检索结果-内蒙古大学图书馆

上海农业学报 2020年第5期36卷 148-152页

作者：张树山韩雪峻姜红菊戴建军吴彩凤孙玲伟张德福上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106 上海祥欣畜禽有限公司∕上海种猪工程技术研究中心上海201302

通过配子(精子和卵母细胞)、胚胎和体细胞等遗传物质的冷冻保存(即“静态保种”)对地方猪种进行遗传资源备份,可大幅度地降低传统活体保种面临的生物安全风险。通过对我国地方猪种遗传资源保护现状、“静态保种”涉及技术和国内外畜禽... 详细信息

通过配子(精子和卵母细胞)、胚胎和体细胞等遗传物质的冷冻保存(即“静态保种”)对地方猪种进行遗传资源备份,可大幅度地降低传统活体保种面临的生物安全风险。通过对我国地方猪种遗传资源保护现状、“静态保种”涉及技术和国内外畜禽“基因库”进展等方面展开综述,指出在目前非洲猪瘟形势仍十分严峻的背景下,整合科研单位、养猪企业和专门保种场力量,利用精液、体细胞和胚胎等冷冻保存技术对我国现有地方猪种质资源进行有效保护,显得尤为紧迫和意义重大。

关键词：中国地方猪品种静态保种遗传资源

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牛传染性鼻气管炎可视化LAMP检测方法的建立和应用

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生物工程学报 2018年第10期34卷 1587-1595页

作者：董世娟冯蒙于瑞嵩谢春芳陈冰清李震上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室上海201106

根据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gB基因保守序列(GenBank Accession No. DQ006857.1),利用Primer ExplorerV4软件设计3对LAMP引物,通过反应体系的优化、敏感性试验和特异性试验,建立IBRV的LAMP检测方法,并对393份临床样本进行了检测应... 详细信息

根据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gB基因保守序列(GenBank Accession No. DQ006857.1),利用Primer ExplorerV4软件设计3对LAMP引物,通过反应体系的优化、敏感性试验和特异性试验,建立IBRV的LAMP检测方法,并对393份临床样本进行了检测应用。结果显示,建立的IBRV LAMP方法在65℃、50 min条件下可扩增出LAMP特征性梯状条带,并可通过颜色变化判定结果。该方法可以检测到10copies/μL的质粒DNA,与nested-PCR方法的敏感性相当,比PCR方法敏感1000倍,且与牛病毒性腹泻病毒、猪伪狂犬病毒、水泡口炎病毒等均无交叉反应。应用该方法检测301份鼻腔拭子和92份血清样本,阳性率分别为87.6%和58.8%,表明鼻腔棉拭子更适用于IBRV的临床检测。文中建立的IBRV LAMP方法具有可视化、快速、特异、灵敏性强的优势,适合基层和现场对临床样本进行快速检测,为IBR的防控提供了技术支撑。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒环介导等温扩增方法 gB基因

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与猪流行性腹泻病毒M蛋白互作的宿主蛋白的鉴定

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微生物学通报 2019年第6期46卷 1434-1442页

作者：王瑞阳于瑞嵩陈冰清李凤平谢春芳司伏生董世娟李震上海海洋大学水产与生命学院上海201306 上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海农业遗传育种重点实验室上海201106 上海种猪工程技术研究中心上海201106

【背景】猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)膜蛋白(M)在病毒粒子的组装、膜融合和病毒复制等方面具有重要的作用,但M蛋白与宿主细胞的互作机制尚不清楚。【目的】利用免疫沉淀技术和液质联用技术筛选细胞内与PEDV... 详细信息

【背景】猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)膜蛋白(M)在病毒粒子的组装、膜融合和病毒复制等方面具有重要的作用,但M蛋白与宿主细胞的互作机制尚不清楚。【目的】利用免疫沉淀技术和液质联用技术筛选细胞内与PEDVM蛋白相互作用的蛋白,为揭示M蛋白在病毒增殖过程中发挥的功能提供研究基础。【方法】将MOI=0.1的PEDV DR13疫苗株接种于长成单层的Vero细胞,感染36 h后,收集细胞并进行裂解。利用抗M的单克隆抗体沉淀与M相互作用蛋白复合物,通过液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)进行鉴定并利用细胞功能富集分析(Gene ontology,GO)对感染组鉴定到的细胞蛋白进行分析,确定两个细胞内源性蛋白为候选蛋白,进行免疫共沉淀(Co-IP)验证和共定位分析。【结果】基于鉴定蛋白的肽段数的方法分析显示,感染组与对照组相比,鉴定了218个与M蛋白相互作用的细胞内源性蛋白,分别与蛋白质合成、代谢、细胞信号通路转导等密切相关,选择细胞分裂周期蛋白42 (Cell division cycle 42,CDC42)、真核翻译起始因子3亚基L蛋白(eIF3L)为候选蛋白进行Co-IP(Co-immunoprecipitation)验证和共定位分析,结果证实CDC42、eIF3L蛋白分别与M蛋白在细胞内存在相互作用。【结论】鉴定出PEDV M蛋白能够与宿主细胞CDC42和eIF3L蛋白相互作用,并鉴定出其他可能与M蛋白发生相互作用的宿主蛋白60个,为开展PEDV与宿主细胞蛋白相互作用研究提供了重要理论依据。

