检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：洪震郭起浩赵倩华丁玎周燕虞培敏复旦大学附属华山医院

本项目属神经病学领域。项目组编制一系列基于当代认知心理学原理、脑定位作用强、符合中国人文化背景的神经心理测评工具,对于各类神经系统疾病认知障碍的早期识别、鉴别诊断、结局预测具有较高的临床实践指导意义。在我国,目... 详细信息

标准号: 1500110286

本项目属神经病学领域。项目组编制一系列基于当代认知心理学原理、脑定位作用强、符合中国人文化背景的神经心理测评工具,对于各类神经系统疾病认知障碍的早期识别、鉴别诊断、结局预测具有较高的临床实践指导意义。在我国,目前广泛使用的是韦氏智力测验第一版修订版(WAIS-RC)、韦氏记忆量表第一版修订版(WMS-RC)等经典成套测验,但是,近10余年来,鉴于国际上针对神经系统不同程度认知损害的评估的需要,新一代更高效敏感的神经心理测验得到广泛应用,这些成套测验是不同认知领域的测验的组合,包括：听觉词语记忆测验、逻辑记忆测验、连线测验、Stroop色词测验、Rey-Osterrieth复杂图形测验、Mattis痴呆评定量表(DRS)、言语流畅性测验,等。项目组近20年来致力于上述测验的原版引进、汉化、修订,验证了其信度和效度,制定了中国人常模及划界分。在此基础上,还自行开发了记忆与执行功能筛查量表(MES)等系列测验。应用“华山成套神经心理测验”对数千名阿尔茨海默病、轻度认知损害、血管性认知损害、血管性痴呆、额颞叶痴呆、癫痫、梅毒等病种进行系统的神经心理评估。在国内首先开展的研究有：针对语义性痴呆患者的颞叶皮层功能分区研究、轻度认知损害不同亚型的患病率与转归差异研究、血管性认知损害的可操作性诊断与分类研究,这些研究不仅填补了国内空白,还丰富了国际学界对这些领域的认识。应用心理测验为核心工具,在上海地区开展两次大规模流调(近20000人),获得认知障碍的患病率数据。针对不同疾病特点,项目组编制数套神经心理评估工具,已在全国30多家三级医院神经科、精神科、老年科推广应用。华山医院神经心理室累积评估已超4000人次,显示了这些评估工具已成为老年认知障碍的诊断、治疗、预后评估的必不可少的组成部分。以第一、通讯、合作作者共发表文章131篇, SCI收录35篇(影响因子合计124.332,单篇最高14.483。出版专著《神经心理评估》。多次应邀在国内外会议上大会发言和壁报展示。承担国家级继续医学教育学习班。

关键词：神经心理测验认知评估神经内科临床

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单细胞分辨的全脑显微光学切片断层成像技术与仪器

单细胞分辨的全脑显微光学切片断层成像技术与仪器

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作者：骆清铭龚辉李安安曾绍群张斌吕晓华华中科技大学

该项目属生物医学工程光学成像领域。美国“脑研究计划”被《SCIENCE》评价为与“人类基因组计划”相媲美的重大工程，其中高精度、大范围观测脑细胞及回路连接，对揭示阿尔茨海默症、帕金森症等重大脑疾病的成病机理意义重大，其核心... 详细信息

标准号: 1600400007

该项目属生物医学工程光学成像领域。美国“脑研究计划”被《SCIENCE》评价为与“人类基因组计划”相媲美的重大工程，其中高精度、大范围观测脑细胞及回路连接，对揭示阿尔茨海默症、帕金森症等重大脑疾病的成病机理意义重大，其核心环节是对大脑结构的精确测量。常用的磁共振技术虽测量范围大，但不能分辨单细胞水平的细节：电镜的精度高却威像时间长，难以大范围检测，类似于近距离观看大幅图画，细节清晰而无法看到整张画面。为此，美国Allen脑科学研究所采用传统技术，历时3年耗资近亿美元获得了小鼠全脑图谱，但精度远未达到单细胞水平。因此研发观测精度高(1微米级)、范围大(数厘米级)的单细胞分辨的全脑显微成像技术，成为亟待解决的难题。美国在NIH、NSF等部门长期资助下，一直未取得突破，其瓶颈是缺乏高分辨连续成像技术，及配套的组织样本处理、切削技术。针对上述问题，在中国国家自科基金等项目支持下，经十余年从理论、方法到仪器的系统研究，主要发明如下：1．在国际上率先建立光折射率差异组织切片成像理论，发明了一种反射式切片成像技术，突破传统的“先切片再成像”模式，解决了人工收集样本薄片无法准确、快速自动成像的问题，奠定了生物组织的高分辨连续成像技术基础。2．发明了一系列大体积脑组织的样本处理方法，在国际上首次实现大体积完整鼠脑的均匀Gol-gi/Nissl染色和塑性包埋，填补了传统方法的空白。3．发明了一种全自动精密组织切削技术，攻克传统方法中切削大样本时切薄困难、样片易损、刀具寿命短等难题，保证成像信息的连续、完整、有效。4．建立了单细胞分辨的全脑显微光学成像技术体系，首创显微光学切片断层成像仪器(MOST)，绘制出世界上第一套单细胞分辨的小鼠全脑三维结构图谱。该项目获发明专利9项、软件著作权6项。原创成果发表于《SCIENCE》，美国科学院院士、心理学会前主席Gazzaniga等国际同行，及麻省理工学院、马普研究所等单位在《NATURE》，《认知神经科学趋势》等国际一流刊物上多次正面引用。《SCI-ENCE》专栏评价“来自中国的团队竭尽全力地创造出最精细的小鼠全脑神经元三维连接图谱”，“没有一家能达到与中国工作类似的精细程度”，“数据和新的自动化脑图谱获取仪器将会为未来的研究提供重要基础”。NATURE METHODS的综述评价“首次展示了鼠脑内一根根轴突的长距离追踪”。国际期刊《临床神经生理学》副主编认为“利用MOST技术取得了详细描述鼠脑连接的重大突破”。经该领域四位院士及其他专家鉴定：“MOST技术原创性强，填补了现有研究方法的空白，达到国际领先水平”。入选2011年度“中国科学十大进展”。所研发的MOST仪器已应用于诺贝尔生理和医学奖得主Sudhof教授实验室、美国冷泉港实验室、上海神经所、药物所等20余家知名科研机构，有力推进了脑发育和疾病的机理研究及药物研发。后续研究获得“国家重大科学仪器设备开发专项”支持。部分核心专利经知识产权交易所公开挂牌，以1千万元转让，成为教育部直属高校中首个案例，探索出了一条基础研究重大成果的产业化道路。

