检索结果-内蒙古大学图书馆

中国农业大学学报 2024年第5期29卷 56-64页

作者：石迎陶洁李本强程靖华刘惠莉上海市农业科学院畜牧兽医研究所/上海市农业遗传育种重点实验室上海201106 上海市种猪工程技术中心上海201302

为分析适应肠道细胞的猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)对仔猪的致病性,本研究首先用ST细胞分离培养的PDCoV感染IPEC-J2细胞进行适应性试验,通过间接免疫荧光试验(IFA)检测PDCoV抗原,然后绘制病毒生长曲线,最后分析适... 详细信息

为分析适应肠道细胞的猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)对仔猪的致病性,本研究首先用ST细胞分离培养的PDCoV感染IPEC-J2细胞进行适应性试验,通过间接免疫荧光试验(IFA)检测PDCoV抗原,然后绘制病毒生长曲线,最后分析适应IPEC-J2细胞的PDCoV对仔猪的致病性。结果表明:1)经ST细胞分离培养的PDCoV可以感染IPEC-J2细胞并出现CPE,可在细胞内检测到PDCoV抗原,PDCoV在感染IPEC-J2细胞后48 h达到增殖高峰。2)适应IPEC-J2的PDCoV对仔猪具有肠致病性,仔猪出现明显腹泻症状,甚至出现死亡;剖检可见明显的肠道病变,病理组织学显示肠上皮细胞及肠绒毛病变,并通过免疫组化对抗原进行定位,发现PDCoV广泛分布于肠道上皮细胞。3)肠道免疫细胞因子分析发现PDCoV感染仔猪后肠道I型干扰素表达上调,同时激活体内Th1和Th2型肠道细胞免疫反应,诱导感染仔猪产生免疫细胞因子发挥抗病毒作用。综上,经ST细胞分离培养的PDCoV对IPEC-J2细胞具有较强的适应性,并对仔猪产生较强的致病性。本研究为PDCoV致病机制及抗病毒免疫进一步研究奠定基础。

关键词：猪德尔塔冠状病毒 IPEC-J2细胞仔猪免疫反应致病机理

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猪δ冠状病毒S1蛋白的真核表达及多克隆抗体制备

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微生物学通报 2025年

作者：崔世龙魏晓锋司伏生于瑞嵩董世娟陈冰清李春华上海海洋大学水产与生命学院上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海农业遗传育种重点实验室上海实验动物研究中心上海市兽医生物技术重点实验室

【背景】猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus，PDCoV)是2012年首次报道的一种猪肠道冠状病毒，主要引起猪以腹泻、呕吐和脱水为特征的胃肠道疾病，与猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎等的临床症状类似，难以区别。PDCoV具有4种结构蛋... 详细信息

【背景】猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus，PDCoV)是2012年首次报道的一种猪肠道冠状病毒，主要引起猪以腹泻、呕吐和脱水为特征的胃肠道疾病，与猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎等的临床症状类似，难以区别。PDCoV具有4种结构蛋白，棘突蛋白(Spike，S)位于PDCoV病毒粒子表面，由S1和S2两个亚基组成，是病毒中和抗体的主要靶标。【目的】应用真核系统表达PDCoV S1蛋白并进行纯化，制备该蛋白的多克隆抗体。【方法】通过RT-PCR技术扩增PDCoV CHN-JS-2018株的S1基因，连接到pCAGGS真核表达载体中，构建pCAGGS-PDCoV-S1-mFc和pCAGGS-PDCoV-S1-hFc真核表达质粒，经测序正确后转染HEK293T细胞，采用IFA和Western blot检测重组蛋白表达。以纯化的PDCoV-S1-mFc重组蛋白免疫BALB/c小鼠，制备多克隆抗体，IFA检验多抗血清的反应原性，间接ELISA测定多抗血清效价。【结果】构建的pCAGGS-PDCoV-S1-mFc和pCAGGS-PDCoV-S1-hFc真核表达质粒能够在HEK293T细胞中表达，并与PDCoV阳性小鼠血清特异性结合，制备的PDCoV S1重组蛋白的多克隆抗体效价达到1:64 000以上，中和抗体效价为1:185，可用于猪δ冠状病毒检测的间接免疫荧光试验、Western-blot检测。【结论】本研究真核表达的PDCoV S1重组蛋白具有较强的免疫原性，可诱导小鼠产生较高效价的抗体，制备的多克隆抗体具有良好的反应性和中和活性，为后续开展PDCoV诊断、S1单克隆抗体制备、疫苗研制等奠定基础。

