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微生物学通报 2024年第7期51卷 2534-2545页

作者：孙如晶董世娟于瑞嵩李震李春华司伏生谢春芳陈冰清张道敬华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237 上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海种猪工程技术研究中心上海201106 上海农业遗传育种重点实验室上海201106

【背景】猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是严重影响养猪业健康发展的动物传染病,其致病原为猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)。PEDV结构蛋白之一——棘突蛋白(spike protein,S protein)负责病毒的侵染、入胞等过程,该蛋白结构和功能研究是PEDV分子生物学研究的热点。S蛋白分为两个功能域,N端的S1亚单位和C端的S2亚单位,以往研究表明PEDV DR13att毒株S1N(19-233 aa)结构域缺失,不影响DR13att毒株的存活和增殖。【目的】基于靶向RNA重组技术,在PEDV(DR13att)S1N结构域分别引入HA标签基因、抗坏血酸过氧化物酶(APEX2)基因,构建重组PEDV,考察S1N结构域能否被标签(记)蛋白或多肽替换。【方法】利用靶向RNA重组技术的PEDV反向遗传学操作平台,将转移载体p-PEDV-DR13att的S1N结构域(1-234 aa)分别替换成HA基因、APEX2基因,进行重组转移载体的构建,再分别将线性化的载体体外转录的RNA转染至m PEDV感染的LR7细胞,然后在Vero细胞上拯救重组PEDV。通过观察细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)、RT-PCR检测、测序、间接免疫荧光分析(immunofluorescence assay,IFA)、Western blotting检测对重组病毒进行验证,最后测定重组病毒滴度并绘制重组病毒生长曲线,探究重组病毒与亲本病毒的生长特性。【结果】构建的重组病毒经过拯救和传代,发现引入HA标签蛋白的重组猪流行性腹泻病毒r PEDV-DR13-S1N-HA(r PEDV-DSH)在P1代出现细胞病变,引入APEX2蛋白的重组猪流行性腹泻病毒r PEDV-DR13-S1N-APEX2(rPEDV-DSA)盲传至P4代,未出现细胞病变。对P4代的rPEDV-DSH、rPEDV-DSA进行RT-PCR检测、测序、间接免疫荧光分析、蛋白质印迹法验证,证实引入HA标签的重组病毒r PEDV-DSH拯救成功,而携带APEX2的重组病毒未能拯救成功。重组病毒rPEDV-DSH生长曲线表明rPEDV-DSH与亲本毒株DR13att有相似的生长趋势,但病毒增殖水平显著低于亲本毒株。【结论】HA标签替换S1N(1-234 aa)结构域的重组PEDV rPEDV-DSH成功拯救,为进一步研究S蛋白与宿主细胞的互作机制建立了基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒 HA标签靶向RNA重组技术 S1N结构域

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猪德尔塔冠状病毒致病机理研究进展

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上海农业学报 2024年第4期40卷 127-134页

作者：石迎陶洁李本强程靖华刘惠莉上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室上海市种猪工程技术中心上海201106

猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是流行于猪群中的一种新发肠道冠状病毒,能引起猪腹泻、呕吐、脱水甚至死亡,给养猪业带来巨大威胁。PDCoV可在猪、禽类和牛体内复制,甚至在人体血浆样品中检出,具有潜在的公共安全问题... 详细信息

猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是流行于猪群中的一种新发肠道冠状病毒,能引起猪腹泻、呕吐、脱水甚至死亡,给养猪业带来巨大威胁。PDCoV可在猪、禽类和牛体内复制,甚至在人体血浆样品中检出,具有潜在的公共安全问题,存在引发大流行的威胁,深入开展PDCoV的致病机理研究对该病的防控有重要意义。本文从其入侵宿主细胞以拮抗干扰素反应、诱导细胞凋亡、调控细胞自噬、抑制细胞焦亡途径来逃避宿主免疫应答,以及其他影响PDCoV复制的分子机制方面对其致病机理进行总结,为后续科学研究和有效防治提供借鉴。

关键词：猪德尔塔冠状病毒致病机理研究进展

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犬猫冠状病毒病

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上海畜牧兽医通讯 2023年第2期 1-9页

作者：李春华于瑞嵩周宗清上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室上海201106

由犬猫冠状病毒感染导致的犬猫冠状病毒病对宠物危害较大,不仅影响宠物行业的健康发展,还对人类健康和公共卫生安全构成潜在威胁。本文从病原学、临床症状与病理变化、诊断方法等方面分别对犬冠状病毒病和猫冠状病毒病进行介绍,并对犬... 详细信息