关键词：生物医学工程脑疾病显微光学切片断层成像仪器

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人类疱疹病毒6型与神经胶质瘤关系的研究

人类疱疹病毒6型与神经胶质瘤关系的研究

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作者：张春南京医科大学

学位级别：硕士

神经胶质瘤（glioma）是人类最常见的原发性恶性脑肿瘤,具有复发率高、死亡率高的特点,到目前为止对其病因和发病机制仍不是很清楚,近年来有研究表明病毒感染因素可能是神经胶质瘤发生发展重要的病因之一。人类疱疹病毒6型（Human herpe... 详细信息

神经胶质瘤（glioma）是人类最常见的原发性恶性脑肿瘤,具有复发率高、死亡率高的特点,到目前为止对其病因和发病机制仍不是很清楚,近年来有研究表明病毒感染因素可能是神经胶质瘤发生发展重要的病因之一。人类疱疹病毒6型（Human herpesvirus 6, HHV-6）于1986年首先由美国癌症中心的Salahuddin等从淋巴细胞增生性疾病及AIDS患者的外周血单个核细胞中分离到,HHV-6与人巨细胞病毒（Human cytomegalo virus , HCMV）、人类疱疹病毒7型（HHV-7）同属于疱疹病毒β亚科,都具有嗜神经的特性。根据其基因结构差异和抗原性可分为HHV-6 A、B两种亚型,代表株分别是GS、U1102和Z29株。已有多篇文献报道在神经胶质瘤患者肿瘤组织中检测到HHV-6 DNA的存在,但未能分离到病毒。本实验室于2008年从神经胶质瘤组织囊液中分离到一株活病毒,经初步鉴定为HHV-6 A亚型,该发现在国内外属首次发现,因此本实验是在分离到HHV-6病毒的基础上,进一步探讨HHV-6感染与神经胶质瘤的关系。本论文分两部分: 第一部分:采用巢式PCR方法对临床收集的40例新鲜神经胶质瘤组织和13例正常脑组织检测人类疱疹病毒的感染情况,结果显示神经胶质瘤组织中HHV-6 DNA的阳性率为42.5% ,与正常脑组织中相比具有显著差异（P=0.03）,在神经胶质瘤中HSV-1阳性率为17.5%,EBV、HCMV阳性率为20%,HHV-7阳性率为7.5%,与正常脑组织相比均没有显著性差异（P值分别为0.121、0.074、0.074、0.501）。同时用免疫组化染色法检测所收集标本的疱疹病毒抗原的表达,结果显示HHV-6早期抗原p41和晚期抗原gp116/64/54阳性率均高于正常脑组织,差异具有统计学意义（P值分别为0.03、0.014）。用HCMV pp65抗体、HSV-1抗体进行免疫组化染色发现神经胶质瘤与正常脑组织相比没有显著性差异（P=0.229;P=0.35）,而HHV-7 pp85在神经胶质瘤和正常脑组织中均未被检测到。用同样的方法对脑膜瘤进行疱疹病毒核酸和蛋白检测,发现脑膜瘤与正常脑组织相比均没有显著性差异,结果表明HHV-6感染和神经胶质瘤具有相关性。第二部分:首先根据论文第一部分巢式PCR检测神经胶质瘤的结果,取HHV-6阳性和阴性的神经胶质瘤组织来分离肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）,随后用磁珠分选浸润性淋巴细胞的CD4+T细胞,分别用HHV-6病毒抗原和对照抗原刺激,根据3H的结果来观察细胞增殖情况的变化。结果发现:HHV-6阳性胶质瘤TIL中的CD4+T细胞对HHV-6病毒抗原刺激后的应答能力与HHV-6阴性胶质瘤TIL中的CD4+T细胞相比较有显著性差异（P=0.001）。而HHV-6阳性胶质瘤TIL中的CD4+T细胞对HHV-6对照抗原刺激后的应答能力与HHV-6阴性胶质瘤TIL中的CD4+T细胞相比较没有显著性差异（P=0.183）。结果表明HHV-6阳性的胶质瘤TIL中的CD4+T细胞对HHV-6病毒抗原的刺激应答能力较HHV-6阴性的胶质瘤弱;而用对照抗原刺激时CD4+T细胞应答能力无明显差异。表明HHV-6阳性胶质瘤肿瘤浸润性淋巴细胞中CD4+T细胞增殖能力减弱可能是胶质瘤致病的免疫学机制之一。综上所述,实验结果表明HHV-6感染与神经胶质瘤的发生发展存在一定联系,并且我们从免疫学角度发现HHV-6阳性胶质瘤肿瘤浸润性淋巴细胞中CD4+T细胞增殖能力减弱可能是胶质瘤致病的免疫学机制之一。CD4+T细胞不仅具有直接抗肿瘤功能,更重要的是辅助激活CD8+T淋巴细胞、建立和维持记忆性免疫应答中的作用。研究结果将为神经胶质瘤的抗病毒治疗提供一条新的思路。