关键词：免疫共沉淀猪流行性腹泻病毒 CDC42 eIF3L 膜蛋白蛋白互作

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原花青素对湖羊冻精抗氧化能力的影响

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上海农业学报 2019年第3期35卷 95-99页

作者：吕松洁吴彩凤范文华张树山戴建军孙玲伟张德福上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室

在湖羊冻精基础稀释液中分别添加原花青素(PC),使其最终质量浓度为0μg/mL(CK)、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL,经冷冻解冻后对精子质量进行检测,探讨原花青素对湖羊精液冷冻效果的影响。结果表明:当PC的质量浓度为10μg/mL时... 详细信息

在湖羊冻精基础稀释液中分别添加原花青素(PC),使其最终质量浓度为0μg/mL(CK)、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL,经冷冻解冻后对精子质量进行检测,探讨原花青素对湖羊精液冷冻效果的影响。结果表明:当PC的质量浓度为10μg/mL时,解冻后精子的活率、活力、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性最高,分别达58.91%、56.03%、50.03%、53.42%和50.19%,其中活力和质膜完整性显著高于对照组;SOD值和GSH-PX值分别为212.60U/mL和125.04UL,均显著高于对照组;ROS和MDA值分别为363.05U/mL和7.02nmolL,显著低于对照组;NO和NOS值分别为8.22μmol/L和35.90μmol/L,其中NOS值显著低于对照组。当PC的质量浓度提高至40μg/mL时,精子解冻后质量显著下降,表现为促氧化损伤。在湖羊精液冷冻中,添加10μg/mL的PC可降低精子氧化损伤,提高冻精品质,当PC质量浓度提高至40μg/mL时,对精子具有毒副作用。

关键词：湖羊冷冻精液原花青素抗氧化

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干扰素诱导蛋白IFIT研究进展

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上海畜牧兽医通讯 2019年第2期 23-25页

作者：谢春芳于瑞嵩董世娟王剑马进雯李震上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106

干扰素诱导蛋白(Interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats, IFITs)是机体先天免疫系统中,当病原体、肿瘤细胞等微生物刺激相关受体,促使机体免疫细胞诱导表达干扰素后,产生的干扰素刺激因子之一,起抑制病毒复制增殖... 详细信息

干扰素诱导蛋白(Interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats, IFITs)是机体先天免疫系统中,当病原体、肿瘤细胞等微生物刺激相关受体,促使机体免疫细胞诱导表达干扰素后,产生的干扰素刺激因子之一,起抑制病毒复制增殖、抵抗病毒感染的作用。1 IFIT的产生机体的先天免疫,主要包括机体产生的干扰素触发和干扰素的抗病毒效应,建立极其有效的抗病毒状态.

关键词： RNA 宿主细胞干扰素抗病毒感染诱导蛋白

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猪流行性腹泻病毒流行株S蛋白高变区B细胞线性表位肽的鉴定

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微生物学通报 2019年第7期46卷 1772-1784页

作者：刘英杰李凤平董世娟王瑞阳于瑞嵩王燕李震齐鲁工业大学生物工程学院(山东省科学院) 山东济南250353 上海种猪工程技术研究中心上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室上海201106 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

【背景】对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)经典毒株与流行毒株S蛋白氨基酸序列比对显示,变异位点主要集中在S蛋白的N端。【目的】鉴定PEDV流行毒株S蛋白高变区(S10A,1-496 aa)的B细胞线性表位肽,特别是流行毒... 详细信息

