检索结果-内蒙古大学图书馆

现代中西医结合杂志 2022年第12期31卷 1640-1643页

作者：王雪飞温雅丽杜鑫李彬首都医科大学附属北京中医医院北京100010

目的观察贺氏火针治疗脑卒中恢复期痉挛患者的临床疗效。方法选择2019年1月—2020年12月首都医科大学附属北京中医医院针灸科收治的脑卒中恢复期痉挛患者120例,采用随机、对照、单盲(评价者盲)方法将患者分为治疗组和对照组,每组60例。... 详细信息

目的观察贺氏火针治疗脑卒中恢复期痉挛患者的临床疗效。方法选择2019年1月—2020年12月首都医科大学附属北京中医医院针灸科收治的脑卒中恢复期痉挛患者120例,采用随机、对照、单盲(评价者盲)方法将患者分为治疗组和对照组,每组60例。治疗组给予贺氏火针治疗,对照组给予常规针刺治疗,2组均治疗4周。观察比较2组治疗前及治疗2周、4周和12周后改良Ashworth量表(MAS)评分、简氏Fugl-Meyer评定量表(FMA)评分、Barthel指数、脑卒中专用生活质量量表(SS-QOL)评分及治疗12周后肌张力情况。结果2组治疗4周后MAS评分、Barthel指数评分、SS-QOL评分均较治疗前明显增高(P均<0.05),FMA评分与治疗前比较差异无统计学意义(P均>0.05)。2组各项评分比较差异均无统计学意义(P均>0.05);2组治疗12周后MAS评分、FMA评分、Barthel指数评分、SS-QOL评分均较治疗前明显增高(P均<0.05),且治疗组各项评分均明显高于同期对照组(P均<0.05)。治疗12周后,治疗组肌张力明显增高(Ashworth评分≥3分)患者比例为17.9%(10/56),对照组为35.2%(19/54),治疗组明显低于对照组(P<0.05)。结论贺氏火针可以降低脑卒中恢复期患者肢体痉挛程度,促进运动功能恢复,有效改善患者的生活质量。

关键词：火针脑卒中恢复期痉挛

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自体骨髓源性内皮祖细胞移植治疗缺血性脑卒中的临床研究

自体骨髓源性内皮祖细胞移植治疗缺血性脑卒中的临床研究

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作者：方杰南方医科大学

学位级别：博士

研究背景:以脑梗塞为代表的缺血性脑卒中是中枢神经系统(central nerve system,CNS)的常见病和多发病,多数存活者会遗留运动、感觉、认知等功能障碍。早期溶栓公认有效,但由于限于严格的时间窗及出血等风险,使之应用受限;且至今为止,对... 详细信息

研究背景:以脑梗塞为代表的缺血性脑卒中是中枢神经系统(central nerve system,CNS)的常见病和多发病,多数存活者会遗留运动、感觉、认知等功能障碍。早期溶栓公认有效,但由于限于严格的时间窗及出血等风险,使之应用受限;且至今为止,对遗留的CNS功能障碍并无确切疗效的治疗方法,尤其是慢性期脑梗塞所致的CNS功能障碍,严重危害脑卒中患者的生存质量,给患者个人、家庭和社会都带来了沉重的经济负担和心理负担,亟需探寻新的、安全有效的治疗策略。随着干细胞研究的不断深入,我们发现骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)来源的内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPCs)具有分化为成熟内皮血管的功能,以及参与到血管新生、促进血脑屏障(brain blood barrier,BBB)及神经功能修复的潜力,是极具治疗应用前景的干细胞疗法种子细胞。本课题在团队前期干细胞有效性、安全性实验研究均获得一定成果基础上,以严格遵循临床试验研究规范为前提,对急、慢性缺血性脑卒中临床志愿者干细胞移植治疗进行疗效与安全性评估,旨在为干细胞临床神经医学转化提供有意义数据支持及可借鉴规范流程、可行的评估指标依据。研究内容:1.探讨自体骨髓源性EPCs在治疗急性期脑梗塞中的安全性和初步疗效。2.探讨自体骨髓源性EPCs在治疗慢性期脑梗塞中的安全性和初步疗效。研究方法:第一部分1.选取符合纳入标准的急性期缺血性脑卒中(发病<7天)患者18例,采用分层区段随机化法随机分入EPCs组、BMSCs组(阳性对照)和安慰剂组,每组各6例,入组患者均接受缺血性脑卒中后的二级预防等基础治疗;2.基线评估:患者入组后进行常规的实验室生化检查、心电图、心脏彩超和头颅磁共振。功能评估包括mRS、NIHSS、Barthel Index和SSS量表;***组和BMSCs组患者在病程第7天提取骨髓,进行体外培养和扩增后经外周静脉回输体内(2.5×106/kg体重/次,隔2周一次、共两次),安慰剂组只回输相同体积的生理盐水;4.在移植后第3、6、12和48个月对基线指标进行随访,并记录与试验可能相关的不良事件。第二部分1.选取符合纳入标准的慢性期缺血性脑卒中(发病>6个月)患者14例,分为EPCs组和对照组,每组各7例,入组患者均接受缺血性脑卒中后的二级预防等基础治疗;2.基线评估:患者入组后进行常规的实验室生化检查、心电图、心脏彩超和头颅磁共振。功能评估包括 mRS、NIHSS、Barthel Index、SSS、Fugl-Meyer量表***组患者进行基线评估后提取骨髓,进行体外培养和扩增后经外周静脉回输体内(2.5×106/kg体重/次,隔2周一次、共两次);4.在移植后次日及移植后第3、6、12和24个月对基线指标进行随访,并记录与试验可能相关的不良事件。研究结果:***移植治疗急性期缺血性脑卒中的不良事件(0例)明显少于BMSCs组(1例)和安慰剂组(4例),差异有统计学意义(P<0.05),但48个月死亡率无明显差异(P>0.05);随访第3个月时,EPCs组的SSS评分(47.20±2.96)明显高于BMSCs组(29.00±2.04)和安慰剂组(36.80±4.19),差异有统计学意义(P<0.05),其余时间点功能评分无显著差异(P>0.05)。***移植治疗慢性期缺血性脑卒中发生的不良事件发生率(1例)与安慰剂组(4例)差异无统计学意义(P>0.05),两组在到达24个月随访期时均无死亡;EPCs组在随访3月时的Barthel Index评分(92.5±6.12)、NIHSS评分(5.00±2.68)优于安慰剂组(分别为70.00±15.17、7.17±0.98),差异有统计学意义(P<0.05),但安慰剂组Fugl-Meyer评分(171±28.01)优于EPCs组(168.83±13.00),差异有统计学意义(P<0.05)。12和24个月时EPCs组Fugl-Meyer评分(分别为179±15.86和178.33±16.22)均优于安慰剂组(分别为169.83±32.39和167.83±32.55),差异有统计学意义(P<0.05)。其余时间点功能评分无显著差异(P>0.05)。研究结论:1.在未增加死亡率的前提下,自体骨髓源性EPCs移植治疗急性期缺血性脑卒中具有较高的安全性,并且在3个月时表现出更佳的功能恢复。2.在未增加死亡率和不良反应发生率的前提下,自体骨髓源性EPCs移植治疗慢性期缺血性脑卒中表现出更佳的功能恢复效果,并持续到24个月。