关键词： HHV-6 神经胶质瘤 CD4+T细胞肿瘤免疫

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白芍总苷对MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎影响的实验研究

白芍总苷对MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎影响的实验研究

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作者：丁朝霞南方医科大学

学位级别：硕士

目的与意义系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)是自身免疫介导的,以免疫性炎症为突出表现的弥漫性结缔组织病,被认为是自身免疫性疾病的原型,以血清中出现抗核抗体(antinuclear antibody, ANA)为代表的多种自身抗体和... 详细信息

目的与意义系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)是自身免疫介导的,以免疫性炎症为突出表现的弥漫性结缔组织病,被认为是自身免疫性疾病的原型,以血清中出现抗核抗体(antinuclear antibody, ANA)为代表的多种自身抗体和多器官、多系统受累为主要临床特征。SLE广泛分布于世界各地,全世界的患病率约为17～48/10万,我国在上海纺织女工中进行的一次性大系列调查,显示SLE的患病率为70/10万人,女性则高达113/10万人,略高于西方国家。SLE好发于青年女性,多见于15～45岁,男女之比1：7～9。 SLE累及肾脏引起的肾损害即为狼疮性肾炎(lupus nephritis, LN)。LN是SLE最常见且严重的内脏损害,根据临床表现有70%以上的病人肾脏受累,若根据肾组织病理活检,则几乎所有SLE患者均有肾脏损害,其肾脏病变的严重程度是直接影响SLE预后的重要因素。LN临床表现复杂多样,轻重不一,可表现为蛋白尿、血尿和管型尿,或伴有高血压、水肿等临床肾损害和肾功能减退的实验依据,临床诊治困难,致使病情逐渐进展,最终部分患者可进展为终末期肾病(end-stage renal disease, ESRD),是SLE主要死亡原因之一。 LN的病因和发病机制还不十分清楚,目前认为是在遗传易感的基础上经环境因素(包括感染、日光照射、气候、食物、药物作用等)、内分泌(主要为雌激素水平,这可能是女性发病率明显高于男性的原因之一)诱发,引起机体的免疫调节功能紊乱,出现T、B淋巴细胞的异常活化、细胞因子网络失衡、补体的激活及细胞凋亡等,导致ANA、抗dsDNA抗体、抗Sm抗体等多种病理性自身抗体产生和免疫复合物形成。这些自身抗体主要针对核抗原成分,尤其是针对核DNA产生的抗体,形成抗原抗体复合物沉积在靶器官的血管壁上,引发一系列免疫反应,最终导致全身多个器官损害。自身免疫复合物在肾小球沉积后,激活补体,造成炎细胞浸润、凝血因子活化及各种炎症介质释放,从而导致肾脏损害。现代医学以糖皮质激素、细胞毒药物、多种新方法,如生物制剂、血浆置换、干细胞移植、大剂量免疫球蛋白冲击疗法等治疗LN,取得了一定疗效。但这些药物的复发率高、副作用大、价格昂贵,许多患者往往难以坚持长期治疗,而且由于SLE的复杂性和异质性,单纯干预某一个环节的治疗策略往往难以取得良好效果。而中药是我国医学资源的一大宝库,临床实践证实,中医药具有多部位、多环节和多靶点的整体调节功能,并在提高疗效、改善预后、减少复发、维持病情长期稳定,帮助停用激素或减少激素维持量及副作用等方面有着良好效果,对多基因调控、发病机理复杂、病情多变的LN患者的治疗具有非常重要的意义。白芍总苷(1otal glucosides of paeony, TGP)商品名称帕夫林,作为第一个抗炎免疫调节药被正式批准生产上市,用于类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的临床治疗。TGP是国内外学者经过多年的研究从传统中药毛莨科植物白芍干燥根中提取的有效成分,主要为一组糖苷类物质,包括芍药苷、羟基芍药苷、芍药花苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷等,统称为TGP,其中芍药苷占总苷量的90%以上,是白芍的主要有效成份。药理和临床研究发现,其具有良好的抗炎、镇痛和免疫调节等作用,且不良反应少,患者耐受性良好。在某些自身免疫疾病的早期及缓解期,不宜应用强效免疫抑制剂或激素治疗的病人,TGP是满意的选择。目前已逐渐应用于系统性红斑狼疮、强直性脊柱炎、干燥综合征等自身免疫性疾病的治疗,在自身免疫性疾病治疗中显示出独特应用价值和良好应用前景,但用于LN的临床报道鲜见,实验研究尚未见报道。 MRL/lpr小鼠,由美国Jackson实验室的Murphy和Roths在1978年培育成功,是目前研究SLE和LN最常用的自发性动物模型之一。该鼠含有与细胞自发性程序性死亡有关的Fas基因隐性突变,出现淋巴细胞增生基因(1ymphoproliferation, lpr),自身反应T细胞即有可能逃避胸腺的负选择,大量释放进入外周器官,造成T细胞大量增生,加速了自身免疫反应,出现脾脏及全身淋巴结肿大、多种自身抗体、高丙种球蛋白血症及免疫复合物相关性肾炎,与人类狼疮性肾炎相似。本项研究拟采用MRL/lpr小鼠为实验对象,观察TGP对MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎尿蛋白、血清抗dsDNA抗体、ANA、肾组织病理、脾脏和胸腺指数及一般状况的影响,为进一步探讨TGP的免疫调节作用机理及临床治疗LN提供重要的理论和实验依据。方法与内容 1.实验分组：MRL/Lpr小鼠经检疫、适应性饲养1周后,检测MRL/lpr小鼠抗dsDNA抗体

