检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2023年第8期43卷 63-71页

作者：鲍莉雯蔡勤周一叶许淼舒娟李华李虹雨曾溢滔曾凡一上海市儿童医院上海交通大学医学院附属儿童医院上海医学遗传研究所上海200040 上海交通大学基础医学院组织胚胎学与遗传发育学系上海200025 卫生部医学分子生物学重点实验室上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海200040

目的:端粒是真核生物染色体末端的一种高度保守的负责维持染色体稳定的特殊结构,其DNA序列长度即端粒长度,会随着年龄增长或疾病发生发展而逐渐缩短,检测端粒长度可以为评估机体衰老和健康状况提供参考,但目前缺乏测定微量牛DNA样本绝... 详细信息

目的:端粒是真核生物染色体末端的一种高度保守的负责维持染色体稳定的特殊结构,其DNA序列长度即端粒长度,会随着年龄增长或疾病发生发展而逐渐缩短,检测端粒长度可以为评估机体衰老和健康状况提供参考,但目前缺乏测定微量牛DNA样本绝对端粒长度的方法;通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)实现微量牛DNA样本绝对端粒长度的测定并评估DNA提取方法对牛绝对端粒长度测定结果的影响,为进行端粒长度研究时选择合适的DNA提取方法和端粒长度分析方法提供参考。方法:利用标准曲线对检测样本的端粒和内参Ct值进行转换,通过qPCR测定牛端粒长度绝对值;采用膜吸附法、苯酚-氯仿法和磁珠法3种方法分别提取相同样本的DNA,分别用端粒末端限制性片段(terminal restriction fragment,TRF)分析法和qPCR法分析端粒长度,比较不同DNA提取方法对牛绝对端粒长度测定的影响。结果:(1)qPCR可以测定纳克级别DNA样本的绝对端粒长度,检测结果重复性良好,并且和“金标准”TRF测定结果的相关性良好。(2)不同方法提取的DNA用TRF分析法和qPCR法测定端粒长度时,结果有显著差异,其中磁珠法提取的DNA在用2种不同方法进行端粒长度测定时,测定结果的一致性最好。结论:qPCR法是较TRF分析法更加灵敏的端粒长度绝对值测定方法,适合微量DNA样本的测定,且方便快捷;DNA提取方法会影响端粒长度的测定结果,在测定时应统一样本的DNA提取方法,磁珠法是相对更优的选择。

关键词：端粒长度 qPCR TRF DNA提取方法

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神经肌肉疾病基因治疗的研究进展

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生命的化学 2022年第5期42卷 968-975页

作者：周鹏颜景斌上海市儿童医院上海医学遗传研究所上海交通大学附属儿童医院国家卫生健康委员会胚胎分子生物学重点实验室上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海200040

神经肌肉疾病(neuromuscular diseases,NMD)是一类以运动单位受损、运动耐力下降、肌力减退为主要表现的中枢及周围神经疾病。长期以来,神经肌肉疾病的治疗手段主要是对症治疗,但仅能缓解症状,无法根治。腺相关病毒(adeno-associated vi... 详细信息

神经肌肉疾病(neuromuscular diseases,NMD)是一类以运动单位受损、运动耐力下降、肌力减退为主要表现的中枢及周围神经疾病。长期以来,神经肌肉疾病的治疗手段主要是对症治疗,但仅能缓解症状,无法根治。腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)载体是经过基因工程改造过的转基因载体,由于其安全性好、免疫原性低、表达时间长,可以感染分裂细胞和非分裂细胞等特点,在基因治疗和疫苗研究中得到广泛应用。CRISPR/Cas9基因编辑系统由型CRISPR细菌免疫系统改进而来,具有靶向精确、脱靶率低、细胞毒性低等特点,是目前应用最为广泛的基因编辑工具。本综述总结了几种常见神经肌肉疾病的最新基因治疗进展,着重讨论了基于AAV载体和CRISPR/Cas9系统的基因治疗在NMD治疗中的潜在价值以及相应的风险。