关键词：内皮祖细胞移植缺血性脑卒中临床研究

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有序导电纳米纤维支架促进骨髓间充质干细胞向施万细胞分化及其在组织工程修复周围神经缺损的应用

有序导电纳米纤维支架促进骨髓间充质干细胞向施万细胞分化及其在...

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作者：胡晓芳南方医科大学

学位级别：博士

周围神经损伤是一个世界性的临床问题,常由创伤或手术引起,可导致部分或全部的运动功能和感觉知觉丧失,甚至终身残疾。自体神经移植作为轴突再生理想的免疫惰性支架,被认为是治疗不可逆神经缺损的“金标准”。然而,自体神经移植受限于... 详细信息

周围神经损伤是一个世界性的临床问题,常由创伤或手术引起,可导致部分或全部的运动功能和感觉知觉丧失,甚至终身残疾。自体神经移植作为轴突再生理想的免疫惰性支架,被认为是治疗不可逆神经缺损的“金标准”。然而,自体神经移植受限于来源的缺乏、供体部位的高发病率、移植物与宿主神经的尺寸不匹配等。为了克服这些局限性,各种生物材料和种子细胞被用来制造人工神经支架,用于神经缺损的桥接,并取得了不同程度的成功。在这些方法中,有序纳米纤维构成的人工神经受到广泛关注,被认为能显著促进轴突的再生。另有研究表明,线形对干细胞的黏附、增殖、迁移和分化均有影响。施万细胞(Schwann cells,SCs)作为周围神经组织工程最有前途的种子细胞,可以合成和分泌多种神经营养因子和细胞外基质,引导和促进轴突的生长。此外,再生的轴突必须通过SCs再髓鞘化才能作为功能神经传导冲动。遗憾的是,SCs仅分布于周围神经,且属于高度分化、增殖能力低的成体细胞。采用传统的SCs分离方法存在供体神经来源困难及细胞扩增慢等问题,故难以获得足够的SCs以满足治疗需要。已有资料表明,骨髓间充质干细胞(Bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)可诱导分化为施万样细胞,且排列整齐的纳米纤维可显著促进其分化,这说明微环境的拓扑结构在SCs分化中起着重要的作用。考虑到SCs与导电性轴突共存,我们推测导电性也可能会对BMSCs向SCs的分化过程产生影响,但是我们并没有找到相关的文献报道。为此,我们设计本课题对这一假设进行了验证:我们将导电材料-胺功能化的多壁碳纳米管(multi-walled carbon nanotubes,MWCNT)与聚己内酯(Polycaprolactone,PCL)和明胶(gelatin)共混,电纺成有序或无序导电纳米纤维,研究评价其对BMSCs向SCs分化的影响。然后利用大鼠坐骨神经缺损模型,研究以MWCNT/PCL/gelatin静电纺丝纤维为基础的人工神经导管对周围神经损伤后再生的影响。研究方法:1.以MWCNT,PCL及gelatin为原料,利用静电纺丝法,制备4种纳米纤维膜:无序纤维膜(random,R),有序纤维膜(aligned,A),无序导电纤维膜(random and conductive,RC),有序导电纤维膜(aligned andconductive,AC)。采用扫描电子显微镜对纳米纤维膜的表面形貌进行观察,利用Image J软件从图像中测量电纺纤维的直径,电化学工作站检测导电性,活死细胞染色评价纤维膜的生物相容性。2.体外分离培养BMSCs,并分别接种于4种纳米纤维膜或细胞培养板上,通过三个步骤向SCs诱导分化,通过免疫荧光染色、Western Blot验证诱导后的各组BMSCs(iBMSCs)表达SCs的特异性标记蛋白的差异。3.为检测iBMSCs对神经突生长的生物效应,体外分离培养背根神经节(DRG),与iBMSCs共培养5 d后,免疫荧光染色检测轴突的走向及长度的区别。4.制备PCL导管,将培养有iBMSCs的静电纺丝纤维膜填充进导管中,移植到SD大鼠坐骨神经10 mm缺损处,移植后12 w通过免疫荧光染色检测神经丝蛋白(Neurofilament,NF)及髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)的表达判断轴突再生及再髓鞘化的情况。通过腓肠肌湿重比,腓肠肌横截面的HE染色及神经电生理检测判断神经损伤后功能恢复及靶区肌组织修复情况。研究结果:1.