检索结果-内蒙古大学图书馆

医学分子生物学杂志 2012年第4期9卷 281-285页

作者：李振海马晴雯上海市儿童医院、上海交通大学附属儿童医院、上海交通大学医学遗传研究所上海市200040

基因治疗是一种极具应用前景的疾病治疗方法。作为一种非病毒载体系统，ФC31整合酶系统凭借其高效性、位点特异性与低毒性的特点，在基因治疗的应用中具有无可比拟的优势。ФC31整合酶可以介导治疗基因整合到靶细胞基因组并稳定、长期... 详细信息

基因治疗是一种极具应用前景的疾病治疗方法。作为一种非病毒载体系统，ФC31整合酶系统凭借其高效性、位点特异性与低毒性的特点，在基因治疗的应用中具有无可比拟的优势。ФC31整合酶可以介导治疗基因整合到靶细胞基因组并稳定、长期表达，目前已经在多种组织和器官的体内、离体研究中取得成功。文章着重阐述ФC31整合酶的作用机制、应用实例及优缺点，并评估了其安全性。

关键词：基因治疗 ФC31整合酶体内应用离体应用安全性

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焦磷酸测序技术及其在DNA甲基化研究中的应用

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国际遗传学杂志 2012年第5期35卷 272-276页

作者：任晓叶上海市儿童医院上海交通大学附属儿童医院上海交通大学医学遗传研究所

焦磷酸测序技术(pyrosequencing)是近年来刚兴起的一种新型的酶联级联测序技术。该技术是一种高效的DNA分析技术,具有分析结果快速准确、灵敏度高、自动化的优势。DNA甲基化是表遗传学的一个重要组成部分,焦磷酸测序技术对于准确高效地... 详细信息

焦磷酸测序技术(pyrosequencing)是近年来刚兴起的一种新型的酶联级联测序技术。该技术是一种高效的DNA分析技术,具有分析结果快速准确、灵敏度高、自动化的优势。DNA甲基化是表遗传学的一个重要组成部分,焦磷酸测序技术对于准确高效地进行甲基化研究提供了很好的技术平台。此文主要就焦磷酸测序技术的原理及该技术在DNA甲基化研究中的应用进行综述。

关键词：焦磷酸测序甲基化表遗传学

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应用高分辨率熔解曲线分析技术开展点突变的定性和定量诊断

应用高分辨率熔解曲线分析技术开展点突变的定性和定量诊断

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第八届全国遗传病诊断与产前诊断学术交流会

作者：颜景斌何湘熊灿许淼黄淑帧上海交通大学医学遗传研究所上海市儿童医院上海 200040

遗传病是指由于生殖细胞中的基因或染色体结构变异导致的遗传性疾病。提高这类疾病相关基因的定性和定量诊断水平对于基因诊断技术的发展具有重要的作用。高分辨率熔解曲线分析(HRM)技术已经应用于疾病基因突变扫描、基因分型、甲基化... 详细信息

遗传病是指由于生殖细胞中的基因或染色体结构变异导致的遗传性疾病。提高这类疾病相关基因的定性和定量诊断水平对于基因诊断技术的发展具有重要的作用。高分辨率熔解曲线分析(HRM)技术已经应用于疾病基因突变扫描、基因分型、甲基化分型等多个方面。此外，还应用HRM技术开展了线粒体中杂合突变的定量分析研究。我们通过HRM检测平台对5个家系共81个样本成功地进行了3243位点的基因检测结果显示，与常规的PCR-RFLP方法相比，HRM技术的特异度达到100%，灵敏度较PCR一RFLP更高因此，该技术可作为检测线粒体糖尿病病人中A3243G突变的常规方法，将显著提高了糖尿病分子诊断的水平。

关键词：遗传疾病基因突变临床诊断高分辨率熔解曲线分析技术灵敏度

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一种快速检测CLN6模型小鼠基因型的方法-高分辨率熔解曲线分析法

一种快速检测CLN6模型小鼠基因型的方法-高分辨率熔解曲线分析法

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第八届全国遗传病诊断与产前诊断学术交流会

作者：许淼王娟龚秀丽蔡勤颜景斌 Nanbert Zhong 曾凡一黄淑帧上海市儿童医院上海医学遗传研究所，上海交通大学医学遗传研究所上海，200040 卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海市儿童医院上海医学遗传研究所，上海交通大学医学遗传研究所上海，200040 上海市儿童医院上海医学遗传研究所，上海交通大学医学遗传研究所上海，200040 卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海交通大学医学院医学科研研究院发育生物学研究室上

本文利用高分辨率熔解曲线分析法(HRM)对CLN6模型小鼠不同基因型进行检测。结果显示，通过比较HRM结果和直接测序结果完全一致，准确性和灵敏性均达到100%，且相比其他方法大大节省了时间和成本。