关键词：神经肌肉疾病基因治疗 AAV载体 CRISPR/Cas9

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血清孕酮水平检测在克隆胚胎移植受体牛的筛选及妊娠诊断中的应用

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中国生物工程杂志 2020年第7期40卷 1-8页

作者：贾晓邱瑾舒娟李华习书斌曾溢滔曾凡一上海交通大学附属儿童医院上海市儿童医院上海医学遗传研究所上海200040 上海滔滔转基因工程有限公司上海201604 卫生部医学分子生物学重点实验室上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海200040 上海交通大学基础医学院组织胚胎学与遗传发育学系上海200025

目的:孕酮(progesterone,P4)作为一种生殖激素,在牛的发情期和妊娠期呈规律性变化,且在妊娠的建立和维持过程中发挥着重要作用。拟应用孕酮浓度测定辅助人工观察筛选克隆胚胎移植受体牛并监测其整个妊娠过程。方法:通过对自然配种牛不... 详细信息

目的:孕酮(progesterone,P4)作为一种生殖激素,在牛的发情期和妊娠期呈规律性变化,且在妊娠的建立和维持过程中发挥着重要作用。拟应用孕酮浓度测定辅助人工观察筛选克隆胚胎移植受体牛并监测其整个妊娠过程。方法:通过对自然配种牛不同生殖阶段血液中孕酮水平的分析,建立其在发情初期、妊娠期孕酮浓度的变化规律,以此为依据辅助人工观察筛选适合胚胎移植的受体牛。同时将在体外培养7天后的体细胞核移植重构囊胚移植到所筛选出的同期发情的受体牛子宫内,并应用孕酮测定监测其妊娠状态。实验结果:(1)运用孕酮检测筛选克隆胚胎移植受体牛时,当孕酮浓度在发情第0天和第5天分别为≤0.64nmol/L和2~8nmol/L时,适宜作为胚胎移植受体牛,根据此筛选指标能够排除50%左右假发情牛。(2)运用孕酮检测较传统的人工观察方法,胚胎移植的克隆牛出生率提高了7.1倍。结论:运用牛血清孕酮检测方法能有效提高母牛生理周期判断的准确性,有利于选择合适的胚胎移植受体牛,既能实时、有效地监测怀孕受体牛的妊娠状态,又避免了靠人工观察受体牛返情、流产时的人为疏漏和误判,有效地提高受体牛的利用率,提高克隆牛的生产效率,并能推广应用于畜牧行业牛的生产繁育中。

关键词：孕酮水平受体牛胚胎移植体细胞核移植/克隆牛

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VEGF-A 基因变异对新生血管性年龄相关性黄斑变性及雷珠单抗疗效的影响

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中华实验眼科杂志 2020年第8期38卷 680-685页

作者：宋爽杨帆谷潇雅张鹏喻晓兵戴虹北京医院眼科国家老年医学中心中国医学科学院老年医学研究院100730北京上海交通大学附属儿童医院上海市儿童医院上海交通大学医学遗传研究所卫生部医学胚胎与分子生物学重点实验室上海市胚胎与生殖工程重点实验室200040

目的探讨中国人群血管内皮生长因子A(VEGF-A)基因变异对新生血管性年龄相关性黄斑变性(nAMD)及雷珠单抗治疗疗效的影响。方法采用病例对照研究方法,纳入2017年2月至2018年1月在北京医院确诊的nAMD患者127例和健康对照组101人。nAMD患者... 详细信息

