检索结果-内蒙古大学图书馆

中国运动医学杂志 2021年第12期40卷 987-993页

作者：朱琛煜陈熙黄媚刘莉菲仝晓阳邹军上海体育学院运动科学学院上海200438 温州医科大学体育科学学院温州325035

骨骼是一种高度组织化的人体承重器官,并通过骨重塑来使其结构特性适应机械应力的变化。成骨细胞(OB)的骨形成功能和破骨细胞(OC)的骨吸收功能在维持骨重塑过程中发挥着重要作用。研究表明,OB和OC可以通过细胞间接触、细胞因子和细胞外... 详细信息

骨骼是一种高度组织化的人体承重器官,并通过骨重塑来使其结构特性适应机械应力的变化。成骨细胞(OB)的骨形成功能和破骨细胞(OC)的骨吸收功能在维持骨重塑过程中发挥着重要作用。研究表明,OB和OC可以通过细胞间接触、细胞因子和细胞外基质相互交流来维持机体骨稳态。而该通讯作用失调导致的骨稳态失衡则会引起骨质疏松、骨硬化症等骨代谢疾病,故调节OB与OC之间的通讯机制对骨生物细胞学至关重要。机械应力是调节骨重塑过程的一个重要因素,而OB和OC的耦合活动可能在该调控中具有重要作用。目前研究提示,机械应力下OB与OC之间的交流主要以旁分泌可溶性因子的形式进行,OB通过分泌巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)等因子调节OC的活动,而OC可能以分泌细胞外囊泡的形式影响OB的活性。本文通过总结关于OB-OC通讯以及机械应力参与的调控作用的相关报道,为骨代谢疾病的治疗提供新的思路。

关键词：机械应力成骨细胞破骨细胞细胞通讯

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合并HIV感染的神经梅毒及非神经梅毒患者临床特征比较

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中国艾滋病性病 2021年第12期27卷 1418-1421页

作者：杨慧勤何凯茵柯迎春许飞龙梁志伟李凌华陈谐捷广州医科大学附属市八医院感染病中心广州510440

目的对比合并HIV的神经梅毒及非神经梅毒患者临床及实验室检查结果,为提高诊断水平提供依据。方法将广州医科大学附属市八医院收治的HIV合并梅毒、进行了脑脊液检查的住院患者分为HIV合并神经梅毒组(简称神经梅毒组)与HIV合并非神经梅毒... 详细信息

目的对比合并HIV的神经梅毒及非神经梅毒患者临床及实验室检查结果,为提高诊断水平提供依据。方法将广州医科大学附属市八医院收治的HIV合并梅毒、进行了脑脊液检查的住院患者分为HIV合并神经梅毒组(简称神经梅毒组)与HIV合并非神经梅毒组(简称非神经梅毒组),对比分析其一般情况、症状体征、实验室检查、脑脊液检查及影像学检查结果。结果神经梅毒组患者33例,非神经梅毒组患者48例,两组在一般情况、HIV确诊时间、ART、合并感染率、血HIV-RNA阳性率、既往梅毒治疗情况的差异均无统计学意义。神经梅毒组血TRUST滴度≥1∶16的比例显著高于非神经梅毒组(78.8%vs.47.9%,P<0.05),神经梅毒组多经异性性行为感染。神经梅毒组与非神经梅毒组患者脑脊液白细胞数分别为26.5×10^(6)/L及5.5×10^(6)/L。神经梅毒组脑脊液蛋白数显著高于非神经梅毒组(786 mg/L vs.362 mg/L,P<0.05),有神经系统阳性症状体征的比例显著高于非神经梅毒组(84.8%vs.45.8%,P<0.05)。神经梅毒组36.4%的患者影像学检查有异常,分别为低密度感染灶(15.2%)、缺血梗死灶(15.2%)、脑白质病变(3.0%)、脑萎缩(3.0%)。结论与HIV合并梅毒比较,HIV合并神经梅毒患者血TRUST滴度、脑脊液白细胞数、脑脊液蛋白数、有神经系统阳性症状体征的比例更高。同时部分患者头颅影像学检查有异常。