【背景】对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)经典毒株与流行毒株S蛋白氨基酸序列比对显示,变异位点主要集中在S蛋白的N端。【目的】鉴定PEDV流行毒株S蛋白高变区(S10A,1-496 aa)的B细胞线性表位肽,特别是流行毒株特异性B细胞表位肽。【方法】以SDS-PAGE割胶纯化大肠杆菌表达的PEDV流行株SD2014 S蛋白高变区片段(S10A^SD2014),免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体;在***中谷胱甘肽巯基转移酶(Glutathione S-transferase,GST)融合表达覆盖S10A^SD2014序列全长且彼此重叠8个氨基酸残基的系列16肽。以制备的抗S10A^SD2014多抗为一抗,通过Western blot筛选系列16肽中的阳性反应性16肽,鉴定S10A^SD2014上的B细胞线性表位肽;利用抗PEDV经典毒株(CV777)S蛋白高变区片段(S10A^CV777)多抗血清鉴定S10A^SD2014上的保守性B细胞线性表位肽。【结果】重组表达的S10A^SD2014相对分子质量约为72 kD;纯化的S10A^SD2014表位肽能被PEDV阳性血清识别。制备的抗S10A^SD2014多抗可以识别PEDV DR13弱毒株。利用抗S10A^SD2014血清和抗S10A^CV777血清从61个GST融合表达的16肽中鉴定到28个阳性反应16肽,其中13个为2种血清共同识别16肽。对24株PEDV不同亚群代表毒株的对应区域进行同源性分析表明2个阳性16肽为保守性表位肽。【结论】确定了PEDV流行株SD2014 S蛋白高变区的B细胞线性表位肽,B细胞线性表位肽,特别是流行毒株特异性表位肽的确定有助于了解S蛋白的结构与功能,为建立以表位为基础的PEDV感染检测方法打下良好基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒纤突蛋白高变区多克隆抗体 B细胞线性表位

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猪流行性腹泻病毒S2截短肽的原核表达及其线性B细胞表位区鉴定

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微生物学通报 2019年第7期46卷 1785-1795页

作者：李凤平刘英杰董世娟王瑞阳王剑于瑞嵩李震上海海洋大学水产与生命学院上海201306 上海种猪工程技术研究中心上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海农业遗传育种重点实验室上海201106 齐鲁工业大学生物工程学院(山东省科学院) 山东济南250353

【背景】由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的猪流行性腹泻给养猪业造成了巨大的经济损失。PEDV S蛋白可以诱导宿主产生中和抗体。【目的】原核表达PEDV CV777疫苗株S2截短肽(aa:961-1 382)并制备其多克隆... 详细信息

【背景】由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的猪流行性腹泻给养猪业造成了巨大的经济损失。PEDV S蛋白可以诱导宿主产生中和抗体。【目的】原核表达PEDV CV777疫苗株S2截短肽(aa:961-1 382)并制备其多克隆抗体;鉴定表达的S2截短肽上的线性B细胞表位区。【方法】将经密码子优化的PEDV S2截短肽编码DNA (s2t)克隆至载体p ET-28a中并转化Escherichia coli BL21(DE3),利用IPTG诱导S2截短肽表达。以经SDS-PAGE切胶纯化的重组S2截短肽免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。在*** BL21中GST融合表达覆盖S2截短肽序列全长、彼此重叠8个氨基酸残基的系列16肽。以制备的抗S2截短肽兔血清为一抗,通过Westernblot(WB)筛选系列16肽中的阳性反应性16肽,鉴定S2截短肽上的线性B细胞表位区。【结果】重组PEDV S2截短肽的相对分子质量约为50 kD;诱导4 h表达量最高,且主要形成包涵体。WB结果显示,纯化的S2截短肽能被猪抗PEDV血清识别;以纯化的S2截短肽免疫新西兰大白兔制备多抗血清,ELISA法检测抗体效价位于1:25 600-1:102 400之间。免疫组化和间接免疫荧光分析均表明,制备的多抗血清可以识别Vero细胞培养的PEDV DR13弱毒株。以制备的多抗血清通过WB从52个GST融合表达的16肽中鉴定到11个阳性反应性16肽。WB分析显示,得到的阳性反应性16肽都可以被猪抗PEDV血清识别。鉴定到的阳性16肽在S2截短肽上形成4个线性B细胞表位区(aa:969-984;1 065-1 096;1 225-1 280;1 361-1 382)。【结论】高效价抗PEDV S2截短肽多克隆抗体的制备和S2截短肽上线性B细胞抗原表位区的确定有助于了解S蛋白的结构与功能,为建立有效的PEDV检测方法奠定了基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒 S蛋白多克隆抗体线性B细胞表位

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猪MII期卵母细胞冷冻前后全基因组表达谱分析

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上海农业学报 2019年第2期35卷 67-74页

作者：戴建军吴彩凤张树山孙玲伟陈亚宁张德福上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106 上海种猪工程技术研究中心上海201302

为探究猪MII期卵母细胞冷冻前后基因表达的变化,采用猪全基因组表达谱芯片对其冷冻前后的基因进行表达谱分析,筛选出2倍以上差异表达基因,并利用生物信息学对这些基因进行GO和KEGG Pathway分析。结果表明:(1)猪卵母细胞玻璃化冷冻前后... 详细信息