关键词：猪δ冠状病毒 S蛋白真核表达多克隆抗体

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基于猪轮状病毒完整VP6蛋白的间接ELISA方法的建立

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微生物学通报 2025年

作者：洪雨娟李本强陶洁程靖华唐攀石迎刘惠莉上海海洋大学水产与生命学院上海市农业科学院畜牧兽医研究所/上海市农业遗传育种重点实验室上海市种猪工程技术中心

【背景】猪轮状病毒（Porcine rotavirus， PoRV）是引起猪腹泻的重要病原之一，近期其感染率再次出现升高趋势，有必要加强临床监测以助力该病的防控。【目的】针对PoRV最新流行株的VP6蛋白，建立一种检测PoRV IgG抗体的间接ELISA方法... 详细信息

【背景】猪轮状病毒（Porcine rotavirus， PoRV）是引起猪腹泻的重要病原之一，近期其感染率再次出现升高趋势，有必要加强临床监测以助力该病的防控。【目的】针对PoRV最新流行株的VP6蛋白，建立一种检测PoRV IgG抗体的间接ELISA方法，为临床PoRV抗体普查提供技术支持。【方法】克隆PoRV优势基因型G9P[23]I5的VP6基因并原核表达与鉴定；以VP6重组蛋白作为捕获抗原，与PoRV阳性猪血清进行方阵滴定试验，优化并确定间接ELISA最优参，数并分析其特异性、敏感性和重复性。【结果】建立的ELISA技术流程及参数：VP6抗原最佳包被量0.1μg/孔，4℃包被过夜；5%脱脂奶粉封闭2 h，阳性血清最佳稀释度是1:1000，37℃孵育1h；Goat pAb to Pig IgG H&L （HRP）(1:15 000稀释)37℃孵育1 h，TMB显色15 min；最佳临界值OD450nm= 0.42，可检测到抗体的最大稀释度为1:8 000；批内和批间系数均小于10%；具有较好的特异性；与商品化PoRV ELISA检测试剂盒比对，检测130份临床血清样品，两种方法的总体符合率达93.85%；本试验建立间接ELISA方法的灵敏度高于商品化PoRV ELISA检测试剂盒。【结论】本研究建立的PoRV抗体间接ELISA方法具有较高的检测可靠性，适用于临床PoRV抗体的大规模筛查。

关键词：猪轮状病毒间接ELISA VP6重组蛋白抗体监测

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猪萨佩罗病毒VP4蛋白多克隆抗体制备及功能验证

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畜牧与兽医 2025年第4期57卷 78-84页

作者：钟祖昌李本强陶洁程靖华石迎刘佩红唐攀焦嘉杰刘惠莉上海海洋大学水产与生命学院上海201306 上海市农业科学院畜牧兽医研究所/上海市农业遗传育种重点实验室上海201106 上海市种猪工程技术中心上海201106

为深入揭示猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)致病机制,以毒株SHCM2019为研究对象,原核表达VP_(4)蛋白并制备多克隆抗体。根据VP_(4)氨基酸序列进行PSV遗传进化分析,然后将VP_(4)基因与原核表达载体连接,经诱导表达得到可溶性VP_(4... 详细信息