关键词：艾滋病病毒神经梅毒临床特点脑脊液

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线粒体动力学调控对肾缺血-再灌注损伤的影响

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器官移植 2021年第2期12卷 226-231页

作者：闫晓冬王强河北北方学院河北张家口075000 首都医科大学附属北京友谊医院

缺血-再灌注损伤(IRI)是肾移植术后早期移植肾功能障碍的主要原因之一。我国器官移植已经进入公民逝世后器官捐献时代,供者心肺复苏风险增加、低灌注时间和热缺血时间延长等可导致移植肾IRI,影响受者和移植肾的近期及远期临床结局。在IR... 详细信息

缺血-再灌注损伤(IRI)是肾移植术后早期移植肾功能障碍的主要原因之一。我国器官移植已经进入公民逝世后器官捐献时代,供者心肺复苏风险增加、低灌注时间和热缺血时间延长等可导致移植肾IRI,影响受者和移植肾的近期及远期临床结局。在IRI等应激状态下,以线粒体分裂和融合的动态调控为主要表现的线粒体动力学机制对线粒体的生物学功能具有重要影响,其损伤引发的细胞凋亡是导致急性肾损伤的关键环节,主要表现为线粒体动力学调控机制失调。本文综述了线粒体动力学调控对肾IRI影响机制的研究进展,以期为改善肾移植临床结局提供参考。

关键词：缺血-再灌注损伤(IRI) 肾移植线粒体分裂线粒体融合分裂蛋白(Fis)1 融合蛋白(Mfn) 动力相关蛋白(Drp)1 视神经萎缩症蛋白(OPA)1

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贺氏火针治疗脑卒中恢复期痉挛疗效观察

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现代中西医结合杂志 2022年第12期31卷 1640-1643页

作者：王雪飞温雅丽杜鑫李彬首都医科大学附属北京中医医院北京100010

目的观察贺氏火针治疗脑卒中恢复期痉挛患者的临床疗效。方法选择2019年1月—2020年12月首都医科大学附属北京中医医院针灸科收治的脑卒中恢复期痉挛患者120例,采用随机、对照、单盲(评价者盲)方法将患者分为治疗组和对照组,每组60例。... 详细信息

目的观察贺氏火针治疗脑卒中恢复期痉挛患者的临床疗效。方法选择2019年1月—2020年12月首都医科大学附属北京中医医院针灸科收治的脑卒中恢复期痉挛患者120例,采用随机、对照、单盲(评价者盲)方法将患者分为治疗组和对照组,每组60例。治疗组给予贺氏火针治疗,对照组给予常规针刺治疗,2组均治疗4周。观察比较2组治疗前及治疗2周、4周和12周后改良Ashworth量表(MAS)评分、简氏Fugl-Meyer评定量表(FMA)评分、Barthel指数、脑卒中专用生活质量量表(SS-QOL)评分及治疗12周后肌张力情况。结果2组治疗4周后MAS评分、Barthel指数评分、SS-QOL评分均较治疗前明显增高(P均<0.05),FMA评分与治疗前比较差异无统计学意义(P均>0.05)。2组各项评分比较差异均无统计学意义(P均>0.05);2组治疗12周后MAS评分、FMA评分、Barthel指数评分、SS-QOL评分均较治疗前明显增高(P均<0.05),且治疗组各项评分均明显高于同期对照组(P均<0.05)。治疗12周后,治疗组肌张力明显增高(Ashworth评分≥3分)患者比例为17.9%(10/56),对照组为35.2%(19/54),治疗组明显低于对照组(P<0.05)。结论贺氏火针可以降低脑卒中恢复期患者肢体痉挛程度,促进运动功能恢复,有效改善患者的生活质量。

关键词：火针脑卒中恢复期痉挛

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自体骨髓源性内皮祖细胞移植治疗缺血性脑卒中的临床研究

自体骨髓源性内皮祖细胞移植治疗缺血性脑卒中的临床研究

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作者：方杰南方医科大学

学位级别：博士

研究背景:以脑梗塞为代表的缺血性脑卒中是中枢神经系统(central nerve system,CNS)的常见病和多发病,多数存活者会遗留运动、感觉、认知等功能障碍。早期溶栓公认有效,但由于限于严格的时间窗及出血等风险,使之应用受限;且至今为止,对... 详细信息