关键词：基因诊断高分辨率熔解曲线分析法动物模型

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不同启动子引导的人凝血因子Ⅷ基因载体在HC11细胞和小鼠乳腺中表达的研究

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医学分子生物学杂志 2012年第5期9卷 313-319页

作者：王晴任晓叶蔡勤龚秀丽黄英曾溢滔上海市儿童医院上海交通大学附属儿童医院上海医学遗传研究所上海市200040 卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海市200040

目的应用山羊β-酪蛋白基因启动子（P1A3），构建真核细胞表达人凝血因子Ⅷ（humancoagu—lationfactorⅧ，hFⅧ）全长cDNA载体（pcDNA3．1．P1A3-hFⅧ）和hFⅧB区缺失（humancoagulationfactorⅧB—***，hFVⅧBD）的cDNA载体（pcDNA3．1-P1A3-hFⅧBD），研究它们在乳腺细胞中的表达情况，同时与巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）启动子引导的相应的hFⅧ载体进行比较。方法采用常规DNA分子克隆技术构建人凝血因子Ⅷ（hFⅧ）基因载体，转染小鼠乳腺上皮细胞（HC-11），应用RT—PCR以及real—timePCR技术检测hFⅧ基因转录本；对NSL期母鼠乳腺注射DNA载体后，采集试验母鼠乳汁，应用ELISA检测乳腺细胞分泌hFⅧ蛋白的瞬时表达水平。结果应用构建的CMV启动子和P1A3启动子指导的hFⅧ基因载体转染HC-11细胞后，在mRNA水平均有表达；瞬时转染哺乳期母鼠的乳汁检测表明，转染CMV和P1A3启动子的hFⅧ载体的母鼠，乳汁中的hFⅧ蛋白表达量分别为2．81μg／ml（CMV—hFⅧBD），2．01μg/ml（CMV—hFⅧ），1．82μg／ml（P1A3-hFⅧBD），1．20μg／ml（***Ⅷ）。结论构建的乳腺特异性表达hFⅧ基因的载体，转染HC-11细胞和乳腺组织后的mRNA及蛋白表达水平均证实了该载体的有效性：CMV启动子引导的hFⅧ载体表达虽稍高于P1A3启动子载体，但由于后者具有乳腺特异表达的特点，更适用于乳腺生物反应器。我们构建hFⅧ基因的载体的经验，为乳腺生物反应器的研制提供了有价值的科学依据。

关键词：人凝血因子Ⅷ 哺乳动物乳腺启动子特异表达

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一种快速检测CLN6模型小鼠基因型的方法——高分辨率熔解曲线分析法

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医学分子生物学杂志 2012年第3期9卷 161-165页

作者：许淼王娟龚秀丽蔡勤颜景斌 Nanbert Zhong 曾凡一黄淑帧上海市儿童医院上海医学遗传研究所上海交通大学医学遗传研究所上海市200040 卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海市200040 上海交通大学医学院医学科研研究院发育生物学研究室上海市200025

目的建立利用高分辨率熔解曲线（HRM）分析快速鉴定CLN6（神经元蜡样脂褐质沉积症，ceroid—lipofuscinosis，neurona16）小鼠（c2硒基因移码突变）基因型的方法。方法根据NCBI公布的小鼠cln6序列（NC00075）设计HRM引物和测序引物，然... 详细信息

目的建立利用高分辨率熔解曲线（HRM）分析快速鉴定CLN6（神经元蜡样脂褐质沉积症，ceroid—lipofuscinosis，neurona16）小鼠（c2硒基因移码突变）基因型的方法。方法根据NCBI公布的小鼠cln6序列（NC00075）设计HRM引物和测序引物，然后采用HRM技术获得高分辨熔解曲线鉴定实验小鼠基因型，同时通过直接测序法进行验证，评价其灵敏性和准确性。结果181只实验小鼠经HRM检测，共有野生型11只、Cln6基因突变杂合子73只和纯合子97只，HRM结果和直接测序结果完全一致，准确性为100％。结论HRM方法检测DNA微小突变时具有操作简便、快速、灵敏，单管避免污染以及准确度高等优点，值得推广。

关键词：高分辨熔解曲线神经元蜡样脂褐质沉积症 Cln6模型小鼠

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用KOSR优化山羊克隆胚的培养体系

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上海交通大学学报（农业科学版） 2012年第6期30卷 47-50,57页

作者：陈威胡伟曹辉李凯王清泉蔡勤蔡琳琳刘宇习书斌李华陈美珏黄英黄淑帧曾凡一上海市儿童医院上海医学遗传研究所上海交通大学医学遗传研究所上海200040 卫生部医学胚胎与分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室上海200040 上海滔滔转基因工程股份有限公司上海201604 上海交通大学医学院医学科学研究院上海200025

体细胞核移植重构胚的体外培养一直是影响山羊克隆效率的一个重要因素,为了排除成分复杂的胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)对克隆重构胚发育的潜在抑制作用,本研究采用成分明确的血清替代品(knockout serum replacement,KOSR)进行山... 详细信息