目的探讨中国人群血管内皮生长因子A(VEGF-A)基因变异对新生血管性年龄相关性黄斑变性(nAMD)及雷珠单抗治疗疗效的影响。方法采用病例对照研究方法,纳入2017年2月至2018年1月在北京医院确诊的nAMD患者127例和健康对照组101人。nAMD患者雷珠单抗治疗后3个月,视力提高5个ETDRS字母数及以上者为视力改善组,视力改善低于5个ETDRS字母数者为视力欠佳组。每人取外周血5 ml,采用酚氯仿法提取DNA,采用Sanger法对VEGF-A外显子及上下游各2 kb片段进行测序并筛选变异位点。使用限制性内切酶片段长度多态性对测序发现的变异进行基因分型。采用Hardy-Weinberg平衡(HWE)检验研究样本群体代表性。分析并比较病例组与对照组、视力改善组与视力欠佳组在等位基因分布频率及基因型分布频率的差异。结果VEGF-A基因变异位点rs3025018位于第7内含子,该位点VEGF-A的等位基因包括C、G和T,基因型为CC、CT、CG、TT和TG。病例组与对照组不同等位基因分布比较,差异有统计学意义(χ2=7.492,P=0.024);其中2个组间G与C+T分布频率比较,差异有统计学意义(χ2=7.490,P=0.006,OR=0.407,95%CI=0.210~0.695)。病例组与对照组各基因型分布频率比较,差异有统计学意义(χ2=13.376;P=0.010);其中基因型CG+GT与CC+CT+TT分布频率比较,差异有统计学意义(χ2=8.335,P=0.004,OR=0.367,95%CI=0.183~0.802)。视力改善组与视力欠佳组在等位基因及基因型频率上差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论携带VEGF-A基因的rs3025018位点G等位基因人群患nAMD的可能性较携带C或T等位基因的小。VEGF-A基因位点rs3025018变异对雷珠单抗治疗黄斑变性的疗效无明显影响。

关键词：黄斑变性血管内皮生长因子A 基因变异雷珠单抗

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多能干细胞关键因子Oct4 RNA结合蛋白的分离与鉴定

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上海交通大学学报（医学版） 2019年第1期39卷 4-10页

作者：马姬郭传亮范书玥薛燕曾凡一上海交通大学基础医学院组织胚胎学与遗传发育学系上海200025 上海交通大学附属儿童医院上海医学遗传研究所上海200040 上海市胚胎与生殖工程重点实验室国家卫生和健康委员会医学胚胎分子生物学重点实验室上海200040

目的·分离多能干细胞关键因子Oct4的RNA结合蛋白。方法·培养小鼠胚胎干细胞(R1),从中提取细胞总RNA,反转录为cDNA,PCR扩增Oct4并转录为m RNA。采用链霉素亲和层析和质谱技术筛选候选RNA结合蛋白,采用RNA免疫沉淀技术鉴定候选... 详细信息

目的·分离多能干细胞关键因子Oct4的RNA结合蛋白。方法·培养小鼠胚胎干细胞(R1),从中提取细胞总RNA,反转录为cDNA,PCR扩增Oct4并转录为m RNA。采用链霉素亲和层析和质谱技术筛选候选RNA结合蛋白,采用RNA免疫沉淀技术鉴定候选RNA结合蛋白。结果·经高效液相色谱-质谱法鉴定和筛选出121个能与Oct4 3'非翻译区(untranslated region,UTR)和Oct45'UTR相结合的RNA结合蛋白,肽段图谱匹配数≥2的有11个。并对其中的7个候选RNA结合蛋白进行了进一步验证,结果显示Oct4可与DSP、SOD1、LMNA、NPM1、PSIP1、NCL和HDGF蛋白发生相互作用,其中HDGF与Oct4结合能力最强。结论·Oct4RNA结合蛋白的鉴定将为Oct4的调控机制提供一定理论依据,为后续其功能研究提供基础。

关键词： Oct4 RNA结合蛋白胚胎干细胞 RNA免疫沉淀

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2类小鼠胎肝基质细胞的生物学特征及表达谱分析

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上海交通大学学报（医学版） 2019年第11期39卷 1226-1232页

作者：王沄汉迟亚男杨冠恒范书玥马姬薛燕曾凡一上海交通大学基础医学院组织胚胎学与遗传发育学系上海200025 上海交通大学附属儿童医院上海医学遗传研究所国家卫生和健康委员会医学胚胎分子生物学重点实验室上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海200040

目的·探究不同类型小鼠胎肝基质细胞在细胞形态、分子特征和生物学功能上的差异。方法·通过体外贴壁培养的方式获取13.5 d小鼠胎肝基质细胞,根据细胞形态及其表面标志物CD44、CD29、CD106、CD45及Sca-1的表达差异,区分不同的... 详细信息