研究背景:以脑梗塞为代表的缺血性脑卒中是中枢神经系统(central nerve system,CNS)的常见病和多发病,多数存活者会遗留运动、感觉、认知等功能障碍。早期溶栓公认有效,但由于限于严格的时间窗及出血等风险,使之应用受限;且至今为止,对遗留的CNS功能障碍并无确切疗效的治疗方法,尤其是慢性期脑梗塞所致的CNS功能障碍,严重危害脑卒中患者的生存质量,给患者个人、家庭和社会都带来了沉重的经济负担和心理负担,亟需探寻新的、安全有效的治疗策略。随着干细胞研究的不断深入,我们发现骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)来源的内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPCs)具有分化为成熟内皮血管的功能,以及参与到血管新生、促进血脑屏障(brain blood barrier,BBB)及神经功能修复的潜力,是极具治疗应用前景的干细胞疗法种子细胞。本课题在团队前期干细胞有效性、安全性实验研究均获得一定成果基础上,以严格遵循临床试验研究规范为前提,对急、慢性缺血性脑卒中临床志愿者干细胞移植治疗进行疗效与安全性评估,旨在为干细胞临床神经医学转化提供有意义数据支持及可借鉴规范流程、可行的评估指标依据。研究内容:1.探讨自体骨髓源性EPCs在治疗急性期脑梗塞中的安全性和初步疗效。2.探讨自体骨髓源性EPCs在治疗慢性期脑梗塞中的安全性和初步疗效。研究方法:第一部分1.选取符合纳入标准的急性期缺血性脑卒中(发病<7天)患者18例,采用分层区段随机化法随机分入EPCs组、BMSCs组(阳性对照)和安慰剂组,每组各6例,入组患者均接受缺血性脑卒中后的二级预防等基础治疗;2.基线评估:患者入组后进行常规的实验室生化检查、心电图、心脏彩超和头颅磁共振。功能评估包括mRS、NIHSS、Barthel Index和SSS量表;***组和BMSCs组患者在病程第7天提取骨髓,进行体外培养和扩增后经外周静脉回输体内(2.5×106/kg体重/次,隔2周一次、共两次),安慰剂组只回输相同体积的生理盐水;4.在移植后第3、6、12和48个月对基线指标进行随访,并记录与试验可能相关的不良事件。第二部分1.选取符合纳入标准的慢性期缺血性脑卒中(发病>6个月)患者14例,分为EPCs组和对照组,每组各7例,入组患者均接受缺血性脑卒中后的二级预防等基础治疗;2.基线评估:患者入组后进行常规的实验室生化检查、心电图、心脏彩超和头颅磁共振。功能评估包括 mRS、NIHSS、Barthel Index、SSS、Fugl-Meyer量表***组患者进行基线评估后提取骨髓,进行体外培养和扩增后经外周静脉回输体内(2.5×106/kg体重/次,隔2周一次、共两次);4.在移植后次日及移植后第3、6、12和24个月对基线指标进行随访,并记录与试验可能相关的不良事件。研究结果:***移植治疗急性期缺血性脑卒中的不良事件(0例)明显少于BMSCs组(1例)和安慰剂组(4例),差异有统计学意义(P<0.05),但48个月死亡率无明显差异(P>0.05);随访第3个月时,EPCs组的SSS评分(47.20±2.96)明显高于BMSCs组(29.00±2.04)和安慰剂组(36.80±4.19),差异有统计学意义(P<0.05),其余时间点功能评分无显著差异(P>0.05)。***移植治疗慢性期缺血性脑卒中发生的不良事件发生率(1例)与安慰剂组(4例)差异无统计学意义(P>0.05),两组在到达24个月随访期时均无死亡;EPCs组在随访3月时的Barthel Index评分(92.5±6.12)、NIHSS评分(5.00±2.68)优于安慰剂组(分别为70.00±15.17、7.17±0.98),差异有统计学意义(P<0.05),但安慰剂组Fugl-Meyer评分(171±28.01)优于EPCs组(168.83±13.00),差异有统计学意义(P<0.05)。12和24个月时EPCs组Fugl-Meyer评分(分别为179±15.86和178.33±16.22)均优于安慰剂组(分别为169.83±32.39和167.83±32.55),差异有统计学意义(P<0.05)。其余时间点功能评分无显著差异(P>0.05)。研究结论:1.在未增加死亡率的前提下,自体骨髓源性EPCs移植治疗急性期缺血性脑卒中具有较高的安全性,并且在3个月时表现出更佳的功能恢复。2.在未增加死亡率和不良反应发生率的前提下,自体骨髓源性EPCs移植治疗慢性期缺血性脑卒中表现出更佳的功能恢复效果,并持续到24个月。

关键词：内皮祖细胞移植缺血性脑卒中临床研究

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有序导电纳米纤维支架促进骨髓间充质干细胞向施万细胞分化及其在组织工程修复周围神经缺损的应用

有序导电纳米纤维支架促进骨髓间充质干细胞向施万细胞分化及其在...