材料的制备及表征:1.1采用静电纺丝技术制备了有序导电PCL/gelatin/MWCNT纳米纤维。作为对照,同时制备了无序导电的PCL/gelatin/MWCNT纳米纤维以及有序或无序不导电的PCL/明胶纳米纤维。扫描电子显微镜图像显示,这些纤维表面光滑,直径分布范围在200-900nm之间。1.2电化学工作站检测结果表明,与不导电纤维膜(R和A)相比,RC和AC纤维膜的导电性明显提高,说明MWCNT可以显著提高纳米纤维膜的导电性能。1.3活死细胞染色结果显示BMSCs在纤维膜上生长状态良好,与细胞培养板无显著差异,提示纤维膜具有良好的生物相容性。2.体外实验鉴定纤维膜对BMSCs向SCs诱导及对DRG神经突延伸的影响:2.1免疫荧光染色显示,向SCs方向定向诱导的BMSCs表达SCs的特异性标记物以及SCs的功能性蛋白S100,胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及神经生长因子(nerve growth factor,NGF),Western blotting 和定量分析结果显示,所有诱导细胞的S100、GFAP和NGF水平均显著高于未诱导细胞。排列整齐的纳米纤

关键词：导电纳米纤维碳纳米管骨髓间充质干细胞神经组织工程施万细胞

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医用三氧对慢性坐骨神经损伤大鼠神经生长因子水平的影响

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毒理学杂志 2021年第1期35卷 24-29页

作者：石慧王峰刘劲洲吴逸伦张爱民姜岳明蒋宗滨广西医科大学第二附属医院疼痛科广西南宁530007 广西医科大学公共卫生学院毒理学系广西南宁530021

目的探讨不同浓度医用三氧(O_(3))对慢性坐骨神经损伤(chronic constriction injury,CCI)大鼠神经生长因子水平的影响,为临床治疗神经病理性疼痛提供基础科学依据。方法60只SPF级健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、CCI组和不同浓度O_... 详细信息

目的探讨不同浓度医用三氧(O_(3))对慢性坐骨神经损伤(chronic constriction injury,CCI)大鼠神经生长因子水平的影响,为临床治疗神经病理性疼痛提供基础科学依据。方法60只SPF级健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、CCI组和不同浓度O_(3)(15、30和60μg/ml依序为O_(3)-15组、O_(3)-30组、O_(3)-60组)治疗组,每组12只。造模后7 d,受损侧坐骨神经给予注射O_(3)2 ml治疗,1次/d,每周7 d,共14 d。在造模前1 d、造模后1、4和7 d,O_(3)治疗后7和14 d分别测量机械缩足反应阈值(PWMT),并于治疗14 d测量PWMT后取受损侧坐骨神经组织,放入液氮罐中保存。采用逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测神经生长因子(NGF)和脑源性神经生长因子(BDNF)mRNA表达量,Western blot检测NGF和BDNF蛋白表达量。结果与假手术组比较,CCI组和O_(3)治疗组造模后PWMT下降(P<0.05);与CCI组比较,O_(3)治疗组治疗后PWMT上升,差异有统计学意义(P<0.05)。与假手术组比较,CCI组和O_(3)治疗组NGF与BDNF mRNA表达量增加(P<0.05);与CCI组比较,O_(3)-60组NGF mRNA表达量增加,O_(3)治疗组BDNF mRNA表达量也增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与假手术组比较,CCI组和O_(3)治疗组NGF与BDNF蛋白表达量增加(P<0.05);与CCI组比较,O_(3)-30组、O_(3)-60组NGF与BDNF蛋白表达量增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在本实验条件下,大鼠神经生长因子随着O_(3)浓度增加而升高,可能有利于促进慢性坐骨神经受损组织的修复再生。

