脯氨酸(约1%)外，几乎所有的羟脯氨酸都存在于胶原中。因此，羟脯氨酸含量的测定已成为衡量机体胶原组织代谢的重要指标。胶原是肝纤维化时细胞外基质的主要成分，故肝组织羟脯氨酸含量能客观地反映肝纤维化程度［1,2］。近年来，已对尿羟脯氨酸含量测定的各种参数和条件进行了优化［3,4］，但对肝组织羟脯氨酸含量测定的方法尚未有系统的研究，尽管已有人使用该方法来评价肝纤维化程度［5,6］。另外，经福尔马林溶液固定的肝组织是否能使用同样的方法测定羟脯氨酸含量，以便进行回顾性研究尚不清楚。为此，我们在Gordeladze等［4］建立的方法基础上，寻找肝组织最适宜的水解条件，比较几种肝组织处理方法对羟脯氨酸含量测定的影响等，以建立一种可靠、稳定的肝组织羟脯氨酸含量测定方法。

关键词：肝纤维化肝组织羟脯氨酸含量

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利用新型表达载体pcDNA3.1/Myc-His表达sIL-4受体

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上海医科大学学报 2000年第4期27卷 298-299,301页

作者：陈琦陈广平郭慕依张秀荣朱虹光上海医科大学基础医学院病理学教研室上海200032

近二十年来，分子生物学技术飞速发展，并在各个领域得到了广泛的运用。通过构建目的基因表达质粒转化细菌或转染细胞，合成重组蛋白质技术日臻成熟［1］。在抗体制备方面，传统的方法是通过分离、纯化抗原，免疫动物制备相应抗体。而... 详细信息

近二十年来，分子生物学技术飞速发展，并在各个领域得到了广泛的运用。通过构建目的基因表达质粒转化细菌或转染细胞，合成重组蛋白质技术日臻成熟［1］。在抗体制备方面，传统的方法是通过分离、纯化抗原，免疫动物制备相应抗体。而要得到一定量纯度较高的抗原往往困难较大且过程烦琐，特别是一些表达量较低的抗原，尤为困难。随着分子生物学技术的发展，利用基因工程合成蛋白质成为可能，为制备高质量抗原开辟了新的领域。现介绍利用一种新的在哺乳动物细胞中高效表达的载体pc DNA 3.1/Myc?His，合成重组大鼠可溶性IL?4受体(sIL?4R)蛋白。材料和方法 RT?PCR扩增sIL?4R基因片段雄性5周龄Wistar大鼠1只，取脾脏，液氮内速冻，利用Isogen RNA抽提试剂(日本基因公司，日本)，参照说明书推荐方法，一步法提取总RNA。电泳鉴定RNA完整未降解，测OD 260/280值定量。取2 μg总DNA，以MULV逆转录酶(Toyobo公司，日本)常规方法逆转录反应合成cDNA［2］。

关键词：分子生物学基因载体 pc DNA 3.1/Myc-His

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用套式RT-PCR法检测肝细胞癌中丙型肝炎病毒基因型

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上海医科大学学报 2000年第1期27卷 16-19页

作者：苏英豪朱世能陆世伦张王海上海医科大学基础医学院病理学教研室上海200032

目的　检测人肝细胞癌（ＨＣＣ）组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型。方法　用ＲＴＰＣＲ法常规检测ＨＣＣ组织和部分患者血清ＨＣＶ，再以巢式ＲＴＰＣＲ法对ＨＣＶ阳性标本中５种ＨＣＶ基因型进行鉴别。对多数标本中ＨＢｓＡｇ... 详细信息

目的　检测人肝细胞癌（ＨＣＣ）组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型。方法　用ＲＴＰＣＲ法常规检测ＨＣＣ组织和部分患者血清ＨＣＶ，再以巢式ＲＴＰＣＲ法对ＨＣＶ阳性标本中５种ＨＣＶ基因型进行鉴别。对多数标本中ＨＢｓＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ也进行了免疫组化和原位杂交检测。结果　ＨＣＣ组织中ＨＣＶ阳性率为５０％（３９／７８），与ＨＢＶ者（６４．４％）差异无显著性意义（Ｐ＞０．０５），两者重叠感染率３４％（２０／５９）。在１０例血清ＨＣＶ阴性ＨＣＣ患者中，３例ＨＣＣ冰冻组织检出ＨＣＶＲＮＡ。在ＨＣＣ组织中共检出３种ＨＣＶ基因型，其中２ａ、１ｂ、３ａ和混合型分别为１７例（４３．６％）、９例（２３．１％）、４例（１０．３％）和２例（５．１％），各基因型间差异有极显著性意义（Ｐ＜０．０１），但２ａ型与１ｂ型间差异无显著性（Ｐ＞０．０５），２ａ型与ＨＢＶ的重叠感染明显较其他ＨＣＶ基因型者常见（Ｐ＜０．０５）。结论　２ａ型ＨＣＶ是ＨＣＣ组织中最常见的基因型并易与ＨＢＶ重叠感染率，ＨＣＣ患者血清ＨＣＶ检测不一定能准确反映ＨＣＣ组织中的ＨＣＶ感染率，其所示基因型也有所不同。