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作者：胡晓芳南方医科大学

学位级别：博士

周围神经损伤是一个世界性的临床问题,常由创伤或手术引起,可导致部分或全部的运动功能和感觉知觉丧失,甚至终身残疾。自体神经移植作为轴突再生理想的免疫惰性支架,被认为是治疗不可逆神经缺损的“金标准”。然而,自体神经移植受限于... 详细信息

周围神经损伤是一个世界性的临床问题,常由创伤或手术引起,可导致部分或全部的运动功能和感觉知觉丧失,甚至终身残疾。自体神经移植作为轴突再生理想的免疫惰性支架,被认为是治疗不可逆神经缺损的“金标准”。然而,自体神经移植受限于来源的缺乏、供体部位的高发病率、移植物与宿主神经的尺寸不匹配等。为了克服这些局限性,各种生物材料和种子细胞被用来制造人工神经支架,用于神经缺损的桥接,并取得了不同程度的成功。在这些方法中,有序纳米纤维构成的人工神经受到广泛关注,被认为能显著促进轴突的再生。另有研究表明,线形对干细胞的黏附、增殖、迁移和分化均有影响。施万细胞(Schwann cells,SCs)作为周围神经组织工程最有前途的种子细胞,可以合成和分泌多种神经营养因子和细胞外基质,引导和促进轴突的生长。此外,再生的轴突必须通过SCs再髓鞘化才能作为功能神经传导冲动。遗憾的是,SCs仅分布于周围神经,且属于高度分化、增殖能力低的成体细胞。采用传统的SCs分离方法存在供体神经来源困难及细胞扩增慢等问题,故难以获得足够的SCs以满足治疗需要。已有资料表明,骨髓间充质干细胞(Bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)可诱导分化为施万样细胞,且排列整齐的纳米纤维可显著促进其分化,这说明微环境的拓扑结构在SCs分化中起着重要的作用。考虑到SCs与导电性轴突共存,我们推测导电性也可能会对BMSCs向SCs的分化过程产生影响,但是我们并没有找到相关的文献报道。为此,我们设计本课题对这一假设进行了验证:我们将导电材料-胺功能化的多壁碳纳米管(multi-walled carbon nanotubes,MWCNT)与聚己内酯(Polycaprolactone,PCL)和明胶(gelatin)共混,电纺成有序或无序导电纳米纤维,研究评价其对BMSCs向SCs分化的影响。然后利用大鼠坐骨神经缺损模型,研究以MWCNT/PCL/gelatin静电纺丝纤维为基础的人工神经导管对周围神经损伤后再生的影响。研究方法:1.以MWCNT,PCL及gelatin为原料,利用静电纺丝法,制备4种纳米纤维膜:无序纤维膜(random,R),有序纤维膜(aligned,A),无序导电纤维膜(random and conductive,RC),有序导电纤维膜(aligned andconductive,AC)。采用扫描电子显微镜对纳米纤维膜的表面形貌进行观察,利用Image J软件从图像中测量电纺纤维的直径,电化学工作站检测导电性,活死细胞染色评价纤维膜的生物相容性。2.体外分离培养BMSCs,并分别接种于4种纳米纤维膜或细胞培养板上,通过三个步骤向SCs诱导分化,通过免疫荧光染色、Western Blot验证诱导后的各组BMSCs(iBMSCs)表达SCs的特异性标记蛋白的差异。3.为检测iBMSCs对神经突生长的生物效应,体外分离培养背根神经节(DRG),与iBMSCs共培养5 d后,免疫荧光染色检测轴突的走向及长度的区别。4.制备PCL导管,将培养有iBMSCs的静电纺丝纤维膜填充进导管中,移植到SD大鼠坐骨神经10 mm缺损处,移植后12 w通过免疫荧光染色检测神经丝蛋白(Neurofilament,NF)及髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)的表达判断轴突再生及再髓鞘化的情况。通过腓肠肌湿重比,腓肠肌横截面的HE染色及神经电生理检测判断神经损伤后功能恢复及靶区肌组织修复情况。研究结果:1.材料的制备及表征:1.1采用静电纺丝技术制备了有序导电PCL/gelatin/MWCNT纳米纤维。作为对照,同时制备了无序导电的PCL/gelatin/MWCNT纳米纤维以及有序或无序不导电的PCL/明胶纳米纤维。扫描电子显微镜图像显示,这些纤维表面光滑,直径分布范围在200-900nm之间。1.2电化学工作站检测结果表明,与不导电纤维膜(R和A)相比,RC和AC纤维膜的导电性明显提高,说明MWCNT可以显著提高纳米纤维膜的导电性能。1.3活死细胞染色结果显示BMSCs在纤维膜上生长状态良好,与细胞培养板无显著差异,提示纤维膜具有良好的生物相容性。2.体外实验鉴定纤维膜对BMSCs向SCs诱导及对DRG神经突延伸的影响:2.1免疫荧光染色显示,向SCs方向定向诱导的BMSCs表达SCs的特异性标记物以及SCs的功能性蛋白S100,胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及神经生长因子(nerve growth factor,NGF),Western blotting 和定量分析结果显示,所有诱导细胞的S100、GFAP和NGF水平均显著高于未诱导细胞。排列整齐的纳米纤