关键词：狼疮性肾炎白芍总苷 MRL/lpr小鼠自身抗体病理

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不同浓度氟化钠致小胶质细胞的活化及氧化损伤的研究

不同浓度氟化钠致小胶质细胞的活化及氧化损伤的研究

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作者：刘子酉中国医科大学

学位级别：硕士

氟是人体必需的微量元素，位于元素周期表中的第二排第七位，是目前发现的最活泼的非金属元素，但摄入过量会引起氟中毒。我国是地方性氟中毒的高分布国家，除了有饮水型地方性氟中毒外，还有世界上其他国家所没有的燃煤型和饮茶型地方... 详细信息

氟是人体必需的微量元素，位于元素周期表中的第二排第七位，是目前发现的最活泼的非金属元素，但摄入过量会引起氟中毒。我国是地方性氟中毒的高分布国家，除了有饮水型地方性氟中毒外，还有世界上其他国家所没有的燃煤型和饮茶型地方性氟中毒。我国现有病区县1380个，受威胁人口达1.25亿人。除上海外，其余各省、市、自治区均有不同程度的氟中毒流行。氟中毒的主要表现为氟斑牙和氟骨症，还可以对心血管、肾脏、神经系统等多个系统和器官产生影响。在正常情况下一定量的氟可通过与白蛋白结合或以氟离子的形式穿过血脑屏障进入脑组织，并可在脑内蓄积，进而影响脑细胞的正常生理功能。包括损伤神经受体、使神经细胞变形、神经纤维髓鞘脱落、神经递质和酶发生变化，从而产生一系列神经系统的损伤表现，影响记忆和思维能力。近年来，一些现场调查研究发现，氟中毒病区儿童智力水平明显下降，氟对中枢神经系统的损伤受到关注，但其作用机制尚不清楚。　　在中枢神经系统中，小胶质细胞(Microglia,MG)约占胶质细胞的10％～20％，在神经元的生理活动中起着支持、营养、保护及修复等重要功能。MG主要为分枝状和阿米巴状，不同形态代表不同的功能状态。正常生理状况下，MG处于非活化状态，当中枢神经系统损伤、炎症、或受外来物刺激时，可以活化，发挥免疫保护作用。MG的活化有直接和间接两种作用方式。直接作用是受各种刺激后，MG可表达各种抗原，行使抗原提呈细胞的功能;间接作用是MG可分泌神经营养因子、炎性或抑炎性细胞因子、趋化因子等，刺激中枢神经系统(CNS)其它细胞进行细胞间免疫调节。但MG的过度激活可产生大量细胞因子及活性氧产物，其异常激活及其所诱导的炎症反应是多种环境因素所致中枢神经系统损伤的重要因素。因此，本研究以MG为切入点，了解氟是否可诱导MG活化及其所致氧化损伤情况，探讨氟致中枢神经系统损伤的机制。　　材料和方法:　　一、实验方法　　（一）细胞培养　　小胶质细胞系(BV-2)购自中国协和医科大学基础医学细胞中心。细胞常规培养于DMEM高糖培养基（含10％胎牛血清，1×105U/L青、链霉素），5％CO2、37℃条件下培养。待细胞达到70％～80％融合时，以1：3进行传代。　　（二）细胞增殖活力检测　　采用MTT比色法。实验分为对照组和9个染氟组，每组设置三个平行样。用酶标仪测定各孔的光密度(OD)值，细胞活力用还原率表示。还原率越高，表示细胞增殖活力越强。　　（三）IntegrinαM(OX-42)的免疫细胞化学检测　　采用免疫细胞化学方法，观察BV-2细胞活化后特异性标志物OX-42的表达情况。细胞呈棕色者为阳性细胞。实验分组为对照组、染氟组和脂多糖(LPS)阳性对照组。　　（四）细胞氧化损伤检测　　 1、细胞内谷胱甘肽(GSH)含量的测定　　采用二硫代二硝基甲酸比色法应用GSH测定试剂盒检测细胞内GSH含量，同时应用考马斯亮蓝法测定细胞内蛋白浓度以校正细胞内GSH的含量。实验分组为：对照组和染氟组。　　 2、细胞内超氧化物岐化酶(SOD)含量的测定　　采用黄嘌呤氧化酶法用SOD测试盒检测细胞内SOD的含量，同时应用考马斯亮蓝法测定细胞内蛋白浓度以校正细胞内SOD的含量。实验分组为：对照组和染氟组。　　 3、细胞内丙二醛(MDA)含量的测定　　采用硫代巴比妥酸法应用MDA检测试剂盒测定细胞内MDA的含量，同时应用考马斯亮蓝法测定细胞内蛋白浓度以校正细胞内MDA的含量。实验分组为：对照组和染氟组。　　 4、细胞内活性氧(ROS)的相对含量的测定　　采用2’，7’-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)法，用FACScan流式细胞仪于488nm激发波长处检测荧光强弱用来代表ROS的相对含量。实验分组为：对照组和不加染料DCFH-DA探针的对照组，即2个对照组和染氟组。　　 5、细胞内过氧化氢(H2O2)含量的测定　　采用比色法应用H2O2试剂盒检测细胞培养液中H2O2的含量。实验分组为：对照组和染氟组。　　（五）细胞培养液中一氧化氮(NO)含量的测定和细胞内一氧化氮合酶(NOS)含量的测定　　 1、NO含量的测定　　采用硝酸还原酶法应用NO试剂盒检测细胞培养液中NO含量。实验分组为：对照组和染氟组。　　 2、NOS活力的测定　　采用NOS试剂盒检测细胞中NOS活力，同时应用考马斯亮蓝法测定细胞内蛋白浓度以校正细胞内NOS的含量。实验分组为：对照组和染氟组。　　（六）细胞内硝基酪氨酸(NT)的测定　　采用ELISA检测试剂盒检测细胞内NT含量。实验分组为：对照组和染氟组。　　二、统计学处理　　用SPSS13.0统计软件进行统计分析，用Kolmogorov-Smirnov进行数据正态性分析。组间比较