关键词：肝细胞癌丙型肝炎病毒基因型乙型肝炎病毒逆转录聚合酶链反应

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慢性移植物抗宿主反应诱导SLE样小鼠模型

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上海医科大学学报 2000年第4期27卷 264-266页

作者：郭玲吴厚生胡新美上海医科大学基础医学院免疫学教研室上海200032

目的　运用慢性移植物抗宿主反应 (GVHR)诱导系统性红斑狼疮 (SLE)样小鼠模型 ,为进一步探索SLE发病机制奠定基础。方法　将亲代BALB/C小鼠淋巴细胞经静脉途径输入 (BALB/C×C57BL/ 6 )F1代小鼠体内 ,用ELISA测定IgG类抗dsDNA抗体... 详细信息

目的　运用慢性移植物抗宿主反应 (GVHR)诱导系统性红斑狼疮 (SLE)样小鼠模型 ,为进一步探索SLE发病机制奠定基础。方法　将亲代BALB/C小鼠淋巴细胞经静脉途径输入 (BALB/C×C57BL/ 6 )F1代小鼠体内 ,用ELISA测定IgG类抗dsDNA抗体和抗组蛋白抗体 ,用免疫荧光法检测抗核抗体 (ANA)核型和免疫复合物沉积 ,用免疫印迹法测定抗可浸出核抗原 (ENA)抗体。结果　亲代淋巴细胞所致的慢性移植物抗宿主反应可诱导F1代小鼠产生高滴度的抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体等多种ANA ,免疫小鼠的肾脏有显著的免疫复合物沉着。结论　运用慢性GVHR诱导的SLE样小鼠模型 ,小鼠发病迅速 ,抗核抗体的产生与人SLE相似。

关键词：系统性红斑狼疮慢性移植物抗宿主反应抗核抗体

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胃镜病理标本中Ⅴ型胶原的定量检测

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上海医科大学学报 2000年第3期27卷 214-214,225,F003页

作者：施建英上海医科大学基础医学院病理学教研室上海200032

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应用图像细胞仪测定细胞DNA倍体的标定方法

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上海医科大学学报 2000年第6期27卷 475-476页

作者：金立军上海医科大学基础医学院人体解剖学教研室上海200032

国内外大量基础和临床研究资料的研究资料表明肿瘤细胞DNA的倍体是恶性肿瘤细胞特征性的标志之一。测量和分析DNA含量及倍体对恶性肿瘤的诊断、恶性程度、疗效估计、预测愈后都具有重要的价值，在国内外的肿瘤病理诊断中得到了广泛的应... 详细信息

国内外大量基础和临床研究资料的研究资料表明肿瘤细胞DNA的倍体是恶性肿瘤细胞特征性的标志之一。测量和分析DNA含量及倍体对恶性肿瘤的诊断、恶性程度、疗效估计、预测愈后都具有重要的价值，在国内外的肿瘤病理诊断中得到了广泛的应用［1,2］，目前主要采用的是流式细胞测定(flow cytometry,FCM)，和图像细胞测定(image cytometry or cytophotometry，简称ICM)。目前认为ICM对肿瘤细胞DNA的测量更具有实际意义。美国CAS公司专门设计制造了图像细胞分析仪称为细胞分析系统。其光密度测试功能和流式细胞仪的功能是相似的。目前国际上公认的标准化测量DNA仪器的基本原理是采用计算机灰度分析随后通过一定的公式转换成光密度，主要应用积分光密度(IOD)来测定细胞的DNA倍体［3,4］，分光光度的测量必须有一个严格的标定标准，否则会导致测量的准确度，目前，国内生产的图像细胞分析仪绝大多数均未做这种标定，因这种具有二倍体、四倍体、八倍体的定标标准玻片是需要进口的，没有定标的图像细胞分析仪的DNA倍体测量是不准确的，不能作为诊断应用，为此本文介绍一种在国内能自制的而且能达到国际细胞学会所规定的标准的实用标定方法。材料与方法材料：老年Wistar大鼠(12月以上)的肝脏。正常大鼠肝脏细胞主要是两倍体，但是超过1年以上的老年大鼠肝脏具有二倍体，四倍体、八倍体三种细胞，我们取出老鼠的肝脏后做成肝脏的印片，然后用10%甲醛固定30 min，随后空气干燥5 min，用5 mol盐酸室温水解1 h，再用Feulgen Azure A(孚尔根天青A)染色1 h，完成后用图像分析仪测定200只细胞，制成一直方图，以X轴为积光密度或称为细胞质量，Y轴为细胞测定数。此时即可得到一个标准的直方图，以此作为DNA倍体的测量的基础。

关键词： DNA倍体肿瘤细胞图像细胞仪

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活性染色质诱导抗核抗体生成及肾损伤

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上海免疫学杂志 2000年第1期20卷 21-24页

作者：吴厚生马爱妞张鹏郭玲胡新美上海医科大学基础医学院免疫学教研室上海200032 上海医科大学附属中山医院药剂科上海200032 上海医科大学药学院药理教研室上海200032