关键词：导电纳米纤维碳纳米管骨髓间充质干细胞神经组织工程施万细胞

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肝脏磁共振扩散加权成像方法研究进展

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北京生物医学工程 2024年第4期43卷 426-432页

作者：邓献敏蔡昕李建奇贾守强聂生东上海理工大学健康科学与工程学院上海200093 华东师范大学物理与电子科学学院上海200000 山东第一医科大学附属济南人民医院影像科济南271100

扩散加权成像(diffusion weighted imaging,DWI)对肝脏局灶性病变表现出的强大诊断能力主要得益于其成像方法的发展。目前DWI对于肝脏弥漫性病变的评估仍存在缺陷,所以进一步探索并优化其成像方法具有重要意义。为此,本文对近年来肝脏DW... 详细信息

扩散加权成像(diffusion weighted imaging,DWI)对肝脏局灶性病变表现出的强大诊断能力主要得益于其成像方法的发展。目前DWI对于肝脏弥漫性病变的评估仍存在缺陷,所以进一步探索并优化其成像方法具有重要意义。为此,本文对近年来肝脏DWI所涉及到的定量成像、图像质量提升和加速成像等方法进行综述。首先,本文阐述了目前肝脏DWI所面对的主要挑战;然后,综述了定量成像模型、脂肪抑制技术、并行成像、压缩感知技术和多层同步成像方法在肝脏DWI中的研究现状和问题的潜在解决方法,为现有成像方法的进一步优化和新方法的引入提供可行思路;最后,对肝脏DWI方法进行了总结与展望。

关键词：肝脏扩散加权成像定量成像脂肪抑制并行成像压缩感知多层同步成像

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脑胶质瘤治疗后假性进展与复发的影像学鉴别研究进展

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磁共振成像 2021年第3期12卷 85-88页

作者：保莎莎刘一帆罗玥媛郭效宾李志林杨军廖承德云南省肿瘤医院(昆明医科大学第三附属医院) 昆明650000

脑胶质瘤源自于神经上皮细胞,是颅内最常见的原发性肿瘤,其治疗方案为手术切除及后续的同步放化疗,但多达30%的患者会出现新的磁共振成像内的强化病变,这可能不是早期肿瘤进展(early progression,EP),而是放化疗导致的假性进展(pseudo-p... 详细信息