为深入揭示猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)致病机制,以毒株SHCM2019为研究对象,原核表达VP_(4)蛋白并制备多克隆抗体。根据VP_(4)氨基酸序列进行PSV遗传进化分析,然后将VP_(4)基因与原核表达载体连接,经诱导表达得到可溶性VP_(4)蛋白。纯化后的VP_(4)蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体并进行ELISA、Western blot、间接免疫荧光试验(IFA)验证其反应性。ELISA结果显示,多克隆抗体效价达1∶128000;Western blot和IFA结果表明,其能特异性识别和结合PSV,说明重组VP_(4)蛋白具有较好的免疫原性和反应原性。本研究成功表达了VP_(4)蛋白并制备了多克隆抗体,为VP_(4)蛋白功能研究奠定基础。

关键词：猪萨佩罗病毒 VP4蛋白原核表达多克隆抗体

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当归多糖对崇明白山羊冷冻精液质量与DNA甲基化的影响

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黑龙江畜牧兽医 2024年第15期 36-42,117页

作者：张克勤周金勇何孟纤张德福戴建军张维娅孙玲伟河北农业大学动物科技学院河北保定071001 上海市农业科学院畜牧兽医研究所农业遗传育种重点实验室上海201106

为了解决崇明白山羊精液冷冻后总体质量偏低的问题,试验采集8只24~26月龄体型匀称的崇明白山羊精液,检测合格后混匀以消除个体差异,分别用未添加当归多糖(ASP)和添加150,300,600,1200μg/mL ASP的基础稀释液稀释后进行冷冻,解冻后评估... 详细信息

为了解决崇明白山羊精液冷冻后总体质量偏低的问题,试验采集8只24~26月龄体型匀称的崇明白山羊精液,检测合格后混匀以消除个体差异,分别用未添加当归多糖(ASP)和添加150,300,600,1200μg/mL ASP的基础稀释液稀释后进行冷冻,解冻后评估精液的质量参数(活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性)、相关抗氧化指标[丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPH-Px)、一氧化氮(NO)、总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)]及DNA甲基化5-MC水平,最终确定ASP的最适宜添加浓度,并分析了精液DNA甲基化5-MC水平与精液质量参数的相关性。结果表明:与未添加ASP相比,添加600μg/mL ASP的精子活率、活力、质膜完整率和线粒体活性都显著升高(P<0.05);添加300μg/mL ASP的精子顶体完整率显著升高(P<0.05);添加600μg/mL ASP的精子SOD、CAT活性及T-AOC水平都显著升高(P<0.05);添加600μg/mL ASP的精子ROS、MDA含量都显著降低(P<0.05);添加300,600μg/mL ASP的精子DNA甲基化5-MC水平显著降低(P<0.05)。精液DNA甲基化5-MC水平与精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性均呈现极显著负相关(P<0.01),R分别为-0.983,-0.892,-0.992,-0.732,-0.825。说明在本试验条件下,基础稀释液中添加600μg/mL ASP最利于崇明白山羊精液的冷冻保存。

关键词：精液冷冻保存崇明白山羊抗氧化性当归多糖 DNA甲基化5-MC水平

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上海地方猪种抗腹泻基因与免疫相关因子分析

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中国农业科技导报 2024年第4期26卷 128-143页

作者：周金勇孙玲伟张克勤戴建军张德福王振国主性吴彩凤贵州大学动物科学学院贵阳550025 上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室上海201106 上海市崇明区动物疫病预防控制中心上海202154

为鉴定上海地方猪种上海白猪、枫泾猪和沙乌头猪中抗腹泻基因抗原加工相关转运体1(transporterassociated with antigen processing 1, TAP1)、α(1, 2)岩藻糖转移酶1[α (1, 2)-fucosyltransferase 1, FUT1]、天然抗性相关的巨噬细胞蛋... 详细信息