关键词：医用三氧慢性坐骨神经损伤大鼠神经生长因子

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人和小鼠正常肾上腺组织单细胞图谱的建立及其意义

人和小鼠正常肾上腺组织单细胞图谱的建立及其意义

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作者：黄林广西医科大学

学位级别：博士

背景及目的作为人体一个重要且复杂的内分泌器官,肾上腺由两种不同胚胎来源的组织组成:中胚层衍生的、产生皮质类固醇的肾上腺皮质和外胚层衍生的,产生儿茶酚胺的肾上腺髓质。成人的肾上腺皮层由三个在组织学和功能上不同的结构组成:最... 详细信息

背景及目的作为人体一个重要且复杂的内分泌器官,肾上腺由两种不同胚胎来源的组织组成:中胚层衍生的、产生皮质类固醇的肾上腺皮质和外胚层衍生的,产生儿茶酚胺的肾上腺髓质。成人的肾上腺皮层由三个在组织学和功能上不同的结构组成:最外层的球状带（zona glomerulosa z G）,中间的束状带（zona fasciculata z F）和内层的网状带（zona reticularis z R）。肾上腺髓质中的嗜铬细胞主要是分泌应激相关的激素产物:肾上腺素和去甲肾上腺素。人体内环境的稳态依赖于应对各种生理和病理变化做出反应和适应的能力。人体这种独特能力主要是由下丘脑-垂体-肾上腺（hypothalamic–pituitary–adrenal HPA）轴和交感神经-肾上腺髓质系统组成的“压力应激系统”来协调。在重症感染的患者中,由于下丘脑和垂体因炎症受损,调节肾上腺皮质激素分泌的两个主要激素:促肾上腺皮质激素释放激素和促肾上腺皮质激素的水平都受到抑制。然而,这些患者的糖皮质激素水平却能够保持正常甚至升高,提示机体的应激反应从中枢的垂体依赖性调节机制到局部的垂体非依赖调节机制的过渡转变。此过程可能涉及的诸多机制中,肾上腺内环境的激活起着关键作用。作为机体应激系统的主要效应器官,肾上腺内存在一个重要的微环境。在此微环境中,免疫系统-肾上腺皮质,免疫系统-肾上腺髓质、肾上腺皮质-髓质细胞之间的相互作用和肾上腺的高度血管化的器官特征发挥着关键作用。在炎症应激阶段,肾上腺激素的合成分泌调节主要是由激活肾上腺内微环境这种垂体非依赖性机制介导的,越来越多的实验研究支持肾上腺微环境中的不同类型细胞在维持内环境稳态过程中的关键作用。在生理和病理状况下,微环境中包括肾上腺皮质细胞,髓质细胞,免疫细胞等多种不同类型细胞通过直接或以旁分泌方式相互协调来维持肾上腺稳态。此外,肾上腺微环境稳态的变化会影响机体一些疾病的发生及进展,例如糖尿病、抑郁症、心血管疾病、炎症等,同样微环境稳态也受到这些疾病的影响。虽然了解肾上腺微环境内具体的细胞类型及特点对于肾上腺疾病的发生发展至关重要。但是,目前我们对这方面的知识十分有限,有关肾上腺微环境的研究往往基于在由数百万个细胞组成的组织样本层面上,缺乏一个系统全面的认识,诸多细节仍然未知,很难发现单个细胞之间的差异和可能在肾上腺疾病进展中发挥重要作用的新的细胞类型,限制了我们对肾上腺相关疾病发生发展机制的理解和治疗水平的提高。单细胞转录组测序（single-cell RNA sequencing sc RNA-seq）是在单细胞水平对全转录组RNA进行高通量扩增与测序从而建立细胞图谱一项新技术。利用sc RNA-seq的优势,我们可以弥补不足。因此,本研究借助10X单细胞转录组测序平台,在单细胞层面上探索人和小鼠正常肾上腺组织内的细胞类型及特点,同时对比人和小鼠正常肾上腺的基因表达差异,目的是建立人和小鼠正常肾上腺组织的单细胞图谱,系统全面认识肾上腺微环境内的细胞类型及特点。方法:1.取人正常肾上腺组织,采用酶消化法分离出单细胞悬液。达到合格上机条件的单细胞悬液制备成c DNA文库,检测合格的c DNA文库外送进行测序,运用cell ranger、seurat、monocle等单细胞相关分析软件,对肾上腺测序结果数据进行质量控制、细胞聚类和细胞亚群分析、拟时态分析、细胞周期分析、差异性基因表达等方面的分析。2.单细胞层面上对比分析人左侧肾上腺和右侧肾上腺之间基因表达的相关性和差异性。同时,对比分析节律相关基因（CLOCK,NPAS2,ARNTL,ARNTL2,PER1,PER2,CRY1,CRY2和RORA）在左侧肾上腺和右侧肾上腺皮质细胞上的表达情况。运用q PCR进一步对比分析数据中表达明显的节律性基因（RORA,CLOCK,ARNTL和PER1）在左侧肾上腺和右侧肾上腺的表达情况。3.取8周龄C57/BL6小鼠的正常肾上腺组织,采用酶消化法分离出小鼠肾上腺组织单细胞,制备c DNA文库,文库外送测序,运用cell ranger、seurat等分析软件包,采用与人肾上腺数据分析相同的参数标准,对小鼠测序数据进行质量控制、细胞聚类和细胞定义、差异基因表达等方面的分析。4.运用ENSEMBL R package Bio Mart软件将小鼠肾上腺测序数据中的基因名称转换为人同源性基因名称。使用同源性基因的平均表达量来比较人和小鼠细胞亚群之间的相关性,同时对比分析人和小鼠肾上腺四种主要细胞类型(肾上腺皮质细胞（z G和z F细胞）,肾上腺髓质细胞,内皮细胞和纤维细胞),确定出人特异性,小鼠特异性及共同表达的差异性表达基因。结果1.人肾上腺单细胞测序结果提示了23组细胞亚群:巨噬细胞1,效应CD8+T细胞1,z F细胞,内皮细胞1,