由犬猫冠状病毒感染导致的犬猫冠状病毒病对宠物危害较大,不仅影响宠物行业的健康发展,还对人类健康和公共卫生安全构成潜在威胁。本文从病原学、临床症状与病理变化、诊断方法等方面分别对犬冠状病毒病和猫冠状病毒病进行介绍,并对犬猫冠状病毒病的防治进行概述,以期为犬猫养殖者、饲养者及研究人员提供参考。

关键词：犬冠状病毒病猫冠状病毒病病原学病理变化诊断方法防治措施

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不同形式饲粮对生长期白山羊生长性能、肉质性能和血液生理生化指标的影响

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动物营养学报 2021年第8期33卷 4748-4759页

作者：戴建军李丹阳孙玲伟吴彩凤吕玉华张树山林月霞张德福上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106

为促进全价颗粒饲粮在山羊饲养中的推广应用,本研究以生长期长三角洲白山羊为研究对象,分别以全混合日粮(TMR,TMR组)、全价颗粒饲粮(颗粒组)和全价颗粒饲粮部分限制采食(限制采食组)进行饲喂,研究全价颗粒饲粮对其生长速度、肉质性能和... 详细信息

为促进全价颗粒饲粮在山羊饲养中的推广应用,本研究以生长期长三角洲白山羊为研究对象,分别以全混合日粮(TMR,TMR组)、全价颗粒饲粮(颗粒组)和全价颗粒饲粮部分限制采食(限制采食组)进行饲喂,研究全价颗粒饲粮对其生长速度、肉质性能和血液生理生化指标的影响。结果表明:1)颗粒组的增重效果显著高于TMR组(P<0.05),部分限制采食亦能取得良好的增重效果。2)与TMR组相比,颗粒组白山羊屠宰率提高了1.48%,但差异不显著(P>0.05);各组间pH、剪切力、滴水损失、蒸煮损失和肉色均没有显著变化(P>0.05)。3)各组间白山羊血清中生长激素(GH)、生长抑素(SS)、生长激素释放多肽(GHRP)、三碘甲状腺原氨酸(T 3)、甲状腺素(T 4)和胰岛素样生长因子(IGF)含量均无显著差异(P>0.05);限制采食组血清碱性磷酸酶(ALP)活性在第4周时出现一个异常波动,显著高于TMR组和颗粒组(P<0.05),到第8周时限制采食组血清ALP活性显著下降(P<0.05),但仍显著高于颗粒组(P<0.05);颗粒组的血清甘油三酯(TG)含量在第8周时显著高于TMR组和限制采食组(P<0.05),血清低密度脂蛋白(LDL)含量则显著低于TMR组(P<0.05),其余血清生化指标在各组之间均无显著差异(P>0.05)。在血常规指标方面,除个别指标在饲喂第2周出现一定波动外,其余时间点3组呈一致变化趋势;饲喂结束后,各组之间血清丙二醛(MDA)、活性氧簇(ROS)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性均没有显著差异(P>0.05)。4)组织切片观察表明,颗粒饲喂可部分增加十二指肠的肠绒毛长度,对肝脏、睾丸和附睾等组织未产生影响。综上所述,全价颗粒饲粮饲喂对生长期白山羊增重效果明显,且整个试验过程未对其健康指标产生明显影响,可用于育肥过程中的标准化饲喂。

关键词：全价颗粒饲粮生长性能血液生理生化指标白山羊

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紫外照射对两种猪流行性腹泻病毒毒株体外感染细胞的影响比较

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上海农业学报 2024年第6期40卷 96-102页

作者：谢春芳马嘉于瑞嵩董世娟陈冰清李震李春华上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室上海201106 上海建工医院外科上海200083

猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是引起仔猪腹泻死亡的重要病因之一,目前尚无有效治疗药物。不同的PEDV毒株,其感染细胞方式、病毒增殖速度有所不同。目前,主要依靠消毒等预防管理措施防止病毒的传播和污染。... 详细信息

猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是引起仔猪腹泻死亡的重要病因之一,目前尚无有效治疗药物。不同的PEDV毒株,其感染细胞方式、病毒增殖速度有所不同。目前,主要依靠消毒等预防管理措施防止病毒的传播和污染。本研究运用不添加胰酶法在体外贴壁培养细胞上分别感染PEDV CV777毒株和DR13毒株,检测紫外线对不同毒株的杀灭效果。结果显示:100 TCID_(50)DR13和CV777毒株需要使用48.6 m J∕cm^(2)的UV能量值灭活,10 000 TCID_(50)DR13和CV777毒株需要291.6 m J∕cm^(2)的UV能量值灭活。本研究对PEDV的防控具有重要意义。