关键词：氟化钠氟中毒小胶质细胞 BV-2细胞活化作用氧化损伤中枢神经损伤损伤机制

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人巨细胞病毒UL128基因编码蛋白的生物学功能研究

人巨细胞病毒UL128基因编码蛋白的生物学功能研究

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作者：任高伟中国医科大学

学位级别：硕士

目的:　　人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是一种普遍存在的疱疹病毒,在人群中感染率为50％-80％。正常人感染HCMV后表现为无症状的隐性或潜伏感染。而一旦人体的免疫机能发生重大变化时(如妊娠、肿瘤、HIV感染、器官移植和... 详细信息

目的:　　人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是一种普遍存在的疱疹病毒,在人群中感染率为50％-80％。正常人感染HCMV后表现为无症状的隐性或潜伏感染。而一旦人体的免疫机能发生重大变化时(如妊娠、肿瘤、HIV感染、器官移植和新生儿等),HCMV即从潜伏感染活化为继发性的增殖感染,引起严重的临床症状甚至致死。同时HCMV感染还可引起间质性肺炎、肝炎、脑炎、视网膜、肾、神经系统、肠胃系统的疾病。随着免疫低下人群患者的增多,HCMV感染及其引发的严重疾病(致盲、致死)日益受到关注。　　 HCMV广泛的致病性是由其病毒感染多种类型细胞的能力决定的。在免疫功能低下人群中HCMV感染的首要目标为内皮细胞和上皮细胞。研究证明HCMVUL131A-128编码蛋白是病毒在内皮细胞中的复制及白细胞的播散过程中的重要决定因子。而我们在研究中发现UL128 ORF(opening reading frame)具有两个大小不同的片段,分别为519bp和642bp,我们将其命名为HCMV UL128-519bp和HCMV UL128-642bp,为了观察两个ORF片段所编码蛋白的功能是否相同及其是否在HCMV UL131A-128编码蛋白感染内皮及上皮细胞过程中发挥着各自不同的作用,故而利用酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选与HCMVUL128-519bp和HCMV UL128-642bp编码蛋白相互作用的蛋白,这将为研究HCMV UL128基因在内皮细胞感染嗜性中所发挥的作用及揭示HCMV先天感染致病机理、解决人巨细胞病毒先天感染的防治、减少先天畸形儿出生等医学问题奠定基础。　　实验材料与方法:　　一、实验材料;标本为中国医科大学附属盛京医院病毒室保存的临床低传代分离株H;酵母表达质粒pGBKT7及pACT2-Human fetus brain librar由武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室肖庚富教授惠赠:构建表达载体的相关试剂(Takara公司);3'RACE及5'RACE试剂盒(Takara公司);酵母双杂交实验相关试剂(Sigma,公司);常用实验设备如BECKMAN台式低温高速离心机、Perkin Elmer PCR循环仪、电穿孔仪(BioRad)、全温振荡培养箱等;常用数据库及分析软件如基因组数据库、蛋白质分析数据库、凝胶成像及扫描分析软件、引物设计软件等。　　二、实验方法;(一)HCMV UL128两种基因片段的构建及鉴定。　　 1、从感染了人巨细胞病毒的人胚肺中提取HCMV总mRNA,应用RT-PCR技术将HCMV mRNA反转录成cDNA,再利用PCR技术以反转录得到的cDNA为模板,从而扩增出UL128基因的两个不同大小的片段。　　 2、将UL128基因的两种片段分别切胶纯化后与载体pGBKT7同时进行双酶切后再次纯化并连接,筛选鉴定重组克隆(pGBKT7-UL128-519bp和pGBKT7-UL128-642bp),测序并分析。　　 (二)酵母双杂交筛选。　　 1、检测重组质粒对酵母的毒性和自激活活性;2、采用醋酸锂法将酵母双杂交系统中的重组诱饵载体一重组质粒pGBKT7-UL128-519bp或pGBKT7-UL128-642bp与人胎脑cDNA文库质粒共同转化至酵母菌株AH109中,涂布于SD/-Leu/-Trn/-His/-Ade/X-a-gal平板上,30℃培养至菌落长出,以X-gal筛选蓝色的阳性克隆。　　 3、回转杂交鉴定:玻璃珠法提取酵母阳性质粒。转化到大肠杆菌中TG1中进行PCR鉴定。提取质粒分别与HCMV UL128-519bp和HCMV UL128-642bp共同转化酵母菌株AH109,转化产物涂布于SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade/X-a-gal,不能生长作为假阳性排除。　　 4、鉴定后的阳性克隆进行测序,经Genbank生物信息学软件进行BLAST分析。本筛选过程重复进行三次。　　结果：　　一、HCMV UL128两种基因片段的构建及鉴定。　　 1、采用特异性引物扩增出HCMV UL128-519bp和HCMV UL128-642bp基因片段,片段长度分别为519bp和642bp,　　 2、并成功将HCMV UL128的两个不同片段克隆到酵母系统的转录结合域pGBKT7上,命名为pGBKT7-UL128-519bp和pGBKT7-UL128-642bp。经SmalⅠ及SalⅠ限制性内切酶进行酶切鉴定,测序分析显示结果与预期一致。测序结果表明融合区域的读码框正确并有正确的方向。经测序证实为HCMVUL128序列且无碱基突变。　　二、酵母双杂交。　　 1、证实pGBKT7-UL128两种质粒对酵母细胞无毒