关键词：单细胞转录组测序肾上腺细胞特点微环境

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基于单细胞RNA测序技术构建人和小鼠膀胱单细胞转录组图谱的研究

基于单细胞RNA测序技术构建人和小鼠膀胱单细胞转录组图谱的研究

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作者：玉镇源广西医科大学

学位级别：博士

背景:构建一个全面的膀胱细胞图谱对于了解良性膀胱疾病和膀胱癌的细胞起源至关重要。以往对膀胱细胞的分类研究多依赖于细胞的形态、位置、电生理学和功能。然而,这些方法可能难以全面地对膀胱细胞进行精确分类。m RNA作为遗传物质的信... 详细信息

背景:构建一个全面的膀胱细胞图谱对于了解良性膀胱疾病和膀胱癌的细胞起源至关重要。以往对膀胱细胞的分类研究多依赖于细胞的形态、位置、电生理学和功能。然而,这些方法可能难以全面地对膀胱细胞进行精确分类。m RNA作为遗传物质的信使,起到翻译和指导蛋白质合成的重要生理功能。利用总RNA测序人们可以了解膀胱组织的平均RNA表达情况,但却无法精确到单个细胞的RNA表达情况。近年来,随着高通量单细胞RNA测序(single-cell RNA sequencing,sc RNA-seq)技术的发展和人类细胞图谱计划的提出,为我们进行膀胱单细胞转录组图谱的研究提供了基础。目的:本研究拟通过sc RNA-seq技术,深入了解人和小鼠膀胱细胞的精确分类和潜在的生理功能。同时,通过单细胞转录组的分析可以揭示人和小鼠膀胱细胞的同源性和异质性,这将为研究不同膀胱细胞类型与膀胱疾病之间的关系提供重要的信息。第一部分人类膀胱单细胞转录组图谱的构建方法:我们分别从3位行根治性膀胱癌切除术或膀胱部分切除术的患者获取远离肿瘤的正常膀胱组织,通过消化酶的消化作用后制备成单细胞悬液。我们应用10x Genomics的仪器把单细胞悬液制备成油包水结构,随后进行c DNA文库建立和测序。我们使用10x Genomics提供的Cellranger软件对单细胞测序数据进行初步分析,然后使用R包Seurat、Monocle2、Velocity对单细胞测序数据进行二次分析。同时我们使用免疫组化、免疫荧光和蛋白质印迹的方法对单细胞测序发现的膀胱新的细胞类型进行验证。结果:我们成功捕获了12423个人类膀胱细胞的单细胞转录组信息,构建了一个人类膀胱转录组图谱。通过细胞之间的无偏聚类,可以把人膀胱细胞分成16种不同的细胞类型。我们构建了人类膀胱间质细胞的发育轨迹,并且对膀胱上皮细胞和间质细胞的RNA动力学进行分析。我们发现了2种新的膀胱细胞类型:一种是特异表达ADRA2A和HRH2的间质细胞,它可能与神经传导和过敏反应有关;另一种是特异表达TNNT1的上皮细胞,它可能与膀胱的排空有关。本部分结果展示了人膀胱丰富的单细胞转录组信息,通过聚类分析将膀胱细胞精确分成16种不同细胞类型,并且发现了2种新的细胞类型。然而,小鼠作为最常用的动物模型之一,我们仍然没有完全清楚它与人的膀胱细胞类型之间的相似性如何。为了解决这些问题,我们接下来对小鼠的膀胱进行sc RNA-seq。第二部分小鼠膀胱单细胞转录组图谱的构建方法:我们选取10只C57BL/6小鼠正常膀胱组织,用消化酶进行单细胞悬液的制备。同样使用10 Genomics的仪器把小鼠膀胱单细胞悬液制备成油包水的结构,随后进行文库建立和测序。用类似人膀胱的方法分析小鼠单细胞测序的数据。我们计算皮尔森相关系数判断人和小鼠不同细胞类型之间的相关性。同时,我们使用免疫组化和蛋白质印迹的方法验证人与小鼠之间的种属异质性。结果:我们得到了12884个正常小鼠膀胱的单细胞RNA信息,描绘了一个小鼠膀胱单细胞转录组图谱。根据这些单细胞转录组的信息,把小鼠膀胱细胞精确分成15种细胞类型。通过比较人和小鼠膀胱细胞类型的同源性和异质性,确定了人类和小鼠膀胱进化的保守性和异质性。结论:我们的研究提供了迄今为止人和小鼠正常膀胱中最全面的单细胞转录组信息。这些结果为发现新的细胞类型、特异性的细胞标记、信号受体和转录组数据集提供了很好的参考,这将有助于研究细胞类型和膀胱疾病之间的关系提供新的见解。

