检索结果-内蒙古大学图书馆

人卵巢cDNA文库中与蛋白激酶Wee1B相互作用的候选分子的筛选及其调控作用

吉林大学学报（医学版） 2016年第5期42卷 866-871,I0001页

作者：刘超任丽莉栾治东孟智超刘乙蒙肖建英锦州医科大学基础医学院发育生物学教研室辽宁锦州121001 锦州医科大学基础医学院神经生物学教研室辽宁锦州121001 锦州医科大学基础医学实验教学中心辽宁锦州121001 锦州医科大学教务处辽宁锦州121001

目的:利用酵母双杂交系统筛选与蛋白激酶Wee1B相互作用的新候选分子,并用生物信息学方法分析其与Wee1B相互作用是否能调控小鼠受精卵早期发育。方法:以pcDNA3.1/V5 His TOPO Wee1B WT质粒为模板构建pGBKT7Wee1B诱饵质粒;制备酵母感受态... 详细信息

目的:利用酵母双杂交系统筛选与蛋白激酶Wee1B相互作用的新候选分子,并用生物信息学方法分析其与Wee1B相互作用是否能调控小鼠受精卵早期发育。方法:以pcDNA3.1/V5 His TOPO Wee1B WT质粒为模板构建pGBKT7Wee1B诱饵质粒;制备酵母感受态细胞,将诱饵质粒pGBKT7Wee1B转化酵母感受态细胞后分别接种SD/Trp(SDO)、SD/Trp/XαGal(SDO/X)和SD/Trp/XαGal/AbA plates(SDO/X/A)培养板检测其对酵母的毒性和自身激活能力,利用Western blotting法检测pGBKT7 Wee1B在酵母中的表达情况;将含有pGBKT7 Wee1B的酵母感受态细胞与人卵巢cDNA文库相融合,利用酵母双杂交系统筛选出阳性克隆,提取阳性克隆的酵母质粒转化大肠杆菌后进行测序鉴定,最终再经酵母重新转化验证。在GenBank中对其进行BLAST分析,根据基因注释推断其在小鼠受精卵发育过程中可能发挥的作用。结果:双酶切鉴定和测序分析,pGBKT7 Wee1B诱饵质粒构建成功。将该质粒转入酵母感受态细胞后在SDO/X/A平皿上无克隆。将pGBKT7Wee1B和pGBKT7空载体转入酵母感受态细胞中,菌液接种于SDO平皿,2个SDO平皿上克隆都均匀生长。从工作板SDO和阳性对照板上挑取阳性克隆扩大培养,裂解细胞提取蛋白,Western blotting法检测示pGBKT7Wee1B对应位置出现条带。含诱饵质粒的酵母菌与人卵巢cDNA文库融合,PCR验证融合后的阳性克隆质粒有插入片段。将质粒测序并经BLAST分析筛选出9个与Wee1B蛋白激酶存在相互作用的蛋白,生物信息学分析可能与小鼠卵母细胞发育和受精卵发育密切相关的蛋白。结论:利用酵母双杂交系统从人卵巢cDNA文库中筛选出9个与Wee1B蛋白激酶相互作用的蛋白,这些筛选蛋白可能通过与Wee1B相互作用调控小鼠卵母细胞成熟和受精卵早期发育。

关键词：蛋白激酶 Wee1B 蛋白相互作用酵母双杂交小鼠受精卵

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紫草素对脑胶质瘤干细胞干性维持的相关研究

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中国药理学通报 2016年第1期32卷 49-54页

作者：刘静笪祖科李振薛一雪刘丽波王萍刘云会中国医科大学附属盛京医院第一神经外科辽宁沈阳110004 中国医科大学基础医学院神经生物学教研室辽宁沈阳110001

目的研究紫草素对脑胶质瘤干细胞(GSCs)干性维持的影响及相关分子机制。方法应用免疫荧光方法对分离提取的细胞球进行干细胞表面标志性分子CD133和nestin的检测;紫草素(2μmol·L-1)处理GSCs 12、24和48 h后,光镜下观察紫草素对GSC... 详细信息

目的研究紫草素对脑胶质瘤干细胞(GSCs)干性维持的影响及相关分子机制。方法应用免疫荧光方法对分离提取的细胞球进行干细胞表面标志性分子CD133和nestin的检测;紫草素(2μmol·L-1)处理GSCs 12、24和48 h后,光镜下观察紫草素对GSCs悬浮细胞球形态的影响;采用亚球形成实验评估紫草素对GSCs自我更新能力的影响;应用Western blot方法检测紫草素作用下GSCs干细胞标志分子CD133的表达变化,同时检测紫草素作用下,GSCs中PI3K、p-PI3K、Akt和p-Akt的表达变化;联合应用胰岛素样生长因子-1(IGF-1)后检测紫草素作用下,GSCs干性维持的改变。结果分离提取的细胞球表面CD133和nestin呈阳性表达;紫草素能够明显抑制GSCs悬浮细胞球的形态和二代细胞球的形成,同时能够降低CD133的表达;与对照组相比,紫草素作用下,GSCs中PI3K和Akt的表达无变化,pPI3K和p-Akt的表达呈现药物时间依赖性明显下降;此外,IGF-1能够明显改善紫草素对GSCs干性维持的抑制作用。结论紫草素能够明显抑制GSCs的干性维持,其机制可能与PI3K/Akt信号通路有关。