体细胞核移植重构胚的体外培养一直是影响山羊克隆效率的一个重要因素,为了排除成分复杂的胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)对克隆重构胚发育的潜在抑制作用,本研究采用成分明确的血清替代品(knockout serum replacement,KOSR)进行山羊体细胞克隆重构胚胎的体外培养,并比较KOSR与FBS对重构胚的发育效率的影响。结果显示,KOSR组山羊重构胚培养体系的分裂率明显高于FBS组(80.67±0.63%.vs 49.02±4.85%,P<0.01),2组在重构胚重编程过程中的8细胞率具有显著差异(48.89±1.92%vs.28.59±3.13%,P<0.05);2组不同培养体系的受孕率也有明显不同(33.3%vs.10%,P<0.05)。研究结果表明,KOSR培养体系能有效提高山羊重构胚的发育效率,特别是有利于重构胚的早期重编程,为获得健康的转基因克隆山羊奠定了良好的基础。

关键词：血清替代品(KOSR) 山羊体细胞克隆重构胚重编程发育

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慢病毒载体转录“通读”改进研究进展

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生物工程学报 2011年第11期27卷 1541-1548页

作者：何佳平张敬之上海市儿童医院上海200040 上海交通大学附属儿童医院上海200040 上海交通大学医学遗传研究所上海200040

自2002年以来,在用γ-逆转录病毒载体治疗X连锁重度复合性免疫缺陷病(X-SCID)的10例病人中已有4例因载体整合在原癌基因lmo2等附近而得了白血病。这一事件提高了人们对基因治疗载体安全性的关注。与γ-逆转录病毒载体相比,慢病毒载体因... 详细信息

自2002年以来,在用γ-逆转录病毒载体治疗X连锁重度复合性免疫缺陷病(X-SCID)的10例病人中已有4例因载体整合在原癌基因lmo2等附近而得了白血病。这一事件提高了人们对基因治疗载体安全性的关注。与γ-逆转录病毒载体相比,慢病毒载体因尚未发现有整合在lmo2附近的现象,被认为是安全性较好的基因治疗载体。然而自灭活慢病毒载体与γ-逆转录病毒载体一样存在着转录"通读"的现象。近些年来,科学家们在改善自灭活慢病毒载体的通读率上做了一些工作并取得了一些积极成果。以下对慢病毒载体转录"通读"现象的发生机理和解决途径作了综合描述。

关键词：基因治疗载体自灭活慢病毒载体转录通读长末端重复序列转录终止信号

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piggyBac转座系统在哺乳动物及其细胞中的研究进展

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生命科学 2011年第3期23卷 255-260页

作者：谢飞蒋世忠马晴雯上海市儿童医院医学遗传研究所上海交通大学医学院

piggyBac(PB)转座系统来源于昆虫鳞翅目,属于真核生物的第二类转座系统,主要采取"剪切粘帖"机制发生转座。PB系统转座效率高,宿主范围广,广泛应用于昆虫等低等生物的基因转移及突变筛选。近年来,研究发现PB系统在哺乳动物及... 详细信息

piggyBac(PB)转座系统来源于昆虫鳞翅目,属于真核生物的第二类转座系统,主要采取"剪切粘帖"机制发生转座。PB系统转座效率高,宿主范围广,广泛应用于昆虫等低等生物的基因转移及突变筛选。近年来,研究发现PB系统在哺乳动物及其细胞中也具有高效的转座活性,已在动物基因组功能研究、基因转移及诱导多能干细胞等领域得到了广泛应用。本文就PB系统近年来在哺乳动物及其细胞中的研究进展、应用前景及存在问题进行了综述。

关键词： piggyBac 转座哺乳动物转基因

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血友病A基因治疗载体研究现状

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医学分子生物学杂志 2011年第5期8卷 437-442页

作者：王晴颜景斌曾溢滔上海市儿童医院上海交通大学医学遗传研究所上海市200040

血友病A是X染色体隐性遗传出血性疾病。其发病原因是患者血液中先天缺乏凝血因子FⅧ。用于血友病A基因治疗研究的载体有病毒载体和非病毒载体，目前研究较多的是病毒载体，主要有逆转录病毒载体和慢病毒载体，腺病毒载体及腺相关病毒载... 详细信息

血友病A是X染色体隐性遗传出血性疾病。其发病原因是患者血液中先天缺乏凝血因子FⅧ。用于血友病A基因治疗研究的载体有病毒载体和非病毒载体，目前研究较多的是病毒载体，主要有逆转录病毒载体和慢病毒载体，腺病毒载体及腺相关病毒载体等。非病毒载体主要有质粒、脂质体、转座子等。文章拟对血友病A基因治疗各载体的特点和研究进展作一综述。

关键词：血友病A 载体基因治疗人凝血因子Ⅷ

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