关键词：人巨细胞病毒 UL128蛋白生物学功能疱疹病毒

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精神分裂症研究的进展

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上海精神医学 2011年第4期23卷 196-199页

作者：王传跃首都医科大学附属北京安定医院 100088

精神分裂症是一种在遗传和神经发育缺陷基础上产生的慢性、致残性精神障碍。基因组学和神经环路分析两大技术的整合,将是揭示精神分裂症生物学病因的最佳策略。在疾病分型和诊断方面,本文重点介绍了修订中的DSM-5的相关观点,就紧张症的... 详细信息

精神分裂症是一种在遗传和神经发育缺陷基础上产生的慢性、致残性精神障碍。基因组学和神经环路分析两大技术的整合,将是揭示精神分裂症生物学病因的最佳策略。在疾病分型和诊断方面,本文重点介绍了修订中的DSM-5的相关观点,就紧张症的某些临床特征作了进一步探讨,并提出"不同的精神病是由脑功能缺陷或受损的程度与范围所决定"的理论假设。在治疗与预防方面,指出早识别、早诊断并尽早进行药物治疗或非药物干预是防止疾病发生发展的关键,甚至能够有效阻止脑萎缩和功能丧失。

关键词：精神分裂症病因诊断治疗

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脂肪因子作为心脑血管疾病防治靶点的研究

脂肪因子作为心脑血管疾病防治靶点的研究

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作者：缪朝玉王培徐添颖李志勇管云枫中国人民解放军第二军医大学

该项目属生物与医药技术领域。心脑血管疾病是人类的第一杀手，严重威胁人类的健康。脂肪是机体最大的、活跃的内分泌器官，可分泌多种生物活性肽/蛋白质，统称为脂肪因子。脂肪因子在调节代谢和脏器功能中具有重要意义，是肥胖流行导... 详细信息

标准号: 1500110273

该项目属生物与医药技术领域。心脑血管疾病是人类的第一杀手，严重威胁人类的健康。脂肪是机体最大的、活跃的内分泌器官，可分泌多种生物活性肽/蛋白质，统称为脂肪因子。脂肪因子在调节代谢和脏器功能中具有重要意义，是肥胖流行导致心脑血管疾病的关键连接分子。该项目主要研究脂肪因子在心脑血管生理稳态和疾病发生中的作用及信号转导机制，并从脂肪因子新的视角，挖掘心脑血管疾病防治的新靶点。该项目在建立计算机化血压遥控测量、脑血流监测、血管功能检测、组织形态分析、活细胞共聚焦观测、高通量筛选等一系列先进技术平台基础上，利用多种自发性疾病模型、实验性疾病模型和基因工程动物模型，主要取得三方面科学发现。第一，找到了血管外膜脂肪调节血管生长的第一个物质分子Visfatin，确定了外膜脂肪释放的Visfatin和血流来源的Visfatin是以烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)活性方式促进血管平滑肌生长；揭示了血管外膜脂肪肾素血管紧张素系统(RAS)是临床重要治疗药物RAS抑制剂发挥作用的新靶位，提出了脂肪因子功能失衡是导致血管疾病发生发展的新机制。第二，首次确认了Visfatin(又名Nampt)可作为脑卒中防治新靶点，阐明了该靶点经Nampt-SIRT1-AMPK新途径对抗细胞凋亡/坏死、经Nampt-SIRT1-mTOR新通路激活缺血早期细胞自噬，从而促进神经细胞存活、发挥抗脑卒中作用；创建了基于Nampt靶点的高通量筛选系统，获得了多个新型活性化合物；确定了Nampt天然酶产物NMN可作为脑卒中防治候选新药。第三，阐明了限食发挥有益作用的新的生物学机制，可通过Leptin受体介导的STAT3通路，使中枢肥胖基因FTO表达下调，从而减轻体重、减少脂肪、改善胰岛素敏感性，为模拟限食延缓心脑血管疾病提供了新的干预靶点。该项目已在Ann Neurol 2011(IF=11.09)、Autophagy 2012(IF=12.04)、Cardiovasc Res 2009(IF=5.80)、Br J Pharmacol 2012(IF=5.07)等期刊上发表SCI论文16篇，SCI他引288次，单篇最高SCI他引84次，SCI他引超过27次有5篇，入选ESI全球高被引论文2篇。该项目获国家发明专利3项，另有5项专利已公开。许多研究结果、结论已被Nat Med、Lancet、Lancet Neurol、J Clin Invest、PNAS等重要他人研究所验证和引用，并得到了临床医学Lancet、心血管病学Eur Heart J、药理学Trends Pharmacol Sci、代谢领域Annu Rev Nutr、神经生物学Prog Neurobiol等重要专家综述的高度评价。相关理论成果已主编出版《心血管药理学》等专著教材。在国际上，应邀起草长达百页的研究指南；应邀发表编辑部专评；应邀做大会报告多次；应邀撰写专家综述多篇；应邀主编出版"脂肪因子与心脑血管疾病研究前沿"专辑，该专辑联合了美国、德国、希腊等9家实验室。这些有力推动了心脑血管药理学与脂肪生物学的交叉学科发展，并为转化研究奠定了重要基础。该项目在国家杰青项目、973项目结题时均被评为优秀项目，并被推荐为973计划项目重大研究成果。项目负责人获全国巾帼建功标兵、上海领军人才、军队拔尖人才，入选国家教育部创新团队。研究骨干获上海市科技启明星、总后优秀青年科技人才。