脑胶质瘤源自于神经上皮细胞,是颅内最常见的原发性肿瘤,其治疗方案为手术切除及后续的同步放化疗,但多达30%的患者会出现新的磁共振成像内的强化病变,这可能不是早期肿瘤进展(early progression,EP),而是放化疗导致的假性进展(pseudo-progression,PSP)。假性进展由于病变较轻且预后较好,只需对其进行对症治疗,而肿瘤复发时临床医生对其处理方式与假性进展不同,复发可能要选择再次手术或者使用放化疗等其他治疗方式,因此,如果胶质瘤的假性进展与复发被误诊,患者的最佳治疗时机将会受到耽误。常规磁共振成像不可能可靠地区分PSP和EP,目前一些更先进的成像方法有望对其进行准确鉴别。

关键词：胶质瘤复发假性进展磁共振成像鉴别诊断

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人和小鼠正常肾上腺组织单细胞图谱的建立及其意义

人和小鼠正常肾上腺组织单细胞图谱的建立及其意义

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作者：黄林广西医科大学

学位级别：博士

背景及目的作为人体一个重要且复杂的内分泌器官,肾上腺由两种不同胚胎来源的组织组成:中胚层衍生的、产生皮质类固醇的肾上腺皮质和外胚层衍生的,产生儿茶酚胺的肾上腺髓质。成人的肾上腺皮层由三个在组织学和功能上不同的结构组成:最... 详细信息

背景及目的作为人体一个重要且复杂的内分泌器官,肾上腺由两种不同胚胎来源的组织组成:中胚层衍生的、产生皮质类固醇的肾上腺皮质和外胚层衍生的,产生儿茶酚胺的肾上腺髓质。成人的肾上腺皮层由三个在组织学和功能上不同的结构组成:最外层的球状带（zona glomerulosa z G）,中间的束状带（zona fasciculata z F）和内层的网状带（zona reticularis z R）。肾上腺髓质中的嗜铬细胞主要是分泌应激相关的激素产物:肾上腺素和去甲肾上腺素。人体内环境的稳态依赖于应对各种生理和病理变化做出反应和适应的能力。人体这种独特能力主要是由下丘脑-垂体-肾上腺（hypothalamic–pituitary–adrenal HPA）轴和交感神经-肾上腺髓质系统组成的“压力应激系统”来协调。在重症感染的患者中,由于下丘脑和垂体因炎症受损,调节肾上腺皮质激素分泌的两个主要激素:促肾上腺皮质激素释放激素和促肾上腺皮质激素的水平都受到抑制。然而,这些患者的糖皮质激素水平却能够保持正常甚至升高,提示机体的应激反应从中枢的垂体依赖性调节机制到局部的垂体非依赖调节机制的过渡转变。此过程可能涉及的诸多机制中,肾上腺内环境的激活起着关键作用。作为机体应激系统的主要效应器官,肾上腺内存在一个重要的微环境。在此微环境中,免疫系统-肾上腺皮质,免疫系统-肾上腺髓质、肾上腺皮质-髓质细胞之间的相互作用和肾上腺的高度血管化的器官特征发挥着关键作用。在炎症应激阶段,肾上腺激素的合成分泌调节主要是由激活肾上腺内微环境这种垂体非依赖性机制介导的,越来越多的实验研究支持肾上腺微环境中的不同类型细胞在维持内环境稳态过程中的关键作用。