关键词：紫草素胶质瘤干细胞干性维持 PI3K/Akt信号通路胰岛素样生长因子-1 自我更新能力

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microRNA-424-5p对人胃癌细胞SGC-7901自噬的影响及机制

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解剖科学进展 2017年第1期23卷 1-5页

作者：刘明辉郑永绵张键刘丽波鞍山市中心医院普外科中国医科大学第六临床学院普外科辽宁鞍山114001 中国医科大学基础医学院神经生物学教研室辽宁沈阳110122

目的研究microRNA-424-5p(miR-424-5p)对人胃癌细胞SGC-7901自噬的影响及可能机制。方法培养人正常胃黏膜上皮细胞GES和人胃癌细胞SGC-7901,应用实时定量PCR方法检测miR-424-5p的表达水平;应用Lipofectamine LTX试剂将化学合成的miR-424-5p agomir和miR-424-5p antagomir转染人胃癌细胞SGC-7901,验证转染效率后应用MTT方法检测细胞活力;应用免疫荧光法检测自噬标记物微管相关蛋白轻链-3(LC3)和自噬降解底物p62/SQSTM1在SGC-7901细胞的分布;应用Western blot方法检测LC3-Ⅱ、p62/SQSTM1和自噬相关蛋白Beclin1的蛋白表达水平。结果 miR-424-5p在人胃癌细胞SGC-7901中呈低表达,miR-424-5p过表达显著抑制人胃癌细胞SGC-7901的细胞活力,miR-424-5p表达沉默的作用效果与之相反。miR-424-5p过表达后自噬标记物LC3在SGC-7901细胞的胞浆内呈点状分布,荧光表达显著增强,并且LC3-II的蛋白表达水平显著上调,同时伴有自噬降解底物p62/SQSTM1在细胞浆内荧光表达显著减弱,蛋白表达下调,此外,自噬相关蛋白Beclin1的蛋白表达水平显著上调;miR-424-5p表达沉默的作用效果与之相反。结论 miR-424-5p过表达明显抑制人胃癌细胞SGC-7901的细胞活力,诱导细胞发生自噬,其机制之一可能与自噬相关蛋白Beclin1上调有关。

关键词： miR-424-5p 人胃癌SGC-7901细胞自噬 LC3 p62／SQSTM1 Beclin1

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ApoE4在U87细胞中可增加GSK-3β的表达及Tau的磷酸化

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南方医科大学学报 2016年第7期36卷 904-908页

作者：何颜结卫佩如伍巧燕张馨宇张兴梅刘晓加王方南方医科大学基础医学院神经生物学教研室广东广州510515 南方医科大学神经内科广东广州510515 南方医科大学南方医院第一临床医学院广东广州510515

目的探讨Apo E4与GSK-3β及Tau蛋白超磷酸化之间的关系,为研究Apo E4在阿尔茨海默病(AD)中的作用机制提供实验依据。方法分别将对照质粒载体p IRES-EGFP、重组质粒Apo E4/p IRES-EGFP和Apo E3/p IRES-EGFP转染U87脑星形胶质细胞系,用免... 详细信息

目的探讨Apo E4与GSK-3β及Tau蛋白超磷酸化之间的关系,为研究Apo E4在阿尔茨海默病(AD)中的作用机制提供实验依据。方法分别将对照质粒载体p IRES-EGFP、重组质粒Apo E4/p IRES-EGFP和Apo E3/p IRES-EGFP转染U87脑星形胶质细胞系,用免疫蛋白印迹法(Western blotting)检测p-Tau/Tau及GSK-3β蛋白水平的变化。在U87细胞中转入干扰Apo E表达的si RNA(Apo E-si RNA)及对照si RNA,检测p-Tau/Tau及GSK-3β蛋白的改变情况。将质粒转染前后及si RNA干扰前后目标蛋白的含量或磷酸化水平的改变进行统计学比较。结果与对照组相比,GSK-3β蛋白水平的相对值分别为:Apo E4组(1.819±0.130,P<0.01,n=3)和Apo E3组(1.336±0.130,P<0.01,n=3),差异具显著差异,且Apo E4和Apo E3组比较也具有显著性差异(P<0.01)。同样,相对于对照组,Apo E4和Apo E3组的磷酸化Tau蛋白(p-Tau)的相对值分别为1.587±0.027(P<0.01,n=3)和1.436±0.026(P<0.01,n=3),均具显著差异;且Apo E4组较Apo E3组的促进作用更强,两组间具显著差异(P<0.01)。此外,用Apo E-si RNA干扰后,U87细胞中GSK-3β的表达和p-Tau水平均较对照组显著降低,分别为0.544±0.058(P<0.001,n=3)和0.474±0.060(P<0.01,n=3)。结论 AD危险因子Apo E4可能通过上调GSK-3β的表达而促进Tau的磷酸化。