为鉴定上海地方猪种上海白猪、枫泾猪和沙乌头猪中抗腹泻基因抗原加工相关转运体1(transporterassociated with antigen processing 1, TAP1)、α(1, 2)岩藻糖转移酶1[α (1, 2)-fucosyltransferase 1, FUT1]、天然抗性相关的巨噬细胞蛋白1(natural resistance-associated macrophage protein 1, NRAMP1)、黏蛋白4(mucin 4,MUC4)和黏蛋白13(mucin 13, MUC13)基因的有效遗传标记,为上海地方猪种资源特性提供参考,应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism, PCRRFLR)和序列测序分析上述基因的多态性,结合部分免疫相关因子,探讨对3个上海地方猪种免疫力的影响。结果显示,3个猪种中TAP1和MUC4基因均具有抗腹泻基因型GG,而仅在枫泾猪和沙乌头猪中检测到MUC13基因抗腹泻基因型GG,在3个猪种中均未检测到FUT1和NRAMP1基因抗腹泻基因型AA。上海白猪、枫泾猪和沙乌头猪TAP1基因处于中度多态,上海白猪的MUC4基因处于低度多态,枫泾猪和沙乌头猪的MUC4基因处于中度多态,上海白猪MUC13基因处于中度多态,其中上海白猪和沙乌头猪的TAP1基因不满足HardyWeinberg平衡,枫泾猪的MUC4基因不满足Hardy-Weinberg平衡。上海白猪MUC13基因AA型的白细胞介素12(interleukin-12, IL-12)水平显著高于AG型,枫泾猪TAP1基因AA型的肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor, TNF-α)指标显著高于GG和AG型,沙乌头猪TAP1基因AG型的IL-12指标显著高于GG型。以上研究结果对上海白猪、枫泾猪和沙乌头猪的抗腹泻育种和分子选育具有一定指导意义,为今后上海各地方猪种抗腹泻育种工作奠定了基础。

关键词：上海白猪枫泾猪沙乌头猪抗腹泻基因免疫因子

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细胞松弛素B改善冷冻引起的猪卵母细胞皮质颗粒迁移障碍

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畜牧兽医学报 2024年第5期55卷 1999-2010页

作者：李婉君徐皆欢何孟纤孔钰婷张德福戴建军上海海洋大学水产与生命学院上海201306 上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室上海201106 农业农村部畜禽资源(猪)评价利用重点实验室上海201106 上海种猪工程技术研究中心上海201302

旨在揭示冷冻后的猪GV期卵母细胞体外成熟过程中细胞骨架与皮质颗粒迁移之间的相互关系和影响。所采集猪卵巢样品来自上海市嘉定区五丰上食屠宰场的健康经产母猪,每次采样选用体重70~90 kg、生产性能良好的浦东白母猪300头左右采取卵巢... 详细信息

旨在揭示冷冻后的猪GV期卵母细胞体外成熟过程中细胞骨架与皮质颗粒迁移之间的相互关系和影响。所采集猪卵巢样品来自上海市嘉定区五丰上食屠宰场的健康经产母猪,每次采样选用体重70~90 kg、生产性能良好的浦东白母猪300头左右采取卵巢样品,采集卵巢数量120~150枚·次^(-1),挑选胞质分布均匀且紧密的GV期卵母细胞按试验要求随机分为3组,每组设3个重复,每组至少30枚细胞,利用细胞骨架稳定剂细胞松弛素B (cytochalasin B,CB)冻前处理猪GV期卵母细胞,冷冻解冻后经体外成熟培养,检测卵母细胞存活率、各时间点微丝与皮质颗粒荧光共定位情况、卵丘扩散程度、第一极体排出率、谷胱甘肽(glutathione, GSH)水平和发育能力等指标。结果显示,冷冻前用CB处理可有效提高GV期卵母细胞解冻后存活率(44.11%vs. 27.91%,P<0.01)。在新鲜卵母细胞成熟过程中,可观察到皮质颗粒与微丝存在共迁移。冷冻会引起皮质颗粒-微丝迁移异常,而冷冻前CB的添加会缓解冷冻引起的迁移障碍,表现为CB处理组的微丝与皮质颗粒均成功迁移至质膜的比例更高,迁移均匀分布于质膜效果更好。冷冻卵母细胞体外成熟后,CB预处理的第一极体排出率((26.79±2.37)%vs.(8.13±0.30)%,P<0.01)、GSH水平(23.12±2.65 vs. 7.27±0.79,P<0.01)和孤雌激活后的卵裂率((20.91±2.84)%vs.(5.64±0.37)%,P<0.01)与囊胚率((5.00±0.03)%vs.(0.41±0.01)%,P<0.05)均有显著提高。本研究表明,微丝细胞骨架对卵母细胞体外成熟过程中胞内皮质颗粒由内部向质膜迁移有一定的调节作用,且两者存在一定共定位关系,通过冻前添加CB孵育可有效影响细胞微丝骨架与皮质颗粒的迁移程度,减轻了冷冻引起的细胞骨架异常分布,缓解了由冷冻引起的皮质颗粒-微丝迁移障碍,进而提升细胞抗冻能力,表现为促进胞质成熟的同时,提高了冷冻卵母细胞存活率、核成熟率与胚胎体外发育潜能。