关键词：膀胱单细胞RNA测序间质细胞上皮细胞单细胞转录组

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向远端延伸的周围神经束分裂与合并次数自动获取方法

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中国生物医学工程学报 2022年第6期41卷 764-768页

作者：钟映春蚁晓虹黄建浩戚剑朱爽罗鹏广东工业大学自动化学院广州510006 中山大学附属第一医院显微外科广州510080 南方医科大学珠江医院骨科广东深圳510630 深圳市第六人民医院骨科广东深圳518000

周围神经内的神经束分裂与合并次数和结构极有可能与其发育有关。当前,针对周围神经序列MicroCT图像中的神经束分裂与合并次数,完全依赖于人工计数方法进行统计,存在易出错、效率低等问题。为实现对神经束分裂与合并次数的自动获取,首先... 详细信息

周围神经内的神经束分裂与合并次数和结构极有可能与其发育有关。当前,针对周围神经序列MicroCT图像中的神经束分裂与合并次数,完全依赖于人工计数方法进行统计,存在易出错、效率低等问题。为实现对神经束分裂与合并次数的自动获取,首先,在完成神经束类圆度统计学分析的基础上,从数学角度提出了序列MicroCT图像中四肢周围神经内部神经束分裂过程与神经束合并过程的定义;其次,提出了ACA-SCN算法,即利用相邻图像间的神经束质心总数的差分结果进行次数的自动获取;最后,提出了ACA-COM算法,即利用神经束的质心偏移量实现对同一神经束的跟踪匹配。以人工方式处理的3个标本中的41个分裂过程和51个合并过程作为评价标准。分析结果表明,所提出的神经束分裂与合并的开始与结束位置定义准确,无例外情况出现;ACA-SCN算法的神经束质心总数计数结果误差为8.69%;ACA-COM算法对神经束分裂与合并次数的计数与人工计数结果完全一致,能正确计数在一张图像上同时发生神经束分裂与合并的情况,也能正确计数单根神经束分裂为3根、3根神经束合并为单根神经束的情况。上述分析结果为后续探索单位长度内神经束分裂与合并次数的统计规律提供了基础。

关键词：周围神经神经束分裂与合并自动计数算法 MicroCT图像

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NeuroD1在周围神经轴突再生过程的作用及其相关机制研究

NeuroD1在周围神经轴突再生过程的作用及其相关机制研究

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作者：赖木华南方医科大学

学位级别：硕士

在神经系统的发育过程中,未成熟神经元的轴突需要不断延展伸长,直至其突起的末端与靶细胞或器官形成突触连接。而在成体神经元轴突受损后,损伤远侧段轴突将退变崩解,在条件合适的情况下近侧端的轴突将发生轴突再生,这个过程与发育阶段... 详细信息