关键词： DR13毒株 CV777毒株紫外线照射感染灭活

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猪流行性腹泻病毒免疫及疫苗研制

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生物工程学报 2021年第8期37卷 2603-2613页

作者：董世娟谢春芳司伏生陈冰清于瑞嵩李震上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室上海201106 上海市种猪育种工程中心上海201106

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是严重危害我国和世界养猪业的重要动物疫病,其致病原为猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),属冠状病毒科α冠状病毒属。文中综述分为5个部分。前两部分在介绍该病病... 详细信息

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是严重危害我国和世界养猪业的重要动物疫病,其致病原为猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),属冠状病毒科α冠状病毒属。文中综述分为5个部分。前两部分在介绍该病病原及其流行病学的基础上先概括了初生仔猪的被动免疫途径和初乳的重要功效。第三部分总结了母猪孕期免疫的特点,讨论了"肠道-乳腺-sIgA轴"理论及其可能的作用机理,提出了一系列PEDV免疫防控中应重点关注的理论技术问题。最后两部分分别总结了PEDV疫苗的研发现状并对PEDV免疫防控的未来发展作了展望。

关键词：猪流行性腹泻病毒冠状病毒疫苗免疫肠道-乳腺-sIgA轴

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浦东鸡囊胚细胞冷冻保存技术的优化

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上海畜牧兽医通讯 2024年第5期 23-27页

作者：孙玲伟高骏何孟纤徐皆欢刘富琴张树山吴彩凤戴建军上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室农业农村部畜禽资源(猪)评价利用重点实验室上海201106

本研究旨在探究不同冷冻-解冻程序对浦东鸡囊胚细胞(blastodermal cells,BCs)冷冻保存效果的影响。以浦东鸡BCs为研究对象,比较了不同冷冻-解冻程序下细胞解冻后培养24 h的活率和贴壁率。经综合分析,鸡BCs最佳的冷冻方法为:以20%二甲基... 详细信息

本研究旨在探究不同冷冻-解冻程序对浦东鸡囊胚细胞(blastodermal cells,BCs)冷冻保存效果的影响。以浦东鸡BCs为研究对象,比较了不同冷冻-解冻程序下细胞解冻后培养24 h的活率和贴壁率。经综合分析,鸡BCs最佳的冷冻方法为:以20%二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)+20%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)+60%DMEM (dulbecco′s modified eagle medium)为冷冻保护液,通过应用程序冷冻仪,在4℃条件下以0.7℃/min降温速率,降温至—7℃保持10 min,以1.0℃/min速率降温至—35℃,之后投入液氮保存。最佳的解冻方法为:在37℃水浴锅中解冻30s,培养24h后鸡BCs的质量最佳。本研究优化了浦东鸡BCs冷冻保存技术,为家禽种质资源保存工作提供一定参考。

关键词：浦东鸡囊胚细胞抗冻性冷冻保存解冻

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卵黄在鸡精液冷冻保存中的应用研究

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上海农业学报 2023年第1期39卷 108-112页

作者：何孟纤孙玲伟戴建军汪俊跃徐皆欢吴彩凤张树山张德福上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106

以Lake’s为基础稀释液,通过在鸡精液冷冻过程中添加全卵黄和不同浓度卵黄上清,探究卵黄及其离心处理在鸡精液冷冻中的应用效果。结果表明:与对照相比,稀释液中添加10%的全成分卵黄处理鸡精液冷冻保存后活率(22.33%)和活力(13.26%)显著... 详细信息

以Lake’s为基础稀释液,通过在鸡精液冷冻过程中添加全卵黄和不同浓度卵黄上清,探究卵黄及其离心处理在鸡精液冷冻中的应用效果。结果表明:与对照相比,稀释液中添加10%的全成分卵黄处理鸡精液冷冻保存后活率(22.33%)和活力(13.26%)显著下降(47.81%,42.55%),质膜完整性、顶体完整性和线粒体活性也下降显著。卵黄经稀释和离心处理后,添加5%-15%的卵黄上清可提高鸡精液的冷冻保存效果,其中以10%的卵黄上清效果最佳,其冻后活率和活力可达58.93%和55.36%,显著高于对照组。当卵黄上清添加浓度达到25%时,冻精质量开始明显下降。综上,在鸡精液冷冻过程中,添加全卵黄成分不利于其冷冻保存;10%的卵黄上清可显著提高鸡精子的抗冻能力。