关键词：皮质颗粒微丝玻璃化冷冻猪卵母细胞

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肉鸽肠道微生物菌群差异分析和抗生素耐药基因预测

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畜牧兽医学报 2023年第12期54卷 5293-5300页

作者：陶洁李本强程靖华石迎刘佩红刘惠莉上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室上海201106 农业农村部区域特色畜禽品种疾病防控重点实验室(部省共建) 上海201106

本研究旨在利用宏基因组学深入分析上海某鸽场青年鸽(RP)和产鸽(LP)粪便样品的微生物菌群差异。结果显示,肉鸽肠道菌群的优势菌门为厚壁菌(Firmicutes)、变形菌(Proteobacteria)和放线菌(Actinobacteria)。RP组中双歧杆菌(Bifidobacteri... 详细信息

本研究旨在利用宏基因组学深入分析上海某鸽场青年鸽(RP)和产鸽(LP)粪便样品的微生物菌群差异。结果显示,肉鸽肠道菌群的优势菌门为厚壁菌(Firmicutes)、变形菌(Proteobacteria)和放线菌(Actinobacteria)。RP组中双歧杆菌(Bifidobacterium)、棒状杆菌(Corynebacteriun)、嗜冷杆菌(Psychrobacter)、链球菌属(Streptococcus)含量显著高于LP组,而LP组金黄色葡萄球菌属(Staphyloccus)、短状杆菌属(Brachybacterium)、库特氏菌属(Kurthia)和埃希氏菌属(Escherichia)含量显著高于RP组。LEfSe分析显示,LP和RP组的差异表达基因主要富集于5个KEGG通路。抗生素耐药基因(antibiotic resistance genes,ARGs)鉴定显示,肉鸽体内存在198种ARGs,其中多重耐药类ARGs流行率40%以上,说明该场肉鸽抗生素耐药情况较严重。本研究为后续深入研究肠道菌群与健康养殖、抗生素耐药机制等提供了科学数据。

关键词：肉鸽宏基因组学肠道菌群抗生素耐药基因

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毛喉素对猪卵母细胞降脂及冷冻保护效果研究

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畜牧兽医学报 2023年第1期54卷 178-188页

作者：蔡绍莉徐皆欢何孟纤张德福孙玲伟张树山李婉君吴彩凤主性戴建军贵州大学动物科学学院贵阳550025 上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室上海201106 农业农村部畜禽资源(猪)评价利用重点实验室上海201106 上海种猪工程技术研究中心上海201302

猪卵母细胞脂质含量高被认为是其冷冻效率低下的重要因素之一。本文通过在猪卵母细胞体外成熟过程中添加化学降脂剂毛喉素(forskolin),检测冷冻前后成熟卵母细胞的脂滴含量、脂滴超微结构、线粒体膜电位、活性氧水平、早期凋亡指标、冻... 详细信息