目的·探究不同类型小鼠胎肝基质细胞在细胞形态、分子特征和生物学功能上的差异。方法·通过体外贴壁培养的方式获取13.5 d小鼠胎肝基质细胞,根据细胞形态及其表面标志物CD44、CD29、CD106、CD45及Sca-1的表达差异,区分不同的细胞类型。使用小鼠基因组阵列4302.0基因芯片在P<0.05、差异倍数>3或<-2的标准下筛选差异基因,并使用IPA(ingenuity pathway analysis)软件对典型信号通路和生物学功能进行分析。结果·依据细胞形态的不同,分离出2类胎肝基质细胞,即短梭形细胞(CD45^+CD106^-CD29^+CD44^+Sca-1-)和成纤维样细胞(CD45^-CD106^+CD29^+CD44^+Sca-1^-)。前者共筛选出1485个高表达基因,主要参与免疫炎症相关的信号通路;后者共筛选出3374个高表达基因,主要参与细胞外基质形成及细胞间黏附。结论·小鼠胎肝基质细胞在生物学特征及功能上具有较强的异质性,在促进造血干细胞的增殖方面可能存在差异。

关键词：胎肝基质细胞造血干细胞流式细胞术基因芯片 IPA软件

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临床测序数据后期处理中的常用工具及使用

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中华医学遗传学杂志 2019年第5期36卷 508-512页

作者：韩亚丽周在威张敬之上海交通大学附属儿童医院、上海市儿童医院、上海交通大学医学遗传研究所 200040 上海市胚胎与生殖工程重点实验室、卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室 200040

随着测序技术的日臻成熟及其在基因病诊断应用中的日益普及,测序数据的处理已成为临床基因诊断的一个重要环节.近年来,各类软件和数据库的开发,已使得对高通量测序数据的变异筛查流程变得更加完善、便捷.然而,将筛查到的变异与疾病表型... 详细信息

随着测序技术的日臻成熟及其在基因病诊断应用中的日益普及,测序数据的处理已成为临床基因诊断的一个重要环节.近年来,各类软件和数据库的开发,已使得对高通量测序数据的变异筛查流程变得更加完善、便捷.然而,将筛查到的变异与疾病表型进行关联,并对该变异可能的致病机理和分子机制进行进一步验证和阐述,仍是临床基因诊断所面临的重要挑战.本文将对测序数据处理的流程进行简要的介绍,并对常用的表型-基因型关联工具和方法、以及基因诊断中基因组的功能分析和验证方法进行综述.

关键词：测序技术数据分析基因关联软件数据库

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小鼠胎肝单个核细胞行骨髓腔内注射重建造血系统的效果

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上海交通大学学报（医学版） 2019年第10期39卷 1110-1114页

作者：伊庆福迟亚男刘光辉杨冠恒龚秀丽范书玥曾凡一上海交通大学基础医学院组织胚胎学与遗传发育学系上海200025 上海交通大学附属儿童医院上海交通大学医学遗传研究所上海200040 卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海200040

目的·观察用小鼠胎肝单个核细胞悬液行骨髓腔内注射以重建小鼠造血系统的效果。方法·用Ficoll分离技术获取胎龄13.5 d的小鼠胎肝单个核细胞悬液,采用磁珠分选的方法获得造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)并计数。以骨... 详细信息

目的·观察用小鼠胎肝单个核细胞悬液行骨髓腔内注射以重建小鼠造血系统的效果。方法·用Ficoll分离技术获取胎龄13.5 d的小鼠胎肝单个核细胞悬液,采用磁珠分选的方法获得造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)并计数。以骨髓腔内注射的方法对137Cs辐射清髓后的小鼠胫骨进行小鼠胎肝单个核细胞移植。对移植后的受体小鼠通过血常规检测、血涂片及骨髓涂片镜检的方法观察造血系统的重建情况。对受体小鼠移植后1年骨髓中的供体HSC进行流式细胞检测。结果·胎龄13.5 d的小鼠胎肝单个核细胞中HSC占0.171%。小鼠胎肝单个核细胞移植后1周,外周血即能探测到供体细胞来源的血细胞;移植后第3周受体小鼠外周血白细胞、红细胞、血红蛋白基本恢复至辐照前水平;第5周外周血中供体细胞来源的血细胞比例趋于稳定;移植后1年受体小鼠骨髓中的HSC基本来自供体细胞。结论·小鼠胎肝单个核细胞通过骨髓腔内注射的移植方法能高效重建小鼠造血系统。