为探究猪MII期卵母细胞冷冻前后基因表达的变化,采用猪全基因组表达谱芯片对其冷冻前后的基因进行表达谱分析,筛选出2倍以上差异表达基因,并利用生物信息学对这些基因进行GO和KEGG Pathway分析。结果表明:(1)猪卵母细胞玻璃化冷冻前后共获得2倍以上差异表达基因171个,其中冻后上调表达基因103个,下调表达基因68个;选取的6个差异表达基因的RT-PCR验证结果与芯片分析结果一致。(2)损伤应答、细胞凋亡、程序性细胞死亡、细胞坏死及蛋白激酶调节、RNA拼接、核mRNA拼接和mRNA代谢等参与了卵母细胞冻后基因差异表达的生物学过程;(3)胞外区、基底质膜、细胞外间隙、质膜、肌动蛋白细胞骨架、线粒体脊、线粒体、细胞器膜和线粒体包膜等参与了卵母细胞冻后基因差异表达的细胞组分调控;(4)类固醇结合、酶抑制剂的活性、激素结合、核苷酸结合、辅酶结合和ATP酶活等参与了卵母细胞冻后差异表达基因的分子功能调控。(5) KEGG Pathway分析表明,Toll样受体信号通路、NOD样受体信号通路、黏着连接和MAPK信号通路等参与了冻后卵母细胞的基因表达调控。综上所述,冷冻能造成猪MII期卵母细胞多系统的损伤,如线粒体损伤、凋亡、坏死、质膜损伤和RNA拼接与代谢异常等。

关键词：猪卵母细胞玻璃化冷冻表达谱基因芯片

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“靓精”对山羊精液液态低温保存效果的影响

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上海畜牧兽医通讯 2019年第5期 44-45页

作者：范文华戴建军张树山孙玲伟吴彩凤张德福上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

为探究山羊精液液态低温保存过程中添加不同稀释倍数“靓精”对保存效果的影响。实验以稀释液中未添加靓精为对照组,在稀释液中分别添加稀释50倍、100倍、200倍、400倍的靓精为实验组,经37℃孵育后持续检测精子活力、活率。结果表明,精... 详细信息

为探究山羊精液液态低温保存过程中添加不同稀释倍数“靓精”对保存效果的影响。实验以稀释液中未添加靓精为对照组,在稀释液中分别添加稀释50倍、100倍、200倍、400倍的靓精为实验组,经37℃孵育后持续检测精子活力、活率。结果表明,精液孵育后,与未添加靓精对照组相比,稀释液中添加靓精的实验组精子保存时间、活率及活力均得到提高,其中添加稀释200倍靓精组,精子保存时间最长,精子活率和活力均优于其他实验组。表明稀释液中添加靓精有助于延长山羊精子保存时间,提高精子质量。

关键词：山羊低温保存靓精

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羊口疮病毒F1L、B2L基因重组腺病毒构建及对小鼠的免疫效果分析

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畜牧兽医学报 2018年第8期49卷 1701-1708页

作者：陈晓葛雷戴建军李丽张德福吴彩凤张树山上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 锦州医科大学畜牧兽医学院锦州121001 上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室上海201106

选取自剪切T2A和P2A肽,连接F1L和B2L基因,构建羊口疮病毒(orf virus,ORFV)重组腺病毒,并对其免疫效果进行评价,为羊口疮的疫苗研制提供依据。应用PCR扩增ORFV-F416毒株的F1L、B2L目的基因,构建重组腺病毒穿梭质粒,穿梭质粒与骨架质粒共... 详细信息

选取自剪切T2A和P2A肽,连接F1L和B2L基因,构建羊口疮病毒(orf virus,ORFV)重组腺病毒,并对其免疫效果进行评价,为羊口疮的疫苗研制提供依据。应用PCR扩增ORFV-F416毒株的F1L、B2L目的基因,构建重组腺病毒穿梭质粒,穿梭质粒与骨架质粒共转染HEK-293细胞,包装出ORFV重组腺病毒。将重组腺病毒感染MDBK细胞,收集上清液免疫ICR小鼠,并进行间接ELISA、淋巴细胞增殖、ORFV攻毒试验等初步评价小鼠免疫效果。结果显示:成功获得pAV-CMV-F1L-T2A-B2L-P2A-EGFP重组腺病毒,其TCID_(50)为10^(-5.375)·mL^(-1),PCR和IFA检测证实目的基因在基因及蛋白水平上均有表达。ORFV重组腺病毒免疫小鼠后,其抗体水平迅速升高。ORFV重组腺病毒组对特异性抗原ORFV表现出明显的T淋巴细胞增殖能力,极显著高于PBS组(P<0.01)。本文的研究结果表明:F1L和B2L基因重组腺病毒能够刺激小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答,且未影响小鼠正常采食,保护效力较好。

关键词：羊口疮病毒重组腺病毒构建免疫效果

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