猪卵母细胞脂质含量高被认为是其冷冻效率低下的重要因素之一。本文通过在猪卵母细胞体外成熟过程中添加化学降脂剂毛喉素(forskolin),检测冷冻前后成熟卵母细胞的脂滴含量、脂滴超微结构、线粒体膜电位、活性氧水平、早期凋亡指标、冻后存活率及发育潜能变化等,研究其对猪卵母细胞降脂和冷冻保护的效果。结果显示,成熟过程中毛喉素处理可部分提高卵母细胞成熟率,但差异不显著(P>0.05)。尼罗红荧光染色显示,毛喉素处理后卵母细胞内脂滴数量及面积在冷冻前后均极显著低于未处理组(P<0.01);超微结构观察发现,经毛喉素处理的卵母细胞中非均质脂滴数量与均质脂滴数量的比例扩大,且比均质脂滴面积更大;冷冻后,卵母细胞中以非均质脂滴为主,脂滴变小变少,分布不均匀,毛喉素处理后非均质与均质间的脂滴数量比例进一步增加。毛喉素处理极显著上调冻后卵母细胞线粒体膜电位(1.04 vs. 0.51,P<0.01),减轻氧化应激,降低早期凋亡率(68.30%vs. 86.03%,P<0.01),从而有效提高了冷冻后卵母细胞的存活率(71.17%vs. 51.47%,P<0.01)和孤雌激活卵裂率(16.63%vs. 8.23%,P<0.05)。本研究表明,在猪卵母细胞体外成熟过程中添加毛喉素可有效降低细胞内脂质含量,并通过降低氧化损伤和改善线粒体功能,达到提高冻后存活率和发育能力的目的。

关键词：猪卵母细胞冷冻保存脂质毛喉素线粒体功能

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猪萨佩罗病毒对仔猪的致病性

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中国兽医学报 2023年第2期43卷 240-244,277页

作者：刘佳佳李本强陶洁石迎程靖华乔长涛刘惠莉上海市农业科学院畜牧兽医研究所/上海市农业遗传育种重点实验室上海201106 上海海洋大学水产与生命学院上海201306 上海市种猪工程技术中心上海201106

猪萨佩罗病毒(PSV)是我国近年来新报道的仔猪腹泻病原,为深入了解PSV对仔猪腹泻的致病作用,本研究建立了PSV感染仔猪模型,通过对感染仔猪临床症状、剖检及组织病理学变化观察发现PSV能感染仔猪并导致发病,临床仔猪表现体温下降、出现腹... 详细信息

猪萨佩罗病毒(PSV)是我国近年来新报道的仔猪腹泻病原,为深入了解PSV对仔猪腹泻的致病作用,本研究建立了PSV感染仔猪模型,通过对感染仔猪临床症状、剖检及组织病理学变化观察发现PSV能感染仔猪并导致发病,临床仔猪表现体温下降、出现腹泻症状,腹泻率可达80%,病死率20%。组织病理学观察肠道、肺脏及淋巴结病变明显,肠道绒毛受损,肺脏和淋巴结炎性细胞浸润。感染仔猪组织脏器病毒载量检测显示,病毒主要定植在肠道、肺脏和淋巴组织。荧光定量PCR对外周血中相关细胞因子水平检测,攻毒初期IL-1α、IL-6细胞因子上升明显,后期IL-2水平升高较快;抗病毒因子MX1水平持续上高,在14 d左右达到高峰。结果表明,PSV感染低日龄仔猪可引起腹泻,甚至死亡;病毒定植部位以肠道、肺脏及淋巴组织为主;感染后能诱导仔猪机体产生高水平细胞因子及抗病毒因子,攻毒仔猪体内先诱导产生TH2型体液免疫反应为主的抗炎性反应为主,后期以诱导TH1型促炎症反应的免疫应答为主。

关键词：猪萨佩罗病毒仔猪致病性病理变化

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