系统性红斑狼疮 (SLE )的病因和诱导抗核抗体 (ANA )生成的激发原迄今不明。本实验试图用ConA活化淋巴细胞的染色质免疫同系BALB/c小鼠 ,寻找诱导ANA生成的真正免疫原 ,阐明SLE发生的激发原是自身活化细胞的核成分 ,而且证明它所诱导的... 详细信息

系统性红斑狼疮 (SLE )的病因和诱导抗核抗体 (ANA )生成的激发原迄今不明。本实验试图用ConA活化淋巴细胞的染色质免疫同系BALB/c小鼠 ,寻找诱导ANA生成的真正免疫原 ,阐明SLE发生的激发原是自身活化细胞的核成分 ,而且证明它所诱导的ANA具有致病性。从ConA活化的脾细胞中提取染色质 ,然后免疫同系BALB/c小鼠 ,用ELISA方法测定IgG类抗双链DNA (dsDNA )、抗组蛋白抗体 ,用免疫荧光法检测抗核抗体核型和免疫复合物沉积 ,用免疫印迹法测定抗核抗体谱 ,在光镜下检测肾损伤及电镜下检测肾小球沉积物 ,用考马斯亮蓝法检测尿蛋白含量。结果显示 ,活性染色质能诱导IgG类抗dsDNA、抗组蛋白等多种抗核抗体生成 ,且肾小球有显著免疫复合物沉积和蛋白尿形成。该实验表明 ,活化淋巴细胞的染色质是诱导SLE发生的真正自身免疫原。

关键词：活性染色质肾损伤系统性红斑狼疮抗核抗体

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褪黑素对大鼠脑内强啡肽水平的影响

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上海医科大学学报 2000年第6期27卷 457-459页

作者：俞昌喜吴根诚许绍芬陈崇宏上海医科大学基础医学院神经生物学教研室-医学神经生物学国家重点实验室，福州 350004 福建医科大学药理学教研室，上海 200032

目的　观察褪黑素 (MLT)对大鼠脑内某些镇痛相关核团内神经细胞的强啡肽样免疫反应强度的影响。方法　实验大鼠分给药组及对照组 ,分别腹腔注射MLT 110mg/kg或配药液 ,1h后灌注取脑、冰冻切片 ,进行免疫组化染色 ,计算机图像处理技术测... 详细信息

目的　观察褪黑素 (MLT)对大鼠脑内某些镇痛相关核团内神经细胞的强啡肽样免疫反应强度的影响。方法　实验大鼠分给药组及对照组 ,分别腹腔注射MLT 110mg/kg或配药液 ,1h后灌注取脑、冰冻切片 ,进行免疫组化染色 ,计算机图像处理技术测定染色脑片积分光密度 (IOD)值。结果　给药组大鼠视上核、中缝背核内强啡肽样免疫阳性反应减弱 ,其IOD值显著减少 (P <0 .0 1) ;给药组大鼠下丘脑室旁核、中脑导水管周围灰质腹外侧区、中缝大核的IOD值 ,与对照组比较差别无显著意义。结论　MLT可致视上核。

关键词：褪黑素脑核团强啡肽大鼠镇痛

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葡萄球菌肠毒素B突变体的构建

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上海医科大学学报 2000年第4期27卷 238-239,244页

作者：俞红钱利生李雪萍上海医科大学基础医学院微生物学教研室上海200032

目的　应用重组和克隆技术在大肠杆菌中表达葡萄球菌肠毒素B(SEB)突变体。方法　利用PCR和PCR致变技术从产SEB的标准株扩增SEB基因 ,与原核表达载体 pTrc99A重组后引入大肠杆菌JM1 0 9。通过序列测定鉴定突变基因 ;用聚丙烯酰胺凝胶电泳... 详细信息

目的　应用重组和克隆技术在大肠杆菌中表达葡萄球菌肠毒素B(SEB)突变体。方法　利用PCR和PCR致变技术从产SEB的标准株扩增SEB基因 ,与原核表达载体 pTrc99A重组后引入大肠杆菌JM1 0 9。通过序列测定鉴定突变基因 ;用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和单向免疫扩散试验分别检测表达产物和表达量。结果　获得了 3株重组菌NJM1 0 9、M2 3JM1 0 9、M1 5 0JM 1 0 9。测序表明 ,SEB N序列与已报道的天然seb完全一致 ;SEB M 2 3第 2 3位天冬酰胺密码子AAT发生定向突变 ,即由丝氨酸密码子AGT替代 (N2 3S) ;SEB M1 5 0第1 5 0位氨基酸发生非定向突变 ,由苏氨酸密码子ACT突变为丙氨酸密码子GCT(T1 5 0A)。表达SEB M1 5 0和SEB M2 3的重组细菌裂解液经SDS PAGE ,在 2 80 0 0处可见有表达条带 ,非重组菌则无。单向免疫扩散试验和蛋白浓度测定表明 ,重组菌表达目的蛋白量为 5 μg/ml培养液 ,表达量占菌体总蛋白量的 3.5 %。结论　获得了2株能表达SEB突变体的工程菌。

关键词：葡萄球菌肠毒素B 突变体克隆细菌超抗原

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