关键词：脂肪因子作用机制信号转导机制心血管疾病脑血管疾病防治靶点

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女性肺癌的发生危险度、预后因素及放化疗疗效的研究

女性肺癌的发生危险度、预后因素及放化疗疗效的研究

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肺癌是发病率和死亡率增长最快、对人类健康与生命危害最大的恶性肿瘤之一。近年来，肺癌发病率不断上升，女性肺癌发病率的增加尤为突出。在我国，肺癌的发病率和死亡率占女性恶性肿瘤发病率的第二位，死亡率的第一位。虽经相关临床医... 详细信息

标准号: 1300311571

肺癌是发病率和死亡率增长最快、对人类健康与生命危害最大的恶性肿瘤之一。近年来，肺癌发病率不断上升，女性肺癌发病率的增加尤为突出。在我国，肺癌的发病率和死亡率占女性恶性肿瘤发病率的第二位，死亡率的第一位。虽经相关临床医生和研究者几十年的努力，肺癌患者总的5年生存率在美国不到15﹪，我国则更低。对于早期肺癌，手术切除的金标准地位和良好预后毋庸置疑；但不幸的是，肺癌患者在就诊时有25﹪～30﹪已是局部晚期，40﹪～50﹪已有恶性胸水或远处转移病灶，从而失去了外科手术和多学科根治的最佳时机。对于不能手术的晚期肺癌患者，姑息性放化疗是最主要的治疗手段。本课题组从1999年开始，先后承担美国中华医学基金项目（CMB项目）、国家自然科学基金项目、辽宁省自然科学基金项目及辽宁省高等学校重点实验室研究项目及美国NCI合作项目等课题。本课题首先从环境暴露因素和重要DNA损伤修复基因单核苷酸多态性与非吸烟女性肺癌发生危险度的关系、DNA损伤修复基因单核苷酸多态性和放化疗等因素对非吸烟女性肺癌预后的影响以及DNA损伤修复能力与肺癌危险性的关系等多个角度，探讨影响女性肺癌发生危险度及预后的因素。结果发现，烹饪油烟暴露、既往肺部良性疾病史、ERCC2基因Lys751Gln及XRCC1基因Arg399Gln和T-77C单核苷酸多态性会影响非吸烟女性肺癌的发生危险度，而且交互作用分析显示，女性肺癌发生过程中XRCC1 399Gln等位基因的基因型与油烟暴露有明显的交互作用、ERCC2基因751位点携带风险型等位基因Gln与油烟暴露存在协同作用即携带至少一个751Gln等位基因且有油烟暴露者患肺癌的危险度升高；ERCC1基因Asn118Asn和XRCC1基因Arg399Gln单核苷酸多态性及放化疗治疗是影响非吸烟女性肺癌疗效及预后的重要因素；肺癌患者的DNA修复能力显著低于正常对照且DNA修复能力与暴露高吸烟量对肺癌发生有交互作用。另外，本课题对肺癌的临床治疗的有效性进行了系统评价meta分析，在循证治疗的基础上评估了铂类抗癌药的临床疗效及有效组合，结果提示同步化放化疗治疗可显著性延长肺癌患者生存时间并提高治疗有效率，这为肺癌患者的临床治疗确定了指导原则。第三，本课题探索了线性判别模型结合支持向量机方法在肺癌基因表达数据分析中的应用，发现改进的判别分析方法尤其是收缩线性判别分析在肿瘤分类判别方面具有良好的表现，优于传统线性判别分析；在机器学习方法中，支持向量机（SVM）方法由于BP人工神经网络（BP-ANN）；在判别分析中加入先验信息能够有效提高判别分析能力，降低基因表达数据中噪声的影响；基因表达中结合生物学功能在一定程度上能够提高基因表达聚类分析的准确性和解释性，具有一定实际应用意义。本课题还针对既往女性肺癌病例对照研究调查资料评价其有效性及准确性，结果调查表内不同项目的多次调查一致率在88.39﹪和99.11﹪之间，Kappa值介于0.56～0.92之间，提示大部分调查项目的一致性较好。本课题研究结果已发表论文80余篇，其中SCI收录16篇，仅本次限定申报的10篇代表性论文近3年被他引25次，成果还多次在国内外学术会议上交流并进行专题报告。该研究结果创新性强，具有相当高的学术价值，达到了国际同类研究的先进水平，为深入研究非吸烟女性肺癌的发生发展机制和开展有效防治奠定了基础，对肺癌高危个体的预防有一定的预警作用。