关键词：鸡精液冷冻卵黄卵黄上清

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茯苓多糖对上海白猪精液冷冻保存及精子DNA甲基化的影响

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上海农业学报 2025年第1期41卷 72-79页

作者：孙玲伟朱永军周金勇刘富琴张德福戴建军滑志民上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室上海201106 农业农村部畜禽资源(猪)评价利用重点实验室上海201106 上海农林职业技术学院动物科学技术系上海201699

为研究茯苓多糖(Poria cocos mushroom polysaccharides,PCP)在上海白猪精液冷冻保存中的作用,采集8头上海白猪24份精液,在精液冷冻液中添加不同浓度的PCP,测定冷冻-解冻后精液质量和抗氧化活性,以及冷冻保存后精子DNA甲基化水平。结果... 详细信息

为研究茯苓多糖(Poria cocos mushroom polysaccharides,PCP)在上海白猪精液冷冻保存中的作用,采集8头上海白猪24份精液,在精液冷冻液中添加不同浓度的PCP,测定冷冻-解冻后精液质量和抗氧化活性,以及冷冻保存后精子DNA甲基化水平。结果表明:与未添加PCP组相比,600μg∕mL PCP添加组精子活力最高(P<0.05),600μg∕mL PCP添加组精子活率最高(P<0.05),而600μg∕mL和900μg∕mL PCP添加组的精子顶体完整率、质膜完整率、线粒体活性、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)含量较高。此外,600μg∕mL PCP添加组精液中的超氧化歧化酶(SOD)活性最高(P<0.05),300、600、900μg∕mL PCP添加组精液中的过氧化氢酶(CAT)活性较高(P<0.05),600μg∕mL PCP添加组精液中的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性最高(P<0.05);所有添加组的精子DNA甲基化水平均显著低于对照组(P<0.05)。综上,添加适量的PCP可以改善上海白猪的精液冷冻保存效果,也能够降低冷冻后精子的DNA甲基化水平。

关键词：上海白猪精液冷冻保存茯苓多糖(PCP) 抗氧化 DNA甲基化

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原花青素添加对鸡精液冷冻效果的影响

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上海农业学报 2024年第2期40卷 66-70页

作者：何孟纤戴建军孙玲伟徐皆欢吴彩凤张树山滑志民张德福上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106 上海农林职业技术学院上海201699

为探究抗氧化剂原花青素(Procyanidin,PC)在鸡精液冷冻中的应用效果,在10%卵黄上清稀释液中添加不同质量浓度(10μg∕mL、20μg∕mL、30μg∕mL、40μg∕mL、60μg∕mL)的PC,检测冻后鸡精子的质量指标和抗氧化指标。结果表明:在卵黄上... 详细信息

为探究抗氧化剂原花青素(Procyanidin,PC)在鸡精液冷冻中的应用效果,在10%卵黄上清稀释液中添加不同质量浓度(10μg∕mL、20μg∕mL、30μg∕mL、40μg∕mL、60μg∕mL)的PC,检测冻后鸡精子的质量指标和抗氧化指标。结果表明:在卵黄上清稀释液中添加10—30μg∕mL PC,冻后鸡精子的质量指标(存活率、活力、质膜完整性、顶体完整性和线粒体活性)与对照之间均无显著差异。当PC添加质量浓度为40—60μg∕mL时,冻后鸡精子的各项质量指标均显著下降(P<0.05)。在抗氧化指标方面,PC添加可提高冻后鸡精子的抗氧化能力,其中添加30μg∕mL PC的冻后鸡精子抗氧化能力最高,冻后鸡精子的MDA含量和ROS含量最低,分别为5.48 nmol∕L和342.00 U∕mL;SOD活性和GSH-PX活性最高,分别为137 U∕mL和90.85 U∕L,且与其他各组差异显著。当PC添加质量浓度为40—60μg∕mL时,冻后鸡精子的抗氧化能力显著下降,表现为对精子的毒副损伤。可见,在鸡精液冷冻过程中添加10—30μg∕mL的PC虽不能显著提高冻后鸡精子的质量,但却能显著提高其抗氧化能力。

关键词：鸡精液冷冻原花青素

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