在生理和病理状况下,微环境中包括肾上腺皮质细胞,髓质细胞,免疫细胞等多种不同类型细胞通过直接或以旁分泌方式相互协调来维持肾上腺稳态。此外,肾上腺微环境稳态的变化会影响机体一些疾病的发生及进展,例如糖尿病、抑郁症、心血管疾病、炎症等,同样微环境稳态也受到这些疾病的影响。虽然了解肾上腺微环境内具体的细胞类型及特点对于肾上腺疾病的发生发展至关重要。但是,目前我们对这方面的知识十分有限,有关肾上腺微环境的研究往往基于在由数百万个细胞组成的组织样本层面上,缺乏一个系统全面的认识,诸多细节仍然未知,很难发现单个细胞之间的差异和可能在肾上腺疾病进展中发挥重要作用的新的细胞类型,限制了我们对肾上腺相关疾病发生发展机制的理解和治疗水平的提高。单细胞转录组测序（single-cell RNA sequencing sc RNA-seq）是在单细胞水平对全转录组RNA进行高通量扩增与测序从而建立细胞图谱一项新技术。利用sc RNA-seq的优势,我们可以弥补不足。因此,本研究借助10X单细胞转录组测序平台,在单细胞层面上探索人和小鼠正常肾上腺组织内的细胞类型及特点,同时对比人和小鼠正常肾上腺的基因表达差异,目的是建立人和小鼠正常肾上腺组织的单细胞图谱,系统全面认识肾上腺微环境内的细胞类型及特点。方法:1.取人正常肾上腺组织,采用酶消化法分离出单细胞悬液。达到合格上机条件的单细胞悬液制备成c DNA文库,检测合格的c DNA文库外送进行测序,运用cell ranger、seurat、monocle等单细胞相关分析软件,对肾上腺测序结果数据进行质量控制、细胞聚类和细胞亚群分析、拟时态分析、细胞周期分析、差异性基因表达等方面的分析。2.单细胞层面上对比分析人左侧肾上腺和右侧肾上腺之间基因表达的相关性和差异性。同时,对比分析节律相关基因（CLOCK,NPAS2,ARNTL,ARNTL2,PER1,PER2,CRY1,CRY2和RORA）在左侧肾上腺和右侧肾上腺皮质细胞上的表达情况。运用q PCR进一步对比分析数据中表达明显的节律性基因（RORA,CLOCK,ARNTL和PER1）在左侧肾上腺和右侧肾上腺的表达情况。3.取8周龄C57/BL6小鼠的正常肾上腺组织,采用酶消化法分离出小鼠肾上腺组织单细胞,制备c DNA文库,文库外送测序,运用cell ranger、seurat等分析软件包,采用与人肾上腺数据分析相同的参数标准,对小鼠测序数据进行质量控制、细胞聚类和细胞定义、差异基因表达等方面的分析。4.运用ENSEMBL R package Bio Mart软件将小鼠肾上腺测序数据中的基因名称转换为人同源性基因名称。使用同源性基因的平均表达量来比较人和小鼠细胞亚群之间的相关性,同时对比分析人和小鼠肾上腺四种主要细胞类型(肾上腺皮质细胞（z G和z F细胞）,肾上腺髓质细胞,内皮细胞和纤维细胞),确定出人特异性,小鼠特异性及共同表达的差异性表达基因。结果1.人肾上腺单细胞测序结果提示了23组细胞亚群:巨噬细胞1,效应CD8+T细胞1,z F细胞,内皮细胞1,