关键词：女性肺癌发生危险度预后因素姑息性放化疗疗效

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基于细胞免疫调节的类风湿关节炎发病机制研究

基于细胞免疫调节的类风湿关节炎发病机制研究

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作者：焦志军王文红许化溪苏兆亮徐岷王胜军李晶陈艳尤海燕陈蕾汪毅江苏大学附属医院

本成果属于医药卫生领域、临床医学/风湿病学与自体免疫学方向。类风湿关节炎(RA)是以慢性多关节滑膜炎,骨及软骨破坏为主要特征的全身性自身免疫性疾病。在我国是一种常见病、多发病,有“不死的癌症”之称。明确类风湿性关节炎发病... 详细信息

标准号: 1400190751

本成果属于医药卫生领域、临床医学/风湿病学与自体免疫学方向。类风湿关节炎(RA)是以慢性多关节滑膜炎,骨及软骨破坏为主要特征的全身性自身免疫性疾病。在我国是一种常见病、多发病,有“不死的癌症”之称。明确类风湿性关节炎发病的具体机制,在此基础上发展行之有效的免疫治疗手段,具有极其重要的理论和应用价值。本项目在两项国家自然科学基金及多项省市级课题的资助下,着重围绕近年来新发现的两类功能性T细胞亚群：调节性T细胞(Treg)与Th17细胞在关节炎患者及小鼠动物模型中分布特征,以及与这两类细胞功能调节相关的关键信号途径展开一系列的基础与临床研究。研究结果经来自香港大学、上海交通大学、南京医科大学及南京大学等单位的专家共同鉴定,总体水平处于国内领先。主要内容及创新点如下：临床研究发现,RA患者外周血促炎性的Th17细胞明显增多,而具有抑制功能的CD4+CD25+FoxP3+Treg明显降低。通过分析每例患者Th17/Treg比值发现,RA外周血中存Th17/Treg平衡的失调,该比例可作为评价疾病状态的指标之一。RA患者T细胞Notch 2、Notch 3及Notch 4表达量增加,其中Notch 3主要表达于活化的T细胞。活动期RA患者T细胞内Notch信号呈活化状态。利用胶原诱导的关节炎小鼠(CIA)进行相关机制研究发现,：CIA小鼠脾脏及引流淋巴结中Th17细胞的比例明显增多,血清中IL-17的含量也明显高于正常对照组。体外胶原特异性增殖体系中分泌Th1细胞和Th17细胞百分比明显增加,Treg百分比未见明显变化。Notch信号阻断剂DAPT和Notch3的单克隆抗体均能抑制胶原特异性T细胞增殖及向Th1和Th17方向分化。CIA小鼠IL-25水平显著升高,尤其是疾病高峰期。在高峰期,IL-25与IL-17呈负相关。此外,IL-25与Th1相关细胞因子IFN-γ之间无相关性,而与Th2相关细胞因子IL-4之间呈正相关。 RA患者血浆中可检测到高水平的GITRL,且与这些患者的DAS28评分呈正相关。CIA小鼠外周淋巴器官和关节组织中GITRL表达均增加。在CIA小鼠体内应用重组的GITRL可促进Th17细胞扩增并加剧关节炎发生与发展。同时发现,GITRL蛋白可在体内外促进正常小鼠Th17细胞扩增。具有促炎作用的HMGB1在RA患者外周血单个核细胞中的mRNA表达及血浆中的浓度均明显升高。重组的HMGB1刺激小鼠CD4+T细胞可诱导IL-17和RORγt的mRNA表达升高及Th17细胞的扩增。总之,通过本项目的研究,首次在类风湿关节炎发病机制中提出Th17/Treg平衡失调理论,同时发现诸多信号途径及其相关细胞因子、炎性分子如：Notch信号、GITR信号途径及HMGB1、IL-25参与调节Th17/Treg平衡,为深入且全面研究RA的发病机制及发展基于干预Notch、GITR信号途径及炎症相关分子的免疫治疗提供了重要理论依据。该项目共发表英文研究论文18篇,其中已被SCI收录论文11篇,总影响因子35.921,被引用42次,其中他引33次,自引9次。发表中文研究论文31篇,其中CNKI收录28篇。会议交流论文5篇。获江苏省医学新技术引进奖一等奖和二等奖各一次(2010,2008)。获镇江市科技论文和专著二等奖(2009)及镇江市科技进步奖三等奖(2010)。举办江苏省级继续项目(项目编号：2008-11-11-00006)。成功申办国家级继续项目一项(自身免疫性基础研究与实验室诊断进展,编号：2012-11-00-081)。

关键词：细胞免疫调节类风湿关节炎发病机制

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