关键词：载脂蛋白E 阿尔茨海默病(AD) Tau蛋白糖原合酶激酶3β

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提升科研实验室创新能力的建设

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中国继续医学教育 2017年第19期9卷 25-27页

作者：郭艳尚超马玉继宋荣博朱莉钟鸣中国医科大学附属口腔医院中心实验室辽宁沈阳110002 中国医科大学口腔医学院口腔生物教研室辽宁沈阳110002 辽宁省口腔疾病重点实验室辽宁沈阳110002 中国医科大学基础医学院神经生物学教研室辽宁沈阳110122

科研实验室的创新能力,体现科研实验室的水平和发展潜力。为了进一步构建科学的科技创新体系,不断提升自主创新和社会服务能力,本科研实验室采取多种措施,完善科研实验室创新体系,提升科研实验室成员的科研创新能力,培养中青年科技创新... 详细信息

科研实验室的创新能力,体现科研实验室的水平和发展潜力。为了进一步构建科学的科技创新体系,不断提升自主创新和社会服务能力,本科研实验室采取多种措施,完善科研实验室创新体系,提升科研实验室成员的科研创新能力,培养中青年科技创新领军人才,组建科技创新团队,提高国家自然基金中标数量,提升学校的行业认同度和学术影响力,进一步提高本科研实验室的科研水平,力争在重大科技奖励、国家自然基金项目、产学研一体化方面实现新的突破。

关键词：科研实验室创新能力创新体系创新团队

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科研实验室建设与人才培养研究

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中国继续医学教育 2017年第15期9卷 59-60页

目的人才队伍建设是科研实验室建设成败的关键,人才培养和团队建设是其中的重中之重。方法正视与一流科研实验室差距,开展多方面工作推动实验室人才培养。(1)加强学术水平建设:承办学术会议,加强学术交流;开展学术讲座;建设科研信息数... 详细信息

目的人才队伍建设是科研实验室建设成败的关键,人才培养和团队建设是其中的重中之重。方法正视与一流科研实验室差距,开展多方面工作推动实验室人才培养。(1)加强学术水平建设:承办学术会议,加强学术交流;开展学术讲座;建设科研信息数据库。(2)人才支持计划:有计划地选派科研实验室骨干到国外高水平大学和科研院所学习、交流,为科研实验室长远发展储备优秀人才。(3)培养高层次人才:建设硕博士研究生工作室,规范化培养,因材施教提高学生的实践能力和创新能力。结果上述项目的实施能够促进人才培养和团队建设,完善科研实验室队伍结构,提高科研实验室整体素质、协作精神和发展潜力。结论上述团队建设和人才培养的运行机制,目的明确、效果确实、可行性强,具有推广应用的价值。

关键词：科研实验室人才培养团队建设

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靶向notch1的siRNA对U87-EGFRv Ⅲ胶质瘤细胞株凋亡和放射敏感度的影响

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肿瘤防治研究 2016年第4期43卷 245-248页

作者：寇哲文林水苗张兴梅陈文君彭勇华石玉生南方医科大学基础医学院神经生物学教研室广州510515 南方医科大学南方医院放疗科广州510515

目的探讨靶向notch1的siRNA对过表达EGFRvⅢ的U87胶质瘤细胞株U87-EGFRvⅢ凋亡和放射敏感度的影响。方法利用脂质体转染合成的si RNA转染U87-EGFRvⅢ细胞。用RT-PCR和免疫印迹法来分别检测notch1的蛋白和m RNA的表达水平;用AnnexinⅤ-FI... 详细信息

目的探讨靶向notch1的siRNA对过表达EGFRvⅢ的U87胶质瘤细胞株U87-EGFRvⅢ凋亡和放射敏感度的影响。方法利用脂质体转染合成的si RNA转染U87-EGFRvⅢ细胞。用RT-PCR和免疫印迹法来分别检测notch1的蛋白和m RNA的表达水平;用AnnexinⅤ-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡情况;用平板集落形成实验检测转染后细胞的放射敏感度。结果合成的notch1 siRNA可有效抑制notch1在m RNA和蛋白水平的表达(P<0.05)。转染notch1 si RNA作用后细胞凋亡率比对照组明显增加(P<0.05)。平板集落形成实验初步证明notch1 siRNA可提高U87-EGFRvⅢ细胞的放射敏感度。结论下调notch1基因可促进U87-EGFRvⅢ细胞的凋亡和提高其放射敏感度,为研究notch1基因在肿瘤放疗中的作用及其靶向联合治疗胶质瘤提供基础。