在神经系统的发育过程中,未成熟神经元的轴突需要不断延展伸长,直至其突起的末端与靶细胞或器官形成突触连接。而在成体神经元轴突受损后,损伤远侧段轴突将退变崩解,在条件合适的情况下近侧端的轴突将发生轴突再生,这个过程与发育阶段的轴突延伸具有一定的相似性。不管是发育中突起的生长还是损伤后轴突的再生,都需要胞体大量转录并合成轴突出芽所需的蛋白质。转录因子是一种DNA结合蛋白,能够与基因上特异性的位点相结合从而直接或间接地调控基因转录。近年来有研究表明通过干预在神经发育过程中发挥重要作用的部分转录因子的表达可以让发育成熟的神经元重返“年轻”的生长状态,从而促进成熟神经元轴突损伤后的再生。神经源性分化因子(Neurogenic differentiation 1,NeuroD1)是神经系统发育过程具有重要作用的一种转录因子。在神经系统发育过程中NeuroD1高表达于神经元,但其表达水平随着发育成熟而降低。研究表明NeuroD1可促进神经元的发育与分化,同时在突起延长过程发挥重要的调控作用。但是,迄今为止尚无证据显示NeuroD1能否对受损成熟神经元的轴突再生发挥作用。这正是本课题拟回答的关键科学问题。鉴于以往研究提示NeuroD1可以通过调控神经营养因子受体的表达从而影响神经元发育,也可以通过调控细胞骨架重排来影响神经分化和神经元迁移。故本课题还从这两方面对NeuroD1影响轴突再生的机制进行了初步探讨。研究方法1.利用腺相关病毒pAAV-Flex-CAG-ND1-P2A-mCherry 和rAAV-hSYN1-Cre-WPE-pA(以下简称AAV-NeuroD1)作为载体在成体小鼠脊髓腰膨大局部微量注射方法使得运动神经元过表达NeuroD1。对照组采用同样的方法微量注射 pAAV-Flex-CAG-P2A-mCherry 和rAAV-hSYN1-Cre-WPE-pA(以下简称AAV-con)。病毒注射7d或21天后通过Western blot和免疫荧光等方法检测NeuroD1的表达。2.利用脊髓腰膨大运动神经元成功转染病毒的小鼠制备坐骨神经夹伤模型,术后3d取材,通过免疫荧光和Western blot检测GAP43在损伤远侧神经的表达情况,以此来评价AAV-NeuroD1转染组(以下简称NeuroD1组)和AAV-con转染组(以下简称con组)轴突再生速度的区别。另有一批动物在术后存活14d,然后进行行为学和神经电生理检测观察神经损伤后后肢运动功能和神经传导功能的恢复情况。最后取材称重检测腓肠肌湿重比,以及采用组织学方法(HE染色、BTX染色复合NF200免疫荧光)检测腓肠肌横截面积和运动终板支配率等靶区肌组织修复情况进行对比分析。3.在体外培养的PC12细胞中利用逆转录病毒载体(RV-NeuroD1或RV-con)进行转染并利用免疫荧光和Western blot检测NeuroD1蛋白表达。将转染后的PC12细胞诱导分化为神经元,再参照文献报道的方法构建神经元轴突损伤体外细胞模型。在此细胞模型上,通过q-PCR和Western blot初步筛选出NeuroD1过表达对神经营养因子BDNF及其受体TrkB,以及微管切割蛋白Spastin的表达有显著影响。4.利用AAV-NeuroD1或AAV-con转染后的小鼠制备坐骨神经夹伤模型,术后3d取材,通过免疫荧光法和Western blot检测脊髓前角运动神经元中BDNF、TrkB以及Spastin表达情况。研究结果***1过表达可以促进小鼠坐骨神经损伤后结构与功能修复。1.1 hSYN1-Cre介导的AAV-NeuroD1病毒载体可以在脊髓内特异性转染神经元,免疫荧光和Western blot均显示成年脊髓神经元以及AAV-con转染的神经元并不表达NeuroD1蛋白,而NeuroD1组在微量注射7d或21d后脊髓神经元均能稳定过表达NeuroD1蛋白。1.2 坐骨神经夹伤3d后在损伤远侧神经内GAP43阳性再生轴突的长度(神经纵切片测量从损伤点至GAP43阳性再生轴突最远端距离)和GAP43阳性再生轴突的数量(在距离神经损伤点远侧3-4mm的横切片测量GAP43 阳性轴突数)均显示NeuroD1组显著性大于对照组。Western blot结果也显示在损伤远端神经内GAP43总蛋白表达水平是NeuroD1组显著性大于对照组。1.3 腓肠肌湿重比(损伤侧与正常侧的比值)、肌纤维横截面积、a-BTX 阳性运动终板数量以及NF阳性轴突支配的运动终板比率等统计结果均显示为NeuroD1组显著性大于对照组。1.4 行为学检测显示术后14d两组动物后肢均有一定的功能恢复,其中NeuroD1组表现更加明显。CatWalk步态分析得出的SFI值也是NeuroD1组显著性大于对照组。1

关键词： NeuroD1 周围神经损伤轴突再生 BDNF TrkB Spastin

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遗传易感性在马尔尼菲青霉病发病机制中的作用研究

遗传易感性在马尔尼菲青霉病发病机制中的作用研究

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作者：曹存巍吴易郑艳青潘开素韦立莉宁心强郭静严汝帆史娜娜李炳坤郑冬燕罗宏广西医科大学

①课题来源与背景：本项目来源于国家自然科学基金面上项目”遗传易感性在马尔尼菲青霉病发病机制中的作用研究”项目编号：81571971。马尔尼菲青霉病（Penicilliosis marneffei,现更名为马尔尼菲篮状菌病）在我国南方的广西、广东,以... 详细信息