关键词：单细胞转录组测序肾上腺细胞特点微环境

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Neuregulin-1/ErbB4信号通路在皮肤创面修复中的作用及其机制研究

Neuregulin-1/ErbB4信号通路在皮肤创面修复中的作用及其机制研究

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作者：李顺堂广西医科大学

学位级别：博士

目的皮肤是人体最大的感觉器官,具有感觉、屏障、免疫体温调节、内分泌及排泄等功能,烧伤、皮肤撕脱伤、外科手术等所导致的皮肤大面积缺损十分常见。另外,慢性致伤因素导致的皮肤难愈性创面如血管性溃疡、压力性溃疡、糖尿病性溃疡等... 详细信息

目的皮肤是人体最大的感觉器官,具有感觉、屏障、免疫体温调节、内分泌及排泄等功能,烧伤、皮肤撕脱伤、外科手术等所导致的皮肤大面积缺损十分常见。另外,慢性致伤因素导致的皮肤难愈性创面如血管性溃疡、压力性溃疡、糖尿病性溃疡等的发病率也在逐年上升,严重影响着患者的经济与生活质量,给创面修复外科医师带来巨大的挑战。皮肤创面修复的过程是一个由各种不同类型的细胞、细胞外基质、细胞因子及生长因子等共同参与的复杂而有序的过程。近年来人们对皮肤创面修复的研究取得许多重要的进展,但是对于创面愈合过程中不同修复因子在创面愈合过程中的作用及机制仍不明晰,这亟需人们从新的角度深入探讨皮肤创伤修复的调控机制。神经调节素1（Neuregulin-1,NRG1）是广泛表达于中枢及周围神经系统的分泌性细胞生长因子,具有表皮生长因子（Epidermal growth factor,EGF）类结构域,通过作用于Erb B酪氨酸激酶受体家族（包括Erb B2、Erb B3和Erb B4等）,可产生广泛的生物学功能,在细胞的增殖、分化及迁移中发挥重要的调控作用。其中,Erb B4是该家族受体中唯一能与NRG1直接结合又可发挥酪氨酸激酶活性的受体,已被发现在神经、心脏的发育和再生中起着重要的调控作用。但是迄今为止,Erb B4在皮肤中的表达分布及其作用还不明确。因此,本研究以此为切入点,通过采用分子生物学、形态学及药理学等手段,从机体整体环境出发,从神经调控的角度入手,阐明NRG1/Erb B4信号通路在皮肤创面修复中的作用及具体分子机制。为完善皮肤创面修复的调控机制提供新线索,为寻找促进皮肤创面修复的新手段提供理论依据。方法（1）综合使用患者皮肤组织和小鼠皮肤全层缺损创面模型的皮肤组织,利用免疫荧光染色和组织学染色等方法,系统观察Erb B4在正常皮肤内表达及空间分布情况,使用表皮干细胞特异性的标志蛋白——角蛋白14（Keratin,Krt14）及多潜能的毛囊干细细胞标记物Nestin进行共标,在限定细胞类型进行表达分析。（2）建立小鼠背部皮肤全层缺损创面动物模型,采用Western blot方法观察NRG1及Erb B4磷酸化活性在创面愈合不同时间点的表达变化;（3）观察皮肤损伤后支配其感觉的的背根神经节（DRGs）中Nrg1基因转录变化。建立小鼠皮肤去神经支配动物模型,观察周围神经对皮肤中NRG1表达水平的影响。（4）构建NRG1过表达质粒,用皮肤电转技术在小鼠皮肤局部过表达NRG1蛋白,观察皮肤创面愈合的影响。（5）应用药理学方法,在C57小鼠全层缺损创面局部应用药物抑制剂AG1478和AG879,分别抑制皮肤内Erb B4或Erb B2的磷酸化活性,观察皮肤创面愈合的情况。（6）使用Erb B4基因敲除杂合子(Erb B4+/-)小鼠和野生型小鼠(Erb B4+/+)建立小鼠皮肤全层缺损创面模型,观察皮肤创面愈合的影响。（7）使用Cre/Loxp介导的基因敲除策略,在Erb B4条件性基因敲除小鼠(K14-Cre;Erb B4-/-、Nestin-Cre ER;Nestin-GFP;Erb B4-/-)及同窝对照小鼠背部皮肤建立皮肤全层缺损创面,观察皮肤创面愈合的情况。（8）收集K14-Cre;Erb B4-/-小鼠及同窝对照小鼠的正常皮肤及损伤后创缘皮肤样品,提取总蛋白,Western Blot筛选下游关键信号通路分子。结果（1）NRG1/Erb B4信号通路在正常及损伤后皮肤中的表达变化情况:免疫荧光染色结果显示,人及小鼠的正常皮肤及创缘皮肤组织中均可检测到Erb B4的表达,主要表达于Krt14阳性的表皮干细胞中,在毛囊Nestin阳性的毛囊干细胞中也检测到Erb B4的表达。动物模型中观察发现,皮肤损伤引起创缘皮肤中的NRG1表达急剧升高并激活创缘组织中Erb B4信号通路。RT-PCR检测结果显示,皮肤创缘组织中的Erb B4 m RNA表达显著上调。Western Blot检测结果显示,皮肤中NRG1蛋白表达和Erb B4磷酸化活性在皮肤损伤后第1天开始即升高,随着皮肤创面的的逐渐愈合表达水平也逐渐降低。免疫荧光染色结果显示,创缘中的表达Erb B4细胞层数增多,创缘中的Erb B4磷酸化活性表达升高。（2）周围神经中的NRG1蛋白响应皮肤创面修复的表达变化情况:RT-PCR结果显示,皮肤创伤后会引起周围神经元中Nrg1-type I/Ⅱm RNA明显上调,而Ⅲ型Nrg1 m RNA降低;Western Blot检测结果显示皮肤去神经支配后,NRG1的表达水平显著降低。（3）NRG1/Erb B4信号通路在皮肤损伤修复中的重要作用:首先利用皮肤电转基因过表达的技术,成功将小鼠NRG1全长基因过表达质粒转入皮肤细胞内,在皮肤及创缘中成功表达NRG1蛋白

关键词：神经调节蛋白1 酪氨酸激酶受体创面修复表皮干细胞

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