关键词： notch1 放射敏感度 EGFRⅢ型突变体小干扰RNA 胶质瘤

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新型Rho激酶抑制剂WAR5对阿尔茨海默病神经保护作用的研究

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中国药物与临床 2017年第3期17卷 309-312页

作者：周荣王晓晖王丽尉杰忠马存根山西医科大学基础医学院病理教研室太原030001 山西大同大学脑科学研究所山西中医学院"2011"协同创新中心/神经生物学研究中心

目的探讨腹腔注射新型Rho激酶抑制剂WAR5对阿尔茨海默病(AD)的神经保护作用。方法16只APP/PS1双转基因小鼠随机分成2组,即AD模型组、WAR5组,每组各8只。应用Morris水迷宫实验检测各组小鼠行为学改变,蛋白质印迹法检测各组小鼠脑组织胶... 详细信息

目的探讨腹腔注射新型Rho激酶抑制剂WAR5对阿尔茨海默病(AD)的神经保护作用。方法16只APP/PS1双转基因小鼠随机分成2组,即AD模型组、WAR5组,每组各8只。应用Morris水迷宫实验检测各组小鼠行为学改变,蛋白质印迹法检测各组小鼠脑组织胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和神经营养素(NT)-3蛋白表达,免疫荧光染色检测各组小鼠脑组织GDNF和NT-3阳性表达。结果经WAR5治疗的小鼠在认知功能上优于AD组,同时WAR5能增加中枢神经系统中GDNF和NT-3等神经营养因子的表达。结论腹腔注射WAR5对AD鼠具有良好的治疗效果,可更好地改善AD模型小鼠的运动能力和空间记忆能力,所以WAR5可能成为治疗AD的一个很好的策略。

关键词：阿尔茨海默病,老年性痴呆腹腔注射 WAR5化合物 Rho激酶抑制剂神经营养

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从多潜能干细胞诱导成神经前体细胞及其分化探讨

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解剖学报 2016年第1期47卷 18-22页

作者：武赟周舒雅徐群渊山西中医学院基础医学院解剖学教研室山西晋中030619 首都医科大学神经生物学系北京100069 中国科学院动物研究所北京100101

目的探讨诱导多潜能干细胞在体外分化为神经前体细胞。方法采用N2B27作为选择培养基,多步法贴壁培养把诱导多潜能干细胞诱导为神经前体细胞。结果免疫荧光染色发现,该细胞神经干细胞的标记物巢蛋白阳性,有极个别的β-微管蛋白Ⅲ(β-Tub-... 详细信息

目的探讨诱导多潜能干细胞在体外分化为神经前体细胞。方法采用N2B27作为选择培养基,多步法贴壁培养把诱导多潜能干细胞诱导为神经前体细胞。结果免疫荧光染色发现,该细胞神经干细胞的标记物巢蛋白阳性,有极个别的β-微管蛋白Ⅲ(β-Tub-Ⅲ)阳性细胞。在分化培养基内培养7d后,β-Tub-Ⅲ阳性细胞增多。结论本实验初步表明,诱导多潜能干细胞在体外可以被诱导为有一定神经特征的神经前体细胞,该细胞有望用于细胞移植治疗缺血性脑损伤。

关键词：诱导多潜能干细胞神经前体细胞分化细胞培养免疫荧光小鼠

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小鼠免疫相关GTP酶Irgm基因家族的研究进展

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国际免疫学杂志 2016年第1期39卷 76-79页

作者：刘禹汐刘传亮王菁华哈尔滨医科大学基础医学院神经生物学教研室 150081

免疫相关GTP酶（IRG）基因家族与抗感染和炎症免疫过程有关.小鼠Irgm1、Irgm2与Ir-gm3基因编码的蛋白参与细胞自噬、Colon氏病等发生发展,并在固有免疫应答中发挥重要作用.了解Irgm1、Irgm2与Irgm3基因的表达、功能等情况以及Irgm1、Ir... 详细信息

免疫相关GTP酶（IRG）基因家族与抗感染和炎症免疫过程有关.小鼠Irgm1、Irgm2与Ir-gm3基因编码的蛋白参与细胞自噬、Colon氏病等发生发展,并在固有免疫应答中发挥重要作用.了解Irgm1、Irgm2与Irgm3基因的表达、功能等情况以及Irgm1、Irgm2与Irgm3基因编码的蛋白参与免疫过程的机制,有利于免疫系统疾病的治疗.

关键词： Irgm1 Irgm2 Irgm3 固有免疫应答

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