①课题来源与背景：本项目来源于国家自然科学基金面上项目”遗传易感性在马尔尼菲青霉病发病机制中的作用研究”项目编号：81571971。马尔尼菲青霉病（Penicilliosis marneffei,现更名为马尔尼菲篮状菌病）在我国南方的广西、广东,以及东南亚各国呈区域性流行,该病主要感染免疫力低下的患者,如 AIDS 患者,使用免疫抑制剂的器官移植或结缔组织病患者。近年来播散性马尔尼菲青霉病在无合并HIV感染及其他基础疾病的人群中发病数逐渐增多,病情顽固难治。大量基础和临床研究提示不同来源的马尔尼菲青霉菌株本身的毒力并无特殊性。马尔尼菲青霉病可能存在宿主遗传易感性,由此导致的天然免疫缺陷是发病的关键因素,但其感染机制尚不清楚。 ②技术原理及性能指标： a.项目组对广西地区 58 例非 HIV 马尔尼菲青霉病患者和 107 例健康人进行了 19 种真菌通路相关的自身抗检测,结果显示,IFN-γ抗体阳性的病人在所有病人中占 94.8%的比例,并证实了该抗体可抑制免疫细胞表面 IFN-γ依赖性 HLA-DR 分子的表达。本课题首次发现并明确 IFN-γ自身抗体引起的获得性免疫缺陷是广西地区非 HIV 马尔尼菲青霉病成人患者发病的主要病因。 b. 首次证实 HLA-DRB1*16:02 和 DQB1*05:02 的多态性是非 HIV 马尔尼菲青霉病患者获得性 IFN-γ自身抗体产生的原因,是广西非HIV马尔尼菲青霉病的遗传易感因素。广西地区既是马尔尼菲青霉菌流行区,又是 IFN-γ抗体易感基因高携带区,遗传和环境两种因素共同促使广西地区 IFN-γ自身抗体介导的非 HIV 马尔尼菲青霉菌病的高发。 c. 与成人相比,IFN-γ自身抗体并非儿童发病机制,原发性免疫缺陷（PIDs）是非 HIV 马尔尼菲青霉病儿童患者的主要原因,提示临床一旦发现非 HIV 患儿感染马尔尼菲青霉菌应及早进行 WGS 检测分析。目前项目组已给12个马尔尼菲青霉病儿童患者及其直系亲属免费全基因组检测,寻找致病基因。 d. 项目组对非 HIV 儿童马尔尼菲青霉病患者的临床特点、实验室诊断以及治疗、预后做了回顾性研究。在对儿童治疗的回顾性和研究中发现,伏立康唑是治疗马尔尼菲青霉病儿童患者有效的药物,伏立康唑初始剂量范围为 7-8 mg/kg,每日静脉给药 2 次,适合中国马尔尼菲青霉病感染儿童的治疗。 ③技术的创造性与先进性： a.在前期研究发现 Dectin-1 基因在非 HIV 马尔尼菲青霉病患者中存在多态性,提示 Dectin-1 基因缺陷与马尔尼菲青霉病易感相关的原创性发现的基础上,以先进的全外显子组测序技术,首次系统的、全面的对马尔尼菲青霉病遗传易感性进行研究,使得本项目的研究内容具有连贯性、创新性。 b.本课题在明确易感基因后,创新性的将分子遗传学与抗真菌感染分子免疫学研究相结合,从全新的视角,深入阐明宿主遗传易感性在马尔尼菲青霉病发病机制中的作用。 ④技术的成熟程度,适用范围和安全性; 本成果技术成熟,安全性好,可以指导马尔尼菲青霉病患者治疗,在以下领域有很大应用前景：1、临床医学;2、微生物感染;3、先天性免疫缺陷疾病。 ⑤应用情况及存在的问题; 该研究成果在全国包括广西、湖南、厦门、北京、上海等各级医院推广应用。指导马尔尼菲青霉病患者治疗,取得良好的社会效益。

关键词：马尔尼菲青霉病药物治疗免疫抑制剂

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师彬教授针刺治疗神经根型颈椎病的经验总结

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上海针灸杂志 2025年第2期44卷 143-147页

作者：赵虹飞张文霞郭琛琛颜纯淳王从安山东中医药大学济南250013 山东第一医科大学附属颈肩腰腿痛医院济南250031 山东中医药大学博士后流动站济南250399

师彬(1969-),男,主任医师,二级教授,博士生导师。国家中医药管理局推拿学重点学科带头人,国家卫生健康突出贡献中青年专家,全国先进工作者,泰山学者特聘专家,山东省名中医药专家。现任山东第一医科大学附属颈肩腰腿痛医院院长,兼任中国... 详细信息

师彬(1969-),男,主任医师,二级教授,博士生导师。国家中医药管理局推拿学重点学科带头人,国家卫生健康突出贡献中青年专家,全国先进工作者,泰山学者特聘专家,山东省名中医药专家。现任山东第一医科大学附属颈肩腰腿痛医院院长,兼任中国针灸学会针推结合专业委员会副主任委员,中国针灸学会综合医院针灸分会副主任委员,中华中医药学会骨伤分会常务委员,中华中医药学会推拿分会常务委员,中华中医药学会整脊分会常务委员。“三维平衡正脊技术”及“通项入脑针法”创始人,率先提出骨性关节炎“三阶梯防治体系”以及颈椎病“中医系统化分级治疗体系”,在脊柱及骨相关疾病的防治领域有丰富经验。承担国家自然科学基金项目、山东省成果转化重大专项等国家级和省部级课题13项。曾获成果奖励13项,其中山东省科技进步一等奖1项,二等奖3项,三等奖1项。授权专利15项,出版专著7部,发表论文120篇,其中SCI论文30余篇。培养硕士、博士研究生50余人。长期致力于颈肩综合症、椎间盘突出症、骨性关节炎和脊柱相关疾病的中西医结合基础与临床研究。

关键词：针刺疗法手法颈椎病筋骨并重以痛为腧名医经验

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