关键词：造血干细胞骨髓腔内注射胎肝小鼠

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基于实时荧光定量PCR技术的唐氏综合征嵌合体小鼠嵌合率检测和分析

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上海交通大学学报（医学版） 2018年第11期38卷 1277-1282页

作者：孟晓伟杨冠恒王云杰马晴雯上海交通大学附属儿童医院上海市儿童医院上海交通大学医学遗传研究所上海200040 卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海200040

目的·建立一种定量检测唐氏综合征嵌合体小鼠各脏器嵌合情况的方法,并初步探究其不同器官中的嵌合规律。方法·分别针对唐氏综合征模型Tc1小鼠细胞(三体细胞)内人源21号染色体(记为Hsa21)上SIM2基因和小鼠15号染色体(记为Mmu15... 详细信息

目的·建立一种定量检测唐氏综合征嵌合体小鼠各脏器嵌合情况的方法,并初步探究其不同器官中的嵌合规律。方法·分别针对唐氏综合征模型Tc1小鼠细胞(三体细胞)内人源21号染色体(记为Hsa21)上SIM2基因和小鼠15号染色体(记为Mmu15)上Derl1基因设计引物,采用实时荧光定量PCR(quantitative real time PCR,qPCR)技术对SIM2和Derl1进行检测来反映Hsa21和Mmu15的比例,并以此计算嵌合体小鼠各器官中Tc1小鼠细胞的嵌合占比。结果·所鉴定的小鼠中有3只为嵌合体小鼠。该3只小鼠心脏组织Tc1小鼠细胞嵌合率分别为8.98%、21.71%和57.70%,小脑组织分别为5.62%、20.17%和40.43%,大脑组织分别为8.48%、15.35%和20.45%,肝脏组织分别为2.66%、6.50%和16.84%,脾脏组织分别为1.73%、3.80%和11.80%。结论·基于qPCR技术对不同染色体上的基因进行定量分析的方法可用于唐氏综合征嵌合体小鼠中三体细胞嵌合率的定量检测。Tc1小鼠细胞在嵌合体小鼠的心脏、小脑、大脑、肝脏、脾脏均可发生嵌合,心脏组织的嵌合率偏向最高。

关键词：唐氏综合征嵌合体小鼠模型实时荧光定量PCR 嵌合率

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造血干细胞基因治疗β-珠蛋白异常疾病的研究与展望

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医学分子生物学杂志 2019年第1期16卷 87-92页

作者：刘亚楠杨冠恒蔡勤张敬之上海交通大学附属儿童医院上海市儿童医院上海交通大学医学遗传研究所上海市200040 卫生部医学胚胎与分子生物学重点实验室上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海市200040

β-珠蛋白异常疾病(B-globin disorders)是由于体内合成β-珠蛋白肽链缺陷,导致溶血性贫血等—系列的症状,严重影响了患者的生活质量。而造血干细胞(hematopoietic stem cells, HSCs)移植是根治此类疾病的唯一方法。现以β-珠蛋白异常... 详细信息

β-珠蛋白异常疾病(B-globin disorders)是由于体内合成β-珠蛋白肽链缺陷,导致溶血性贫血等—系列的症状,严重影响了患者的生活质量。而造血干细胞(hematopoietic stem cells, HSCs)移植是根治此类疾病的唯一方法。现以β-珠蛋白异常疾病为主,阐述近年来依托造血干细胞为主的基因治疗手段的研究进展,并将基因治疗中所使用病毒载体、基因组编辑技术的优缺点和影响临床应用的要素以及未来的研究趋势综述如下。

关键词： β-地中海贫血镰状血红蛋白病基因治疗造血干细胞基因组编辑技术

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